專利名稱：鹽酸威拉賽羅沃的制備方法
相關(guān)申請的交互引用本項(xiàng)申請要求享有2004年1月21日備案的60/538,362號和2004年7月27日備案的60/591,707號US臨時(shí)申請案的權(quán)益，這兩例臨時(shí)申請所公開的內(nèi)容在此被作為整體引用。
發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及鹽酸威拉賽羅沃(valacyclovir hydrochloride)組合物的合成方法，該組合物含有來自起始物BOC-L-纈氨酸的低濃度的丙氨酸類似物，而這種起始物經(jīng)液-固色譜方法檢測含有低濃度的BOC-丙氨酸。
發(fā)明的背景威拉賽羅沃(valacyclovir，式I)是阿賽羅沃(acyclovir，一種天然核苷的無環(huán)類似物，式II)的一種纈氨酰酯藥物前體。據(jù)報(bào)道阿賽羅沃具有高抗病毒活性，被廣泛應(yīng)用于人類病毒感染，特別是由皰疹病毒所致感染的治療和預(yù)防中。見Goodman和Gilman著《治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)》(Goodman and GilmanThe Pharmacological Basis ofTherapeutics.1193-1198，9th ed.，1996)。
式I 式II
可用帶有一個(gè)胺保護(hù)基團(tuán)(例如叔-丁氧羰基團(tuán)(t-BOC))的纈氨酸合成鹽酸威拉賽羅沃。例如美國專利申請20030153757號所公開的用一種胺保護(hù)的纈氨酸做為起始物合成鹽酸威拉賽羅沃的方法。做為一種有用的合成威拉賽羅沃的起始物，BOC-L-纈氨酸可含有BOC-丙氨酸之類的雜質(zhì)。不希望起始物中含有這類雜質(zhì)，因?yàn)閺倪@樣的起始物中得到的最終合成產(chǎn)物會被威拉賽羅沃的丙氨酸類似物污染。
可用高效液相色譜法(HPLC)檢測和定量這些雜質(zhì)。
發(fā)明的概述一方面，本發(fā)明提供了一種用含有少于0.2area-％BOC-L-丙氨酸的BOC-L-纈氨酸做為起始物合成含有少于0.2area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃組合物的方法。優(yōu)選地，所用的起始物含有少于1area-％的BOC-L-丙氨酸，而合成的鹽酸威拉賽羅沃組合物含有少于1area-％的丙氨酸。更優(yōu)選地，所用的起始物含有少于0.05area-％的BOC-L-丙氨酸，而合成的鹽酸威拉賽羅沃組合物中僅含難于檢出量的丙氨酸衍生物。
另一方面，本發(fā)明也提供了一種液-固色譜方法來檢測BOC-L-纈氨酸中的BOC-丙氨酸濃度，鹽酸威拉賽羅沃粗產(chǎn)物和最終產(chǎn)物中丙氨酸類似物的濃度，以及晶狀鹽酸威拉賽羅沃。
發(fā)明的詳細(xì)描述此處所用的“梯度洗脫”指的是梯度洗脫液的組分在一個(gè)固定的時(shí)段內(nèi)逐步地，或者以一種固定的變化率改變，如第一洗脫液的百分濃度減少，第二洗脫液的濃度增加。
此處所用的“梯度洗脫液”指的是由各種濃度的第一和第二洗脫液組成的洗脫液。
此處所用的“樣品”指的是從大量的，或從一個(gè)批次的BOC-L-纈氨酸或鹽酸威拉賽羅沃中取出的小量或等分的試樣，對此試樣的分析以評估大樣本或一個(gè)批次樣本的特點(diǎn)。
聯(lián)系到一定數(shù)量的BOC-L-纈氨酸或鹽酸威拉賽羅沃，此處所用的“批次”指的是取出樣品的數(shù)量。一個(gè)批次是從一次處理或從一次操作所得到的數(shù)量。這個(gè)數(shù)量的大小就象其他事物一樣取決于所用的設(shè)備。
此處所用的“固態(tài)口服劑型”一詞指的是膠囊和片劑。
