專(zhuān)利名稱：純化糖肽膦酸酯衍生物的方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新穎的糖肽抗生素和有關(guān)化合物膦酸酯衍生物的純化。確切而言，本發(fā)明涉及借助樹(shù)脂色譜法純化糖肽膦酸酯衍生物。
背景糖肽(例如dalbaheptides)是一類(lèi)熟知的由各種微生物產(chǎn)生的抗生素(參見(jiàn)Glycopeptide Antibiotics，edited by R.Nagarajan，Marcel Dekker，Inc.New York(1994))。這些復(fù)雜的多環(huán)肽化合物是非常有效的抗菌劑，對(duì)抗多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。盡管是有力的抗菌劑，不過(guò)糖肽抗生素沒(méi)有象其他種類(lèi)抗生素那樣經(jīng)常用于治療細(xì)菌性疾病，例如半合成的青霉素、頭孢菌素和林可霉素，這是出于關(guān)于毒性的考慮。
不過(guò)近些年來(lái)，細(xì)菌已經(jīng)對(duì)很多常用抗生素產(chǎn)生耐藥性(參見(jiàn)J.E.Geraci et al.，Mayo Clin.Proc.1983，58，88-91；以及M.Foldes，J.Antimicrob.Chemother.1983，11，21-26)。由于糖肽抗生素經(jīng)常有效對(duì)抗這些耐藥性菌株，諸如萬(wàn)古霉素等糖肽已經(jīng)成為治療由這些生物所致感染的最后手段。不過(guò)最近，已經(jīng)在多種微生物中出現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥性，例如萬(wàn)古霉素-耐受性腸球菌(VRE)，引起對(duì)未來(lái)有效治療細(xì)菌感染的能力的考慮日益增加(參見(jiàn)Hospital Infection Control PracticesAdvisory Committee，Infection Control Hospital Epidemiology，1995，17，364-369；A.P.Johnson et al.，Clinical MicrobiologyRev.，1990，3，280-291；G.M.Eliopoulos，European J.ClinicalMicrobiol.，Infection Disease，1993，12，409-412；以及P.Courvalin，Antimicrob.Agents Chemother，1990，34，2291-2296)。
有大量萬(wàn)古霉素衍生物和其他糖肽都是本領(lǐng)域已知的。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.4,639,433；4,643,987；4,497,802；4,698,327；5,591,714；5,840,684；和5,843,889。其他衍生物公開(kāi)在EP 0 802199；EP 0 801 075；EP 0 667 353；WO 97/28812；WO 97/38702；WO98/52589；WO 98/52592；以及J.Amer.Chem.Soc.，1996，118，13107-13108；J.Amer.Chem.Soc.，1997，119，12041-12047；和J.Amer.Chem.Soc.，1994，116，4573-4590中。
糖肽抗生素的制備一般包括純化步驟。適合于純化糖肽、特別是萬(wàn)古霉素和有關(guān)化合物的方法例如描述在美國(guó)專(zhuān)利Nos.4,440,753，4,845,194，4,874,843，5,149,784，5,258,495和5,853,720中。其他方法公開(kāi)在WO 91/08300和WO 93/21207中。
盡管已有上述參考文獻(xiàn)的公開(kāi)，目前仍然需要新穎的具有有效抗菌活性和提高了的哺乳動(dòng)物安全性的糖肽衍生物。確切而言，需要這樣的糖肽衍生物，它們有效對(duì)抗廣譜的病原性微生物，包括萬(wàn)古霉素-耐受性微生物，并且具有減少了的組織蓄積和/或腎毒性。進(jìn)而，為了使這些新穎的衍生物是有用的，需要有效的純化所述化合物的方法，以非常純凈的形式回收適合于藥物產(chǎn)品合成的產(chǎn)物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供純化新穎的糖肽膦酸酯衍生物的方法，這些衍生物具有非常有效的抗菌活性和提高了的哺乳動(dòng)物安全性。更具體而言，本發(fā)明提供了借助樹(shù)脂色譜法純化糖肽衍生物的方法。
