專利名稱：陽離子心磷脂類似物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及陽離子心磷脂分子、它們的制備方法和應(yīng)用以及含有陽離子心磷脂的組合物。
背景技術(shù)：
對合成磷脂的需要不斷增加，部分地是由于它們在脂質(zhì)體中的應(yīng)用，其已經(jīng)成為活性治療劑、酶、抗生素、抗原和激素以及其它化合物的有用載體(Tyrell，等1976)。認(rèn)為陽離子脂質(zhì)體是輔助向細(xì)胞輸送陰離子物質(zhì)、例如基因或其它核酸的重要方式(Miller，1998)。認(rèn)為陽離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電荷的核酸序列通過靜電相互作用來形成復(fù)合物，其促進(jìn)這些試劑進(jìn)入細(xì)胞中。因而，在治療疾病時(shí)，陽離子脂質(zhì)可以在將陰離子試劑輸送進(jìn)患者的靶細(xì)胞和器官中起作用。結(jié)果，已經(jīng)需要開發(fā)結(jié)構(gòu)明確的脂質(zhì)的新的合成方法(Bhattacharya等1999)。
本發(fā)明涉及陽離子心磷脂，其用于通過促進(jìn)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)或通過增強(qiáng)向生物表面的粘附來提高生物活性劑、特別是多核苷酸、蛋白、肽和藥物分子的輸送。更具體地，涉及含有銨基的陽離子心磷脂。有些生物活性物質(zhì)不需要進(jìn)入細(xì)胞來發(fā)揮它們的生物作用，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^細(xì)胞表面受體作用于細(xì)胞表面來起作用。但是，許多能在亞細(xì)胞或分子水平影響細(xì)胞功能的天然生物分子和它們的類似物，包括蛋白和多核苷酸或外來物質(zhì)，例如藥物，優(yōu)選進(jìn)入細(xì)胞中，以產(chǎn)生它們的作用。對于這些試劑，細(xì)胞膜成為了不可透過的選擇性屏障。
在DNA轉(zhuǎn)染領(lǐng)域的一項(xiàng)重要進(jìn)展是，發(fā)現(xiàn)某些脂質(zhì)體或小泡形式的合成的陽離子脂質(zhì)，例如N-[1-(2，3-二油基氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨氯化物(DOTMA)，能自發(fā)地與DNA相互作用，形成脂質(zhì)-DNA復(fù)合物，其能與細(xì)胞膜的帶負(fù)電荷的脂質(zhì)相融合，導(dǎo)致DNA的攝入和表達(dá)(Felgner，等1987)。熟知的LipofectinTM試劑(Bethesda Research Laboratories，Gaithersburg，MD)是用于將高度陰離子的多核苷酸輸送進(jìn)活組織培養(yǎng)細(xì)胞中的有效試劑，其包含帶正電荷的多核苷酸以形成復(fù)合物。在某種程度上，認(rèn)為陽離子脂質(zhì)作為細(xì)胞轉(zhuǎn)染劑的功效的原因是它們具有增強(qiáng)的細(xì)胞親合力，所述細(xì)胞中的許多在它們的膜表面具有高負(fù)電荷的區(qū)域。另外，包含陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)聚集體上存在的正電荷使得該聚集體能結(jié)合聚陰離子，特別是核酸。以該方法制備的脂質(zhì)聚集體可以自發(fā)地與細(xì)胞表面上的負(fù)電荷相互作用，與質(zhì)膜融合，并將功能多核苷酸有效地輸送進(jìn)細(xì)胞中。
心磷脂(也稱作雙磷脂酰甘油)構(gòu)成了一類復(fù)合的陰離子的磷脂，其典型地從與高度代謝活性有關(guān)的組織的細(xì)胞膜中純化，包括心臟和骨骼肌的線粒體(Grunner等1985)。但是，已知的色譜純化技術(shù)不能將心磷脂歸為離散的分子種類。結(jié)果，該組分在藥物制劑中的應(yīng)用已經(jīng)受到限制，因?yàn)榈玫降闹苿┎皇蔷鶆虻?。另外，該化合物是陰離子的，這限制了它在陽離子脂質(zhì)體中的應(yīng)用。心磷脂和陰離子試劑之間的電荷排斥會影響其在許多情況中的應(yīng)用。
陽離子形式的心磷脂會吸引陰離子試劑，且對藥物輸送更有用。這樣的復(fù)合物還可以用于穩(wěn)定膠束和脂質(zhì)體中的疏水化合物。需要可以用于合成陽離子心磷脂的新的合成方法。用于制備陽離子心磷脂的合成方法可以用于制備化合物的均勻制劑。
需要新的合成方法，其可以用于制備大量的飽和的和不飽和的具有不同脂肪酸鏈長的陽離子心磷脂種類。該方法能提高更多種陽離子心磷脂種類的可利用性，并且能使可以用于開發(fā)新的含有活性劑的脂質(zhì)體制劑的脂類多樣化，與目前可以獲得的那些相比，其具有更多定義的組合物。
本發(fā)明提供了這樣的方法和組合物。從這里提供的本發(fā)明的描述，本發(fā)明的這些和其它優(yōu)點(diǎn)、以及其它的發(fā)明特征將是明顯的。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了陽離子心磷脂化合物和合成和使用它們的方法。更具體地，本發(fā)明提供了含有陽離子心磷脂類似物的脂質(zhì)體、含有陽離子心磷脂類似物的藥物組合物和使用這樣的脂質(zhì)體和組合物的方法，例如將活性藥物輸送給患者。
本發(fā)明的陽離子心磷脂可以結(jié)合在脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)制劑中，所述的脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)制劑還可以包含活性劑例如疏水的或親水的藥物，核酸例如反義寡核苷酸或診斷劑。這樣的脂質(zhì)體可以用于治療疾病，或用于診斷和/或分析試驗(yàn)中。陽離子心磷脂能促進(jìn)生物活性劑向細(xì)胞中的運(yùn)輸?？梢约庸け景l(fā)明的陽離子心磷脂化合物，以與生物活性劑形成脂質(zhì)聚集體，照此，可以用作細(xì)胞轉(zhuǎn)染劑。


圖1顯示了含有醚連接的烷基側(cè)鏈的陽離子心磷脂類似物的合成。
圖2、3和4顯示了含有醚連接的烷基側(cè)鏈的隔離物陽離子心磷脂類似物的合成。
圖5顯示了含有醚連接的烷基側(cè)鏈的隔離物陽離子心磷脂類似物的合成。
圖6顯示了含有醚連接的烷基側(cè)鏈的隔離物陽離子心磷脂變體、陽離子心磷脂類似物的合成。
圖7顯示了含有醚連接的烷基側(cè)鏈的陽離子心磷脂變體類似物的合成。
圖8顯示了含有酯連接的烷基側(cè)鏈的隔離物陽離子心磷脂類似物的合成。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了包含在光學(xué)上純的和/或非對映異構(gòu)體的陽離子心磷脂變體和類似物、以及它們的合成方法和應(yīng)用。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式I或X的陽離子心磷脂變體和類似物和它們的合成方法
在式I和X中，Z1和Z2可以相同或不同地為-O-C(O)-、-O-、-S-、-NH-C(O)-等。另外，在式I和X中，R1，R2，R3和R4可以相同或不同，且可以獨(dú)立地為H、飽和的或不飽和的烷基、鏈烯基、或炔基(典型地，但不是必須地，C1至C32)，其可以是任選地羥基化的、胺化的(aminenated)、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或用它們的組合取代的。在式I和X中，R5和R6可以相同或不同，且可以獨(dú)立地沒有或含有連接物，所述連接物含有烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基(典型地C1至C32)或烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚。
在式I和X中，R7可以是氫、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、烷?；⑾；?alkenoyl)、炔?；?alkynoyl)，其可以是任選地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或以它們的組合取代的；或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；氨基酸、肽、肽模擬部分(peptidomimetic moiety)、二肽、多肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、糖或多糖、多胺、雜環(huán)化合物、核苷、或多核苷酸或其它類似部分。在式X中，兩個R7取代基可以相同或不同，且可以獨(dú)立地含有這樣的部分。在式I和X中，R8基團(tuán)可以相同或不同，且可以獨(dú)立地包含C1至C25飽和的或不飽和的烷基、烷氧基、取代的烷基、或取代的烷氧基。式I和X中的″X″是無毒的陰離子，例如氯離子、溴離子、碘離子等。
術(shù)語″烷基″包含飽和的或不飽和的直鏈和支鏈烴部分。術(shù)語″取代的烷基″或″取代的烷氧基″等包含還攜帶一個或多個取代基的烷基或烷氧基，所述取代基選自羥基，烷氧基(低級烷基的)，巰基(低級烷基的)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，鹵素，氰基，硝基，氨基，酰胺基(amido)，亞氨基，硫代，-C(O)H，?；貂；然?。術(shù)語″糖″是指任何天然存在的或非天然的糖，例如葡萄糖、甘露糖、阿洛糖、核糖、巖藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、2-脫氧糖、3-脫氧糖、4-脫氧糖、二糖和多糖。術(shù)語″氨基酸″指任何天然存在的或非天然的氨基酸。該定義意在包含取代的α-氨基酸和非α-氨基酸。α-氨基酸是定義為這樣的氨基酸，其中氨基是連接到臨近羧酸基團(tuán)的碳原子上。術(shù)語″核苷酸序列″指任意一種或多種多核苷酸或多核苷酸片段或構(gòu)建體(例如，DNA或RNA寡聚體，mRNA或pDNA)。核苷酸序列可以是線性的、環(huán)狀的(例如，質(zhì)粒)或分支形式以及雙鏈或單鏈形式。核苷酸序列可以包含常規(guī)的磷酸二酯鍵或非常規(guī)的鍵(例如，酰胺鍵，例如出現(xiàn)在肽核酸(PNA)中)。術(shù)語″肽″指含有通過肽鍵連接的兩個或多個氨基酸的分子?！咫逆I″或″肽連接″是一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的氨基之間去除一個水分子形成的共價(jià)鍵，且具有化學(xué)結(jié)構(gòu)-C(O)-NR-，其中R是H、C1至C15烷基。術(shù)語″多肽″指通過肽鍵連接的超過9個氨基酸的聚合物。術(shù)語″蛋白″指高分子量的氨基酸多肽，包括但不限于激素、抗體和某些抗原(Wheeler，Carl，J.專利號WO 00/73263A1)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I和X中的R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C32烷基、鏈烯基、炔基，它們是任選地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的或鹵化的。另外，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I和X中的R5和R6相同或不同地為連接物，其含有C1至C32烷基或烷氧基例如含有1至500個PEG單元的聚乙二醇化的醚。另外，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中的R7取代基是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、肽、二肽、多肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、多糖、雜環(huán)化合物、核苷、或多核苷酸。
在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I和X中的R5，R6，R7和R8中的至少一個包含任選取代的烷基或任選取代的烷氧基。例如，式I和X中的R5或R6中的至少一個(或二者)可以含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至500個烷氧基，例如1至100個烷氧基。實(shí)際上，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I和X中的R7和R8中的至少一個包含任選取代的烷基，且R5和R6包含任選取代的聚烷氧基。在一個特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，至少一個R5和/或R6(或全部R5和/或R6取代基)是乙氧基(單PEG)。
在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，R7取代基是氨基酸、葉酸、糖、肽、多糖、多肽、蛋白質(zhì)、多胺、或肽模擬部分。例如，在式I和X中，優(yōu)選的R7取代基是組蛋白、精胺、亞精胺、或其衍生物。在式I和X中，另一個優(yōu)選的R7取代基是作為O-糖苷或C-糖苷結(jié)合的糖類，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、核糖、阿拉伯糖、阿洛糖、巖藻糖、2-脫氧糖等。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，R7取代基可以包括在側(cè)鏈上具有帶正電荷的基團(tuán)的L-或D-α氨基酸，例如，精氨酸、組氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、或其類似物。另外，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，R7取代基包含帶有一個或多個正電荷的氨基酸、糖類、肽、多糖、多肽、蛋白質(zhì)、多胺、或肽模擬部分。關(guān)于式X，其具有2個R7取代基，它們可以相同或不同，且可以獨(dú)立地含有這樣的基團(tuán)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，R8基團(tuán)是CH3。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，至少一個R5，R6，R7和R8包含取代的烷基或取代的烷氧基。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式I和X中，Z1和Z2是-O-C(O)-或-O-。R1，R2，R3和R4是相同的，為C1至C32飽和的和/或不飽和的烷基、優(yōu)選10至24個碳原子。在式I和X中，″X″最優(yōu)選地為氯離子或溴離子。
在優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5和R6不存在；R7是氫；R8是CH3；X是溴離子；Z1和Z2是氧；它是具有結(jié)構(gòu)II的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、炔基；在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5和R6不存在；R7是氫；R8是CH3；X是溴離子；Z1和Z2是-O-C(O)-；它是具有結(jié)構(gòu)III的陽離子心磷脂酯
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C31烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5不存在；R6是OCH2CH2；R7是氫；R8是CH3，X是溴離子；Z1和Z2是氧；它是具有結(jié)構(gòu)IV的陽離子心磷脂醚類似物 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5不存在；R6是OCH2CH2；R7是氫；R8是CH3，X是溴離子；Z1和Z2是-O-C(O)-；它是具有結(jié)構(gòu)V的陽離子心磷脂酯類似物 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C31烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5是OCH2CH2；R6不存在；R7是氫；R8是CH3，X是溴離子；Z1和Z2是氧；它是具有結(jié)構(gòu)VI的陽離子心磷脂醚類似物 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5是OCH2CH2；R6不存在；R7是氫；R8是CH3，X是溴離子；Z1和Z2是-O-C(O)-；它是具有結(jié)構(gòu)VII的陽離子心磷脂酯類似物 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C31烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5和R6是OCH2CH2；R7是氫；R8是CH3，X是溴離子；Z1和Z2是氧；它是具有結(jié)構(gòu)VIII的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式I的化合物中，R5和R6是OCH2CH2；R7是氫；R8是CH3，X是溴離子；Z1和Z2是-O-C(O)-；它是具有結(jié)構(gòu)IX的陽離子心磷脂酯 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C31烷基、鏈烯基、炔基。
在一個優(yōu)選的根據(jù)通式X的化合物中，R5和R6不存在；R7是氫；X是溴離子；R8是CH3，Z1和Z2是氧；它是具有結(jié)構(gòu)XI的陽離子心磷脂變體醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式X的化合物中，R5和R6不存在；R7是氫；X是溴離子；R8是CH3，Z1和Z2是-O-C(O)-；它是具有結(jié)構(gòu)XII的陽離子心磷脂變體酯
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C31烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式XIII的陽離子心磷脂 在式XIII的化合物中，R1，R2，R3，R4，R5和R6，X，Z1和Z2可以是如上面關(guān)于式I和X所述。而且，在式XIII中，R7，R9，R10和R11可以是如上面關(guān)于式I和X中的R7所述。在式XIII中，R8是烷基、取代的烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、烷氧基或取代的烷氧基、優(yōu)選C2-C32。