此處所用的“干配料”一詞指的是鹽酸威拉賽羅沃與至少一種賦形劑的混合物。
此處所用的“可檢出的”一詞指的是用檢測精度為0.01area-％的HPLC方法能夠檢出的量。
聯(lián)系到鹽酸威拉賽羅沃中的丙氨酸類似物的量，此處所用的“不可檢出的”一詞表示用這里所說的檢測精度為0.01area-％的HPLC方法不能夠檢出的量。
此處所用的“丙氨酸類似物”一詞包括威拉賽羅沃樣的分子，其中結(jié)合在羥基乙氧基甲基基團(tuán)的部分是丙氨酸而不是纈氨酸。
聯(lián)系到所檢測的量，此處所用的“大約”一詞指的是運(yùn)用與檢測的目的和與所用儀器的精度相適應(yīng)的水平從事這項(xiàng)檢測的熟練的技術(shù)人員所期望的檢測量的變化幅度。
此處所用的“area-％”一詞是比喻對檢測者所做的每一次檢測進(jìn)行分析得出的“峰值下面積”(以下稱作“AUP”)，例如在液-固色譜分析中的一種色譜方法。用一種合適的積分儀可算出AUP。色譜中的每個(gè)峰對應(yīng)著裝載到液-固色譜柱上的混合物中一種不同的成分，每種可檢出的成分其AUP在樣品所有成分的總AUP中所占的比例即為面積百分率。面積百分率的數(shù)學(xué)表達(dá)如下式Area i-％＝100(AUPi)/(∑所有的AUPs)鹽酸威拉賽羅沃組合物基本上是由鹽酸威拉賽羅沃組成的。
鹽酸威拉賽羅沃可以用BOC-L-纈氨酸做為起始物，用此處作為參考文獻(xiàn)引用的US發(fā)表號2003/0153757的方法來制備。BOC-L-纈氨酸可被BOC-丙氨酸污染。存在于中間粗產(chǎn)物和結(jié)晶的終產(chǎn)物中的丙氨酸類似物的量可以用具有較低水平的BOC-丙氨酸，特別是較低水平的BOC-L-丙氨酸作為起始物來控制。BOC-丙氨酸的水平可用液-固色譜方法來檢測。
液-固色譜方法，特別是高壓液相色譜法，也叫高效液相色譜法(以下稱“HPLC”)被用來檢測和定量一種化學(xué)化合物中的雜質(zhì)。HPLC中，將通常稱作被分析物的待分離和測定的成分溶解在一種稀釋劑(溶劑)中，這種稀釋劑可以就是洗脫液，或者是流過色譜柱的流動液相。這個(gè)流動的液相與溶解的被分析物在色譜柱中的填料(通常表示為固相)里相互反應(yīng)。由于不同的被分析物與固相的相互反應(yīng)不同，每種被分析物通過色譜柱的速率不同。見13 James D.Winefordner，Treatiseon Analytical Chemistry，pt.I(2d ed.1993)。
反相HPLC利用一種非極性的固相和一種極性的洗脫液。梯度洗脫通過全程改變流動相的組分或梯度洗脫劑的組分改善了樣品成分的分離。用一種指示劑通過測定洗脫液的特定的物理性質(zhì)來監(jiān)控分離。例如，用一個(gè)分光光度計(jì)來測定流動相的放射吸收值就可以做為一個(gè)指標(biāo)。
申請人發(fā)現(xiàn)，就象其他事情一樣，威拉賽羅沃或鹽酸威拉賽羅沃終產(chǎn)物中的丙氨酸類似物濃度可以通過控制起始物BOC-L-纈氨酸中的BOC-丙氨酸濃度予以控制。需要有一些方法來檢測起始物、中間產(chǎn)物和最終的鹽酸威拉賽羅沃合成產(chǎn)物中的丙氨酸類似物。也需要使鹽酸威拉賽羅沃終產(chǎn)物中僅含盡量少的丙氨酸類似物。
做為一個(gè)具體體現(xiàn)，本發(fā)明提供了一種液-固色譜方法來檢測BOC-L-纈氨酸中的BOC-丙氨酸濃度。BOC-L-纈氨酸中的BOC-丙氨酸污染物的濃度可用液-固色譜方法來檢測，特別是用HPLC法，尤其特別是用此處下面所述的HPLC方法來檢測。HPLC法使用一個(gè)合適的層析柱，例如反相色譜柱Inertsil ODS-3V 5μm 150×4.6mm(GLSciences，Cat.No.5020-01731)。