在對(duì)哺乳動(dòng)物給藥時(shí)，按照本發(fā)明方法所純化的糖肽膦酸酯衍生物表現(xiàn)減少了的組織蓄積和/或腎毒性。這些糖肽化合物被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3個(gè))取代基取代，所述取代基包含一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3個(gè))膦?；?-PO3H2)；或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或前體藥物。優(yōu)選地，糖肽化合物被一個(gè)或兩個(gè)取代基取代，取代基包含一個(gè)或兩個(gè)膦酰基。更優(yōu)選地，糖肽化合物被一個(gè)取代基取代，取代基包含一個(gè)或兩個(gè)膦?；瑑?yōu)選一個(gè)膦?；??？蛇x地，這些糖肽化合物還可以被其它不包含膦?；娜〈〈?，其條件是至少一個(gè)取代基包含一個(gè)或多個(gè)膦酰基。
因此，在一種優(yōu)選的衍生物中，糖肽化合物在C-末端被包含一個(gè)或兩個(gè)膦?；?-PO3H2)的取代基取代；或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或前體藥物。優(yōu)選地，含膦?；娜〈峭ㄟ^(guò)酰胺鍵、酯鍵或硫酯鍵與C-末端羰基連接的；更優(yōu)選地，通過(guò)酰胺鍵連接。優(yōu)選地，含膦?；娜〈粋€(gè)膦?；?。特別優(yōu)選的C-末端含膦?；娜〈Ⅴ＜装被?-膦酰丙氨基和2-羥基-2-膦酰乙氨基。
在另一種優(yōu)選的衍生物中，糖肽化合物在R-末端(在雷瑣酚環(huán)上)被包含一個(gè)或兩個(gè)膦?；?-PO3H2)的取代基取代；或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或前體藥物。優(yōu)選地，含膦?；娜〈峭ㄟ^(guò)連接到R-末端的氨甲基的氮原子與R-末端(即雷瑣酚環(huán))連接的。優(yōu)選地，含膦?；娜〈粋€(gè)膦?；?。特別優(yōu)選的R-末端含膦?；娜〈∟-(膦酰甲基)氨甲基、(2-羥基-2-膦酰乙基)氨甲基、N-羧甲基-N-(膦酰甲基)氨甲基、N，N-雙(膦酰甲基)氨甲基和N-(3-膦酰丙基)氨甲基。
在另一種優(yōu)選的衍生物中，糖肽化合物在C-末端和R-末端被包含一個(gè)或兩個(gè)膦酰基(-PO3H2)的取代基取代；或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或前體藥物。優(yōu)選地，含膦?；娜〈髯园粋€(gè)膦?；?br> 優(yōu)選的糖肽衍生物是式I糖肽
其中R19是氫；R20是-Ra-Y-Rb-(Z)x、Rf、-C(O)Rf或-C(O)-Ra-Y-Rb-(Z)x；R3是-ORc、-NRcRc、-O-Ra-Y-Rb-(Z)x、-NRc-Ra-Y-Rb-(Z)x、-NRcRe或-O-Re；或者R3是包含一個(gè)或多個(gè)膦?；牡?連接的、氧-連接的或硫-連接的取代基；R5選自由氫、鹵代、-CH(Rc)-NRcRc、-CH(Rc)-NRcRe、-CH(Rc)-NRc-Ra-Y-Rb-(Z)x、-CH(Rc)-Rx、-CH(Rc)-NRc-Ra-C(＝O)-Rx和包含一個(gè)或多個(gè)膦?；娜〈M成的組；每個(gè)Ra獨(dú)立地選自由亞烷基、取代的亞烷基、亞烯基、取代的亞烯基、亞炔基和取代的亞炔基組成的組；每個(gè)Rb獨(dú)立地選自由共價(jià)鍵、亞烷基、取代的亞烷基、亞烯基、取代的亞烯基、亞炔基和取代的亞炔基組成的組，其條件是當(dāng)Z是氫時(shí)，Rb不是共價(jià)鍵；每個(gè)Rc獨(dú)立地選自由氫、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基和-C(O)Rd組成的組；每個(gè)Rd獨(dú)立地選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基組成的組；Re是糖基；每個(gè)Rf獨(dú)立地是烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基；Rx是N-連接的氨基糖或N-連接的雜環(huán)；每個(gè)Y獨(dú)立地選自由氧、硫、-S-S-、-NRc-、-S(O)-、-SO2-、-NReC(O)-、-OSO2-、-OC(O)-、-NRcSO2-、-C(O)NRc-、-C(O)O-、-SO2NRc-、-SO2O-、-P(O)(ORc)O-、-P(O)(ORc)NRc-、-OP(O)(ORc)O-、-OP(O)(ORc)NRc-、-OC(O)O-、-NRcC(O)O-、-NRcC(O)NRc-、-OC(O)NRc-、-C(＝O)-和-NRcSO2NRc-組成的組；每個(gè)Z獨(dú)立地選自氫、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜芳基和雜環(huán)基；且x是1或2；或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或前體藥物；其條件是，R3和R5至少有一個(gè)是包含一個(gè)或多個(gè)膦酰基的取代基。