在一個優(yōu)選的根據(jù)通式XIII的化合物中，R5和R6不存在，R8是丙基；R7，R9，R10和R11是氫；Z1和Z2是氧；X是氯化物；它是具有結(jié)構(gòu)XIV的陽離子心磷脂變體醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、炔基。
在另一個優(yōu)選的根據(jù)通式XIII的化合物中，R5和R6不存在，R8是丙基；R7，R9，R10和R11是氫；Z1和Z2是-O-C(O)-；X是氯化物；它是具有結(jié)構(gòu)XV的陽離子心磷脂變體酯
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C31烷基、鏈烯基、炔基。
根據(jù)本發(fā)明的陽離子心磷脂分子可以包含具有不同長度和飽和/不飽和的脂肪酸/烷基鏈(例如，在R1，R2，R3和R4)。通常，脂肪酸烴鏈的長度為約2至約32個碳原子；但是，碳鏈更典型地是約10至約24個碳原子(例如14至20碳原子)。脂肪酸典型地根據(jù)烴鏈中的雙鍵和/或三鍵的數(shù)目(即不飽和度)來分類。飽和脂肪酸不含有任何雙鍵或三鍵，且鏈中的每個碳上結(jié)合有最大數(shù)目的氫原子。脂肪酸的不飽和程度依賴于烴鏈中的雙鍵或三鍵的數(shù)目。在這方面，單不飽和脂肪酸含有一個雙鍵，而多不飽和脂肪酸含有2個或多個雙鍵(參見，例如，Oxford Dictionary of Biochemistryand Molecular Biology，修改版，A.D.Smith(編)，Oxford UniversityPress(2000)和Molecular Biology of the Cell，第3版，B.A.Alberts(編)，Garland Publishing，New York(1994))。
無論短的或還是長的，本發(fā)明的陽離子心磷脂的脂肪酸鏈還可以是飽和的或不飽和的。優(yōu)選的脂肪酸的碳鏈長為約C1至C32，優(yōu)選約C4至約C24，且包括丁酸(C4:0)，戊酸(C5:0)，己酸(C6:0)，庚酸(C7:0)，辛酸(Cs:0)，壬酸(C9:0)，癸酸(C10:0)，十一烷酸(C11:0)，十二烷酸(C12:0)，十三烷酸(C13:0)，十四烷酸(肉豆蔻酸)(C14:0)，十五烷酸(C15:0)，十六烷酸(棕櫚酸)(C16:0)，十七烷酸(C17:0)，十八烷酸(硬脂酸)(C18:0)，十九烷酸(C19:0)，二十烷酸(花生酸)(C20:0)，二十一烷酸(C21:0)，二十二烷酸(山萮酸)(C22:0)，二十三烷酸(C23:0)，二十四烷酸(C24:0)，10-十一碳烯酸(C11:1)，11-十二碳烯酸(C12:1)，12-十三碳烯酸(C13:1)，肉豆寇腦酸(C14:1)，10-十五碳烯酸(C15:1)，棕櫚油酸(C16:1)，油酸(C18:1)，亞油酸(C18:2)，亞麻酸(C18:3)，二十碳烯酸(C20:1)，二十碳二烯酸(eicosdienoic acid)(C20:2)，二十碳三烯酸(C20:3)，花生四烯酸(順式-5，8，11，14-二十碳四烯酸)和順式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸，除了別的以外。關(guān)于醚類似物，烷基鏈的范圍是C1至C32，優(yōu)選約C4至約C24。其它的脂肪酸鏈也可以用作R1和/或R2，R3和/或R4取代基。這樣的實(shí)例包括飽和脂肪酸，例如乙酸(或乙酸)，丙酸(或propionic acid)，丁酸(或butyric acid)，二十六酸(或蠟酸)，二十八酸(或褐煤酸)，三十烷酸(或蜂花酸)，三十二烷酸(或紫膠蠟酸)，三十四酸，三十五酸(或ceroplasticacid)等；單烯的不飽和脂肪酸例如反式-2-丁烯酸(或巴豆酸)，順式-2-丁烯酸(或異巴豆酸)，2-己烯酸(或異己烯酸)，4-癸酸(或4-十碳烯酸)，9-癸酸(或癸烯酸)，4-十二碳烯酸(或linderic acid)，5-十二碳烯酸(或denticetic acid)，9-十二碳烯酸(或月桂烯酸)，4-十四碳烯酸(或粗租酸)，5-十四碳烯酸(或抹香鯨酸)，6-十八碳烯酸(或petroselenic acid)，反式-9-十八碳烯酸(或反油酸)，反式-11-十八碳烯酸(或牛痘酸)，9-二十碳烯酸(或順9-二十碳烯酸)，11-二十碳烯酸(或巨頭鯨魚酸)，11-二十二烯酸(或鯨蠟烯酸)，13-二十二烯酸(或芥酸)，15-二十四碳烯酸(或神經(jīng)酸)，17-二十六碳烯酸(或西門木烯酸)，21-三十碳烯酸(或lumequeic acid)，等；二烯的不飽和脂肪酸例如2，4-戊二烯酸(或β-乙烯基丙烯酸)，2，4-己二烯酸(或山梨酸)，2，4-癸二烯酸(或?yàn)蹊晁?，2，4-十二碳二烯酸，9，12-十六碳二烯酸，順式-9，順式-12-十八碳二烯酸(或α-亞油酸)，反式-9，反式-12-十八碳二烯酸(或linlolelaidic acid)，反式-10，反式-12-十八碳二烯酸，11，14-二十碳二烯酸，13，16-二十二碳二烯酸，17，20-二十六碳二烯酸等；三烯的不飽和脂肪酸例如6，10，14-十六碳三烯酸(或hiragonic acid)，7，10，13-十六碳三烯酸，順式-6，順式-9-順式-12-十八碳三烯酸(或γ-亞油酸)，反式-8，反式-10-反式-12-十八碳三烯酸(或β-十八碳三烯酸)，順式-8，反式-10-順式-12-十八碳三烯酸，順式-9，順式-12-順式-15-十八碳三烯酸(或α-亞麻酸)，反式-9，反式-12-反式-15-十八碳三烯酸(或α-亞麻酸)，順式-9，反式-11-反式-13-十八碳三烯酸(或α-桐酸)，反式-9，反式-11-反式-13-十八碳三烯酸(或α-桐酸)，順式-9，反式-11-順式-13-十八碳三烯酸(或石榴油酸)，5，8，11-二十碳三烯酸，8，11，14-二十碳三烯酸等；四烯的不飽和脂肪酸例如4，8，11，14-十六碳四烯酸，6，9，12，15-十六碳四烯酸，4，8，12，15-十八碳四烯酸(或moroctic acid)，6，9，12，15-十八碳四烯酸，9，11，13，15-十八碳四烯酸(或α-或β-十八碳四烯酸)，9，12，15，18-十八碳四烯酸，4，8，12，16-二十碳四烯酸，6，10，14，18-二十碳四烯酸，4，7，10，13-二十二碳四烯酸，7，10，13，16-二十二碳四烯酸，8，12，16，19-二十二碳四烯酸等；五-和六-烯的不飽和脂肪酸例如4，8，12，15，18-二十碳五烯酸(或二十碳五烯酸)，4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸，4，8，12，15，19-二十二碳五烯酸(或鰶魚酸)，7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸，4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸，4，8，12，15，18，21-二十四碳六烯酸(或尼生酸)等；支鏈的脂肪酸例如3-甲基丁酸(或異戊酸)，8-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸(或異月桂酸)，11-甲基十二烷酸(或異十一烷酸)，12-甲基十三烷酸(或異肉豆蔻酸)，13-甲基十四烷酸(或異十五烷酸)，14-甲基十五烷酸(或異棕櫚酸)，15-甲基十六烷酸，10-甲基十七烷酸，16-甲基十七烷酸(或異硬脂酸)，18-甲基十九烷酸(或異花生酸)，20-甲基二十一烷酸(或山萮酸)，22-甲基二十三烷酸(或異二十四烷酸)，24-甲基二十五烷酸(或異蠟酸)，26-甲基二十七烷酸(或isomonatonic acid)，2，4，6-三甲基二十八烷酸(或mycoceranic或mycoserosic acid)，2-甲基-順式-2-丁烯酸(當(dāng)歸酸)，2-甲基-反式-2-丁烯酸(或順芷酸)，4-甲基-3-戊烯酸(或pyroterebic acid)等。
本發(fā)明的陽離子心磷脂分子可以根據(jù)任何合適的方法制備，例如本領(lǐng)域已知的方法。但是，典型地，它們屬于2種一般的合成方法之一。在第一種途徑中，烴鏈通過醚鍵連接到甘油主鏈上。下面的實(shí)施例1-8(圖1-7)解釋了這種合成途徑。根據(jù)合成本發(fā)明的陽離子心磷脂的第2種途徑，烴鏈通過酯鍵連接到甘油主鏈上。下面的實(shí)施例9(圖8)解釋了這種合成途徑。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠明白，當(dāng)在實(shí)施例中描述了具體化合物的合成時(shí)，類似的反應(yīng)方案也可以用于構(gòu)建本發(fā)明的陽離子心磷脂分子，其例如在R1，R2，R3，R4或其它取代基的性質(zhì)上不同。
但是，制備后，本發(fā)明的陽離子心磷脂分子可以包含在組合物中，例如脂質(zhì)體制劑，復(fù)合物，乳劑，混懸液等。這樣的制劑可以根據(jù)組合物的類型通過任何合適的技術(shù)來制備，這是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的。
這樣的制劑可以包含除了本發(fā)明的陽離子心磷脂之外的成分，例如一種或多種共脂質(zhì)或生理上可接受的載體。為了定義的目的，術(shù)語″共脂質(zhì)″指可以與陽離子心磷脂組合的任何疏水物質(zhì)，其包括兩親的脂質(zhì)，例如磷脂和中性脂質(zhì)，例如膽固醇和其它甾醇，以及這樣的脂質(zhì)溶解形式。共脂質(zhì)可以是任何天然的或合成的磷脂或單-、二-或三甘油。天然磷脂典型地是來自動物和植物源的那些，例如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰肌醇。其它的合適的共脂質(zhì)包括甾醇(例如膽固醇，膽固醇的衍生物，糞醇，膽甾烷醇，膽甾烷，膽固醇半琥珀酸酯，膽固醇硫酸酯和其混合物)和生育酚(例如α生育酚)。用于包含在本發(fā)明的組合物中的其它的合適共脂質(zhì)包括磷脂酰膽堿，例如二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二油基磷脂酰膽堿、二棕櫚?；?磷脂酰膽堿、二花生四烯酰磷脂酰膽堿、卵磷脂酰膽堿、豆磷脂酰膽堿、氫化的豆磷脂酰膽堿和其混合物。另外，其它已知的陽離子脂質(zhì)例如N-[1-(2，3-二油基氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨氯化物(DOTMA)或1，2-二油酰基氧基-3-(三甲基氨)-丙烷(DOTAP)，可以包含在本發(fā)明的陽離子心磷脂組合物中。當(dāng)包含中性脂質(zhì)時(shí)，陽離子脂類(包括本發(fā)明的陽離子心磷脂)與中性脂類的摩爾比典型地為約9/1至約1/9。
除了本發(fā)明的陽離子心磷脂外，脂質(zhì)體組合物、復(fù)合物、乳劑等可以包括穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑、抗氧劑、磷脂、可生物降解的聚合物和醫(yī)學(xué)活性劑，除了其它成分外。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物、特別是脂質(zhì)體組合物包含靶向劑，例如能結(jié)合特異性底物的碳水化合物或蛋白或其它配體，例如抗體(或其片段)或能識別細(xì)胞受體的配體。包含這樣的試劑(例如碳水化合物或一種或多種蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)選自由抗體、抗體片段、肽、肽激素、受體配體例如細(xì)胞受體的抗體和其混合物組成的組)，可以促進(jìn)脂質(zhì)體靶向預(yù)定的組織或細(xì)胞類型。
盡管本發(fā)明意圖在任何合適類型的組合物中包括陽離子心磷脂，優(yōu)選的組合物是脂質(zhì)體組合物或含有脂質(zhì)囊的其它組合物。這樣的組合物可以包含單層的或多層的囊，或其混合物?？梢杂萌魏魏线m的技術(shù)來生產(chǎn)這樣的脂質(zhì)體制劑。例如，可以將能形成親脂的脂質(zhì)體的成分，例如磷脂酰膽堿、本發(fā)明的陽離子心磷脂、膽固醇和α-生育酚，溶解或分散到合適的溶劑或溶劑的組合中，并干燥。合適的溶劑包括任何非極性的或輕微極性的溶劑，例如叔丁醇、乙醇、甲醇、氯仿或丙酮，它們可以蒸發(fā)掉而不留下任何藥學(xué)上不可接受的殘余物。可以通過任何合適的方法進(jìn)行干燥，例如通過凍干?？梢詫⒂H水的成分(例如一些藥劑、防腐劑和其它試劑)溶解到極性溶劑、包括水中，其可以在干燥前或在重構(gòu)時(shí)與脂質(zhì)相進(jìn)行混合。將干燥的親脂成分與親水的混合物混合可以形成脂質(zhì)體?？梢酝ㄟ^任何強(qiáng)烈地均質(zhì)化混合物的方法將極性溶液與干燥的脂質(zhì)膜混合。渦流、磁力攪拌和/或超聲處理可以實(shí)現(xiàn)均質(zhì)化。
當(dāng)脂質(zhì)體中含有活性劑時(shí)，它們可以溶解或分散在合適的溶劑中，并在混合前添加到脂質(zhì)體混合物中。典型地，將親水的活性劑直接添加到極性溶劑中，將疏水的活性劑添加到用于溶解其它成分的非極性溶劑中，但這是不需要的。活性劑可以溶解在第3種溶劑或溶劑混合物中，并在均質(zhì)化混合物之前添加到極性溶劑與脂質(zhì)膜的混合物中。
通常，脂質(zhì)體可以是凈中性的，負(fù)電荷或正電荷的。例如，可以從含有磷脂酰膽堿、膽固醇、足夠的硬脂胺以克服陽離子心磷脂的凈正電荷的溶液中形成陽離子脂質(zhì)體?，F(xiàn)在，可以從含有磷脂酰膽堿、膽固醇和本發(fā)明的陽離子心磷脂類似物的溶液制備出帶正電荷的脂質(zhì)體。
根據(jù)制備它們的具體組合物和方法，本發(fā)明的脂質(zhì)體可以是多層的或單層的囊。脂質(zhì)體可以制備成具有實(shí)質(zhì)上均勻的在選定尺寸范圍內(nèi)的大小，例如約1微米或更小，或約500nm或更小，約200nm或更小，或約100nm或更小。一種有效的設(shè)定尺寸的方法包括將脂質(zhì)體的水性懸浮液從一系列具有選定的均勻孔徑大小的聚碳酸酯膜中擠出；膜的孔徑大小大致與穿過該膜擠出生成的脂質(zhì)體的最大尺寸相對應(yīng)。
可以給脂質(zhì)體包裹可生物降解的聚合物例如蔗糖、表氯醇、分支的親水的蔗糖聚合物、聚乙二醇、聚乙烯醇、甲氧基聚乙二醇、乙氧基聚乙二醇、聚環(huán)氧乙烷、聚氧乙烯、聚氧丙烯、乙酸纖維素、藻酸鈉、N，N-二乙基氨基乙酸酯、聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯X-月桂醚，其中X是9至20，和聚氧乙烯脫水山梨醇酯。
脂質(zhì)體(或其它脂質(zhì))組合物或制劑可以是任何理想的形式。例如，為了藥物用途，組合物可以是已經(jīng)準(zhǔn)備好施用給患者。當(dāng)這樣的組合物含有脂質(zhì)體或其它類型的脂質(zhì)囊時(shí)，這樣的制劑典型地是在水性介質(zhì)中的微囊形式?；蛘撸苿┛梢允歉稍锏幕騼龈傻男问?，在該情況下，組合物優(yōu)選地還包含冷凍保護(hù)劑。合適的冷凍保護(hù)劑包括，例如，糖類例如海藻糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖和葡聚糖，從性能看，最優(yōu)選的糖是海藻糖和蔗糖。還可以使用其它更復(fù)雜的糖，例如，氨基糖苷，包括鏈霉素和二氫鏈霉素。
抗氧劑可以包含在包括本發(fā)明的陽離子心磷脂的脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)制劑中。合適的抗氧劑包括化合物例如抗壞血酸、生育酚和deteroximemesylate。吸收促進(jìn)劑可以包含在脂質(zhì)制劑中。合適的吸收促進(jìn)劑包括水楊酸鈉-鵝去氧膽酸鈉、去氧膽酸鈉、聚氧乙烯9-月桂醚、鵝去氧膽酸鹽-去氧膽酸鹽和聚氧乙烯9-月桂醚、甘油一油酸酯、?；?24，25-二氫夫西地酸鈉(Na taruo-24，25-dihydrofusidate)、?；侨パ跄懰徕c、甘氨鵝去氧膽酸鈉(Na glycochenodeoxycholate)、油酸、亞油酸和亞麻酸。還可以包含聚合的吸收促進(jìn)劑，例如聚氧乙烯醚、聚氧乙烯脫水山梨醇酯、聚氧乙烯10-月桂醚、聚氧乙烯16-月桂醚、氮酮(1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷-2-酮)。
包含本發(fā)明的陽離子心磷脂的根據(jù)本發(fā)明的組合物可以用于多種用途，例如將肽、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、多核苷酸、小分子、或其它試劑體內(nèi)地或體外地輸送給人或動物(典型地脊椎動物)患者、植物或培養(yǎng)的細(xì)胞?？梢砸匀魏畏椒ㄊ褂媒M合物，例如，包括使用脂質(zhì)體或脂質(zhì)囊體內(nèi)地或體外地胞內(nèi)輸送物質(zhì)(Felgner等美國專利號5,264,618)。組合物還可以以化妝品方式使用，例如，作為皮膚病學(xué)制品。因此，可以根據(jù)目標(biāo)最終用途來配制組合物。
為了應(yīng)用于人或動物患者，組合物優(yōu)選地包含一種或多種生理上(或藥學(xué)上)可接受的介質(zhì)或載體?？梢允褂萌魏芜@樣的介質(zhì)，例如通常用于脂質(zhì)制劑中的那些。因此，本發(fā)明提供了藥物制劑，其含有本發(fā)明的陽離子心磷脂(例如如所述配制的)和藥學(xué)上可接受的載體或介質(zhì)。
相信根據(jù)本發(fā)明的化合物會賦予患者有益效果，且可以例如抵抗老化、癌癥、心臟病等的影響。因此，可以有益地使用本發(fā)明的藥物制劑來治療某些個體，無需包含其它的藥物。但是，本發(fā)明的藥物制劑可以包含藥理學(xué)上有效量的一種或多種治療劑。在該意義上，治療劑的有效量是在給人或動物應(yīng)用該組合物后適合提供治療效果的量。特定治療劑的有效量取決于該試劑，但是在本發(fā)明的組合物中使用的有效量的確定屬于本領(lǐng)域的常識。