本發(fā)明中測定BOC-L-纈氨酸中的BOC-L-丙氨酸量的HPLC法的第一步包括將BOC-L-纈氨酸裝樣到液-固色譜柱上。用注射法將樣品的溶液注入色譜柱會更有效。注入色譜柱上的合適的量為50μL。用來使樣品的溶液能夠注射的稀釋液可以是，例如，洗脫液?？蓪⑸V柱置于室溫中，最好是約25℃。色譜柱中的固相可以是改性的優(yōu)選5μm的硅膠，球狀十八烷基硅膠，用15％碳填料封端，最好是InertsilODS-3V。將樣品裝上色譜柱后，用洗脫液將色譜柱等速地(isocratically)洗脫。優(yōu)選的洗脫液是乙腈(27％)和含0.05％磷酸(0.5g，85％H3PO4/1L H2O)的水(73％)，流速恒不大于1mL/min。監(jiān)控UV檢測器對色譜柱中流出物的反應(yīng)，這里的UV檢測器可以是操控范圍200-600nm，優(yōu)選的是210nm的分光光度計(jì)。根據(jù)檢測器對洗脫成分的反應(yīng)計(jì)算BOC-L-纈氨酸中BOC-丙氨酸的量，表示為“area-％”。
HPLC系統(tǒng)的適用性可用一種系統(tǒng)適用性溶液檢測，這種溶液包括BOC-丙氨酸(0.15mg/mL)和BOC-L-纈氨酸(15mg/mL)稀釋劑的混合物。
另一項(xiàng)具體體現(xiàn)，本發(fā)明提供了一種檢測存在于鹽酸威拉賽羅沃樣品中的丙氨酸類似物的量的液-固色譜方法。通過液-固色譜方法，特別是通過HPLC，可以測出丙氨酸類似物的濃度。做這種測定的合適的色譜柱是反相柱Inertsil ODS-3V 5μm，或具相同功能的色譜柱。優(yōu)選地，本方法使用梯度洗脫。這種方法可使樣品成分更有效地分離。
本發(fā)明中測定鹽酸威拉賽羅沃樣品中丙氨酸類似物的量的HPLC法的第一步是將鹽酸威拉賽羅沃樣品裝到液-固色譜柱上。用注射法將樣品的溶液注入色譜柱會更有效。用注入法裝柱時(shí)，注入的量約為20μL。另外，用來制備注射樣品溶液的稀釋液可以是，例如，相同的第一洗脫液。柱溫可以比室溫高。優(yōu)選的柱溫約為30℃。色譜柱中的固相可以是改性的優(yōu)選5μm的硅膠，球狀十八烷基硅膠，用15％碳填料封端，最好是Inertsil ODS-3V 1。然后將色譜柱梯度洗脫，梯度洗脫液的流速不要超過1.5mL/min，使梯度洗脫含有第一和第二洗脫液。
合適的第一洗脫液是0.01M磷酸二氫鉀的水溶液(98％)和乙腈(2％)。第一洗脫液的pH為酸性，優(yōu)選的是pH值約為3.5?？捎?0％磷酸調(diào)節(jié)pH值。合適的第二洗脫液是乙腈。通常合適的平衡時(shí)間約為7分鐘。對UV檢測器對色譜柱流出物的反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測，這里的UV檢測器可以是操控范圍200-600nm，優(yōu)選的是245nm的分光光度計(jì)。根據(jù)檢測器的反應(yīng)，計(jì)算鹽酸威拉賽羅沃中丙氨酸類似物的量，表示為“area-％”。
可將威拉賽羅沃溶解在一種鳥嘌呤溶液和一種阿賽羅沃溶液中來制備系統(tǒng)的適用性溶液。樣品溶液的濃度可以是用稀釋劑稀釋的0.8mg/mL威拉賽羅沃?？蓪悠啡芤鹤⑷氲缴V柱上，然后可以用一種合適的積分儀測出混合物中各種成分的area-％來測定任何雜質(zhì)的濃度。
本發(fā)明的另一項(xiàng)具體體現(xiàn)是提供了合成一種鹽酸威拉賽羅沃組合物的方法，這種組合物中含有一定量的丙氨酸類似物，其含量少于0.2area-％但多于或等于0.1area-％，這種方法包括如下步驟
a)得到一個(gè)或多個(gè)一個(gè)批次或多個(gè)批次的BOC-L-纈氨酸樣品；b)測定(a)步驟中每個(gè)樣品中的BOC-L-丙氨酸水平；c)挑選一個(gè)批次或多個(gè)批次的BOC-L-纈氨酸樣品，這些樣品中所含的BOC-L-丙氨酸的量經(jīng)(b)步驟的檢測要少于0.2area-％；以及d)用(c)步驟所選批次的樣品合成所說的鹽酸威拉賽羅沃組合物。