優(yōu)選地，R20是-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3；-CH2CH2CH2-NH-(CH2)8CH3；-CH2CH2CH2CH2-NH-(CH2)7CH3；-CH2CH2-NHSO2-(CH2)9CH3；-CH2CH2-NHSO2-(CH2)11CH3；-CH2CH2-S-(CH2)8CH3；-CH2CH2-S-(CH2)9CH3；-CH2CH2-S-(CH2)10CH3；-CH2CH2CH2-S-(CH2)8CH3；-CH2CH2CH2-S-(CH2)9CH3；-CH2CH2CH2-S-(CH2)3-CH＝CH-(CH2)4CH3(反式)；-CH2CH2CH2CH2-S-(CH2)7CH3；-CH2CH2-S(O)-(CH2)9CH3；-CH2CH2-S-(CH2)6Ph；-CH2CH2-S-(CH2)8Ph；-CH2CH2CH2-S-(CH2)8Ph；-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2-NH-CH2-4-[4-(CH3)2CHCH2-]-Ph；-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-CF3-Ph)-Ph；-CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2-S(O)-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-ph;-CH2CH2CH2-S(O)-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-S-CH2-4-[3，4-二-Cl-PhCH2O-)-Ph；-CH2CH2-NHSO2-CH2-4-[4-(4-Ph)-Ph]-Ph；-CH2CH2CH2-NHSO2-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-NHSO2-CH2-4-(Ph-C≡C-)-Ph；-CH2CH2CH2-NHSO2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；或-CH2CH2CH2-NHSO2-4-(萘-2-基)-Ph。優(yōu)選地，R20還是4-(4-氯苯基)芐基或4-(4-氯芐氧基)芐基。
作為替代選擇，糖肽衍生物是這樣的式I化合物，其中R19是氫；R20是-CH2CH2NH-(CH2)9CH3；R3是-OH；R5是包含膦酰基的取代基；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一種替代選擇中，糖肽衍生物是這樣的式I化合物，其中R19是氫；R20是-Ra-Y-Rb-(Z)x、Rf、-C(O)Rf或-C(O)-Ra-Y-Rb-(Z)x；R3是-OH；R5是-CH2-NH-CH2-P(O)(OH)2；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
上述化合物是非常有效的抗菌劑。本發(fā)明的糖肽化合物和治療患有細(xì)菌性疾病的哺乳動(dòng)物的方法—包含對(duì)哺乳動(dòng)物給以治療有效量的本發(fā)明化合物—進(jìn)一步描述在2001年5月1日提交的被普遍轉(zhuǎn)讓的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)系列號(hào)09/847,042中，其公開(kāi)內(nèi)容結(jié)合在此作為參考。
制備在C-末端被包含一個(gè)或多個(gè)膦?；娜〈〈奶请牡姆椒òㄊ箤?duì)應(yīng)的其中C-末端是羧基的起始糖肽與含有膦?；倪m合化合物偶聯(lián)。
制備在R-末端被包含一個(gè)或多個(gè)膦?；娜〈〈奶请牡姆椒òㄊ箤?duì)應(yīng)的其中R-末端是未取代的起始糖肽與適合的含膦?；幕衔锱悸?lián)。當(dāng)起始糖肽在萬(wàn)古胺(vancosamine)氨基末端被取代時(shí)，這樣一種方法可以進(jìn)一步可選地包括通過(guò)還原性烷基化對(duì)應(yīng)的其中萬(wàn)古胺氨基末端是對(duì)應(yīng)的胺的糖肽來(lái)制備起始糖肽。
