專利名稱：3-吡咯并環(huán)己亞基-2-二氫吲哚酮衍生物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物
其中 R1是氫、鹵素、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、羥基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、-(CH2)nR12或-C(O)NR13R14； R2是氫、鹵素、烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、氰基、-NR10R11、-NR10C(O)R11、-C(O)R9、芳基、雜芳基、-S(O)2NR10R11或-SO2R15； R3是氫、鹵素、烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、芳基、雜芳基、-NR10S(O)2R11、-S(O)2NR10R11、-NR10C(O)R11、-NR10C(O)OR11或-SO2R15； R4是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基或-NR10R11； R5是氫、烷基或-C(O)R16； R6、R7和R8是氫或烷基； R9是氫、羥基、烷氧基或芳氧基； R12是羥基、-C(O)R9、-NR10R11或-C(O)NR10R11； R13和R14獨(dú)立地選自氫、烷基或芳基，或者R13和R14與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)基； R15是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； R16是羥基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11； Z是芳基、雜芳基、雜環(huán)基或-NR10R11； R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基； n是1、2、3或4。
上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中 R1、R2、R3和R4優(yōu)選氫、羥基、烷氧基、-NR10R11、鹵素或烷基； R5優(yōu)選氫或烷基； R6、R7和R8優(yōu)選氫或烷基； Z優(yōu)選-NR10R11； R10和R11優(yōu)選氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
上述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中 R1、R3和R4最優(yōu)選氫； R2最優(yōu)選氫，鹵素或烷基； R5最優(yōu)選甲基； R6、R7和R8最優(yōu)選氫； Z最優(yōu)選-NR10R11； R10和R11獨(dú)立地選自氫，烷基，環(huán)烷基，芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
本發(fā)明化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
一種式(II)的中間體
其中 R5是氫、烷基或-C(O)R16，優(yōu)選甲基； R16是羥基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11； R6、R7和R8是氫或烷基，優(yōu)選氫； Z是芳基、雜芳基、雜環(huán)基或-NR10R11，優(yōu)選-NR10R11； R10和R11獨(dú)立地選自氫，烷基，環(huán)烷基，芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
在此可互換使用的術(shù)語“2-二氫吲哚酮”、“2-羥基吲哚”和“2-氧代吲哚”指的是具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的分子。

“吡咯并環(huán)己亞基”指的是具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的分子。

“3-吡咯并環(huán)己亞基-2-二氫吲哚酮”指的是具有在式(I)中顯示的通式結(jié)構(gòu)的化合物。
“吡咯并環(huán)己酮”指的是具有在式(II)中顯示的通式結(jié)構(gòu)的化合物。
“藥學(xué)上可接受的鹽”表示保留母體化合物的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽。這類鹽包括 (1)與酸成鹽，通過母體化合物的游離堿與無機(jī)酸或有機(jī)酸的反應(yīng)而得，無機(jī)酸例如(但不限于)鹽酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亞硫酸和高氯酸等，有機(jī)酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)蘋果酸、富馬酸、馬來酸、羥基苯甲酸、γ-羥基丁酸、甲氧基苯甲酸、鄰苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等，優(yōu)選鹽酸或(L)蘋果酸 (2)存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子被金屬離子代替或者與有機(jī)堿配位化合所生成的鹽，金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子，有機(jī)堿例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
1.化學(xué) A.一般結(jié)構(gòu)特征 本發(fā)明的一個方面涉及具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物
其中 R1是氫、鹵素、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、羥基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、-(CH2)nR12或-C(O)NR13R14； R2是氫、鹵素、烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、氰基、-NR10R11、-NR10C(O)R11、-C(O)R9、芳基、雜芳基、-S(O)2NR10R11或-SO2R15； R3是氫、鹵素、烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、芳基、雜芳基、-NR10S(O)2R11、-S(O)2NR10R11、-NR10C(O)R11、-NR10C(O)OR11或-SO2R15； R4是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基或-NR10R11； R5是氫、烷基或-C(O)R16； R6、R7和R8是氫或烷基； R9是氫、羥基、烷氧基或芳氧基； R12是羥基、-C(O)R9、-NR10R11或-C(O)NR10R11； R13和R14獨(dú)立地選自氫、烷基或芳基，或者R13和R14與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)基； R15是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； R16是羥基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11； Z是芳基、雜芳基、雜環(huán)基或-NR10R11； R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
n是1、2、3或4。
除非另外說明，在說明書和權(quán)利要求中使用的以下術(shù)語具有下面討論的含義 “烷基”表示1-20個碳原子的飽和的脂烴基，包括直鏈和支鏈基團(tuán)(本申請書中提到的數(shù)字范圍，例如“1-20”，是指該基團(tuán)，此時為烷基，可以含1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等，直至包括20個碳原子)。含1-4個碳原子的烷基稱為低級烷基。當(dāng)?shù)图壨榛鶝]有取代基時，稱其為未取代的低級烷基。更優(yōu)選的是，烷基是有1-10個碳原子的中等大小的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基為有1-4個碳原子的低級烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。當(dāng)是取代的烷基時，該取代基優(yōu)選是一或多個，更優(yōu)選1-3個，最優(yōu)選1或2個取代基，它們獨(dú)立地優(yōu)選自以下的基團(tuán)鹵素、羥基、低級烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜脂環(huán)基、-C(O)R9，-NR10R11和-C(O)NR13R14，其中R9、R10、R11、R13和R14定義同上。
“環(huán)烷基”表示全部為碳的單環(huán)或稠合的環(huán)(“稠合”環(huán)意味著系統(tǒng)中的每個環(huán)與系統(tǒng)中的其它環(huán)共享毗鄰的一對碳原子)基團(tuán)，其中一個或多個環(huán)不具有完全連接的π電子系統(tǒng)，環(huán)烷基的實(shí)例(不局限于)為環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)戊烯、環(huán)己烷、金剛烷、環(huán)己二烯、環(huán)庚烷和環(huán)庚三烯。環(huán)烷基可為取代的和未取代的。當(dāng)被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個各自選自以下的基團(tuán)，包括烷基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷巰基、芳巰基、氰基、鹵素、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-羧基、O-氨基甲?；?、N-氨基甲?；?，C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、氨基和-NR10R11，其中R10和R11定義同上。