優(yōu)選地，BOC-L-纈氨酸樣品和所得到的鹽酸威拉賽羅沃分別含有BOC-L-丙氨酸和丙氨酸類似物的量均少于約0.1area-％。最優(yōu)選地，當(dāng)BOC-L-纈氨酸樣品含有的BOC-L-丙氨酸的量少于0.05area-％時(shí)，鹽酸威拉賽羅沃組合物中不含可檢出量的丙氨酸。
用上述液-固色譜方法或與之等效的方法檢測BOC-L-纈氨酸樣品中BOC-L-丙氨酸的量。
尤其是，本發(fā)明提供了一種合成鹽酸威拉賽羅沃組合物的方法，這種組合物中所含的丙氨酸類似物的量少于0.2area-％。這種合成方法的第一步是分析一個(gè)批次或多個(gè)批次樣品中的一個(gè)BOC-L-纈氨酸樣品，其中所含的丙氨酸類似物僅以雜質(zhì)意義存在，并挑選一個(gè)批次的樣品，它所含的丙氨酸類似物的量少于0.2area-％。選定的BOC-L-纈氨酸樣品與在一種有機(jī)溶劑中的阿賽羅沃反應(yīng)以得到一種混合物，這種有機(jī)溶劑優(yōu)選的是二環(huán)己基羰基二亞胺(以下稱做“DCC”)的二甲基甲酰胺(以下稱做“DMF”)溶液。然后將這種混合物與4-二甲基氨基吡啶(以下稱做“DMAP”)合并，然后加水得到一個(gè)懸液。過濾除去沉淀的二環(huán)己基脲，而后將生成的濾液濃縮。然后將濾液再生于，或溶解于回流的低級醇，特別是異丙醇中，以獲得被保護(hù)的威拉賽羅沃。該產(chǎn)物可以去保護(hù)，并從水和異丙醇中再結(jié)晶，以給出結(jié)晶的鹽酸威拉賽羅沃。鹽酸威拉賽羅沃的合成可以做到不同的規(guī)模，所提供的重量體積比可適用于所有反應(yīng)物。
按本發(fā)明的方法得到的鹽酸威拉賽羅沃可以配制成藥物組分。除了有效成分外，本發(fā)明的藥物配方中可以、典型的情況下也確實(shí)含有一種或多種賦形劑。典型的藥物組分是成批配制的，并制成固態(tài)口服劑型，例如片劑和膠囊。提供給商業(yè)銷售的固態(tài)口服劑型根據(jù)鹽酸威拉賽羅沃中丙氨酸類似物的含量可以是干的配料，或者就是固態(tài)的口服劑型。
配方中為各種目的加入賦形劑。稀釋劑增加了固態(tài)藥物組分的總量，可以使含有這種組分的藥物劑型容易被患者服用，運(yùn)送處理也方便。固態(tài)組分的稀釋劑包括微晶態(tài)纖維素(例如Avicel)，微細(xì)纖維素，乳糖，淀粉，前凝膠化淀粉，碳酸鈣，硫酸鈣，蔗糖，葡聚糖，糊精，右旋葡萄糖，二堿價(jià)的磷酸鈣二水合物，三堿價(jià)的磷酸鈣，高嶺土，碳酸鎂，氧化鎂，麥芽糖糊精，甘露糖醇，聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit)，氯化鉀，纖維素粉，氯化鈉，山梨糖醇和滑石粉，這里提到的只是一小部分。
被制成劑型的固態(tài)藥物組合物，例如片劑，可以包括賦形劑，它的功能包括在壓制過程中有助于將有效成分和其他賦形劑粘合在一起。固態(tài)藥物組合物的粘合劑包括阿拉伯樹膠，藻酸，甲酯類(例如carbopol)，羰甲基纖維素鈉，糊精，乙基纖維素，凝膠，樹膠，氫化菜油，羥乙基纖維素，羥丙基纖維素(例如Klucel)，羥丙基甲基纖維素(例如Methocel)，液態(tài)葡萄糖，硅酸鋁鎂，麥芽糖糊精，甲基纖維素，聚甲基丙烯酸酯，povidone(例如Kollidon，Plasdone)，前凝膠化淀粉，藻酸鈉和淀粉。
為控制質(zhì)量，最好是用含有少量丙氨酸的鹽酸威拉賽羅沃制備藥物組分。典型的藥物組分是成批制備的，或成規(guī)模生產(chǎn)的。須檢查生產(chǎn)的批量以保證丙氨酸類似物的含量不超過質(zhì)量控制檢測規(guī)定的范圍。從批量生產(chǎn)的產(chǎn)物中取樣(例如10～100個(gè)膠囊或藥片)分析存在的丙氨酸類似物以及，優(yōu)選地，分析相同的內(nèi)容。一般來說，全部的批量產(chǎn)品，除去保留的樣品，都將出售，或由廠商發(fā)出去，除非發(fā)現(xiàn)丙氨酸類似物含量超標(biāo)。這種情況下批量產(chǎn)品將不能出售或發(fā)放，即既不能做商業(yè)用途也不能做臨床研究用。同樣的策略也可應(yīng)用于批量生產(chǎn)的鹽酸威拉賽羅沃底物。