在一個實(shí)施方案中，藥物制劑可以包括作為活性劑的治療有效量的核苷類似物或核苷酸類似物。合適的核苷類似物或核苷酸類似物的實(shí)例包括具有抗病毒作用的核苷或核苷酸類似物，例如二脫氧核苷酸、二脫氫核苷酸、核苷的鹵化的或疊氮基衍生物和無環(huán)的核苷。例如，具有鹵素-取代的嘌呤或嘧啶環(huán)的核苷或核苷酸類似物，例如5-三氟甲基-2′-脫氧尿苷或5-氟尿嘧啶；具有鹵素-和疊氮基取代的核糖部分的核苷或核苷酸類似物，例如3′-疊氮基-3′脫氧胸苷(AZT)，具有取代核糖部分上的氧的碳的核苷類似物(碳環(huán)核苷)，或具有無環(huán)的戊糖的核苷酸類似物，例如無環(huán)鳥苷或丙氧鳥苷(gancyclovir)(DHPG)可以合適地包含在組合物中。這種類似物的脂質(zhì)體輸送是本領(lǐng)域已知的(Hosteter等美國專利號5,223,263)，本發(fā)明的組合物可以合適地用于將這樣的試劑輸送給能夠從這樣的治療中獲益的患者。當(dāng)將它們作為磷脂衍生物呈遞給細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)這些類似物的抗病毒效力有所提高。這些衍生物可以整合進(jìn)用于施用給細(xì)胞的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中，由此形成更穩(wěn)定的脂質(zhì)體復(fù)合物，其可以將更大量的藥物輸送給靶細(xì)胞，且具有更低的毒性。核苷類似物的有效的抗病毒脂質(zhì)衍生物包括磷脂酰2′，3′-二脫氧核苷，2′，3′-二脫氫核苷，3′-疊氮基-2′-脫氧核苷，3′-氟脫氧核苷和3′-氟二脫氧核苷，9-β-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤(araA)，1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷(araC)，核苷例如具有無環(huán)的核糖基團(tuán)的無環(huán)鳥苷和丙氧鳥苷，或與二甘油二磷酸酯衍生物相同的核苷類似物。用于使用陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的脂質(zhì)體輸送治療HIV感染的抗病毒的或抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的核苷類似物的脂質(zhì)衍生物的優(yōu)選種類是3′-疊氮基-2′，3′-二脫氧嘧啶的3′-磷脂衍生物、3′-鹵代嘧啶二脫氧核苷、或2′，3′-二脫氫-2′，3′-二脫氧核苷，例如磷脂酰3′-疊氮基-3′脫氧胸苷(pAZT)或磷脂酰2-氯脫氧腺苷。使用含有無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷、1-(2-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶(FIAC)或1-(2′-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)5-碘尿嘧啶(FIAU)的核苷類似物，可以有效地治療某些病毒感染，包括皰疹、巨細(xì)胞病毒和乙肝感染。使用根據(jù)本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)脂質(zhì)體輸送系統(tǒng)，可以將這些試劑的磷脂衍生物、優(yōu)選磷脂酰和二甘油二磷酸酯衍生物施用于這些疾病。已經(jīng)報(bào)道了抗病毒核苷的脂質(zhì)衍生物的結(jié)構(gòu)、合成和脂質(zhì)體輸送的細(xì)節(jié)(Hostetler等美國專利號6,448,392)，本發(fā)明的組合物可以合適地用于將這樣試劑輸送給能從這樣的治療獲益的患者。
在另一個實(shí)施方案中，藥物制劑可以包含作為活性劑的治療有效量的皮質(zhì)類固醇或非甾族的抗炎劑。其它合適的活性劑包括生物活性脂質(zhì)，例如，1-O-十八烷基-2-O-甲基-sn-丙三基-3-磷酸膽堿。其它合適的活性劑包括藥物，例如抗癌藥和局部的抗生素例如克林霉素，妥布霉素，新霉素，慶大霉素，四環(huán)素，紅霉素；抗真菌藥，例如克霉唑，咪康唑，nystain，lactoconazole，益康唑和托萘酯；用于治療痤瘡的視黃酸；和用于治療單純皰疹的試劑，和包括抗病毒的核苷類似物例如無環(huán)鳥苷和丙氧鳥苷。這些核苷類似物制劑優(yōu)選地含有抗病毒劑的脂質(zhì)衍生物，特別是如(Felgner等，美國專利號5,459,127)所述的磷脂酰甘油衍生物，照此可以整合在含有一種或多種本發(fā)明的陽離子心磷脂類似物的脂質(zhì)體或其它制劑中。其它合適的活性劑的實(shí)例包括抗真菌藥、氧化劑、蛋白質(zhì)、多肽和治療性多核苷酸。優(yōu)選的蛋白質(zhì)包括，例如，抗體例如單克隆抗體或其片段。
適用于陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的輸送的治療上重要的多核苷酸是不同工藝的帶負(fù)電荷的新寡核苷酸，包括用于消除或減少基因產(chǎn)物生成的反義多核苷酸序列(Ts′o等1987)。這些寡核苷酸種類中的許多是稀有的、且合成昂貴，根據(jù)普通的現(xiàn)有技術(shù)，不能有效地包封到帶負(fù)電荷的脂質(zhì)的脂質(zhì)體中。
治療性多核苷酸的實(shí)例包括核酶、干擾RNA(RNAi)、反義RNA或DNA序列，其可以定位到細(xì)胞中的目標(biāo)序列，例如與疾病狀態(tài)有關(guān)的基因(例如，致癌基因或病毒基因)。用于定位到目標(biāo)基因的優(yōu)選的治療性多核苷酸是10至30-mer的反義多核苷酸，優(yōu)選15-mer的序列，例如，對c-raf基因靶向的(參見，例如美國專利6,126,965，其公開了具有序列5′-GTGCTCCATTGATGC-3′的15-mer抗c-raf-1寡核苷酸)。當(dāng)組合物中含有寡核苷酸時(shí)，它們優(yōu)選地含有一個或多個硫代磷酸連接，優(yōu)選2個硫代磷酸連接。最優(yōu)選地，包含在本發(fā)明的組合物中的寡核苷酸在每個末端含有1個硫代磷酸連接，但是它們可以存在于從寡核苷酸的一個末端至另一個末端的任何位置(例如，在末端之間)。治療性核酶、干擾RNA(RNAi)反義RNA或DNA序列定位的其它優(yōu)選的基因包括病毒基因，特別是HIV基因，例如rev反式激活蛋白。在其它實(shí)施方案中，治療性多核苷酸可以是這樣的，它在疾病狀態(tài)中不存在或是突變的，或可以編碼在疾病狀態(tài)是缺乏的或不存在的基因產(chǎn)物。其它多核苷酸可以編碼治療性多肽，例如，免疫原性肽(其可以用作疫苗)、天然激素或天然激素的合成類似物。
可以包含在本發(fā)明的制劑中的其它合適的活性劑包括能作用于下述對象的試劑外周神經(jīng)、腎上腺素能受體、膽堿能受體、骨骼肌、心血管系統(tǒng)、平滑肌、血管系統(tǒng)、突觸位點(diǎn)、神經(jīng)效應(yīng)器接合位點(diǎn)、內(nèi)分泌和激素系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)、消化和排泄系統(tǒng)、組胺系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。合適的試劑可以選自，例如蛋白質(zhì)、酶、激素、核苷酸(包括有義和反義寡核苷酸)、多核苷酸、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、多肽、類固醇。活性劑可以是鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、抗心律不齊劑、抗生素、抗過敏劑、抗真菌劑、抗癌劑、抗凝血劑、抗抑郁劑、抗糖尿病劑、抗癲癇劑、抗炎的皮質(zhì)類固醇、用于治療阿爾茨海默氏病或帕金森氏病的藥物、抗?jié)儎⒖乖x藥、抗焦慮藥、甲狀腺制劑、抗甲狀腺制劑、抗病毒藥、減食欲藥物(anoretics)、二膦酸鹽、影響心肌收縮力藥(cardiac inotropicagents)、心血管藥、皮質(zhì)類固醇、利尿劑、多巴胺能劑、腸胃病藥、止血藥、高膽固醇藥、降壓藥(例如二氫吡啶)、抗抑郁藥和cox-2抑制劑、免疫抑制劑、抗痛風(fēng)藥、抗瘧藥、類固醇、terpinoids，triterpines，類視色素；抗?jié)僅2-受體拮抗劑、降血糖藥、保濕劑、化妝品、抗偏頭痛藥、抗毒蕈堿性劑(antimuscarinic agents)、抗炎藥、例如用于治療風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、炎性腸病、局限性回腸炎的藥物；或用于治療脫髓鞘性病、包括多發(fā)性硬化的藥物、眼藥、疫苗(例如抗肺炎、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、霍亂毒素B亞單位、流感病毒、傷寒、惡性瘧原蟲、diptheria、破傷風(fēng)、HSV、結(jié)核病、HIV、SARS病毒、pordetela pertussis、麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹疫苗(MMV)、細(xì)菌類毒素、疫苗病毒、腺病毒、canary、脊髓灰質(zhì)炎病毒、卡介苗(BCG)、弗里德蘭德桿菌肺炎(klebsiellapneumonia)等)、組胺受體拮抗劑、安眠藥、保腎劑、調(diào)脂劑、肌肉松弛劑、神經(jīng)抑制藥、親神經(jīng)劑、阿片樣物質(zhì)激動劑和拮抗劑、擬膽堿藥、蛋白酶抑制劑、前列腺素(prostglandins)、鎮(zhèn)靜藥、性激素(例如，雌激素、雄激素)、興奮劑、擬交感神經(jīng)藥、血管舒張藥和花黃素和這些種類的合成類似物。治療劑可以是腎毒性的，例如環(huán)孢素和兩性霉素B，或心臟毒性的，例如兩性霉素B和紫杉醇。示例性的抗癌劑包括美法侖、氮芥、extramustinephosphate、烏拉莫司汀、異環(huán)磷酰胺、甘露莫司汀、trifosfamide、鏈唑霉素、二溴甘露醇、米托蒽醌(參見，例如公開的國際專利申請WO02/32400)、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、替加氟、idoxide、紫杉烷類(例如，泰素、紫杉醇等，(參見，例如公開的國際專利申請WO 00/01366)、道諾霉素、柔紅霉素、博來霉素、兩性霉素、卡鉑、順鉑、紫杉醇、BCNU、長春新堿、喜樹堿和其衍生物(例如SN38(參見，例如公開的國際專利申請WO 02/058622)、伊立替康(參見，例如公開的國際專利申請WO03/030864))、小紅霉素(antracyclines)、抗體、cytoxines、多柔比星、依托泊甙(etopside)、細(xì)胞因子、核酶、干擾素、寡核苷酸和前述物質(zhì)的功能衍生物?？梢愿鶕?jù)本方法輸送的藥物的其它實(shí)例包括乙二磺酸鹽丙氯拉嗪(prochlorperzine edisylate)、硫酸亞鐵、氨基己酸、鹽酸美卡拉明、鹽酸普魯卡因胺、硫酸苯丙胺、鹽酸去氧麻黃堿、benzamphetaminehydrochloride、硫酸異丙腎上腺素、鹽酸芬美曲秦、氯貝膽堿、氯醋甲膽堿、鹽酸毛果蕓香堿、硫酸阿托品、東莨菪堿溴化物(scopolamine bromide)、異丙碘銨、曲地氯銨、鹽酸苯乙雙胍、鹽酸哌甲酯、膽茶堿、鹽酸頭孢氨芐、地芬尼多、鹽酸美克洛嗪、馬來酸丙氯拉嗪、酚芐明、馬來酸硫乙拉嗪(thiethylperzine maleate)、anisindone、二苯茚酮丁四硝酯、地高辛、異氟磷、乙酰唑胺、醋甲唑胺、芐氟噻嗪、chloropromaide、妥拉磺脲、醋酸氯地孕酮、非那二醇、別嘌醇、阿司匹林鋁、甲氨蝶呤、醋磺胺異噁唑、紅霉素、氫化可的松、hydrocorticosterone acetate、醋酸可的松、地塞米松和其衍生物例如倍他米松、曲安西龍、甲睪酮、17-(S)-雌二醇、炔雌醇、炔雌醇3-甲基醚、潑尼松龍、17-α-醋酸羥孕酮、19-去甲孕酮、炔諾酮孕、去甲脫氫羥孕酮、炔諾酮、norethiederone、孕酮、諾孕酮、異炔諾酮、阿斯匹林、吲哚美辛、萘普生、非諾洛芬、舒林酸、吲哚洛芬、硝基甘油、硝酸異山梨酯、普萘洛爾、噻嗎洛爾、阿替洛爾、阿普洛爾、西咪替丁、可樂定、丙咪嗪、左旋多巴、氯丙嗪、甲基多巴、二羥基苯丙氨酸、茶堿、葡萄糖酸鈣、酮洛芬、布洛芬、頭孢氨芐、紅霉素、氟哌啶醇、佐美酸、乳酸亞鐵、長春胺、長春瑞濱(參見，例如公開的國際專利申請WO03/018018)、地西泮、酚芐明、地爾硫、米力農(nóng)、頭孢孟多、quanbenz、氫氯噻嗪、雷尼替丁、氟比洛芬、fenufen、氟洛芬、托美丁、阿氯芬酸、甲芬那酸、氟芬那酸、difuinal、尼莫地平、尼群地平、尼索地平、尼卡地平、非洛地平、利多氟嗪、噻帕米、戈洛帕米、氨氯地平、米氟嗪、賴諾普利、依那普利、依那普利拉、卡托普利、雷米普利、法莫替丁、尼扎替丁、硫糖鋁、依汀替丁、tetratolol、米諾地爾、利眠寧、地西泮、阿米替林、和丙米嗪。其它的實(shí)例是蛋白和肽，其包括但不限于骨形態(tài)生成蛋白、胰島素、秋水仙堿、胰高血糖素、促甲狀腺激素、甲狀旁腺和垂體激素、消化激素、降鈣素、腎素、催乳素、促腎上腺皮質(zhì)激素、促甲狀腺激素、促卵泡激素、絨毛膜促性腺激素、促性腺激素釋放激素、牛促生長素、豬促生長素、催產(chǎn)素、血管升壓素、GRF、促生長素抑制素、賴氨加壓素、促胰酶素、黃體生成素、LHRH、LHRH激動劑和拮抗劑、亮丙立德、干擾素(例如共有干擾素、干擾素α-2a、干擾素α-2b、α-、β-或γ-干擾素)、白介素、生長激素例如人生長激素和其衍生物例如甲硫胺(methione)-人生長激素和des-苯丙氨酸人生長激素、牛生長激素和豬生長激素、生育抑制劑例如前列腺素、生育促進(jìn)劑、生長因子例如胰島素樣生長因子、凝固因子、胰激素釋放因子(pancreas hormone releasing factors)、這些化合物的類似物和衍生物和這些化合物的藥用鹽或它們的類似物或衍生物。治療劑可以是試劑(例如，兩種或多種試劑)的混合物，它們可以在脂質(zhì)體制劑中有益地共同施用。
藥物制劑可以用于將治療劑通過各種途徑輸送到動物體內(nèi)的不同位點(diǎn)，以實(shí)現(xiàn)理想的治療性作用。通過包含將制劑應(yīng)用或插入到身體空腔或組織的施用，經(jīng)口輸送，氣霧劑的吸入或吹入，局部施用到皮膚或粘膜表面，或通過腸胃外給藥，包括肌肉內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、腫瘤內(nèi)的、皮內(nèi)的、腹膜的、皮下的和局部的施用，可以實(shí)現(xiàn)局部地或全身地輸送治療劑。這些制劑中的陽離子脂質(zhì)的作用是，通過促進(jìn)包含于其中的治療劑的細(xì)胞內(nèi)輸送來提高它的功效和效率(Felgner等，美國專利號5,459,127)。因此，本發(fā)明提供了通過施用本文所述的含有陽離子心磷脂和一種或多種活性劑的組合物輸送一種或多種活性劑的方法。該方法可以治療性地施用，即給需要治療的人或動物患者(或植物)輸送一種或多種活性劑，或者該方法可以用于將一種或多種活性劑輸送給培養(yǎng)中的細(xì)胞。該方法可以用于施用實(shí)質(zhì)上所有的活性劑。關(guān)于治療性應(yīng)用，認(rèn)為對于在存在表面活性劑時(shí)穩(wěn)定的活性劑是常規(guī)的。親水的活性劑是合適的，且可以包含在脂質(zhì)體內(nèi)部，這樣脂質(zhì)體雙分子層建立起擴(kuò)散屏障，防止它隨機(jī)地遍布身體擴(kuò)散。認(rèn)為疏水的活性劑特別適用于本方法的用途，因?yàn)樗鼈儾坏哂心鼙憩F(xiàn)出低毒性的優(yōu)點(diǎn)，而且它們傾向于在脂質(zhì)體的脂雙分子層中較好地溶解。
化療劑也較好地適用于該方法。含有化療劑的脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)制劑可以直接注射到腫瘤組織中，以將化療劑直接輸送到癌細(xì)胞中。在一些情況下，特別是在切除腫瘤后，可以將脂質(zhì)體制劑直接植入產(chǎn)生的空腔中，或可以應(yīng)用到殘余組織上作為包衣。在術(shù)后施用脂質(zhì)體制劑的情況下，可以使用具有約1微米的大直徑的脂質(zhì)體，因?yàn)樗鼈儫o需穿過脈管系統(tǒng)。
特別優(yōu)選的實(shí)施方案包括用于治療或預(yù)防單純皰疹的制劑、和這樣的制劑在治療或預(yù)防皰疹感染中的應(yīng)用。如本文所指出的，除了本發(fā)明的陽離子心磷脂外，這樣的制劑理想地包括藥理學(xué)上有效濃度的無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷、1-(2-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶(FIAC)或1(2′-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)5-碘尿嘧啶(FIAU)。例如，通過局部施用(理想地施用給粘膜組織)可以將組合物施用給感染了單純皰疹或處于感染單純皰疹的風(fēng)險(xiǎn)中的個體。
本發(fā)明提供了施用藥物制劑的方法，所述藥物制劑除了活性劑的脂質(zhì)體制劑外，還包含無毒的、惰性的藥學(xué)上合適的賦形劑。藥學(xué)上合適的賦形劑包括固體、半固體或液體稀釋劑、填料和各種制劑輔料。本發(fā)明還包括劑量單位形式的藥物制劑。這意味著，制劑是單個部分的形式，例如小瓶、注射器、膠囊、丸劑、栓劑或安剖，其中活性劑在脂質(zhì)體制劑中的含量與單次給藥劑量的分?jǐn)?shù)或倍數(shù)相對應(yīng)。劑量單位可以含有例如1、2、3或4個單次給藥劑量，或1/2、1/3或1/4單次給藥劑量。單次給藥劑量優(yōu)選地含有一次施用的活性劑量，其通常與每日給藥劑量的全部、1/2、1/3或1/4相對應(yīng)。
片劑、糖衣丸、膠囊、丸劑、粒劑、栓劑、溶液、混懸液和乳劑、糊劑、軟膏劑、凝膠、霜劑、洗劑、粉末和噴霧劑可以是合適的藥物制劑。除了脂質(zhì)體活性劑外，栓劑可以含有合適的水溶性的或水不溶性的賦形劑。合適的賦形劑是這樣的，本發(fā)明的脂質(zhì)體活性劑在其中是足夠穩(wěn)定的，以用于治療用途，例如聚乙二醇、某些脂肪和酯或這些物質(zhì)的混合物。軟膏劑、糊劑、霜劑和凝膠還可以含有合適的賦形劑，脂質(zhì)體活性劑在其中是穩(wěn)定的。
活性劑或其藥物制劑可以施用給患者或體內(nèi)的細(xì)胞，例如靜脈內(nèi)地、皮下地、局部地(例如，給皮膚或真皮組織，或給粘膜組織)、經(jīng)口地、腸胃外地、腹膜內(nèi)地和/或直腸地，或通過已知的或開發(fā)的方法，直接注射進(jìn)腫瘤或需要治療的位點(diǎn)中。而且，在一些實(shí)施方案中，理想地給患者的細(xì)胞體外地施用藥物制劑，其包含本發(fā)明的陽離子心磷脂和任選的活性劑，此后將細(xì)胞返回到患者。這樣的治療可以是有效的，例如，在重新導(dǎo)入的細(xì)胞中的基因表達(dá)可以有效地抵抗患者的疾病，例如治療癌癥的情況下。
本發(fā)明的陽離子心磷脂和上述的制劑能促進(jìn)治療脊椎動物(例如人或非人的動物)的疾病的方法，其包括給患者施用如本文所述的藥物制劑的步驟，該制劑典型地包含對疾病的治療具有特異性的治療劑。根據(jù)本發(fā)明的方法，將本文所述的制劑(理想地含有活性劑)施用給需要治療的脊椎動物，其量和給藥位置足以治療脊椎動物的疾病。在一些實(shí)施方案中，將治療劑整合進(jìn)患者的至少一個細(xì)胞中，它在其中發(fā)揮治療疾病的作用(例如，當(dāng)治療劑是DNA或RNA時(shí)，它在被攝入細(xì)胞中以后進(jìn)行表達(dá))。在其它實(shí)施方案中，試劑在患者內(nèi)細(xì)胞外地發(fā)揮作用，抵抗疾病。藥物制劑是以適合于制劑類型的方式施用給患者(例如，皮膚地施用給皮膚或粘膜表面，腸胃外的注射或注射進(jìn)體內(nèi)腔或組織中，經(jīng)口施用等)。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，根據(jù)本發(fā)明的方法有效地治療疾病，在理想地消除疾病或其癥狀的同時(shí)，無需徹底根除疾病的影響。實(shí)際上，通過疾病、感染的嚴(yán)重性的降低或患者的疾病發(fā)展速度的降低，可以檢測到根據(jù)本發(fā)明的方法的成功治療。