“芳基”表示1至12個碳原子的全碳單環(huán)或稠合多環(huán)基團(tuán)，具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。芳基的非限制性實(shí)例有苯基、萘基和蒽基。芳基可以是取代的或未取代的。當(dāng)被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個，更優(yōu)選為一個、兩個或三個，進(jìn)而更優(yōu)選為一個或兩個，獨(dú)立地選自由低級烷基、三鹵烷基、鹵素、羥基、低級烷氧基、巰基、(低級烷基)硫基、氰基、?；⒘虼；?、O-氨基甲?；?、N-氨基甲?；?、O-硫代氨基甲?；?、N-硫代氨基甲?；-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、R10S(O)-、R10S(O)2-、-C(O)OR10、R10C(O)O-和-NR10R11組成的組，R10和R11定義同上。優(yōu)選地，芳基可選地被一個或兩個取代基取代，取代基獨(dú)立地選自鹵素、低級烷基、三鹵烷基、羥基、巰基、氰基、N-酰氨基、單或二烷基胺基、羧基或N-磺酰氨基。
“雜芳基”表示5至12個環(huán)原子的單環(huán)或稠合環(huán)基團(tuán)，含有一個、兩個、三個或四個選自N、O或S的環(huán)雜原子，其余環(huán)原子是C，另外具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。未取代的雜芳基地非限制性實(shí)例有吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、嘧啶、喹啉、異喹啉、嘌呤、四唑、三嗪和咔唑。雜芳基可以是取代的或未取代的。當(dāng)被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個，更為優(yōu)選為一個、兩個或三個，進(jìn)而更為優(yōu)選一個或兩個，獨(dú)立地選自以下基團(tuán)，包括低級烷基、三鹵烷基、鹵素、羥基、低級烷氧基、巰基、(低級烷基)硫基、氰基、?；⒘虼；?、O-氨基甲?；?、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲?；-硫代氨基甲?；?、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、R10S(O)-、R10S(O)2-、-C(O)OR10、R10C(O)O-和-NR10R11，其中R10和R11定義同上。優(yōu)選的雜芳基可選地被一個或兩個取代基取代，取代基獨(dú)立地選自鹵素、低級烷基、三鹵烷基、羥基、巰基、氰基、N-酰氨基、單或二烷基胺基、羧基或N-磺酰氨基。
“雜脂環(huán)基”表示單環(huán)或稠合環(huán)基團(tuán)，在環(huán)中具有5到9個環(huán)原子，其中一個或兩個環(huán)原子是選自N、O或S(O)m(其中m是0至2的整數(shù))的雜原子，其余環(huán)原子是C。這些環(huán)可以具有一條或多條雙鍵，但這些環(huán)不具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。未取代的雜脂環(huán)基的非限制性實(shí)例有吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪子基、嗎啉代基、硫代嗎啉代基、高哌嗪子基等。雜脂環(huán)基可以是取代的或未取代的。當(dāng)被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個、更優(yōu)選為一個、兩個或三個，進(jìn)而更優(yōu)選為一個或兩個，獨(dú)立地選自以下基團(tuán)，包括低級烷基、三鹵烷基、鹵素、羥基、低級烷氧基、巰基、(低級烷基)硫基、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲?；?、O-硫代氨基甲?；?、N-硫代氨基甲?；?、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、R10S(O)-、R10S(O)2-、-C(O)OR10、R10C(O)O-和-NR10R11，其中R10和R11定義同上。優(yōu)選地，雜脂環(huán)基可選地被一個或兩個取代基取代，取代基獨(dú)立地選自鹵素、低級烷基、三鹵烷基、羥基、巰基、氰基、N-酰氨基、單或二烷基胺基、羧基或N-磺酰氨基。。
“雜環(huán)”表示3到8個環(huán)原子的飽和環(huán)狀基團(tuán)，其中一個或兩個環(huán)原子是選自N、O或S(O)m(其中m是0至2的整數(shù))的雜原子，其余環(huán)原子是C，其中一個或兩個C原子可以可選地被羰基代替。雜環(huán)基的環(huán)可以可選地獨(dú)立地被一個、兩個或三個取代基取代，取代基選自低級烷基(可選地被一個或兩個取代基取代，取代基獨(dú)立地選自羧基或酯基)、鹵代烷基、氰基烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、烷氧基、氨基、單烷基胺基、二烷基胺基、芳烷基、雜芳烷基和-COR(其中R是烷基)。更具體地，術(shù)語雜環(huán)基包括但不限于四氫吡喃基、2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)、哌啶子基、N-甲基哌啶-3-基、哌嗪子基、N-甲基吡咯烷-3-基、吡咯烷基、嗎啉代基、硫代嗎啉代基、硫代嗎啉代-1-氧化物、硫代嗎啉代-1，1-二氧化物、4-乙氧羰基哌嗪子基、3-氧代哌嗪子基、2-咪唑啉酮、2-吡咯烷酮、2-氧代高哌嗪子基、四氫嘧啶-2-酮及其衍生物。優(yōu)選地，雜環(huán)基團(tuán)可選地被一個或兩個取代基取代，取代基獨(dú)立地選自鹵素、低級烷基、被羧基或酯基取代的低級烷基、羥基、單或二烷基胺基。
“羥基”表示-OH基團(tuán)。
“烷氧基”表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的環(huán)烷基)。代表性實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。
“芳氧基”表示-O-芳基和-O-雜芳基。代表性實(shí)例包括但不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。
“巰基”表示-SH基團(tuán)。
“酰基”表示-C(O)-R’基團(tuán)，其中R’是選自以下基團(tuán)氫、未取代的低級烷基、三鹵甲基、未取代的環(huán)烷基，可選地被一或多個、優(yōu)選被1、2或3個選自未取代的低級烷基、三鹵甲基、未取代的低級烷氧基、鹵素和-NR10R11基團(tuán)的取代基取代的芳基，其中R10和R11定義同上，可選地被一個或多個、優(yōu)選被1、2或3個選自未取代的低級烷基、三鹵甲基、未取代的低級烷氧基、鹵素和-NR10R11基團(tuán)的取代基取代的雜芳基(通過環(huán)碳原子鍵合)，以及可選地被一個或多個、優(yōu)選被1、2或3個選自未取代的低級烷基、三鹵甲基、未取代的低級烷氧基、鹵素和-NR10R11基團(tuán)的取代基取代的雜脂環(huán)基(通過環(huán)碳原子鍵合)，代表性的?；ǖ幌抻谝阴；?、三氟乙?；?、苯甲?；?。
“硫代?；北硎?C(S)-R’基團(tuán)，其中R’定義同上。
“酯基”表示-C(O)O-R’基團(tuán)，其中R’定義同上，但是R’不能是氫。
“乙酰基”表示-C(O)CH3基團(tuán)。
“鹵素”表示氟、氯、溴或碘，優(yōu)選為氟或氯。
“三鹵甲基”表示-CX3基團(tuán)，其中X是如上所定義的鹵素。
“氰基”表示-CN基團(tuán)。
“S-磺酰氨基”表示-S(O)2NR10R11基團(tuán)，其中R10和R11定義同上。
“N-磺酰氨基”表示-NR10S(O)2R11基團(tuán)，其中R10和R11定義同上。
“O-氨基甲?；北硎?OC(O)NR13R14基團(tuán)，其中R13和R14定義同上。
“N-氨基甲?；北硎綬10OC(O)NR11-基團(tuán)，其中R10和R11定義同上。
“O-硫代氨基甲酰基”表示-OC(S)NR13R14基團(tuán)，其中R13和R14定義同上。
“N-硫代氨基甲?；北硎綬10OC(S)NR11-基團(tuán)，其中R10和R11定義同上。
“氨基”表示-NH2基團(tuán)。
“C-酰氨基”表示-C(O)NR10R11基團(tuán)，其中R10和R11定義同上。
“N-酰氨基”表示R10C(O)NR11-基團(tuán)，其中R10和R11定義同上。
“硝基”表示-NO2基團(tuán)。
“鹵代烷基”表示烷基，優(yōu)選如上所定義的低級烷基，它被一個或多個相同或不同的鹵原子取代，例如-CH2Cl、-CF3、-CH2CF3、-CH2CCl3等。
“芳烷基”表示烷基，優(yōu)選如上所定義的低級烷基，它被如上所定義的芳基取代，例如-CH2苯基、-(CH2)2苯基、-(CH2)3苯基、CH3CH(CH3)CH2苯基及其衍生物。
“雜芳烷基”表示烷基，優(yōu)選如上所定義的低級烷基，它被雜芳基取代，例如-CH2吡啶基、-(CH2)2嘧啶基、-(CH2)3咪唑基等及其衍生物。
“單烷基胺基”表示基團(tuán)-NHR，其中R是如上所定義的烷基或未取代的環(huán)烷基，例如甲胺基、(1-甲基乙基)胺基、環(huán)己胺基等。
“二烷基胺基”表示基團(tuán)-NRR，其中每個R獨(dú)立地是如上所定義的烷基或未取代的環(huán)烷基，例如二甲基胺基、二乙基胺基、N-甲基環(huán)己基胺基等。
“氰基烷基”表示1或2個氰基取代的如上定義的未取代的烷基，優(yōu)選為未取代的低級烷基。
“哌嗪子基”指的是具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。

“嗎啉代基”指的是具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。

“哌啶子基”指的是具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。

“吡咯烷基”指的是具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。

“可選”或“可選地”意味著隨后所描述的事件或環(huán)境可以但不必發(fā)生，該說明包括該事件或環(huán)境發(fā)生和不發(fā)生的場合。例如，“雜芳基可選地被一個或兩個取代基取代”意味著雜芳基的取代基可以但不必是一個，該說明包括雜芳基被一個取代基取代的情形和雜芳基被兩個取代基取代的情形。
B.優(yōu)選的結(jié)構(gòu)特征 R1、R3、R4是氫是本發(fā)明優(yōu)選的特征。
R2是氫、鹵素或烷基是本發(fā)明優(yōu)選的特征，其中鹵素優(yōu)選為氟或氯，烷基優(yōu)選為甲基。
R5是甲基是本發(fā)明優(yōu)選的特征。
R6、R7和R8是氫是本發(fā)明優(yōu)選的特征。
Z是-NR10R11也是本發(fā)明優(yōu)選的特征，其中R10和R11獨(dú)立地選自氫，烷基，環(huán)烷基，芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基，優(yōu)選為-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、嗎啉代基、哌啶子基、吡咯烷基、N-甲基-哌嗪子基或N-甲基-環(huán)己基胺基。
2.合成和組合庫 A.組合庫 本發(fā)明的一個方面是式(III)的2-羥基吲哚與式(II)的吡咯并環(huán)已酮反應(yīng)形成具有式(I)結(jié)構(gòu)化合物的組合庫。