以下的非限定性實(shí)施例將對本發(fā)明的一些實(shí)例進(jìn)行說明。
實(shí)施例1本實(shí)施例說明用于檢測BOC-L-纈氨酸中BOC-丙氨酸濃度的一種液-固色譜方法。
用0.15mg/mL的BOC-丙氨酸和15mg/mL的BOC-L-纈氨酸的稀釋液來制備一種檢測系統(tǒng)適用性的溶液。所用的稀釋液與洗脫液相同，由73％的0.05％磷酸水溶液和27％的乙腈構(gòu)成。將50μL的樣品在25℃下裝到一個(gè)Inertsil ODS-3V 5μm 150×4.6mm的色譜柱上。將檢測儀設(shè)定在210nm，以1mL/min的流速將樣品洗脫。BOC-丙氨酸和BOC-L-纈氨酸的保留時(shí)間分別為6分鐘和14.5分鐘。然后用一個(gè)合適的積分儀來比較AUPs以確定BOC-L-纈氨酸中的BOC-丙氨酸area-％濃度。
實(shí)施例2本實(shí)施例說明用于檢測BOC-L-纈氨酸中BOC-丙氨酸濃度的一種液-固色譜方法。
將5mg鳥嘌呤溶解在10mL 0.2N的NaOH中來制備一種檢測系統(tǒng)適用性的溶液。然后用98％的0.01M磷酸二氫鉀水溶液(用10％磷酸和2％乙腈調(diào)pH至3.5)將此溶液進(jìn)一步稀釋到100mL。再將5mg阿賽羅沃用稀釋液稀釋到總量100mL制成第二溶液。這兩種溶液每種取2mL加到20mg鹽酸威拉賽羅沃中。用稀釋液將鹽酸威拉賽羅沃溶液的總量加到25mL。這個(gè)稀釋液也作為HPLC分析的第一洗脫液。第二洗脫液為乙腈。將20μL鹽酸威拉賽羅沃、鳥嘌呤和阿賽羅沃的混合物注射到一個(gè)Inertsil ODS-3V 5μm 250×4.6mm的色譜柱上。這個(gè)色譜柱用0-20％第二洗脫液做梯度洗脫，32分鐘，流速1.5mL/min，溫度30℃。積分儀設(shè)定在254nm。鹽酸威拉賽羅沃的保留時(shí)間為13分鐘?？梢缘玫进B嘌呤和阿賽羅沃之間的轉(zhuǎn)變不少于15.0，尾因子不多于4.0的鹽酸威拉賽羅沃。
實(shí)施例3a本實(shí)施例描述在合成含有不少于約1.4area-％丙氨酸類似物的保護(hù)的鹽酸威拉賽羅沃的方法。
將含有少于1area-％BOC-丙氨酸的BOC-L-纈氨酸(870g)在通氮條件下充分溶解在5874mL的二甲基甲酰胺(DMF)中，同時(shí)攪拌。然后將混合物冷卻到-5℃。在20分鐘內(nèi)將一種二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(360g)的DMF(600g)溶液加到這個(gè)混合物中去，將得到的混合物在-5℃下攪拌20分鐘。將600g阿賽羅沃加到這個(gè)混合物中，攪拌5分鐘后加入98g DMAP。將混合物在-5℃下攪拌3小時(shí)。在20分鐘內(nèi)將DCC(330g)的DMF(600g)溶液加進(jìn)去。將混合物在-5℃下攪拌3小時(shí)。在20分鐘內(nèi)將DCC(438g)的DMF(780g)溶液加進(jìn)去，將得到的混合物在-5℃下攪拌3小時(shí)。將混合物在2.5個(gè)小時(shí)內(nèi)加熱到25℃，攪拌4小時(shí)。加入204g水，將混合物在25℃下攪拌4小時(shí)。生成的沉淀，二環(huán)己基尿，用過濾法回收，用1800g DMF洗滌。然后將過濾物減壓(10mmHg)濃縮得到殘余物。將這種殘余物回流溶解在6120g異丙醇(以下稱IPA)中。使混合物冷卻到25℃，通過過濾回收生成的沉淀——被保護(hù)的威拉賽羅沃。