在一個實(shí)施方案中，方法疾病是癌癥，在該情況下，藥物制劑可以含有合適的抗癌劑，例如本文所述的化療劑(例如，抗癌藥物)或選自下述的多核苷酸核酶、干擾RNA(RNAi)和反義RNA或DNA序列。優(yōu)選的抗癌多核苷酸是c-raf反義寡核苷酸。在另一個實(shí)施方案中，疾病是病毒感染，例如單純皰疹或HIV。為了治療病毒感染，藥物制劑典型地包含抗病毒藥，例如本文所述的。例如，為了治療HSV，制劑可以包括無環(huán)鳥苷，丙氧鳥苷，1-(2-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶(FIAC)或1(2′-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)5-碘尿嘧啶(FIAU)。為了治療HIV，組合物可以包含抗病毒的核苷，例如3′-疊氮基-3′-脫氧胸苷(AZT)。
本發(fā)明還提供了將活性劑導(dǎo)入一個或多個細(xì)胞中的方法。根據(jù)本發(fā)明的方法，制備了含有本文所述的陽離子心磷脂的組合物，其還包含活性劑。然后使細(xì)胞與試劑接觸，使細(xì)胞攝入活性劑，或者，可以制備不含有活性劑的組合物，在存在活性劑的情況下，使細(xì)胞與組合物接觸，使細(xì)胞攝入活性劑。
一個或多個細(xì)胞可以是體外細(xì)胞培養(yǎng)物。當(dāng)一個或多個細(xì)胞是體外的時(shí)，通過將其與培養(yǎng)基相混合，可以將含有陽離子心磷脂和/或活性劑的組合物輸送給細(xì)胞，或者，一個或多個細(xì)胞可以是植物或動物(例如人)宿主體內(nèi)的。在該情況下，可以如本文所述配制和輸送組合物。
當(dāng)活性劑是多核苷酸時(shí)，本發(fā)明的方法可以用于使用該多核苷酸轉(zhuǎn)染一個或多個細(xì)胞。該方法可以用于體外地轉(zhuǎn)染細(xì)胞(例如在培養(yǎng)物中)，或者給細(xì)胞體內(nèi)地輸送治療性的或診斷性的多核苷酸。例如，根據(jù)基因治療方案，該方法可以用于將基因輸送給培養(yǎng)物中的細(xì)胞或患者。為了治療性應(yīng)用，本發(fā)明因而提供了基因治療方法，其包括給需要治療的患者施用包含一種或多種核酸的藥物組合物，其中該組合物包含陽離子心磷脂。在這方面，多核苷酸可以是能編碼基因的表達(dá)構(gòu)建體，該基因在根據(jù)本發(fā)明的方法轉(zhuǎn)染后在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。為了表達(dá)，這樣的基因構(gòu)建體理想地包括合適的調(diào)節(jié)元件來促進(jìn)表達(dá)。因此，除了編碼序列外，表達(dá)構(gòu)建體典型地包括可操作地連接到編碼序列上的啟動子。另外，編碼序列可以包括其它調(diào)節(jié)元件，例如核糖體進(jìn)入位點(diǎn)、增強(qiáng)子等。表達(dá)構(gòu)建體的構(gòu)建是本領(lǐng)域的普通常識。
預(yù)期的應(yīng)用包括與那些現(xiàn)在已知的和使用兩親脂質(zhì)的方法、和使用常規(guī)的陽離子脂質(zhì)技術(shù)和方法相對應(yīng)的轉(zhuǎn)染方法，所述兩親脂質(zhì)包括商業(yè)的陽離子脂質(zhì)制劑，例如LipofectinTM。因此，本文所公開的脂質(zhì)組合物可以用于促進(jìn)編碼治療活性的多肽的DNA或mRNA序列的細(xì)胞間輸送(Felgner等，美國專利號5,459,127)。它們可以類似地用于表達(dá)的基因產(chǎn)物、多肽或自身蛋白的脂質(zhì)體輸送。因此，陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的DNA和mRN多核苷酸或蛋白的輸送可以提供遺傳疾病的治療，它通過提供缺乏的或不存在的基因產(chǎn)物來治療任何遺傳疾病來進(jìn)行，其中已經(jīng)鑒別出了缺陷基因和/或其產(chǎn)物，例如杜興氏營養(yǎng)不良(Kunkel等1989)。
通過將陽離子脂質(zhì)和DNA、RNA或蛋白直接體內(nèi)地注射進(jìn)動物的細(xì)胞中可以施用上面所述的轉(zhuǎn)染方法和試劑盒。但是，最近已經(jīng)證實(shí)，陽離子脂質(zhì)特別有效地促進(jìn)細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)染。因此，通過使用陽離子脂質(zhì)輸送方法，體外地轉(zhuǎn)染動物的一些細(xì)胞，并將細(xì)胞重新導(dǎo)入動物中，可以替代性地進(jìn)行上面的治療。因而陽離子脂質(zhì)的高效率地轉(zhuǎn)染細(xì)胞的能力提供了免疫的替代方法。通過陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的輸送可以將抗原的基因?qū)胍呀?jīng)從動物取出的細(xì)胞中。將現(xiàn)在能表達(dá)抗原的轉(zhuǎn)染細(xì)胞重新注射進(jìn)動物中，其中的免疫系統(tǒng)現(xiàn)在可以對內(nèi)源性的抗原作出反應(yīng)。通過共注射佐劑或淋巴因子、或編碼這樣的淋巴因子的基因，進(jìn)一步刺激淋巴細(xì)胞，可以增強(qiáng)該過程(Felgner等，美國專利號5,459,127)。
本發(fā)明還提供了將多核苷酸轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞的試劑盒。該試劑盒包含本文所述的陽離子心磷脂，其還可以包含用于轉(zhuǎn)染的理想的多核苷酸。當(dāng)存在時(shí)，多核苷酸可以是分開地包裝或與陽離子心磷脂包裝在一起，例如在本文所述的制劑中。該試劑盒還可以包含關(guān)于使用該試劑盒進(jìn)行轉(zhuǎn)染的說明書。說明書可以包含，例如，關(guān)于將多核苷酸和陽離子心磷脂配制成能用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞的制劑的說明。該試劑盒還可以包含有利于轉(zhuǎn)染的試劑，例如緩沖劑、培養(yǎng)基等。另外，該試劑盒可以包含用于儲存陽離子心磷脂的容器，用于儲存試劑的容器，用于儲存包含陽離子心磷脂和多核苷酸的制劑的容器，或用于制備制劑的容器。另外，該試劑盒可以包含有利于轉(zhuǎn)染的物質(zhì)，例如吸管或吸管帽、培養(yǎng)皿或瓶或其它合適的物質(zhì)。
本發(fā)明還涉及向細(xì)胞輸送活性劑的方法。通過制備包含活性劑和通過如上所述的方法合成的陽離子心磷脂變體/類似物的脂質(zhì)體，可以實(shí)現(xiàn)該方法。然后將脂質(zhì)體輸送給細(xì)胞。這也可以通過將脂質(zhì)體加入細(xì)胞培養(yǎng)基中來完成。
下面的實(shí)施例進(jìn)一步解釋了本發(fā)明，但是當(dāng)然，不應(yīng)當(dāng)理解為以任何方式限制其范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1.陽離子心磷脂類似物(4)的合成[圖1](R，S)-1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲基氨基丙烷(2) 向三頸圓底燒瓶中的氫化鈉(60％，在油中)(6.7g，167.92mmol)和DMF(100mL)的懸浮液中，在0℃經(jīng)1.5小時(shí)逐滴地加入1-二甲基氨基-2，3-丙二醇(1)(5g，41.98mmol)的DMF(25mL)溶液，然后使其達(dá)到室溫，并攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中經(jīng)90分鐘逐滴加入四癸基溴化物(46.5g，167.27mmol)。然后使其達(dá)到室溫，并攪拌1小時(shí)。使反應(yīng)混合物的溫度逐漸升至82℃，并在該溫度攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入幾滴冷冰水，然后用水(750mL)稀釋該混合物。用己烷提取含水層數(shù)次(6×150mL)。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥。使用20％乙酸乙酯的己烷溶液，經(jīng)硅凝膠(70-230目)柱層析純化粗化合物，得到無色油狀的1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲基氨基丙烷(2)(13g，62％)(Wheeler等1987)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.511H NMR(CDCl3，500MHz)δ0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25(s，44H)，1.54-1.56(m，4H)，2.25(s，6H，N-CH3)，2.26-2.41(m，2H，CH2N)，3.43-3.52(m，7H)。
(R，S)-1，3-二-(1，2-二十四烷基氧基丙基-3-N，N，N-二甲基銨溴化物)丙烷-2-醇(4) 將1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲基氨基丙烷(2)(4.3g，84.0mmol)和1，3-二溴甘油(3)(0.73g，3.36mmol)在無水乙醇(100mL)中的溶液(Bhattacharya等1999)回流5天。將反應(yīng)混合物冷卻，蒸發(fā)溶劑，得到粗蠟狀固體。將粗化合物溶解到己烷(200mL)中，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)，保持在0℃過夜。過濾分離的固體，并用己烷洗滌(8×10mL)，以除去原料1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲基氨基丙烷。對粗化合物進(jìn)行柱層析(硅膠，70-230目)，用1-6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，以得到白色固體狀的陽離子心磷脂類似物(4)(3.2g，77％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.11.1HNMR(CDCl3，500MHz)δ0.88(t，J＝6.8Hz，12H)，1.24-1.31(m，88H)，1.56-1.60(m，8H)，3.42-3.68(m，25H)，3.79-3.85(m，4H)，4.39(t，J＝6.8Hz，2H)，4.53-4.60(m，2H)，5.18-5.24(m，1H)，6.50-6.61(m，1H)。13C NMR(CDCl3，125MHz)δ14.03，22.60，29.28，29.35，29.37，29.39，29.52，29.55，29.57，29.58，29.61，29.62，29.98，30.0，31.84，52.74，52.89，53.16，54.85，54.89，55.01，62.28，62.57，65.02，68.53，68.63，68.88，69.29，69.39，69.80，70.02，72.02，72.82，72.87.IR(cm-1)3407(br)，3223(br)，2956(s)H，2920(s)，1633，1467，1377，1116，971，893，720.ESI-MS 1162.5[M+1-Br]，1080.6[M+1-2Br]，540.7[M+1-2Br/2]。分子式C69H144Br2N2O5；元素分析；計(jì)算值C66.74，H11.69，N2.26，Br12.87；實(shí)測值C65.85，H11.52，N2.31，Br13.21。
實(shí)施例2.陽離子心磷脂類似物(11)的合成[圖2]1，3二[(2-乙氧基四氫-2H-吡喃)]-2-芐氧基-甘油(7) 在氬氣氛下、在0℃，向攪拌的氫化鈉(59.3g，1.48mol，60％，在油中)在無水DMF(300mL)中的懸浮液中，經(jīng)2小時(shí)加入2-芐氧基1，3-丙二醇(5)(90g，0.49mol)的DMF(700mL)溶液，將溫度維持在15℃以下。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在0℃、經(jīng)3小時(shí)加入2-(2-溴乙氧基)四氫-2H-吡喃(6)(310g，1.48mol)，將溫度維持在10℃以下。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入冰水，以淬滅多余的氫化鈉。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物，以除去最大量的DMF，用水(1L)稀釋粗溶液，用乙酸乙酯(2×500mL)萃取。用含水的飽和氯化鈉(500mL)洗滌有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮溶劑。使用10-30％乙酸乙酯的己烷溶液，通過硅膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，得到無色油狀的1，3-二-[(2-乙氧基四氫-2H-吡喃)]-2-芐氧基-甘油(7)(154g，71％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(3∶2)Rf～0.40。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.41-1.82(m，12H)，3.41-3.98(m，17H)，4.61(brs，2H)，4.78(s，2H，OCH2Ph)，7.24-7.45(m，5H，Ph-H)。
3，7-二氧雜-5-芐氧基-1，9-壬二醇(8) 向1，3-二[(2-乙氧基四氫-2H-吡喃)]-2-芐氧基-甘油(7)(50g，0.11mol)的甲醇(500mL)溶液中，加入1N HCl的醚(5mL)溶液，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用碳酸氫鈉中和反應(yīng)混合物，直到溶液變成中性。過濾反應(yīng)混合物，在減壓下濃縮。將粗化合物溶解到乙酸乙酯(1L)中，用水(100mL)洗滌，并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層，經(jīng)硅凝膠(70-230目)柱層析純化粗化合物，用乙酸乙酯洗脫，隨后用5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到無色油狀的3，7-二氧雜-5-芐氧基-1，9-壬二醇(8)(27g，88％)。TLC(SiO2)乙酸乙酯Rf～0.10.1H NMR(CDCl3，300MHz)δ3.01(brs，2H，OH)，3.50-3.81(m，13H)，4.68(s，2H，OCH2Ph)，7.21-7.42(m，5H，Ph-H)。
1，9-二溴-3，7-二氧雜-5-芐氧基-壬烷(9) 在氬氣氛下、在0℃，向3，7-二氧雜-5-芐氧基-1，9-壬二醇(8)(27g，0.1mol)的無水二氯甲烷(400mL)溶液中，加入三苯膦(65.5g，0.25mol)，然后加入四溴化碳(79.4g，0.24mol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌2小時(shí)。用水(300mL)稀釋反應(yīng)混合物，分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用20％乙酸乙酯的己烷溶液經(jīng)硅凝膠(70-230目)柱層析純化粗化合物，得到無色油狀的1，9-二溴-3，7-二氧雜-5-芐氧基-壬烷(9)(36g，91％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(3∶2)Rf～0.60。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ3.45(t，J＝5.5Hz，4H，CH2Br)，3.60-3.67(m，4H，OCH2)，3.72-3.82(m，5H)，4.70(s，2H，OCH2Ph)，7.28-7.38(m，5H，Ph-H)。
1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10) 將1，9二溴-3，7-二氧雜-5-芐氧基-壬烷(9)(36g，90.90mmol)溶解到乙醇(110mL)中，在50psi的壓強(qiáng)下，用10％碳載鈀(3.6g)氫化2小時(shí)。濾出催化劑后，在減壓下蒸發(fā)溶液。對粗物質(zhì)進(jìn)行硅膠柱層析(70-230目)，用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色油狀的1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10)(26g，94％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶1)Rf～0.30。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ2.56(d，J＝4.5Hz，1H，OH)，3.45(t，J＝6.0Hz，4HCH2Br)，3.54-3.64(m，4H，OCH2)，3.82(t，J＝5.7Hz，4H，OCH2)，3.96-4.02(m，1H)。
(R，S)-1，3-二(1，2-二十四烷基氧基丙基-3-N，N-二甲基-3-乙氧基銨溴化物)丙烷-2-醇(11) 在78-80℃，將1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(2)(50.2g，98.36mmol)和1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10)(10g，32.78mmol)的無水乙醇(600mL)溶液回流5天。將反應(yīng)混合物冷卻，蒸發(fā)溶劑，得到粗蠟狀固體。加入己烷(400mL)，并攪拌1小時(shí)。濾出固體，用己烷(6×100mL)洗滌。通過重結(jié)晶[化合物/甲醇/丙酮的比例為(1∶3∶50)]純化化合物，保持在-20℃過夜。過濾分離的固體，用冷丙酮洗滌。重復(fù)重結(jié)晶2次，得到分析純的樣品。真空下干燥化合物24小時(shí)，然后經(jīng)P2O536小時(shí)，得到白色固體狀的陽離子心磷脂類似物(11)(30g，69％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.11。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，12H)，1.25(s，88H)，1.52-1.71(m，8H)，3.41-3.68(m，29H)，3.95-4.19(m，14H)，4.66(brs，1H)。13C NMR(CDCl3，125MHz)δ13.92，22.50，25.89，26.03，29.12，29.27，29.32，29.42，29.48，29.50，29.54，29.87，31.74，52.95，53.02，53.50，65.02，65.07，66.57，68.63，68.84，69.15，71.80，72.65，73.29。IR(cm-1)3323(br)，2918(s)，2873(s)，1468(s)，1123(brs)。ESI-MS 1248.6[M+1-Br]，584.3[M+1-2Br/2]。分子式C73H152Br2N2O7；元素分析；計(jì)算值C65.93，H11.52，N2.11，Br12.02；實(shí)測值C65.93，H11.40，N2.11，Br11.99。