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和Z具有在一般結(jié)構(gòu)中所闡明的含義。
在此使用的“組合庫”指的是在多維列陣的化合物中由一維的每個化合物與其它的每一個維中的化合物反應(yīng)形成的所有化合物。在本發(fā)明上下文中，所述列陣是二維的并且一維表示本發(fā)明所有的2-羥基吲哚類和第二維表示本發(fā)明所有的吡咯并環(huán)己酮。每一個2-羥基吲哚可與每一個吡咯并環(huán)己酮反應(yīng)以形成如式(I)所示的3-吡咯并環(huán)己亞基-2-二氫吲哚酮化合物。以該方法形成的所有3-吡咯并環(huán)己亞基-2-二氫吲哚酮化合物處于本發(fā)明范圍內(nèi)。經(jīng)一些2-羥基吲哚與所有吡咯并環(huán)己酮反應(yīng)、所有的2-羥基吲哚與一些吡咯并環(huán)己酮反應(yīng)或者一些2-羥基吲哚與一些吡咯并環(huán)己酮反應(yīng)形成的更小的組合庫也處于本發(fā)明范圍內(nèi)。
以上組合庫中的2-羥基吲哚優(yōu)選自2-羥基吲哚本身和取代的2-羥基吲哚，例如(但不局限于)5-氟-2-二氫吲哚酮、5-氯-2-二氫吲哚酮、5-溴-2-二氫吲哚酮、5-羥基-2-二氫吲哚酮、5-甲基-2-二氫吲哚酮、5-乙基-2-二氫吲哚酮、5-正丁基-2-二氫吲哚酮、5-甲氧基-2-二氫吲哚酮、5-乙氧基-2-二氫吲哚酮、5-氨基-2-二氫吲哚酮、5-乙?；?2-二氫吲哚酮、5-苯基氨基磺?；?2-二氫吲哚酮、5-氨基磺?；?2-二氫吲哚酮、5-異丙基氨基磺?；?2-二氫吲哚酮、5-二甲基氨基磺?；?2-二氫吲哚酮、5-三氟甲基-2-二氫吲哚酮、6-氟-2-二氫吲哚酮、6-甲氧基-2-二氫吲哚酮、6-甲基-2-二氫吲哚酮、6-氯-2-二氫吲哚酮、4-甲基-2-二氫吲哚酮、4-甲基-5-氯-2-二氫吲哚酮、4，5-二甲氧基-2-二氫吲哚酮。
以上組合庫中的吡咯并環(huán)己酮優(yōu)選自(但不局限于)N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(二甲胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺。
B.一般合成方法 (1)中間體式(II) 本發(fā)明所涉及的一個中間體式(II)的吡咯并環(huán)己酮按照以下路線合成6-氨基-5-氧代己酸鹽酸鹽(S1)與乙酰乙酸乙酯在磷酸二氫鈉水溶液中回流反應(yīng)生成取代的吡咯(S2)，再以多聚磷酸(PPA)為反應(yīng)溶劑、五氧化二磷(P2O5)為脫水劑，70℃下反應(yīng)生成2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(S3)，隨后在1mol/L LiOH水溶液中進(jìn)行水解得到2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)，最后以N，N-二甲基甲酰胺(DMF)為溶劑、在縮合劑存在條件下，與胺H2N-CH(R6)-CR7(OH)-CH(R8)Z室溫下反應(yīng)24小時制得式(II)的吡咯并環(huán)己酮。

其中 R5是氫、烷基或-C(O)R16，優(yōu)選甲基； R16是羥基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11； R6、R7和R8是氫或烷基，優(yōu)選氫； Z是芳基、雜芳基、雜環(huán)基或-NR10R11，優(yōu)選-NR10R11； R10和R11獨(dú)立地選自氫，烷基，環(huán)烷基，芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
縮合劑包括(但不局限于)N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、N，N′-二異丙基碳二亞胺(DIC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)、2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(CDMT)、2，4-二氯-6-甲氧基-1.3.5-三嗪(DCMT)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)和1-羥基苯并三唑(HOBt)，優(yōu)選為EDCI和HOBt。
所述反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，優(yōu)選的反應(yīng)溫度為20℃至25℃。
(2)式(I)化合物 本發(fā)明提供了用于合成式(I)的3-吡咯并環(huán)己亞基-2-二氫吲哚酮的方法，該方法包括在Lewis酸存在下，使式(III)的2-羥基吲哚與式(II)的吡咯并環(huán)己酮反應(yīng)于溶劑中，其中各基團(tuán)的定義如一般結(jié)構(gòu)特征中所述，優(yōu)選 R1、R3和R4是氫； R2是氫、鹵素或烷基； R5是甲基； R6、R7和R8是氫； Z是-NR10R11； R10和R11獨(dú)立地選自氫，烷基，環(huán)烷基，芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。

該反應(yīng)可以在Lewis酸存在下進(jìn)行，其中Lewis酸包括(但不局限于)AlCl3、BF3、SnCl4、SnCl2、ZnCl2、TiCl4，在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的Lewis酸優(yōu)選為SnCl4和TiCl4，更優(yōu)選為TiCl4。
所述反應(yīng)進(jìn)行的溶劑為非質(zhì)子溶劑?！胺琴|(zhì)子溶劑”為分子中無轉(zhuǎn)移性質(zhì)子的溶劑，這類溶劑又可分為非質(zhì)子親質(zhì)子性溶劑和惰性溶劑?！胺琴|(zhì)子親質(zhì)子性溶劑”特征在于分子中無質(zhì)子，與水比較幾乎無酸性，也無兩性特征，但有較弱的接受質(zhì)子傾向和程度不同的成氫鍵能力，實(shí)例包括(但不局限于)酰胺類、酮類、腈類、二甲亞砜、吡啶?！岸栊匀軇辈痪咚釅A性質(zhì)或酸堿性極弱，自身無質(zhì)子轉(zhuǎn)移過程，當(dāng)溶質(zhì)酸和堿在溶劑中起反應(yīng)時，溶劑分子不參與反應(yīng)，實(shí)例包括(但不局限于)戊烷、己烷、環(huán)己烷、苯、甲苯。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述溶劑為非質(zhì)子溶劑，優(yōu)選為吡啶。
所述反應(yīng)在高于室溫的溫度下進(jìn)行。該溫度一般為50℃至150℃，優(yōu)選為85℃至120℃，最優(yōu)選為100℃至110℃。
所述反應(yīng)的反應(yīng)時間為8小時至10小時。
此外，本發(fā)明所涉及的化合物S1可以參照本領(lǐng)域已有文獻(xiàn)報(bào)道制備，如Lartillot，Serge.et al，Bulletin de la Societe Chimique de France，1964，4783；MacGee，J.et al.Biochem Med，1977，1731；Evans DA，et al，J.C.S.Chem.Comm，1978，17753以及它們所引用的相關(guān)文獻(xiàn)。式H2N-CH(R6)-CR7(OH)-CH(R8)Z是商業(yè)上可以得到的胺，或者它們可以參照本領(lǐng)域已有文獻(xiàn)報(bào)道及其類似方法進(jìn)行制備，如專利GB276012；US1790096；CA975364；FR2396002；US1790042等及其所引用的相關(guān)文獻(xiàn)。本發(fā)明提供的合成方法中所涉及的中間體式(III)的2-羥基吲哚也是商業(yè)上可得到的或可以參照本領(lǐng)域已有文獻(xiàn)報(bào)道及其類似方法進(jìn)行制備，如“Rodd’s Chemistry ofCarbon Compounds”第二版，S.Coffey，第IV卷A部，1973，pp.448-450；Gassman PG，et al，J Org Chem，1977，421340；Wright WB et al，J Am Chem Soc，1956，78221；Kisteneva，MS.Zhurnal Obshchei Khimii，1956，262251；Beckett AH，et al，Tetrahedron，1968，246093；Walker GN，J Am Chem Soc，1955，773844；Protiva M，et al，Collect Czech Chem Commun，1979，442108；McEvoy FJ，et al，J Org Chem，1973，383350；Simet L，J Org Chem，1963，283580；Wieland T，et al，Chem Ber，1963，96253；美國專利US3882236、4006161和4160032以及它們所引用的相關(guān)文獻(xiàn)。
同時，將為本領(lǐng)域技術(shù)人員領(lǐng)會到的是，用于生成本發(fā)明化合物的其它合成途徑也是可利用的，本文所提供的實(shí)施例僅供舉例而非限制。
3.生物評價方法 抑制細(xì)胞增殖測定方法采取常用的MTT法活細(xì)胞線粒體中的脫氫酶能夠還原黃色的溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)為蘭紫色的不溶于水的甲臢(Formazan)，甲臢的多少可通過酶標(biāo)儀測定在570nm的吸收值(OD值)可得知，因而甲臢生成量在通常情況下與活細(xì)胞數(shù)成正比，因此可根據(jù)OD值推測出活細(xì)胞的數(shù)目，了解藥物抑制或殺傷細(xì)胞的能力。
該測定方法可以用于測定不同的本發(fā)明化合物對一種或多種癌細(xì)胞增殖的抑制能力，利用本領(lǐng)域熟知的方法，可以對任意癌細(xì)胞使用相似的測定方法。

具體實(shí)施例方式 給出下列制備例和實(shí)施例，使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更清楚地理解和實(shí)施本發(fā)明。它們不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍，僅僅是其例證和代表。
合成實(shí)施例 實(shí)施例1 2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)
步驟1 6-氨基-5-氧代己酸鹽酸鹽(S1)22.44g(0.12mol)(Lartillot，Serge.et al，Bulletin de laSociete Chimique de France，1964，4783)溶于大約6.1L磷酸二氫鈉緩沖液中(300g磷酸二氫鈉固體溶于6L水，并用1mol/L的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至6.5左右)，加入16.12g(0.12mol)乙酰乙酸乙酯，升溫回流反應(yīng)半小時，待冷卻以后反應(yīng)液用Na2CO3調(diào)節(jié)pH至8左右，并用100ml氯仿萃取一次，水相用6mol/L鹽酸調(diào)pH至1左右，析出大量棕色固體，過濾真空干燥得固體4-(4-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)丁酸(S2)20.29g(71％收率)。