實(shí)施例3b本實(shí)施例描述將在合成含有少于1.4area-％的丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃時(shí)被保護(hù)的鹽酸威拉賽羅沃去保護(hù)的方法。
將干基重578g的被保護(hù)的威拉賽羅沃在25℃下溶解在1440mL甲酸中。加入186mL水，然后在1小時(shí)內(nèi)加入311g 32％的鹽酸。在25℃下將此混合物攪拌1～5個(gè)小時(shí)，直到被保護(hù)的威拉賽羅沃的濃度減少到0.5％以下。在30分鐘內(nèi)向此混合物中加入9200mL異丙醇，將此混合物冷卻到-5℃。過濾回收生成的沉淀，得到含有少于1.4area-％的丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃的粗產(chǎn)物。
實(shí)施例3c本實(shí)施例描述含有少于1.4area-％的丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃結(jié)晶的生成。
將380g鹽酸威拉賽羅沃的粗產(chǎn)物在40℃下溶解在1520mL水中。此混合物經(jīng)過濾后冷卻到35℃。在3小時(shí)內(nèi)向此混合物中加入5700mL異丙醇。將此混合物冷卻到-5℃。生成的沉淀即結(jié)晶的鹽酸威拉賽羅沃，通過過濾回收。將此濕沉淀真空干燥，再把干的沉淀物碾磨。結(jié)晶的鹽酸威拉賽羅沃含有少于1.4area-％的丙氨酸類似物。
實(shí)施例4a本實(shí)施例描述在合成含有少于0.03area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃時(shí)被保護(hù)的威拉賽羅沃的生成。
在通氮條件下將870g含有少于0.05％BOC-丙氨酸的BOC-L-纈氨酸溶解在5874mL DMF中，在20～25℃下攪拌，直到充分溶解。然后將混合物冷卻到-5℃。在20分鐘內(nèi)向此混合物中加入DCC(330g)的DMF(600g)溶液，將所得到的混合物在-5℃下攪拌20分鐘。將600g阿賽羅沃加入此混合物中，攪拌5分鐘后再加入98g DMAP。將此混合物在-5℃下攪拌3小時(shí)。在20分鐘內(nèi)向此混合物中加入DCC(330g)的DMF(600g)溶液，將所得到的混合物在-5℃下攪拌3小時(shí)。在20分鐘內(nèi)向此混合物中加入DCC(438g)的DMF(780g)溶液，將所得到的混合物在-5℃下攪拌3小時(shí)。將此混合物在2.5小時(shí)內(nèi)加熱到25℃，攪拌4小時(shí)。加入240g水，將混合物在25℃下攪拌4小時(shí)。將生成的沉淀，即二環(huán)己基脲，過濾回收，用1800g DMF洗滌。然后將過濾物減壓(10mmHg)濃縮得到蠶渣。將這些殘?jiān)亓魅芙庠?120g異丙醇中。將混合物冷卻至25℃，將生成的沉淀，即被保護(hù)的威拉賽羅沃通過過濾回收。
實(shí)施例4b本實(shí)施例描述在合成含有少于0.03area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃時(shí)鹽酸威拉賽羅沃粗品的生成。
將干基重578g的按實(shí)施例4a所述方法得到的被保護(hù)的威拉賽羅沃在25℃下溶解在1440mL甲酸中。在此混合物中加入186mL水，然后在1小時(shí)內(nèi)再加入311g 32％的鹽酸溶液。將此混合物在25℃下攪拌1～5小時(shí)，直到被保護(hù)的威拉賽羅沃的濃度減少到0.5％以下。在30分鐘內(nèi)向此混合物中加入9200mL異丙醇，然后將此混合物冷卻到-5℃。過濾回收生成的沉淀，即為生成的含有少于約0.03area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃粗品。