實(shí)施例3.陽離子心磷脂類似物(19)的合成[圖3](R)-4-(芐氧基甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)(13).
在氬氣氛下、在0℃，向攪拌的氫化鈉(30.3g，0.75mol，60％，在油中)的無水四氫呋喃(500mL)的懸浮液中，經(jīng)1小時(shí)加入R(-)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇(12)(50g，0.37mol)，維持內(nèi)部溫度低于20℃。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在0℃、經(jīng)1小時(shí)加入芐基溴(97.1g，0.56mol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入冷水，用含水的飽和氯化銨(500mL)稀釋該混合物。用乙酸乙酯(500mL)萃取含水層，用水(300mL)洗滌。在減壓下濃縮有機(jī)層，得到漿狀的粗產(chǎn)物(121g)(R)-4-芐氧基甲基-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)(13)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.26(不經(jīng)純化，對粗產(chǎn)物進(jìn)行下一步操作)1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.39(s，3H，CH3)，1.40(s，3H，CH3)，3.41-3.55(m，2H)，3.68-3.74(m，1H)，4.01-4.05(m，1H)，4.20-4.31(m，1H)，4.55(brs，2H，OCH2Ph)，7.25-7.35(m，5H，Ph-H)。
(S)-(-)-3-芐氧基-1，2-丙二醇(14) 向(R)-4-芐氧基甲基-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)(13)(120g)的甲醇(700mL)溶液中，加入濃HCl(20mL)，并在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。用碳酸氫鈉中和反應(yīng)混合物，直到溶液變成中性。過濾反應(yīng)混合物，并在減壓下濃縮。將粗化合物溶解于二氯甲烷(600mL)，分離有機(jī)層，并經(jīng)硫酸鈉干燥。減壓下濃縮有機(jī)層。使用10-20％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑、隨后使用10％甲醇的乙酸乙酯溶液，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，得到漿狀的(S)-(-)-3-芐氧基-1，2-丙二醇(14)(64g，93％)。TLC(SiO2)乙酸乙酯Rf～0.44。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ3.42-3.61(m，4H)，3.79-3.83(m，3H)，4.47(s，2H，OCH2Ph)，7.23-7.32(m，5H，Ph-H)。
(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-O-芐基丙烷(15).
在氬氣氛下、在0℃，向攪拌的氫化鈉(54.5g，1.36mol，60％，在油中)的無水DMF(220mL)懸浮液中，經(jīng)1小時(shí)加入(S)-(-)-3-芐氧基-1，2-丙二醇(14)(62g，0.34mol)的DMF(400mL)溶液，維持內(nèi)部溫度低于20℃。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在0℃經(jīng)2小時(shí)加入十四烷基溴(377.4g，1.36mol)。加入完畢后，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物2小時(shí)，使溫度逐漸升高至70℃，然后攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入冷水，并用含水的飽和氯化銨(500mL)稀釋。用乙酸乙酯(1L)萃取含水層，并用水(3×1L)洗滌。在減壓下濃縮有機(jī)層，經(jīng)硅凝膠(70-230目)柱層析純化粗產(chǎn)物，使用2-10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，以得到無色油狀的(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-O-芐基丙烷(15)(146g，75％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.53。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(brs，44H)，1.49-1.58(m，4H)，3.39-3.60(m，9H)，4.54(m，2H，OCH2Ph)，7.23-7.32(m，5H，Ph-H)。
(R)-1，2-二-十四烷基氧基-丙烷-3-醇(16) 將(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-O-芐基丙烷(15)(70g，0.12mmol)溶液溶解到乙酸乙酯(280mL)中，在50psi的壓強(qiáng)下，用10％鈀(3g)氫化12小時(shí)。濾出催化劑后，在減壓下蒸發(fā)溶液。將殘余物溶解于熱乙醇(500mL)中，保持在-20℃過夜。過濾分離的固體，并真空干燥，以得到白色固體狀的(R)-1，2-二-十四烷基氧基-丙烷-3-醇(16)(54g，92％).TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.17。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(brs，48H)，1.59-1.57(m，4H)，2.2(t，J＝5.7Hz，1H，OH)，3.37-3.73(m，9H)。
(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-溴丙烷(17)
在氬氣氛下、在0℃，向(R)-1，2-二-十四烷基氧基-丙烷-3-醇(16)(52g，0.1mol)的無水二氯甲烷(280mL)溶液中，加入三苯膦(35.1g，0.13mol)。向該反應(yīng)混合物中經(jīng)1小時(shí)逐滴加入四溴化碳(46.2g，0.13mol)的二氯甲烷(240mL)溶液，在0℃進(jìn)一步攪拌3小時(shí)。用水(500mL)稀釋反應(yīng)混合物，分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用1-5％乙酸乙酯的己烷溶液，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，以得到無色油狀的(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-溴丙烷(17)(53g，90％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.72。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(brs，48H)，1.51-1.61(m，4H)，3.39-3.61(m，9H)。
(R)1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(18) 在螺旋蓋壓力瓶中，將(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-溴丙烷(17)(50g，0.09mol)溶解到2M二甲胺的甲醇溶液(400mL)中。密封壓力瓶，在攪拌的油浴中，在88-90℃加熱60小時(shí)。冷卻壓力瓶，并在減壓下濃縮溶液。將粗殘余物溶解到乙酸乙酯(500mL)中，并用水(500mL)洗滌。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用5-20％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化，得到淺色油狀的(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(18)(41g，88％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.51。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25(s，44H)，1.51-1.58(m，4H)，2.25(s，6H，N-CH3)，2.37(t，J＝4.6Hz，2H，N-CH2)，3.41-3.62(m，7H)。
(R)1，3-二-(1，2-二十四烷基氧基丙基-3-N，N-二甲基-3-乙氧基銨溴化物)丙烷-2-醇(19)
將(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(18)(35.6g，69.8mmol)和1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10)(7.1g，23.2mmol)的無水乙醇(430mL)溶液在78-80℃回流5天。將熱反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，并經(jīng)2小時(shí)逐滴加入丙酮(4.3L)。將混合物保持在-20℃過夜。濾出固體，用冷丙酮(500mL)洗滌，得到純白色(colorless white)固體(28g)。通過在溫甲醇(140mL)丙酮(1.4L)的混合物中重結(jié)晶來純化粗固體，然后儲存在-20℃過夜。分離、過濾固體，用冷丙酮(300mL)洗滌。重復(fù)重結(jié)晶2次，得到分析純的樣品。干燥化合物24小時(shí)，然后在真空下經(jīng)P2O536小時(shí)，得到白色固體狀的(R)-陽離子心磷脂類似物(19)(24g，78％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.13。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，12H)，1.25(s，88H)，1.52-1.71(m，8H)，3.41-3.68(m，30H)，3.95-4.19(m，13H)，4.63(brs，1H，OH)。13C NMR(CDCl3，125MHz)δ13.94，22.52，25.90，26.04，29.20，29.28，29.33，29.44，29.50，29.52，29.55，29.88，31.76，52.99，53.07，53.49，65.01，65.07，66.56，68.66，68.84，69.17，71.82，72.62，72.64，73.30，73.28.IR(cm-1)3409(br，OH)，2918(s)，2873(s)，1468(s)，1124(br s)。ESI-MS 1248.5[M+1-Br]，584.2[M+1-2Br/2]分子式C73H152Br2N2O7；元素分析；計(jì)算值C65.93，H11.52，N2.11，Br12.02；實(shí)測值C65.65，H11.49，N2.13，Br12.17。
實(shí)施例4.陽離子心磷脂類似物(27)的合成[圖4](S)-4-(芐氧基甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)(21) 在氬氣氛下、在0℃，向攪拌的氫化鈉(22.7g，0.57mol，60％，在油中)的無水四氫呋喃(350mL)的懸浮液中，經(jīng)1小時(shí)加入S(-)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇(20)(50g，0.37mol)，維持內(nèi)部溫度低于20℃。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在0℃經(jīng)1小時(shí)加入芐基溴化物(97.1g，0.56mol)。加入完畢后，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物18小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入幾滴冰水(20mL)，用含水的飽和氯化銨(500mL)稀釋該混合物。用乙酸乙酯(750mL)萃取含水層。在減壓下濃縮有機(jī)層，得到漿狀的(S)-4-芐氧基甲基-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)(21)粗產(chǎn)物(83g)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.26。
(R)-(-)-3-芐氧基-1，2-丙二醇(22) 向(S)-4-(芐氧基甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)(21)(83g)的甲醇(800mL)的溶液中，加入濃HCl(20mL)，并在室溫?cái)嚢?5小時(shí)。用碳酸氫鈉中和反應(yīng)混合物，直到溶液變成中性。過濾反應(yīng)混合物，并在減壓下濃縮。將粗化合物溶解于二氯甲烷(200mL)中，分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮。使用10-20％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑，隨后使用10％甲醇的乙酸乙酯溶液，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，得到漿狀的(R)-(-)-3-芐氧基-1，2-丙二醇(22)(65g，94％)。TLC(SiO2)乙酸乙酯Rf～0.44。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ3.42-3.61(m，4H)，3.75-3.99(m，3H)，4.47(s，2H，OCH2Ph)，7.22-7.32(m，5H，Ph-H)。
(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-O-芐基丙烷(23) 在氬氣氛下、在0℃，向攪拌的氫化鈉(38.4g，0.96mol，60％，在油中)的無水DMF(200mL)的懸浮液中，經(jīng)1小時(shí)加入(R)-(-)-3-芐氧基-1，2-丙二醇(22)(35g，0.19mol)的DMF(150mL)溶液，維持內(nèi)部溫度低于20℃。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在0℃經(jīng)2小時(shí)加入十四烷基溴化物(266g，0.97mol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，使溫度逐漸升高至60℃，然后攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入幾滴冰水，并用含水的飽和氯化銨(500mL)稀釋。用己烷(3×500mL)萃取含水層，并用水(500mL)和鹽水(500mL)洗滌。在減壓下濃縮有機(jī)層，經(jīng)硅凝膠(70-230目)柱層析純化粗產(chǎn)物，使用2-10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色油狀的(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-O-芐基丙烷(23)(88g，80％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.53。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.6Hz，6H)，1.25(brs，44H)，1.49-1.58(m，4H)，3.39-3.60(m，9H)，4.54(m，2H，OCH2Ph)，7.23-7.32(m，5H，Ph-H)。
(S)，-1，2-二-十四烷基氧基-丙烷-3-醇(24) 將(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-O-芐基丙烷(23)(83.8g，0.14mol)溶解到乙酸乙酯(450mL)中，在50psi的壓強(qiáng)下，用10％碳載鈀(3.1g)氫化12小時(shí)。濾出催化劑后，在減壓下蒸發(fā)溶液。將殘余物溶解于熱己烷(200mL)中，保持在-20℃過夜。過濾分離的固體，干燥，得到白色固體狀的(S)-1，2-二-十四烷基氧基-丙烷-3-醇(24)(64.8g，92％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.17。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(brs，44H)，1.51-1.57(m，4H)，2.22(t，J＝5.2Hz，1H，OH)，3.40-3.73(m，9H)。
(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-溴丙烷(25) 在氬氣氛下、在0℃，向(S)-1，2-二-十四烷基氧基-丙烷-3-醇(24)(36.8g，59.0mmol)的無水二氯甲烷(375mL)的溶液中，加入三苯膦(27.9g，106.0mmol)。在1小時(shí)的時(shí)間內(nèi)，向反應(yīng)混合物逐滴加入四溴化碳(36.2g，109.0mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液。在0℃進(jìn)一步攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)。然后用水(3×300mL)稀釋。分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮。使用1-5％乙酸乙酯的己烷溶液，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，得到無色油狀的(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-溴丙烷(25)(37.8g，87％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶9)Rf～0.72。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(brs，44H)，1.50-1.60(m，4H)，3.40-3.68(m，9H)。