制備在C-末端被取代的糖肽的方法包括衍生對(duì)應(yīng)的其中C-末端是羧基的起始糖肽。制備在R-末端被取代的糖肽的方法包括衍生對(duì)應(yīng)的其中R-末端是未取代的(即氫)起始糖肽。
另外，制備其中R3是-OH、R5是-CH2-NH-Ra-P(O)(OH)2、R19是氫、R20是-Ra-Y-Rb-(Z)x或-Rf且Ra、Rb、Rf、Y、Z和x是如本文所定義的式I化合物或其鹽包含下列步驟(a)將式I化合物或其鹽，其中R3是-OH，R5、R19和R20是氫，用式HC(O)-Ra’-Y-Rb-(Z)x或HC(O)Rf’醛還原性烷基化，其中Ra’和Rf’分別代表減去一個(gè)-CH2-基團(tuán)的Ra和Rf，生成式I化合物或其鹽，其中R3是-OH，R5和R19是氫，R20是-Ra-Y-Rb-(Z)x或-Rf；和(b)使步驟(a)產(chǎn)物與甲醛和H2N-Ra-P(O)(OH)2反應(yīng)，生成式I化合物或其鹽，其中R3是-OH，R5是-CH2NH-Ra-P(O)(OH)2，R19是氫，R20是-Ra-Y-Rb-(Z)x或-Rf。
優(yōu)選的式I糖肽化合物如下表I所示，其中R19是氫。
表I優(yōu)選的式I化合物
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本文所述膦?；衔镌趯?duì)哺乳動(dòng)物給藥時(shí)，意外地表現(xiàn)減少了的組織蓄積和/或腎毒性。不希望受理論所限，據(jù)信膦?；糠肿饔檬窃谏?xiàng)l件下增加糖肽的總體負(fù)電荷，從而促進(jìn)給藥后從哺乳動(dòng)物排泄。本發(fā)明膦?；衔锱判沟囊馔庠黾涌梢越忉尵瓦@些化合物所觀察到的減少了的組織蓄積和/或減少了的腎毒性，相對(duì)于對(duì)應(yīng)的缺乏膦?；倌芏鹊幕衔锒?。
按照本發(fā)明的實(shí)施方式，糖肽的膦?；苌锸墙柚鷺?shù)脂色譜法純化的，使用基于聚苯乙烯與二乙烯基苯的共聚物的樹(shù)脂。多種有用的聚苯乙烯樹(shù)脂可由商業(yè)來(lái)源提供，例如TosoHaas(Montgomery，PA)，Rohm & Haas(Philadelphia，PA)、Mitsubishi Chemical IndustriesLtd.(Tokyo，Japan)和Dow Chemical Co.(Midland，MI)。
樹(shù)脂通常由多孔的珠粒組成，其特征性大小在約20μm與約800μm之間的范圍內(nèi)，孔徑在約50_與約1000_之間的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的純化方法包括使第一酸化水溶液與聚苯乙烯二乙烯基苯樹(shù)脂接觸，該溶液包含糖肽膦酸酯衍生物和極性有機(jī)溶劑；將所接觸的樹(shù)脂用第二酸化水溶液洗脫，該溶液包含極性有機(jī)溶劑，形成洗脫液；和從洗脫液中分離所純化的糖肽膦酸酯衍生物。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“極性有機(jī)溶劑”包括甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮、正丙醇、正丁醇、異丁醇、甲乙酮、四氫呋喃等溶劑，它們具有相當(dāng)大的水溶性，或者是可與水混溶的。優(yōu)選的極性有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、異丙醇和乙腈。
適合于酸化第一與第二水溶液的酸包括乙酸、三氟乙酸、鹽酸、硫酸、磷酸等酸。關(guān)于本發(fā)明，乙酸和鹽酸是優(yōu)選的。
所純化的產(chǎn)物是借助本領(lǐng)域已知的方法分離的，例如冷凍干燥，或者沉淀繼之以蒸發(fā)和/或過(guò)濾?？蛇x地，分離方法包括第一濃縮步驟，其中將洗脫液用樹(shù)脂加工，優(yōu)選聚苯乙烯二乙烯基苯樹(shù)脂，形成純化產(chǎn)物濃度更高的溶液，從中分離產(chǎn)物。
在一種純化方法中，將樹(shù)脂上柱，分批收集洗脫液，借助薄層色譜法(TLC)和高壓液相色譜法(HPLC)監(jiān)測(cè)糖肽的存在。在分離產(chǎn)物之前匯集產(chǎn)物濃度和純度高于所需閾值的部分。利用本發(fā)明的方法，已經(jīng)得到純度超過(guò)80％的膦?；请臉颖?。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明涉及新穎的化合物的純化，這些化合物是包含一個(gè)或多個(gè)包含一個(gè)或多個(gè)膦?；娜〈奶请目股匮苌铩Ｔ诿枋龌衔飼r(shí)，下列術(shù)語(yǔ)具有下列含義，另有指示除外。