1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.89(s，1H，-COOH)，10.90(s，1H，-NH-1)，6.38(s，1H，pyrrole-2)，4.14(q，2H，-CH2CH3)，2.56(t，2H，-CH2CH2CH2COOH)，2.36(s，3H，-CH3-5)，2.18(t，2H，-CH2CH2CH2-COOH)，1.71(m，2H，-CH2CH2CH2COOH)，1.25(t，3H，-CH2CH3). 步驟2 142g多聚磷酸中加入7.1g五氧化二磷，70℃下攪拌30分鐘，再加入6.3g(0.026mol)4-(4-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)丁酸(S2)，在此溫度下，繼續(xù)攪拌反應(yīng)48小時后，倒入冰水中，用飽和Na2CO3水溶液調(diào)pH至8左右，乙酸乙酯提取。用水和飽和NaCl水溶液洗滌有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮除去大部分乙酸乙酯至飽和狀態(tài)，-5℃下低溫析晶，過濾，真空干燥得白色固體2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(S3)3.5g(61％)。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ10.23(s，1H，-NH-1)，4.30(q，2H，-CH2CH3)，3.00(t，2H，-CH2-4)，2.59(s，3H，-CH3-2)，2.50(t，2H，-CH2-6)，2.12(m，2H，-CH2-5)，1.36(t，3H，-CH2CH3)；ESI-MS222.1[M+H]+；220.1[M-H]-. 步驟3 在25ml LiOH水溶液(1mol/L)中加入1.0g(4.5mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(S3)，在70℃下反應(yīng)48小時后，倒入冰水中，用6mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1～2，析出大量固體，過濾，水洗，真空干燥后得0.64g(74％)為灰色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.03(bs，2H，-NH-1，-COOH)，2.87(t，2H，-CH2-4)，2.42(s，3H，-CH3-2)，2.34(t，2H，-CH2-6)，1.98(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS194.1[M+H]+. 實(shí)施例2 N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)
0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)，0.16g HOBt(1.2mmol)，0.24g(1.2mmol)EDCI和0.2g(2.0mmol)三乙胺溶于10ml DMF中，室溫下攪拌20min后，加入0.31g(2.1mmol)1-氨基-3-二乙胺基-丙-2-醇，室溫下攪拌24個小時后，反應(yīng)液倒入冰水中，用二氯甲烷提取，用水和飽和NaCl水溶液洗滌有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮得到的固體經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑為二氯甲烷∶甲醇3∶1)得0.26g(81％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.09(s，1H，-NH-1)，6.74(t，1H，-CONH-)，4.40(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.83(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.58(m，1H，-CH(OH)-)，3.26～3.15(m，6H，-CH2N(CH2CH3)2)，3.00(t，2H，-CH2-4)，2.56(s，3H，-CH3-2)，2.46(t，2H，-CH2-6)，2.15(m，2H，-CH2-5)，1.44(t，6H，-CH2N(CH2CH3)2)； ESI-MS322.2[M+H]+. 實(shí)施例3 N-[3-(二甲胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-2)
使用實(shí)施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.25g(2.1mmol)1-氨基-3-二甲胺基-丙-2-醇反應(yīng)得0.24g(82％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.43(s，1H，-NH-1)，6.23(t，1H，-CONH-)，3.86(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.32(m，1H，-CH(OH)-)，2.93(t，2H，-CH2-4)，2.58(s，3H，-CH3-2)，2.49(t，2H，-CH2-6)，2.40～2.30(m，8H，-CH2N(CH3)2)，2.14(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS294.1[M+H]+. 實(shí)施例4 N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)
使用實(shí)施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.34g(2.1mmol)1-氨基-3-(嗎啉-4-基)-丙-2-醇反應(yīng)得0.27g(81％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.00(s，1H，-NH-1)，6.08(s，1H，-CONH-)，3.94(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.75～3.71(m，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2CH2)2O)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，2.90(t，2H，-CH2-4)，2.67(m，2H，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.58(s，3H，-CH3-2)，2.51～2.40(m，6H，-CH2-6，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.15(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS336.0[M+H]+，358.0[M+Na]+. 實(shí)施例5 N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)
使用實(shí)施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.30g(2.1mmol)1-氨基-3-(吡咯烷-1-基)-丙-2-醇反應(yīng)得0.26g(82％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.61(s，1H，-NH-1)，6.20(s，1H，-CONH-)，3.92(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.76(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.39(m，1H，-CH(OH)-)，2.96(t，2H，-CH2-4)，2.75(m，3H，烷基)，2.60～2.46(m，8H，-CH2-6，-CH3-2，烷基)，2.20(m，2H，-CH2-5)，1.84(s，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2))； ESI-MS320.2[M+H]+，342.1[M+Na]+；318.2[M-H]-. 實(shí)施例6 N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)
使用實(shí)施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.34g(2.1mmol)1-氨基-3-(哌啶-1-基)-丙-2-醇反應(yīng)得0.26g(78％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.33(s，1H，-NH-1)，6.11(t，1H，-CONH-)，3.88(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.68(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.29(m，1H，-CH(OH)-)，2.92(t，2H，-CH2-4)，2.63～2.57(m，5H，-CH2N(CH2)5，-CH3-2)，2.49(t，2H，-CH2-6)，2.36(m，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2CH2))，2.17(m，2H，-CH2-5)，1.58(m，4H，-N(CH2CH2CH2CH2CH2))，1.46(m，2H，-N(CH2CH2CH2CH2CH2))； ESI-MS334.2[M+H]+，356.3[M+Na]+；332.3[M-H]-. 實(shí)施例7 N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)
使用實(shí)施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.36g(2.1mmol)1-氨基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙-2-醇反應(yīng)得0.25g(72％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.53(s，1H，-NH-1)，6.09(s，1H，-CONH-)，3.93(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，2.92(t，2H，-CH2-4)，2.78(bs，2H，-CH2N(CH2CH2)2NCH3)，2.56～2.40(m，13H，-CH3-2，-CH2N(CH2CH2)2NCH3，-CH2-6)，2.33(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.15(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS349.2[M+H]+. 實(shí)施例8 N-[3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺 (II-7)
步驟1 將7.2g(0.03mol)N-(3-氯-2-羥基丙基-1)-鄰苯二甲酰亞胺(Weizmann，M.et al.Bull.soc.chim.1930，47356-61)和6.8g(0.06mol)N-甲基環(huán)己胺加到25ml乙醇中，回流反應(yīng)6小時，蒸去溶劑，殘留的油狀物中加入60ml 20％的鹽酸，再回流反應(yīng)3小時。待冷卻后，過濾除去不溶物，濾液濃縮至15ml，用NaOH固體堿化至pH為13～14，用二氯甲烷提取，有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮得到無色液體1-氨基-3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-丙-2-醇1.75g(31％)。
ESI-MS187.1[M+H]+. 步驟2 使用實(shí)施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.39g(2.1mmol)1-氨基-3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-丙-2-醇反應(yīng)得0.30g(83％)為白色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.91(s，1H，-NH-1)，6.43(s，1H，-CONH-)，4.16(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.77(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.47(m，1H，-CH(OH)-)，2.97～2.87(m，4H，-CH2-4，-CH(OH)-CH2N-)，2.62(s，3H，-CH3)，2.58(s，3H，-CH3)，2.48(t，2H，-CH2-6)，2.18～2.01(m，4H，-CH2-5，環(huán)己基)，1.90(d，2H，環(huán)己基)，1.71(d，1H，環(huán)己基)，1.41～1.22(m，5H，環(huán)己基)，1.10(m，1H，環(huán)己基)； ESI-MS362.3[M+H]+. 實(shí)施例9 N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-1)
0.11g(0.83mmol)2-羥基吲哚和0.24g(0.75mmol)N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)溶于10ml無水吡啶中，加入TiCl40.3ml，100℃～110℃下攪拌反應(yīng)10小時后，反應(yīng)液倒入冰水中，用二氯甲烷提取，用水和飽和NaCl水溶液洗滌有機(jī)層，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，濃縮得到的固體經(jīng)硅膠柱層析純化(洗脫劑為二氯甲烷∶甲醇10∶1)得0.09g(28％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ14.26(s，1H，-NH-1)，8.20(bs，1H，-NH-1’)，7.61(d，1H，J＝7.90Hz，H-4’)，7.15(t，1H，H-6’)，7.04(t，1H，H-5’)，6.90(d，1H，J＝7.61Hz，H-7’)，6.23(s，1H，-CONH-)，3.86(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，3.11(t，2H，-CH2-4)，2.87(t，2H，-CH2-6)，2.69(m，2H，-CH2N(CH2CH3)2)，2.59～2.40(m，7H，-CH3-2，-CH2N(CH2CH3)2)，2.01(m，2H，-CH2-5)，1.05(t，6H，-CH2N(CH2CH3)2)； ESI-MS437.2[M+H]+. 實(shí)施例10 N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-2)
使用實(shí)施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羥基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)反應(yīng)得0.11g(34％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.32(s，1H，-NH-1)，8.27(bs，1H，-NH-1’)，7.35(dd，1H，J＝10.67Hz，H-4’)，6.92～6.80(m，2H，H-6’，H-7’)，6.28(t，1H，-CONH-)，3.90(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.74(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.38(m，1H，-CH(OH)-)，3.09(t，2H，-CH2-4)，2.92(t，2H，-CH2-6)，2.72(m，2H，-CH2N(CH2CH3)2)，2.62(s，3H，-CH3-2)，2.61～2.40(m，4H，-CH2N(CH2CH3)2)，2.07(m，2H，-CH2-5)，1.08(t，6H，-CH2N(CH2CH3)2)； ESI-MS455.3[M+H]+. 實(shí)施例11 N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-3)
使用實(shí)施例9的方法，0.13g(0.78mmol)5-氯-2-羥基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)反應(yīng)得0.10g(30％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.25(s，1H，-NH-1)，8.18(bs，1H，-NH-1’)，7.57(s，1H，H-4’)，7.12(dd，1H，J＝8.23Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.23Hz，H-7’)，6.25(s，1H，-CONH-)，3.87(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.70(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.34(m，1H，-CH(OH)-)，3.07(t，2H，-CH2-4)，2.89(t，2H，-CH2-6)，2.71(m，2H，-CH2N(CH2CH3)2)，2.66～2.40(m，7H，-CH3-2，-CH2N(CH2CH3)2)，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.07(t，6H，-CH2N(CH2CH3)2)； ESI-MS471.3[M+H]+，493.2[M+Na]+. 實(shí)施例12 N-[3-(二甲胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-4)
使用實(shí)施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羥基吲哚和0.21g(0.72mmol)N-[3-(二甲胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-2)反應(yīng)得0.08g(26％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.33(s，1H，-NH-1)，7.77(bs，1H，-NH-1’)，7.35(dd，1H，J＝10.39Hz，H-4’)，6.91～6.78(m，2H，H-6’，H-7’)，6.19(bs，1H，-CONH-)，3.90(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.37(m，1H，-CH(OH)-)，3.09(t，2H，-CH2-4)，2.92(t，2H，-CH2-6)，2.61(s，3H，-CH3-2)，2.44～2.34(m，8H，-CH2N(CH3)2)，2.06(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS427.3[M+H]+. 實(shí)施例13 N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-5)
使用實(shí)施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羥基吲哚和0.25g(0.75mmol)N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)反應(yīng)得0.12g(35％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.29(s，1H，-NH-1)，7.99(s，1H，-NH-1’)，7.62(d，1H，J＝7.86Hz，H-4’)，7.17(t，1H，H-6’)，7.06(t，1H，H-5’)，6.90(d，1H，J＝7.47Hz，H-7’)，6.12(s，1H，-CONH-)，3.95(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(s，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2CH2)2O)，3.37(m，1H，-CH(OH)-)，3.13(t，2H，-CH2-4)，2.90(t，2H，-CH2-6)，2.69(m，2H，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.46(m，4H，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.04(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS451.3[M+H]+. 實(shí)施例14 N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-6)