(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(26) 在螺旋蓋壓力瓶中，將(R)-1，2-二-十四烷基氧基-3-溴丙烷(25)(36.7g，0.07mol)溶解到2M二甲胺的甲醇溶液(450mL)中。密封壓力瓶，在92℃，在攪拌的油浴中加熱75小時(shí)。冷卻壓力瓶，并在減壓下濃縮溶液。將粗殘余物溶解到乙酸乙酯(500mL)中，并用水洗滌(500mL)。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用5-20％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化，得到淺色油狀的(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(26)(28.7g，80％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(2∶8)Rf～0.66。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，6H)，1.25(s，44H)，1.51-1.57(m，4H)，2.15，2.25(s，6H，N-CH3)，2.34-2.36(m，2H，N-CH2)，3.38-3.61(m，7H)。
(S)-1，3-二-(1，2-二十四烷基氧基丙基-3-N，N-二甲基-3-乙氧基銨溴化物)丙烷-2-醇(27)
將(S)-1，2-二-十四烷基氧基-3-二甲基氨基丙烷(26)(22.5g，43.9mmol)和1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10)(4.48g，14.6mmol)的無水乙醇(220mL)溶液在78-80℃回流5天。將熱溶液轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，逐滴加入丙酮(2.5L)，同時(shí)攪拌溶液。將瓶子在冰箱(-25℃)中儲存15小時(shí)。濾出白色固體，用冷丙酮(100mL)洗滌。將產(chǎn)物溶解到氯仿(100mL)中，加入丙酮(1L)。將瓶子在-25℃儲存15小時(shí)。過濾分離的白色固體，用冷丙酮洗滌(100mL)。重復(fù)重結(jié)晶過程3次。將產(chǎn)物與己烷(1L)一起研磨成粉末，過濾，并在高真空下經(jīng)P2O5干燥24小時(shí)，得到白色固體狀的(S)-陽離子心磷脂類似物(27)(15.5g，80％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.13。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.6Hz，12H)，1.25(s，88H)，1.52-1.71(m，8H)，3.40-3.71(m，36H)，3.92-4.11(m，7H)，4.74(d，J＝5.7Hz，1H，OH)。13CNMR(CDCl3，125MHz)δ13.91，22.48，25.86，26.0，29.16，29.24，29.30，29.40，29.46，29.48，29.51，29.84，31.72，52.93，53.01，53.46，64.98，66.51，86.63，68.8，69.12，71.77，72.61，73.26.IR(cm-1)3397(br，OH)，2917(s)，1467(s)，1122(br s)。ESI-MS 1248.5[M+1-Br]，584.4[M+1-2Br/2]。
實(shí)施例5.陽離子心磷脂類似物(32)的合成[圖5]2-[2-(2，3-二-十四烷基氧基-丙氧基)-乙氧基]-四氫-吡喃(28) 在氬氣氛下、在0℃，向攪拌的氫化鈉(3.3g，82.6mmol，60％，在油中)的無水四氫呋喃(50mL)的懸浮液中，在2小時(shí)內(nèi)加入1，2-二(十四烷基氧基)丙烷-3-醇(16)(20g，41.3mmol)的THF(150mL)溶液，維持溫度低于15℃。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在0℃經(jīng)3小時(shí)加入2-(2-溴乙氧基)四氫-2H-吡喃(6)(25.9g，123mmol)，維持溫度低于10℃。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，非常緩慢地加入冰水，以淬滅多余的氫化鈉，并用含水的飽和氯化銨(300mL)稀釋，用乙酸乙酯(2×150ml)萃取。用水(100mL)洗滌有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮。使用1-8％乙酸乙酯的己烷溶液，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，得到無色油狀的2-[2-(2，3-二-十四烷基氧基丙基)乙氧基]四氫-吡喃(28)(16.3g，66％)。TLC(SiO2)己烷乙酸乙酯(1∶4)Rf～0.30。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，12H)，1.25(s，44H)，1.53-1.87(m，10H)，3.40-4.04(m，15H)，4.62-4.67(m，1H)。
2-(2，3-二-十四烷基氧基-丙氧基)-乙醇(29) 向2-[2-(2，3-二-十四烷基氧基丙氧基)乙氧基]四氫吡喃(28)(16g，26.75mmol)的甲醇(500mL)溶液中，加入1N HCl的醚(5mL)溶液，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用碳酸氫鈉中和反應(yīng)混合物，直到溶液變成中性。過濾反應(yīng)混合物，并在減壓下濃縮。將殘余物溶解到乙酸乙酯(500mL)中，并用水(200mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，使用10-15％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色油狀的2-(2，3-二-十四烷基氧基丙氧基)乙醇(29)(10g，71％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶4)Rf～0.18。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，12H)，1.25(s，44H)，1.51-161(m，4H)，2.58(t，J＝6Hz，OH)，3.41-3.71(m，13H)。
1-[1-(2-溴-乙氧基甲基)-2-十四烷基氧基乙氧基]十四烷(30) 在氬氣氛下、在0℃，向2-(2，3-二-十四烷基氧基丙氧基)乙醇(29)(20g，37.8mmol)的無水二氯甲烷(200mL)的溶液中，加入三苯膦(14.8g，56.8mmol)，隨后加入四溴化碳(17.5g，53.0mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌2小時(shí)。用水(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用5％的乙酸乙酯的己烷溶液，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化粗化合物，得到無色油狀的1-[1-(2-溴乙氧基甲基)-2-十四烷基氧基乙氧基]十四烷(30)(17g，76％)。TLC(SiO2)己烷/乙酸乙酯(1∶5)Rf～0.65。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，12H)，1.25(s，44H)，1.51-157(m，4H)，3.40-3.61(m，11H)，3.79(t，J＝6Hz，2H)。
1，3-二-(1，2-二十四烷基氧基-4-氧雜-己基-6-N，N-二甲基銨溴化物)丙烷-2-醇(32) 將1-[1-(2-溴乙氧基甲基)-2-十四烷基氧基乙氧基]-十四烷(30)(6g，10.15mmol)和1，3-二(二甲基氨基)-2-丙醇(31)(0.48g，3.38mmol)的無水乙醇(65mL)溶液在78-80℃回流5天。將熱溶液轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，逐滴加入丙酮(650mL)，同時(shí)攪拌溶液。將瓶子在冰箱(-25℃)中儲存過夜。濾出白色固體，用冷丙酮(100mL)洗滌。將固體溶解到二氯甲烷中，加入丙酮(比例1∶10)。將瓶子在-25℃儲存過夜。過濾白色固體，用冷丙酮洗滌(20mL)。重復(fù)重結(jié)晶過程2次。真空下干燥產(chǎn)物，得到白色固體狀的陽離子心磷脂類似物(32)(0.82g，18％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.12。1HNMRδ(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.8Hz，6H)，1.25(s，88H)，1.49-1.60(m，8H)，3.39-3.82(m，31H)，3.81-4.01(m，8H)，4.52(d，J＝12.6Hz，2H)，5.21-5.35(m，1H)。ESI-MS1248.7[M+1-Br]，584.6[M+1-2Br-/2]。分子式C73H152Br2N2O7；元素分析；計(jì)算值C65.93，H11.52，N2.11，Br12.02；實(shí)測值C64.46，H11.34，N2.21，Br11.80。
實(shí)施例6.陽離子心磷脂類似物(34)的合成[圖6] -二甲胺(33) 在螺旋蓋壓力瓶中，將1-[1-(2-溴乙氧基甲基)-2-十四烷基氧基乙氧基]十四烷(30)(10g，16.92mmol)加入2M二甲胺的甲醇溶液(100mL)。密封壓力瓶，在攪拌的油浴中在88-90℃加熱60小時(shí)。冷卻壓力瓶，并在減壓下濃縮溶液。將粗化合物溶解到乙酸乙酯(300mL)中，并用水(100mL)洗滌。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用5-20％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化，得到淺色油狀的[2-(2，3-二-十四烷基氧基丙氧基)乙基]二甲胺(33)(8g，85％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.46。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.7Hz，12H)，1.25(s，44H)，1.52-1.56(m，4H)，2.17(s，6H，N-CH3)，2.78(t，J＝5.8Hz，2H)，3.39-3.46(m，4H)，3.49-3.56(m，5H)，3.71(t，J＝5.4Hz，2H)。
1，3-二-(1，2-二-十四烷基氧基-4，10-二氧雜-癸基-7-N，N-二甲基銨溴化物)丙烷-2-醇(34) 將(R)-[2-(2，3-二-十四烷基氧基丙氧基)乙基]二甲胺(33)(5g，8.99mmol)和1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10)(0.91g，2.99mmol)的無水乙醇(60mL)溶液在78-80℃回流5天。將熱反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，在2小時(shí)內(nèi)逐滴加入丙酮(600mL)，保持在-20℃過夜。濾出固體，用冷丙酮(100mL)洗滌，得到純白色固體(5g)。在溫甲醇∶丙酮(1∶10的比例)中重結(jié)晶純化粗固體，然后儲存在-20℃過夜。分離、過濾固體，用冷丙酮洗滌(50mL)。重復(fù)重結(jié)晶2次，得到純化合物。在真空下干燥化合物，得到白色固體狀的陽離子心磷脂類似物(34)(1.82g，43％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.13。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.9Hz，12H)，1.25(s，88H)，1.48-1.59(m，8H)，3.38-3.65(m，35H)，3.89-4.13(m，16H)，4.77(brs，1H，OH)。ESI-MS1336.4[M+1-Br]，628.4[M+1-2Br-/2]。分子式C77H160Br2N2O9；元素分析；計(jì)算值C65.22，H11.37，N1.98，Br11.27；實(shí)測值C63.94，H11.28，N2.03，Br9.94。
實(shí)施例7.陽離子心磷脂變體類似物(36)的合成[圖6](R，S)-1，3-二-(1，2-二-十四烷基氧基丙基-3-N，N-二甲基銨溴化物)丁烷-2，3-二醇(36) 將1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲基氨基丙烷(2)(6g，11.72mmol)和1，4-二溴-2，3-丁二醇(35)(1.16g，4.68mmol)的無水乙醇(72mL)的溶液回流7天。將反應(yīng)混合物冷卻，蒸發(fā)溶劑，得到粗蠟狀固體。將粗化合物溶解到己烷(200mL)中，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)，維持在0℃過夜。過濾分離的固體，并用己烷(8×10mL)洗滌，以除去原料1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲基氨基丙烷。對粗物質(zhì)進(jìn)行柱層析(硅膠，70-230目)，使用1-10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到白色固體狀的陽離子心磷脂變體類似物(36)(1.9g，32％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.07。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ0.88(t，J＝6.8Hz，12H)，1.24-1.31(m，88H)，1.51-1.62(m，8H)，2.13(brs，2H，OH)，3.33-3.65(m，22H)，3.75-3.82(m，6H)，4.05-4.25(m，6H)，4.68(brs，2H)，4.39(d，J＝13Hz，2H)。13C NMR(CDCl3，125MHz)δ14.05，22.63，25.98，26.14，29.30，29.42，29.63，31.87，52.58，53.28，54.83，67.27，68.87，69.40，72.04，73.17。ESI-MS1190.3[M+1-Br-]，555.3[M+1-2Br-/2]。分子式C71H148Br2N2O6；元素分析；計(jì)算值C66.32，H11.60，N2.18，Br12.43；實(shí)測值C65.20，H11.46，N2.19，Br12.24。
實(shí)施例8.陽離子心磷脂變體類似物(38)的合成[圖7]根據(jù)美國專利申請(Ahmad等PCT/US03/27806)所述的方法制備的2-芐基-1，3-二[(1，2-二肉豆蔻?；?sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二氰基乙基酯化合物(37) 在氬氣氛下，向1，2-肉豆蔻基-sn-甘油(24)(9.2g，19.01mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(5.46g，42.26mmol)的無水醚(150mL)的混合物中，加入2-氰基乙基二異丙基氯亞磷酰胺(2-cyanoethyldiisopropylchlorophosphoramidite)(5g，21.13mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，過濾二異丙基胺氫氯化物，在減壓下濃縮濾液，在真空下干燥粗物質(zhì)1小時(shí)，得到亞磷酰胺(phosphoramidite)中間體(13g)，照此用于下一步磷酸化。
向上面的亞磷酰胺和1H-四唑(1.59g，22.77mmol，0.45M溶液，在乙腈中)的無水CH2Cl2(80mL)的混合物中，加入2-芐氧基1，3-丙二醇(5)(1.55g，8.54mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，冷卻至-40℃，并逐份地加入叔丁基氫過氧化物(6.8g，75.91mmol)。在-40℃攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物加熱至室溫，用CH2Cl2(200mL)稀釋，用5％含水的NaHCO3(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。減壓下濃縮有機(jī)層。殘余物在硅膠(230-400目)上純化，使用50-75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色漿狀的(37)(7.1g，61％)。TLC(SiO2)乙酸乙酯/己烷(3∶1)Rf～0.29。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.39(m，88H)，1.51-1.57(m，8H)，2.58-2.79(m，4H)，3.39-3.87(m，13H)，4.04-4.32(m，10H)，4.59-4.68(m，2H)，7.27-7.36(m，5H)。
1，3-二[(1，2-二-十四烷基氧基-sn-丙三基-3)-磷?；鵠甘油二銨氯化物-n-丙烷酯(38) 在50psi下，將2-芐基-1，3-二-[(1，2-二肉豆蔻基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二氰基乙基酯(37)(0.74g，0.53mmol)的乙醇(25mL)溶液經(jīng)Pd(OH)2(210mg)氫化24小時(shí)。經(jīng)硅藻土床過濾催化劑，用乙醇洗滌。在減壓下濃縮乙醇層，真空干燥過夜，得到漿狀的陽離子心磷脂變體類似物(38)0.6g。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.8Hz)，1.24(brs，88H)，1.51-1.61(m，8H)，2.80-2.88(m，1H)，3.01-3.3.18(m，3H)，3.40-4.21(m，28H)。通過向醚中加入1N HCl溶液，將氨基化合物轉(zhuǎn)變成氫氯化物鹽。
實(shí)施例9.陽離子心磷脂酯類似物(44)的合成[圖8]甲苯-4-磺酸2，2-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基甲基酯(39).