實(shí)施例4c本實(shí)施例描述含有少于約0.03area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃結(jié)晶的生成。
在40℃將380g鹽酸威拉賽羅沃粗品溶解在1520mL水中。將混合物過濾并冷卻到35℃。在3小時(shí)內(nèi)向此混合物中加入5700mL異丙醇。再將混合物冷卻到-5℃。過濾回收生成的沉淀，即為結(jié)晶的鹽酸威拉賽羅沃。將濕的沉淀真空干燥，將干的沉淀物碾磨，產(chǎn)生的結(jié)晶的鹽酸威拉賽羅沃不含可檢出的丙氨酸類似物。
權(quán)利要求
1.一種制備含有少于約0.2area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃組合物的方法，包括a)獲得一批或多批BOC-L-纈氨算的一個(gè)或多個(gè)樣品；b)測定(a)步驟的每個(gè)樣品中BOC-L-丙氨酸的含量；c)選定一批BOC-L-纈氨酸，其所含的BOC-L-丙氨酸水平經(jīng)(b)步驟的檢測低于0.2area-％；以及d)用經(jīng)(c)步驟選定的這批BOC-L-纈氨酸合成鹽酸威拉賽羅沃組合物。
2.一種制備含有少于約0.2area-％丙氨酸類似物的鹽酸威拉賽羅沃組合物的方法，包括a)測定BOC-L-纈氨酸樣品中的BOC-L-丙氨酸，這里的BOC-L-纈氨酸樣品是從一批或多批BOC-L-纈氨酸中選定的；b)選定一批BOC-L-纈氨酸樣品，其所含的BOC-L-丙氨酸少于約0.2area-％；c)使所選定的BOC-L-纈氨酸在一種有機(jī)溶劑中與阿賽羅沃反應(yīng)以得到一種混合物；d)在(c)步驟的混合物中加入4-二甲基氨基吡啶，再加水以得到一種沉淀；e)除去(d)步驟的沉淀，并將所生成的過濾物濃縮；f)在(e)步驟的濃縮過濾物中回流加入一種低級醇以得到被保護(hù)的威拉賽羅沃；g)使(f)步驟中的被保護(hù)的威拉賽羅沃在甲酸、水和HCl中去保護(hù)以得到鹽酸威拉賽羅沃粗品；以及h)使(g)步驟中的鹽酸威拉賽羅沃通過水和異丙醇再結(jié)晶以得到含有少于約0.2area-％丙氨酸類似物的組合物。
3.權(quán)利要求1和2的任何一項(xiàng)方法，其中所選定的那批BOC-L-纈氨酸含有少于約0.1area-％的BOC-L-丙氨酸，而且所得到的鹽酸威拉賽羅沃組合物中含有少于約0.1area-％的BOC-L-丙氨酸類似物。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所選定的那批BOC-L-纈氨酸含有約0.05area-％的BOC-L-丙氨酸，而且所得到的鹽酸威拉賽羅沃組合物中不含有可檢出量的丙氨酸類似物。
5.權(quán)利要求2的方法，其中(c)步驟的有機(jī)溶劑為一種二環(huán)己基羰基二酰亞胺與二甲基甲酰胺的混合物。
6.權(quán)利要求2的方法，其中(f)步驟的低級醇為異丙醇。
7.權(quán)利要求1和2的任一項(xiàng)的方法，其中檢測BOC-L-纈氨酸的樣品是用液-固色譜方法檢測BOC-L-纈氨酸樣品中BOC-L-丙氨酸的量，包括如下步驟a)將樣品裝到一個(gè)液-固色譜柱上；b)用約1mL/min或更低的固定流速用洗脫液洗脫色譜柱，這里的洗脫液由約27％的乙腈和約73％的0.05％磷酸水溶液組成；c)監(jiān)測一個(gè)UV檢測器對色譜柱中洗脫物的反應(yīng)，其中UV檢測器的操作范圍設(shè)定在200～600nm；以及d)根據(jù)檢測器的反應(yīng)按面積百分比計(jì)算BOC-L-纈氨酸中的BOC-L-丙氨酸的量。