使用實(shí)施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羥基吲哚和0.24g(0.72mmol)N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)反應(yīng)得0.11g(33％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.34(s，1H，-NH-1)，7.65(s，1H，-NH-1’)，7.32(d，1H，J＝11.4Hz，H-4’)，6.87～6.79(m，2H，H-6’，H-7’)，6.06(s，1H，-CONH-)，3.92(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.72(bs，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2CH2)2O)，3.34(m，1H，-CH(OH)-)，3.10(t，2H，-CH2-4)，2.96(s，2H，-CH2-6)，2.65～2.60(m，5H，-CH2N(CH2CH2)2O，-CH3-2)，2.45(m，4H，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.07(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS469.2[M+H]+，491.2[M+Na]+；467.3[M-H]-. 實(shí)施例15 N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-7)
使用實(shí)施例9的方法，0.12g(0.72mmol)5-氯-2-羥基吲哚和0.22g(0.66mmol)N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)反應(yīng)得0.11g(34％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ14.30(s，1H，-NH-1)，7.70(s，1H，-NH-1’)，7.59(s，1H，H-4’)，7.12(d，1H，J＝7.95Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.35Hz，H-7’)，6.09(s，1H，-CONH-)，3.93(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.72(bs，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2CH2)2O)，3.34(m，1H，-CH(OH)-)，3.12(t，2H，-CH2-4)，2.95(s，2H，-CH2-6)，2.67(s，2H，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.61(s，3H，-CH3-2)，2.46(m，4H，-CH2N(CH2CH2)2O)，2.09(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS485.2[M+H]+；483.1[M-H]-. 實(shí)施例16 N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-8)
使用實(shí)施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羥基吲哚和0.24g(0.75mmol)N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)反應(yīng)得0.10g(31％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ14.32(s，1H，-NH-1)，7.80(bs，1H，-NH-1’)，7.63(d，1H，J＝7.95Hz，H-4’)，7.15(t，1H，H-6’)，7.05(t，1H，H-5’)，6.91(d，1H，J＝7.73Hz，H-7’)，6.44(bs，1H，-CONH-)，4.02(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.75(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.51(m，1H，-CH(OH)-)，3.15(s，2H，-CH2-4)，2.94(m，4H，-CH2-6，-CH2N(CH2)4)，2.85(m，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2))，2.61(s，3H，-CH3-2)，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.94(s，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2))； ESI-MS435.3[M+H]+，457.2[M+Na]+. 實(shí)施例17 N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-9)
使用實(shí)施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羥基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)反應(yīng)得0.09g(28％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.33(s，1H，-NH-1)，7.89(bs，1H，-NH-1’)，7.36(d，1H，J＝10.92Hz，H-4’)，6.86～6.80(m，2H，H-6’，H-7’)，6.22(s，1H，-CONH-)，3.91(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.37(m，1H，-CH(OH)-)，3.08(s，2H，-CH2-4)，2.93(s，2H，-CH2-6)，2.74(m，2H，-CH2N(CH2)4)，2.67～2.45(m，7H，-CH3-2，-CH2N(CH2CH2CH2CH2))，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.81(bs，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2))； ESI-MS453.3[M+H]+，475.2[M+Na]+. 實(shí)施例18 N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-10)
使用實(shí)施例9的方法，0.14g(0.84mmol)5-氯-2-羥基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)反應(yīng)得0.11g(33％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ14.52(s，1H，-NH-1)，11.02(s，1H，-NH-1’)，7.61(s，1H，H-4’)，7.52(t，1H，-CONH-)，7.18(dd，1H，J＝8.24Hz，H-6’)，6.93(d，1H，J＝8.25Hz，H-7’)，5.71(bs，1H，-CH(OH)-)，3.99(bs，1H，-CH(OH)-)，3.31(m，7H，-CH2CH(OH)CH2-，-CH3-2)，3.10(m，6H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2)，-CH2-4)，2.86(t，2H，-CH2-6)，1.96(m，6H，-CH2-5，-CH2N(CH2CH2CH2CH2))； ESI-MS469.2[M+H]+. 實(shí)施例19 N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-11)
使用實(shí)施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羥基吲哚和0.24g(0.72mmol)N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)反應(yīng)得0.09g(28％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.31(s，1H，-NH-1)，7.75(bs，1H，-NH-1’)，7.64(d，1H，J＝7.99Hz，H-4’)，7.16(t，1H，H-6’)，7.07(t，1H，H-5’)，6.91(d，1H，J＝7.67Hz，H-7’)，6.19(bs，1H，-CONH-)，3.95(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.38(m，1H，-CH(OH)-)，3.13(t，2H，-CH2-4)，2.94(s，2H，-CH2-6)，2.67(bs，2H，-CH2N(CH2)5)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.45(bs，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2CH2))，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.64～1.43(m，6H，-CH2N(CH2CH2-CH2-CH2CH2))； ESI-MS449.4[M+H]+，471.3[M+Na]+. 實(shí)施例20 N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-12)
使用實(shí)施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羥基吲哚和0.23g(0.69mmol)N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)反應(yīng)得0.10g(31％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.30(s，1H，-NH-1)，8.09(bs，1H，-NH-1’)，7.35(d，1H，J＝10.5Hz，H-4’)，6.93～6.80(m，2H，H-6’，H-7’)，6.21(s，1H，-CONH-)，3.93(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.71(d，1H，-CONHCH(H)-)，3.30(m，1H，-CH(OH)-)，3.01(s，2H，-CH2-4)，2.88(s，2H，-CH2-6)，2.59(bs，5H，-CH3-2，-CH2N(CH2)5)，2.38(m，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2CH2))，2.03(m，2H，-CH2-5)，1.60(bs，6H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2CH2))； ESI-MS465.3[M-H]-. 實(shí)施例21 N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-13)