向R(-)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇(12)(40g，0.30mol)和吡啶(250mL)的混合物中，在0℃、經(jīng)1小時(shí)分份地加入甲苯磺?；然?63.3g，0.33mol)，然后使其升至室溫，并攪拌12小時(shí)。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物，用水(1.5L)稀釋粗化合物，用乙酸乙酯(500mL)萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮，得到淺色固體狀的甲苯-4-磺酸2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基酯(39)(87g)。TLC(SiO2)乙酸乙酯/己烷(1∶4)Rf～0.22。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.29(s，3H)，1.32(s，3H)，2.44(s，3H，Ar-CH3)，2.73(dd，J＝10.6Hz，1H)，3.97-4.0(m，3H)，4.22-4.30(m，1H)，7.35(dd，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，7.77(dd，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)。
2，2-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基甲基二甲胺(41).
方法1在氬氣氛下，向(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醛(40)(31g，0.23mol)和2M二甲胺的甲醇溶液(70mL)的無水甲醇(100mL)混合物中，加入無水硫酸鈉(50g)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)。將反應(yīng)冷卻至0℃，分份加入氫硼化鈉(7.1g，0.18mol)，在室溫?cái)嚢柽^夜。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。將粗化合物溶解到乙酸乙酯(100mL)中，并用水(100mL)洗滌。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用20-40％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑，經(jīng)硅凝膠(230-400目)柱層析純化，得到淺色油狀的2，2-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基甲基二甲胺(41)(7g，19％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.45。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.35(s，3H)，1.41(s，3H)，2.28(s，6H，N-CH3)，2.35(dd，J＝12.5Hz，N-CH2)，2.49(dd，J＝12.5Hz，N-CH2)，3.58(dd，J＝8Hz，1H)，4.07(dd，J＝8Hz，1H)，4.20-4.25(m，1H)。
方法2在螺旋蓋壓力瓶中，將甲苯-4-磺酸2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙基酯(39)(50g，0.17mol)溶解到2M二甲胺的甲醇溶液(400mL)中。將壓力瓶在攪拌的油浴中在88-90℃加熱48小時(shí)。冷卻壓力瓶，并在減壓下濃縮溶液。將粗化合物溶解到乙酸乙酯(100mL)中，并用水(100mL)洗滌。減壓下濃縮有機(jī)層，得到淺色油狀的2，2-二甲基[1，3]二氧戊環(huán)-4-基-甲基二甲胺(41)(11g，40％)。
3-二甲基氨基丙烷-1，2-二醇(42) 向2，2-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基-甲基二甲胺(41)(5g，31.44mmol)的甲醇(100mL)的溶液中，加入1M HCl的醚溶液(10mL)，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用碳酸氫鈉中和反應(yīng)混合物，直到溶液變成中性。過濾反應(yīng)混合物，并在減壓下濃縮。用溫乙酸乙酯(5×100mL)萃取粗化合物。減壓下濃縮有機(jī)層，得到淺色漿狀的3-二甲基氨基丙烷-1，2-二醇(42)(1.4g，37％)。TLC(SiO2)甲醇∶氯仿(1∶4)Rf～0.13。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ2.23(dd，J＝5.1Hz，1H，N-CH2)，2.38(s，6H，N-CH3)，2.47-2.56(m，1H，N-CH2)，3.49(dd，J＝11.2Hz，1H)，3.68-3.81(m，4H)。
1，2-二肉豆蔻?；?3-二甲基氨基丙烷(43) 向冰冷卻的(R)-(+)-3-二甲基氨基丙烷-1，2-二醇(42)(3g，25.2mmol)和吡啶(100mL)的溶液中，經(jīng)30分鐘逐滴加入肉豆蔻酰氯化物(19.8g，75.6mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天，在減壓下濃縮。用CH2Cl2(200mL)稀釋粗化合物，用水(100mL)和鹽水(100mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層，使用5％EtOAc的己烷溶液，在硅凝膠(230-400目)上純化殘余物，得到淺色漿狀的(43)(2.9g，21％)。TLC(SiO2)乙酸乙酯Rf～0.54。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝6.9Hz，6H)，1.25(brs，40H，-)，1.60(t，J＝6.9Hz，4H)，2.13(brs，2H，OH)，3.33-3.65(m，22H)，3.75-3.82(m，6H)，2.25(s，6H，N-CH3)，2.30-2.33(m，1H，N-CH2)，2.44(t，J＝6.3Hz，1H，N-CH2)，4.08(dd，J＝11.8Hz，1H)，4.36(dd，J＝11.8Hz，1H)，5.15-5.23(m，1H)。
(R)-1，3-二(1，2-二肉豆蔻?；?3-N，N-二甲基-3-乙氧基銨溴化物)丙烷-2-醇(44) 將1，2-二-(十四烷基氧基)-3-二甲胺(43)(4g，7.42mmol)和1，3-二-(2-溴乙氧基)丙烷-2-醇(10)(0.75g，2.47mmol)的無水乙醇(45mL)溶液回流5天。將反應(yīng)混合物冷卻，蒸發(fā)溶劑，得到粗蠟狀固體。對化合物進(jìn)行柱層析(硅凝膠，70-230目)，使用0-10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到陽離子心磷脂酯類似物(44)(67mg，2％)。TLC(SiO2)甲醇/氯仿(1∶9)Rf～0.101H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，J＝7.2Hz)，1.25(brs，80H)，1.60(brs，8H)，2.37(t，J＝7.5Hz，8H)，3.48-3.83(m，24H)，3.99-4.20(m，8H)，4.65-4.75(m，2H)，5.14-5.25(m，2H)。
本文引用的所有參考文獻(xiàn)，包括出版物、專利申請和專利，包括但不限于下面列出的，結(jié)合于此作為參考，其程度如同每篇文獻(xiàn)各自地和特別地結(jié)合作為參考，且在這里以其全文的形式闡述。
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在描述發(fā)明的上下文(特別是在下面的權(quán)利要求的上下文中)中使用的術(shù)語“一種”和“該”和類似對象應(yīng)該理解為覆蓋了單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非在本文中另有說明或者在上下文中清楚地相抵觸。術(shù)語″包含″、″具有″、″包括″和″含有″應(yīng)該理解為開放式的術(shù)語(即指″包括，但不限于″)，除非另有說明。本文中的數(shù)值范圍的列舉僅僅用作簡略方法，個別提及的每個單個值都在該范圍內(nèi)，除非本文另有說明，每個單個值都結(jié)合在說明書中，如同它是在本文中單獨(dú)引用?？梢砸匀魏魏线m的次序?qū)崿F(xiàn)本文所述的所有方法，除非在本文中另有說明或者在上下文中清楚地相抵觸。本文提供的任何和所有實(shí)施例、或示例性的語言(例如，“例如”)的使用，僅僅意在更好地說明本發(fā)明，而不限制本發(fā)明的范圍，除非另有說明。說明書中的任何語言都不能理解成暗示任何未聲明的要素對完成本發(fā)明是必需的。
本文描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，包括發(fā)明人已知的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的最佳實(shí)施方式。在閱讀前面的說明之后，這些優(yōu)選的實(shí)施方案的變化對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員是顯而易見的。發(fā)明人預(yù)期技術(shù)人員采用這樣的變化是合適的，發(fā)明人認(rèn)為可以通過本文具體說明以外的方法實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，本發(fā)明包括可適用的法律允許的后附權(quán)利要求中引用的主題的所有改進(jìn)和等同物。而且，上面所述的要素以其所有可能的變化進(jìn)行的任何組合都包含在本發(fā)明內(nèi)，除非在本文中另有說明或者在上下文中清楚地相抵觸。
權(quán)利要求
1.一種具有通式I結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂類似物 其中，Z1和Z2相同地或不同地為-O-C(O)-、-O-、-S-或-NH-C(O)-；R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32飽和的或不飽和的烷基、鏈烯基或炔基，其是任選地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或用它們的組合取代的；R5和R6是相同或不同的，可以為缺少或含有連接物，所述連接物含有C1至C32烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；R7是氫、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、烷酰基、烯?；?、炔?；芜x地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或以它們的組合取代的；或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；氨基酸、肽、肽模擬部分、二肽、多肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、糖或多糖、多胺、雜環(huán)化合物、核苷、或多核苷酸；R8基團(tuán)相同或不同地是C1至C25飽和的或不飽和的烷基、烷氧基、取代的烷基、或取代的烷氧基；X是無毒的陰離子。
2.權(quán)利要求1的類似物，其中所述的化合物是具有式II結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地是H、或C1至C32烷基、鏈烯基、或炔基。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式III結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂酯 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C31烷基、鏈烯基、或炔基。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式IV結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C32烷基、鏈烯基、或炔基。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式V結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂酯 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C31烷基、鏈烯基、或炔基。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式VI結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C32烷基、鏈烯基、或炔基。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式VII結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂酯 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C31烷基、鏈烯基、或炔基。
8.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式VIII結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C32烷基、鏈烯基、或炔基。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物是具有式IX結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂酯 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C31烷基、鏈烯基、或炔基。
10.一種具有通式X結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂變體 其中，Z1和Z2相同地或不同地為-O-C(O)-、-O-、-S-或-NH-C(O)-；R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32飽和的或不飽和的烷基、鏈烯基、或炔基，任選地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或用它們的組合取代的；R5和R6相同或不同，可以缺少或含有連接物，所述連接物含有C1至C32烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；R7基團(tuán)可以相同或不同地是氫、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、烷?；?、烯酰基、炔?；芜x地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或以它們的組合取代的；或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；氨基酸、肽、肽模擬部分、二肽、多肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、糖或多糖、多胺、雜環(huán)化合物、核苷、或多核苷酸；R8基團(tuán)相同或不同地是C1至C25飽和的或不飽和的烷基、烷氧基、取代的烷基、或取代的烷氧基；X是無毒的陰離子。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述的化合物是具有式XI結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂醚 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C32烷基、鏈烯基、或炔基。
12.權(quán)利要求10的組合物，其中所述的化合物是具有式XII結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂酯 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C31烷基、鏈烯基、或炔基。
13.權(quán)利要求1或10的陽離子心磷脂，其中，R5，R6，R7和R8中的至少一個包含任選取代的烷基或任選取代的烷氧基。
14.權(quán)利要求13的陽離子心磷脂，其中，至少一個R6包含任選取代的聚烷氧基，其含有1至500個烷氧基。
15.權(quán)利要求14的陽離子心磷脂，其中，至少一個R6包含任選取代的聚烷氧基，其含有1至100個烷氧基。
16.權(quán)利要求13的陽離子心磷脂，其中，至少一個R5包含任選取代的聚烷氧基，其含有1至500個烷氧基。
17.權(quán)利要求16的陽離子心磷脂，其中，至少一個R5包含任選取代的聚烷氧基，其含有1至100個烷氧基。
18.權(quán)利要求13的陽離子心磷脂，其中，R7和R8中的至少一個含有任選取代的烷基，且R5和R6是任選取代的聚烷氧基。
19.權(quán)利要求18的陽離子心磷脂，其中，R5和R6中的至少一個含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至100個烷氧基。
20.權(quán)利要求1或10的陽離子心磷脂，其中，R5或R6中的至少一個是乙氧基(單PEG)。
21.權(quán)利要求1或10的陽離子心磷脂，其中，至少一個R7是氨基酸、葉酸、糖、肽、多糖、多肽、蛋白質(zhì)、多胺、或肽模擬部分。
22.權(quán)利要求21的陽離子心磷脂，其中，至少一個R7是組蛋白、精胺、亞精胺、或其衍生物。
23.權(quán)利要求1或10的陽離子心磷脂，其中，至少一個R7是作為O-糖苷或C-糖苷結(jié)合的糖。
24.權(quán)利要求23的陽離子心磷脂，其中，所述的糖是葡萄糖、甘露糖、半乳糖、核糖、阿拉伯糖、阿洛糖、巖藻糖或2-脫氧的糖。