8.權(quán)利要求2的方法，其中鹽酸威拉賽羅沃樣品中的丙氨酸衍生物的面積百分比是用一種液-固色譜方法測定的，包括如下步驟a)將樣品裝到一個(gè)液-固色譜柱上；b)用一種梯度洗脫液以一種約1.5mL/min的固定流速對色譜柱做梯度洗脫，這里的梯度洗脫液包括第一和第二洗脫液，其中第一洗脫液為98％的0.01M磷酸二氫鉀水溶液和2％的乙腈，第二洗脫液為乙腈；c)監(jiān)測一個(gè)UV檢測器對色譜柱中洗脫物的反應(yīng)，其中UV檢測器的操作范圍設(shè)定在200～600nm；以及d)根據(jù)檢測器的反應(yīng)按面積百分比計(jì)算鹽酸威拉賽羅沃中丙氨酸類似物的量。
9.權(quán)利要求7和8中任一項(xiàng)的方法，其中的色譜柱是硅膠色譜柱
10.權(quán)利要求8的方法，其中第一洗脫液的pH值為約3.5。
11.權(quán)利要求8的方法，其中色譜柱的柱溫為約30℃。
12.一種測定鹽酸威拉賽羅沃中丙氨酸含量的液-固色譜方法，包括下述步驟a)將樣品裝到液-固色譜柱上；b)用一種梯度洗脫液以一種約1.5mL/min的固定流速對色譜柱做梯度洗脫，這里的梯度洗脫液包括第一和第二洗脫液，其中第一洗脫液為98％的0.01M磷酸二氫鉀水溶液和2％的乙腈，第二洗脫液為乙腈；c)監(jiān)測一個(gè)UV檢測器對色譜柱中洗脫物的反應(yīng)，其中UV檢測器的操作范圍設(shè)定在200～600nm；以及d)根據(jù)檢測器的反應(yīng)按面積百分比計(jì)算鹽酸威拉賽羅沃中丙氨酸類似物的量。
13.一種鹽酸威拉賽羅沃固態(tài)口服劑型的質(zhì)量控制分配方法，包括下述步驟a)生產(chǎn)一批干的鹽酸威拉賽羅沃和至少一種賦形劑；b)將步驟a)的那批產(chǎn)物處理成一批鹽酸威拉賽羅沃的固態(tài)口服劑型；c)從步驟b)那批產(chǎn)物中取樣，按照權(quán)利要求12的方法檢測其中丙氨酸類似物的量；以及d)如果步驟c)檢測的丙氨酸類似物的量少于約0.2area-％，則將步驟b)那批產(chǎn)品付諸商售。
14.一種鹽酸威拉賽羅沃固態(tài)口服劑型的質(zhì)量控制分配方法，包括下述步驟a)按照權(quán)利要求12的方法測定一個(gè)鹽酸威拉賽羅沃樣品中的丙氨酸類似物的量；b)如果步驟a)測得的丙氨酸類似物的量少于約0.2area-％，生產(chǎn)一批步驟a)的干的鹽酸威拉賽羅沃和至少一種賦形劑；c)將步驟b)的那批產(chǎn)物處理成一批鹽酸威拉賽羅沃的固態(tài)口服劑型；以及d)將步驟c)那批產(chǎn)品付諸商售。
15.一種制備鹽酸威拉賽羅沃藥物制劑的方法，包括如下步驟a)從一批鹽酸威拉賽羅沃中取樣；b)用權(quán)利要求12的方法計(jì)算樣品中丙氨酸類似物的量；以及c)用那批取樣檢測所含丙氨酸類似物的量少于約0.2area-％的產(chǎn)品制備鹽酸威拉賽羅沃的藥物制劑。
16.權(quán)利要求15的方法，其中那批產(chǎn)物經(jīng)步驟c)檢測其樣品中所含丙氨酸類似物的量少于約0.1area-％。
17.權(quán)利要求15的方法，其中那批產(chǎn)物經(jīng)步驟c)檢測其樣品中所含丙氨酸類似物的量少于約0.05area-％。
18.一種制備鹽酸威拉賽羅沃的方法，包括用所含BOC-L-丙氨酸少于約0.2area-％的BOC-L-纈氨酸做起始物制備鹽酸威拉賽羅沃的步驟。
全文摘要
本發(fā)明提供了分析BOC－L－纈氨酸中的BOC－L－丙氨酸和分析鹽酸威拉賽羅沃中的丙氨酸類似物的HPLC方法，以及其用途和選擇威拉賽羅沃組合物的方法。
文檔編號C07D473/18GK1910184SQ200580002698
公開日2007年2月7日 申請日期2005年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月21日
發(fā)明者Z·哈雷爾, M·佩薩喬維奇 申請人:特瓦制藥工業(yè)有限公司