使用實(shí)施例9的方法，0.14g(0.84mmol)5-氯-2-羥基吲哚和0.23g(0.69mmol)N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)反應(yīng)得0.12g(36％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.25(s，1H，-NH-1)，8.11(bs，1H，-NH-1’)，7.57(s，1H，H-4’)，7.13(d，1H，J＝8.67Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.46Hz，H-7’)，6.20(s，1H，-CONH-)，3.92(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.72(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.32(m，1H，-CH(OH)-)，3.08(s，2H，-CH2-4)，2.89(s，2H，-CH2-6)，2.59(s，5H，-CH3-2，-CH2N(CH2)5)，2.40(m，4H，-CH2N(CH2CH2CH2CH2CH2))，2.05(m，2H，-CH2-5)，1.60～1.43(m，6H，-CH2N(CH2CH2-CH2-CH2CH2))； ESI-MS483.3[M+H]+. 實(shí)施例22 N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-14)
使用實(shí)施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羥基吲哚和0.25g(0.72mmol)N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)反應(yīng)得0.11g(33％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.29(s，1H，-NH-1)，7.96(s，1H，-NH-1’)，7.63(d，1H，J＝8.14Hz，H-4’)，7.15(t，1H，H-6’)，7.06(t，1H，H-5’)，6.91(dd，1H，J＝7.69Hz，H-7’)，6.13(t，1H，-CONH-)，3.94(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.70(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.36(m，1H，-CH(OH)-)，3.14(t，2H，-CH2-4)，2.90(t，2H，-CH2-6)，2.72(bs，2H，-CH2N(CH2CH2)2NCH3)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.46～2.37(m，8H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.30(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.06(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS464.1[M+H]+，486.0[M+Na]+. 實(shí)施例23 N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-15)
使用實(shí)施例9的方法，0.13g(0.86mmol)5-氟-2-羥基吲哚和0.25g(0.72mmol)N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)反應(yīng)得0.10g(29％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.32(s，1H，-NH-1)，8.07(bs，1H，-NH-1’)，7.35(dd，1H，J＝10.6Hz，H-4’)，6.89～6.78(m，2H，H-6’，H-7’)，6.16(t，1H，-CONH-)，3.94(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，3.09(t，2H，-CH2-4)，2.90(t，2H，-CH2-6)，2.74(s，2H，-CH2N(CH2CH2)2NCH3)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.47～2.37(m，8H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.30(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.07(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS482.0[M+H]+. 實(shí)施例24 N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-16)
使用實(shí)施例9的方法，0.14g(0.84mmol)5-氯-2-羥基吲哚和0.25g(0.72mmol)N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)反應(yīng)得0.11g(31％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.28(s，1H，-NH-1)，7.97(s，1H，-NH-1’)，7.59(s，1H，H-4’)，7.13(dd，1H，J＝8.22Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.23Hz，H-7’)，6.15(s，1H，-CONH-)，3.94(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.35(m，1H，-CH(OH)-)，3.11(t，2H，-CH2-4)，2.92(t，2H，-CH2-6)，2.77(bs，2H，-CH2N(CH2CH2)2NCH3)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.52～2.40(m，8H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.33(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH3)，2.08(m，2H，-CH2-5)； ESI-MS498.0[M+H]+，520.0[M+Na]+. 實(shí)施例25 N-[3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-甲基-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-17)
使用實(shí)施例9的方法，0.13g(0.88mmol)5-甲基-2-羥基吲哚和0.27g(0.75mmol)N-[3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-7)反應(yīng)得0.14g(38％)為黃色固體的標(biāo)題化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.29(s，1H，-NH-1)，8.06(s，1H，-NH-1’)，7.42(s，1H，H-4’)，6.97(d，1H，J＝7.88Hz，H-6’)，6.80(d，1H，J＝7.82Hz，H-7’)，6.23(t，1H，-CONH-)，3.88(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.74(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，3.12(t，2H，-CH2-4)，2.89(t，2H，-CH2-6)，2.59(s，3H，-CH3-2)，2.52(m，2H，-CONHCH2CH(OH)-CH2N-)，2.38(s，3H，-NCH3-)，2.33(s，3H，-CH3-5’)，2.05(m，2H，-CH2-5)，1.88～1.62(m，6H，環(huán)己基)，1.32～1.04(m，5H，環(huán)己基)； ESI-MS491.1[M+H]+. 生物學(xué)實(shí)施例 采用下列試驗(yàn)甄別具有最佳程度的所需活性的那些化合物。
抑制腫瘤細(xì)胞增殖測定方法(MTT法) 測定按常規(guī)采用溴化四氮唑藍(lán)(MTT)法?；罴?xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性溴化四氮唑藍(lán)還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。因而，采用MTT法可測定本發(fā)明化合物的抑制細(xì)胞增殖能力，同時利用本領(lǐng)域熟知的方法，可以對任意癌細(xì)胞使用相似的測定方法。
1.試劑和儀器 RPMI 1640培養(yǎng)基(RPMI 1640+12％小牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)； RPMI 1640培養(yǎng)基(RPMI 1640+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)； 高糖DMEM培養(yǎng)基(DMEM+10％小牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)； 高糖DMEM培養(yǎng)基(DMEM+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)； MC COYS 5-A培養(yǎng)基(DMEM+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)； 胰蛋白酶； MTT(美國Amresco公司產(chǎn)品)； 待測化合物本發(fā)明實(shí)施例中制備的化合物I-1～I(xiàn)-17； 酶標(biāo)儀(TECAN infinite M200) 2.