25.權(quán)利要求21的陽離子心磷脂，其中，至少一個R7是在側(cè)鏈上具有帶正電荷的基團(tuán)的L-或D-α氨基酸。
26.權(quán)利要求25的陽離子心磷脂，其中，所述的氨基酸是精氨酸、組氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、或其類似物。
27.權(quán)利要求21的陽離子心磷脂，其中，至少一個R7是帶有一個或多個正電荷的氨基酸、糖、肽、多糖、多肽、蛋白質(zhì)、多胺、或肽模擬部分。
28.一種具有通式XIII結(jié)構(gòu)的陽離子心磷脂 其中，Z1和Z2相同地或不同地為-O-C(O)-、-O-、-S-或-NH-C(O)-；R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32飽和的或不飽和的烷基、鏈烯基、或炔基，任選地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或用它們的組合取代的；R5和R6是相同或不同地，可以缺少或含有連接物，所述連接物含有C1至C32烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；R7，R9，R10和R11相同或不同地是氫、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、烷?；?、烯酰基、炔?；?，任選地羥基化的、胺化的、硫化的、環(huán)氧化的、環(huán)化的、聚乙二醇化的、鹵化的、或以它們的組合取代的；或烷氧基或取代的烷氧基例如含有1至500個PEG(聚乙二醇)單元的聚乙二醇化的醚；氨基酸、肽、肽模擬部分、二肽、多肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、糖或多糖、多胺、雜環(huán)化合物、核苷、或多核苷酸；R8是C2至C32烷基、取代的烷基、烷烯基、取代的烷烯基、烷氧基或取代的烷氧基；X是無毒的陰離子。
29.一種具有通式XIV結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求28的陽離子心磷脂 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、C1至C32烷基、鏈烯基、或炔基。
30.一種具有通式XV結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求28的陽離子心磷脂 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同地為H、或C1至C31烷基、鏈烯基、或炔基。
31.權(quán)利要求28的陽離子心磷脂，其中，R5，R6，R7，R8，R9，R10或R11中的至少一個任選取代的烷基或任選取代的烷氧基。
32.權(quán)利要求31的陽離子心磷脂，其中，至少一個R6含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至500個烷氧基。
33.權(quán)利要求32的陽離子心磷脂，其中，至少一個R6含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至100個烷氧基。
34.權(quán)利要求31的陽離子心磷脂，其中，至少一個R5含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至500個烷氧基。
35.權(quán)利要求34的陽離子心磷脂，其中，至少一個R5含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至100個烷氧基。
36.權(quán)利要求28的陽離子心磷脂，其中，R7，R9，R10或R11中的至少一個含有任選取代的烷基，且R5和R6是任選取代的聚烷氧基。
37.權(quán)利要求36的陽離子心磷脂，其中，R5和R6中的至少一個含有任選取代的聚烷氧基，其含有1至100個烷氧基。
38.權(quán)利要求28的陽離子心磷脂，其中，R5或R6中的至少一個是乙氧基(單PEG)。
39.權(quán)利要求28的陽離子心磷脂，其中，R7，R9，R10或R11中的至少一個是氨基酸、葉酸、糖、肽、多糖、多肽、蛋白質(zhì)、多胺、或肽模擬部分。
40.權(quán)利要求39的陽離子心磷脂，其中，R7，R9，R10或R11中的至少一個是組蛋白、精胺、亞精胺、或其衍生物。
41.權(quán)利要求39的陽離子心磷脂，其中，R7，R9，R10或R11中的至少一個是作為O-糖苷或C-糖苷結(jié)合的糖。
42.權(quán)利要求41的陽離子心磷脂，其中，所述的糖是葡萄糖、甘露糖、半乳糖、核糖、阿拉伯糖、阿洛糖、巖藻糖或2-脫氧的糖。
43.權(quán)利要求39的陽離子心磷脂，其中，R7，R9，R10或R11中的至少一個是在側(cè)鏈上具有帶正電荷的基團(tuán)的L-或D-α氨基酸。
44.權(quán)利要求43的陽離子心磷脂，其中，所述的氨基酸是精氨酸、組氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、或其類似物。
45.權(quán)利要求39的陽離子心磷脂，其中，R7，R9，R10或R11中的至少一個是帶有一個或多個正電荷的氨基酸、糖、肽、多糖、多肽、蛋白質(zhì)、多胺、或肽模擬部分。
46.一種組合物，其含有根據(jù)權(quán)利要求1-45中的任一項(xiàng)的陽離子心磷脂。
47.權(quán)利要求46組合物，其還含有一種或多種共脂。
48.權(quán)利要求46或47的組合物，其含有一種或多種脂質(zhì)體。
49.權(quán)利要求46-48中的任一項(xiàng)的組合物，其含有單層的或多層的泡囊或其混合物。
50.權(quán)利要求46-49中的任一項(xiàng)的組合物，其中，所述的脂質(zhì)體具有約1微米至500nm的直徑。
51.權(quán)利要求48的組合物，其是水性介質(zhì)中的泡囊形式。
52.權(quán)利要求48的組合物，其是凍干形式。
53.權(quán)利要求52的組合物，其還包含冷凍保護(hù)劑。
54.權(quán)利要求46-53中的任一項(xiàng)的組合物，其還包含中性脂質(zhì)種類。
55.權(quán)利要求54的組合物，其中，陽離子脂質(zhì)種類與中性脂質(zhì)種類的摩爾比為約9/1至約1/9。
56.權(quán)利要求46-55中的任一項(xiàng)的組合物，其還包含選自由下述組成的組的脂質(zhì)磷脂酰乙醇胺，磷脂酰膽堿，鞘磷脂，膽固醇，甾醇和生育酚。
57.權(quán)利要求56的組合物，其還包含選自由下述組成的組的磷脂酰膽堿二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二油基磷脂酰膽堿、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二花生四烯酰磷脂酰膽堿、卵磷脂酰膽堿、豆磷脂酰膽堿、氫化的豆磷脂酰膽堿和其混合物。
58.權(quán)利要求56的組合物，其包含選自由下述組成的組的甾醇膽固醇，膽固醇的衍生物，糞醇，膽甾烷醇，膽甾烷，膽固醇半琥珀酸酯，膽固醇硫酸酯和其混合物。
59.一種制劑，其包含權(quán)利要求46-58中的任一項(xiàng)的組合物和生理上可接受的載體。
60.權(quán)利要求59的制劑，其還包含一種活性劑。
61.權(quán)利要求60的制劑，其中，所述的活性劑是治療有效量的核苷類似物或核苷酸類似物。
62.權(quán)利要求61的制劑，其中，所述的類似物是二脫氧核苷、二脫氫核苷、核苷的鹵化或疊氮基衍生物、或無環(huán)的核苷。
63.權(quán)利要求61的制劑，其中，所述的核苷類似物是選自由下述組成的組的抗病毒核苷無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷、1-(2-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶(FIAC)或1-(2′-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)5-碘尿嘧啶(FIAU)。
64.權(quán)利要求61的制劑，其中，所述的類似物是選自由下述組成的組的抗病毒核苷3′-疊氮基-2′，3′-二脫氧嘧啶、3′-鹵代嘧啶二脫氧核苷、或2′，3′-二脫氫-2′，3′-二脫氧核苷。
65.權(quán)利要求61的制劑，其中，所述的類似物是抗病毒核苷，其是3′-疊氮基-3′脫氧胸苷(AZT)。
66.權(quán)利要求61的制劑，其中，所述的治療劑是所述類似物的磷脂酰衍生物或二磷酸二甘油酯衍生物。
67.權(quán)利要求66的制劑，其中，所述的活性劑是皮質(zhì)甾類或非甾族的抗炎劑。
68.權(quán)利要求60的制劑，其中，所述的活性劑是皮質(zhì)甾類、非甾族的抗炎劑、抗生素、抗真菌劑、氧化劑或抗病毒核苷。
69.權(quán)利要求60的制劑，其中，所述的活性劑是蛋白質(zhì)、多肽或多核苷酸。
70.權(quán)利要求69的制劑，其中，所述的活性劑是蛋白質(zhì)或肽。
71.權(quán)利要求69的制劑，其中，所述的活性劑是多核苷酸。
72.權(quán)利要求71的制劑，其中，所述的多核苷酸是核酶、干擾RNA(RNAi)或反義RNA或DNA序列。
73.權(quán)利要求72的制劑，其中，所述的多核苷酸是10至30-mer的反義多核苷酸。
74.權(quán)利要求73的制劑，其中，所述的反義多核苷酸是15-mer的序列。
75.權(quán)利要求73或74中的任一項(xiàng)的制劑，其中，所述的反義寡核苷酸含有1個或多個硫代磷酸酯連接。
76.權(quán)利要求75的制劑，其中，所述的反義寡核苷酸含有2個硫代磷酸酯連接。
77.權(quán)利要求76的制劑，其中，所述的硫代磷酸酯連接存在于反義寡核苷酸的每個末端。
78.權(quán)利要求76的制劑，其中，所述的硫代磷酸酯連接存在于反義寡核苷酸的末端之間。
79.權(quán)利要求73-78中的任一項(xiàng)的制劑，其中，所述的寡核苷酸是c-raf反義寡核苷酸。
80.權(quán)利要求72-78中的任一項(xiàng)的制劑，其中，所述的多核苷酸針對HIV。
81.權(quán)利要求80的制劑，其中，所述的多核苷酸針對rev反式激活蛋白。
82.權(quán)利要求71的制劑，其中，所述的多核苷酸編碼在疾病狀態(tài)是缺乏的或不存在的基因產(chǎn)物。
83.權(quán)利要求71的制劑，其中，所述的多核苷酸編碼免疫原性肽、天然激素或天然激素的合成類似物。
84.權(quán)利要求71的制劑，其中，所述的多核苷酸在疾病狀態(tài)是缺乏的或不存在的。
85.權(quán)利要求71的制劑，其中，所述的多核苷酸編碼治療性多肽。
86.權(quán)利要求85的制劑，其中，所述的多肽在疾病狀態(tài)是缺乏的或不存在的。
87.權(quán)利要求85的制劑，其中，所述的多肽是天然激素或其合成類似物。
88.權(quán)利要求85的制劑，其中，所述的多肽是免疫原。
89.權(quán)利要求60的制劑，其中，所述的活性劑是藥物。
90.權(quán)利要求89的制劑，其中，所述的活性劑是抗癌藥。
91.權(quán)利要求69的制劑，其中，所述的活性劑是單克隆抗體或其片段。
92.權(quán)利要求60的制劑，其中，所述的活性劑是生物活性脂質(zhì)。
93.權(quán)利要求59-92中的任一項(xiàng)的制劑，其是含有一種或多種藥用載體的藥物制劑。
94.權(quán)利要求93的藥物制劑，其被配制成用于局部施用。
95.權(quán)利要求94的藥物制劑，其被配制成施用于皮膚或粘膜表面。
96.權(quán)利要求93的藥物制劑，其被配制成用于腸胃外施用。
97.權(quán)利要求93的藥物制劑，其被配制成用于口服施用。
98.權(quán)利要求93-97中的任一項(xiàng)的藥物制劑，其含有多種活性劑。
99.一種治療脊椎動物的疾病的方法，其包括給需要治療的脊椎動物施用權(quán)利要求59-98中的任一項(xiàng)的制劑的步驟，施用的量和位置足以治療該脊椎動物的疾病。
100.權(quán)利要求99的方法，其包括將所述的制劑體外地施用給所述脊椎動物的細(xì)胞，然后將該細(xì)胞返回所述的脊椎動物。
101.權(quán)利要求99的方法，其包括將所述的制劑體內(nèi)地施用給所述脊椎動物的細(xì)胞。
102.權(quán)利要101的方法，其包括將所述的制劑局部地施用給皮膚或粘膜表面。
103.權(quán)利要求101的方法，其包括注射進(jìn)所述脊椎動物的體腔或組織中。
104.權(quán)利要求101的方法，其包括口服施用所述制劑。
105.權(quán)利要求99-104中的任一項(xiàng)的方法，其中，所述的疾病是癌癥。
106.權(quán)利要求105的方法，其中，所述的組合物含有抗癌藥。
107.權(quán)利要求105或106的方法，其中，所述的組合物包含選自由下述組成的組的多核苷酸核酶、干擾RNA(RNAi)和反義RNA或DNA序列。
108.權(quán)利要求107的方法，其中，所述的多核苷酸是c-raf反義寡核苷酸。
109.權(quán)利要求99-104中的任一項(xiàng)的方法，其中，所述的疾病是病毒感染。
110.權(quán)利要求109的方法，其中，所述的組合物包含抗病毒劑。
111.權(quán)利要求109或110的方法，其中，所述的病毒感染是單純皰疹。
112.權(quán)利要求111的方法，其中，所述的組合物包含無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷、1-(2-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶(FIAC)或1-(2′-脫氧-2′-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)5-碘尿嘧啶(FIAU)。
113.權(quán)利要求109或110的方法，其中，所述的病毒感染是HIV。
114.權(quán)利要求113的方法，其中，所述的組合物包含抗病毒核苷。
115.權(quán)利要求114的方法，其中，所述的抗病毒核苷是3′-疊氮基-3′-脫氧胸苷(AZT)。
116.權(quán)利要求99-115中的任一項(xiàng)的方法，其中，所述的脊椎動物是人。
117.一種將活性劑導(dǎo)入細(xì)胞中的方法，其包括(a)制備含有權(quán)利要求1-45中的任一項(xiàng)的陽離子心磷脂和所述活性劑的組合物，和(b)使所述細(xì)胞與所述組合物接觸，由此使所述細(xì)胞攝入所述活性劑。
118.一種將活性劑導(dǎo)入細(xì)胞中的方法，其包括(a)制備含有權(quán)利要求1-45中的任一項(xiàng)的陽離子心磷脂的組合物，和(b)在存在所述活性劑的情況下，使所述細(xì)胞與所述組合物接觸，由此使所述細(xì)胞攝入所述活性劑。
119.權(quán)利要求117或118的方法，其中，所述的接觸步驟是在體外進(jìn)行。
120.權(quán)利要求117-119中的任一項(xiàng)的方法，其中，所述的活性劑是多核苷酸。
121.權(quán)利要求120的方法，其中，所述的多核苷酸是核酶、干擾RNA(RNAi)和反義RNA或DNA序列。
122.一種用多核苷酸轉(zhuǎn)染細(xì)胞的方法，其包括(a)制備含有權(quán)利要求1-45中的任一項(xiàng)的陽離子心磷脂和所述多核苷酸的組合物，和(b)使所述細(xì)胞與所述組合物接觸，由此使所述細(xì)胞攝入所述多核苷酸。
123.一種用多核苷酸轉(zhuǎn)染細(xì)胞的方法，其包括(a)制備含有權(quán)利要求1-45中的任一項(xiàng)的陽離子心磷脂的組合物，和(b)在存在所述多核苷酸的情況下，使所述細(xì)胞與所述組合物接觸，由此使所述細(xì)胞攝入所述多核苷酸。
124.權(quán)利要求122或123的方法，其中，所述的細(xì)胞是體外的。
125.權(quán)利要求122或123的方法，其中，所述的細(xì)胞是體內(nèi)的。
126.權(quán)利要求122-125中的任一項(xiàng)的方法，其中，所述的多核苷酸是核酶、干擾RNA(RNAi)或反義RNA或DNA序列。
127.權(quán)利要求126的方法，其中，所述的多核苷酸是編碼基因的表達(dá)構(gòu)建體，所述基因在轉(zhuǎn)染后在所述細(xì)胞中表達(dá)。
128.一種用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞的試劑盒，所述的試劑盒包含權(quán)利要求1-45中的任一項(xiàng)的陽離子心磷脂和一種或多種選自由下述組成的組的要素多核苷酸，將該多核苷酸和陽離子心磷脂配制成制劑的說明書，使用陽離子心磷脂轉(zhuǎn)染細(xì)胞的說明書，用于促進(jìn)轉(zhuǎn)染的試劑，用于儲存陽離子心磷脂的容器，用于儲存多核苷酸的容器，用于儲存試劑的容器，用于儲存包含陽離子心磷脂和多核苷酸的制劑的容器，或用于制備制劑的容器，和促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)。
129.一種組合物，其含有陽離子心磷脂和核酸。
130.權(quán)利要求129的組合物，其還包含一種或多種藥用載體。
131.權(quán)利要求129的組合物，其是脂質(zhì)體組合物。
132.一種基因治療方法，其包括給需要治療的患者施用包含一種或多種核酸的藥物組合物，其中該組合物包含陽離子心磷脂。
133.權(quán)利要求132的方法，其中，該組合物還包含一種或多種藥用載體。
134.權(quán)利要求132的方法，其中，該組合物是脂質(zhì)體組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了陽離子心磷脂化合物、合成并將它們用于脂質(zhì)體制劑、基因轉(zhuǎn)染等方面的方法。更具體地，本發(fā)明提供了包含陽離子心磷脂類似物的脂質(zhì)體、包含陽離子心磷脂類似物的藥物組合物、和在輸送活性藥物以治療人和動物疾病和/或在診斷試驗(yàn)中使用這樣的脂質(zhì)體和組合物的方法。
文檔編號C07F9/09GK1726183SQ200380106116
公開日2006年1月25日 申請日期2003年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月16日
發(fā)明者M·U·艾哈邁德, K·卡西雷迪, 伊姆蘭·艾哈邁德 申請人:新藥物公司