癌細(xì)胞株 2.1人胃腺癌細(xì)胞株(BGC) 2.2人非小細(xì)胞肺癌(A549) 2.3人白血病細(xì)胞株(K562) 2.4人胰腺癌細(xì)胞株(PANC-1) 2.5人小細(xì)胞肺癌(NCI-H446) 如2.1、2.2、2.3、2.4和2.5所列癌細(xì)胞株用含12％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 2.6人胰腺癌細(xì)胞株(BXPC-3) 2.7人膀胱癌細(xì)胞株(T24) 如2.6和2.7所列癌細(xì)胞株用12％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 2.8人肝癌細(xì)胞株(HEPG2) 2.9人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7) 如2.8和2.9所列癌細(xì)胞株用12％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 2.10人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株(CACO-2) 如2.10所列癌細(xì)胞株用12％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 2.11人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HT29) 2.12人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT116) 2.13人卵巢癌細(xì)胞株(SK-OV-3) 如2.11、2.12和2.13所列癌細(xì)胞株用12％胎牛血清的MC COYS 5-A培養(yǎng)基，于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3.實(shí)驗(yàn)方法 3.1接種取處于指數(shù)生長期，狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入適量胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細(xì)胞脫落，用含12％小牛血清的RPMI1640(或DMEM或5A)培養(yǎng)液配成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，并將細(xì)胞密度調(diào)整稀釋至1.67×104/ml取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180ul/孔(含腫瘤細(xì)胞3000/孔)。
3.2培養(yǎng)將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入恒溫CO2培養(yǎng)箱中，在37℃，5％CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)24小時。
3.3初篩待測化合物先用DMSO配制成0.1M濃度，再作3個稀釋度，用于初篩，濃度依次為10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L。加入待測化合物，20ul/孔，培養(yǎng)72小時。每組設(shè)3個平行孔，并重復(fù)3次，測定96孔板每孔吸光值，記錄結(jié)果計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，取三次平均值。
3.4染色 3.4.1將MTT加入96孔板(貼壁細(xì)胞)中，20ul/孔，置于培養(yǎng)箱中孵育4小時，吸棄孔內(nèi)上清液，加入DMSO 100ul/孔，置平板搖床上震蕩5分鐘。
3.4.2將MTT加入96孔板中(懸浮細(xì)胞)，20ul/孔，置于培養(yǎng)箱中孵育4小時，再加入20％SDS 50ul/孔，置于培養(yǎng)箱中過夜。
3.5測定酶標(biāo)儀設(shè)定波長為570nm，參考波長為630nm，測定96孔板每孔吸光值，記錄結(jié)果并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，以判斷受試藥物的抗腫瘤活性。
3.6復(fù)篩在初篩濃度為10-5mol/L時，3次細(xì)胞抑制率≥50％的化合物用于復(fù)篩，將0.1mol/L再作10個稀釋度，濃度依次為10-5mol/L、0.5×10-5mol/L、10-6mol/L、0.8×10-6mol/L、0.6×10-6mol/L、0.4×10-6mol/L、0.2×10-6mol/L、10-7mol/L、0.8×10-7mol/L和0.4×10-7mol/L。加入受試化合物，20ul/孔，培養(yǎng)48小時。同樣每組設(shè)3個平行孔，并重復(fù)3次，并按照初篩方法，測定96孔板每孔吸光值，記錄結(jié)果并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率。
3.7細(xì)胞生長抑制率以及IC50的計(jì)算 對照組平均OD值-給藥組平均OD值
同時根據(jù)各濃度的生長抑制率，采用以化合物濃度的對數(shù)同Logit[I]線性回歸，求出抑制生長率為50％時的待測化合物濃度即IC50，取三次平均值。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 4.1細(xì)胞生長抑制率 在濃度為10-5mol/L，本發(fā)明化合物對不同腫瘤細(xì)胞的生長抑制率分別見表1和表2 表1
表2
4.2細(xì)胞生長半數(shù)抑制濃度(IC50umol/L) 本發(fā)明化合物對不同腫瘤細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別見表3和表4 表3
表4
5.實(shí)驗(yàn)結(jié)論 本發(fā)明實(shí)施例中制備的具有式(I)結(jié)構(gòu)的化合物I-1～I(xiàn)-17對多種腫瘤細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用。上述這些化合物可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中
R1是氫、鹵素、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、羥基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、-(CH2)nR12或-C(O)NR13R14；
R2是氫、鹵素、烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、氰基、-NR10R11、-NR10C(O)R11、-C(O)R9、芳基、雜芳基、-S(O)2NR10R11或-SO2R15；
R3是氫、鹵素、烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、芳基、雜芳基、-NR10S(O)2R11、-S(O)2NR10R11、-NR10C(O)R11、-NR10C(O)OR11或-SO2R15；
R4是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基或-NR10R11；
R5是氫、烷基或-C(O)R16；
R6、R7和R8是氫或烷基；
R9是氫、羥基、烷氧基或芳氧基；
R12是羥基、-C(O)R9、-NR10R11或-C(O)NR10R11；
R13和R14獨(dú)立地選自氫、烷基或芳基，或者R13和R14與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)基；
R15是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；
R16是羥基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
Z是芳基、雜芳基、雜環(huán)基或-NR10R11；
R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基；
n是1、2、3或4。
2.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中
R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫、羥基、烷氧基、-NR10R11、鹵素或烷基；
R5是氫或烷基；
R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫或烷基；
Z是-NR10R11；
R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
3.權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中
R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫、鹵素或烷基；
R5是甲基；
R6、R7和R8是氫；
Z是-NR10R11；
R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
4.權(quán)利要求3的化合物或鹽，其中所述的化合物選自下組
N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(二乙胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(二甲胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(嗎啉-4-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(N-甲基環(huán)己基胺基)-2-羥基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氫-5-甲基-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亞基]-4，5，6，7-四氫-1H-吲哚-3-羧酰胺。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.一種式(II)的中間體
其中
R5是氫、烷基或-C(O)R16；
R6、R7和R8是氫或烷基；
R16是羥基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
Z是芳基、雜芳基、雜環(huán)基或-NR10R11；
R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中間體，其中
R5是甲基；
R6、R7和R8是氫；
Z是-NR10R11；
R10和R11獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或者R10和R11合起來形成一個雜環(huán)基。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有式(I)結(jié)構(gòu)的3-吡咯并環(huán)己亞基-2-二氫吲哚酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及其用途；另外，本發(fā)明還涉及合成該類化合物的式(II)中間體。藥理實(shí)驗(yàn)表明，此類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽對多種腫瘤細(xì)胞的增殖具有抑制作用。
文檔編號C07D209/42GK101200446SQ200610161220
公開日2008年6月18日 申請日期2006年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月15日
發(fā)明者鋒 唐, 晗 沈, 潔 楊, 殷曉進(jìn), 磊 丁 申請人:江蘇先聲藥物研究有限公司