定義術(shù)語(yǔ)“烷基”表示一價(jià)直鏈或支鏈飽和烴鏈，優(yōu)選地具有1至40個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至10個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選1至6個(gè)碳原子。該術(shù)語(yǔ)例如有甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正己基、正癸基、十四烷基等。
術(shù)語(yǔ)“取代的烷基”表示如上所定義的烷基，具有1至8個(gè)取代基，優(yōu)選1至5個(gè)取代基，更優(yōu)選1至3個(gè)取代基，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基?；?、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO3H、胍基和-SO2-雜芳基組成的組。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”表示二價(jià)直鏈或支鏈飽和烴鏈，優(yōu)選地具有1至40個(gè)碳原子，優(yōu)選1-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選1-6個(gè)碳原子。該術(shù)語(yǔ)例如有亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞丙基異構(gòu)體(例如-CH2CH2CH2-和-CH(CH3)CH2-)等。
術(shù)語(yǔ)“取代的亞烷基”表示如上所定義的亞烷基，具有1至5個(gè)取代基，優(yōu)選1至3個(gè)取代基，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基?；B氮基、氰基、鹵素、羥基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。另外，這類(lèi)取代的亞烷基包括其中該亞烷基上2個(gè)取代基稠合構(gòu)成一個(gè)或多個(gè)下列基團(tuán)的那些環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基，與該亞烷基稠合。優(yōu)選地，這類(lèi)稠合的基團(tuán)含有1至3個(gè)稠合的環(huán)結(jié)構(gòu)。另外，術(shù)語(yǔ)取代的亞烷基包括這樣的亞烷基，其中1至5個(gè)亞烷基碳原子被氧、硫或-NR-代替，其中R是氫或烷基。取代的亞烷基的實(shí)例有氯代亞甲基(-CH(Cl)-)、氨基亞乙基(-CH(NH2)CH2-)、2-羧基亞丙基異構(gòu)體(-CH2CH(CO2H)CH2-)、乙氧基乙基(-CH2CH2O-CH2CH2-)等。
術(shù)語(yǔ)“烷芳基”表示-亞烷基-芳基和-取代的亞烷基-芳基，其中亞烷基、取代的亞烷基和芳基是如本文所定義的。這類(lèi)烷芳基例如有芐基、苯乙基等。
術(shù)語(yǔ)“烴氧基”表示烷基-O-、烯基-O-、環(huán)烷基-O-、環(huán)烯基-O-和炔基-O-，其中烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和炔基是如本文所定義的。優(yōu)選的烴氧基是烷基-O-，例如包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1，2-二甲基丁氧基等。
術(shù)語(yǔ)“取代的烴氧基”表示取代的烷基-O-、取代的烯基-O-、取代的環(huán)烷基-O-、取代的環(huán)烯基-O-和取代的炔基-O-，其中取代的烷基、取代的烯基、取代的環(huán)烷基、取代的環(huán)烯基和取代的炔基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“烷基烴氧基”表示-亞烷基-O-烷基、亞烷基-O-取代的烷基、取代的亞烷基-O-烷基和取代的亞烷基-O-取代的烷基，其中烷基、取代的烷基、亞烷基和取代的亞烷基是如本文所定義的。優(yōu)選的烷基烴氧基是亞烷基-O-烷基，例如包括亞甲基甲氧基(-CH2OCH3)、亞乙基甲氧基(-CH2CH2OCH3)、正亞丙基異丙氧基(-CH2CH2CH2OCH(CH3)2)、亞甲基叔丁氧基(-CH2-O-C(CH3)3)等。
術(shù)語(yǔ)“烷基硫代烴氧基”表示-亞烷基-S-烷基、亞烷基-S-取代的烷基、取代的亞烷基-S-烷基和取代的亞烷基-S-取代的烷基，其中烷基、取代的烷基、亞烷基和取代的亞烷基是如本文所定義的。優(yōu)選的烷基硫代烴氧基是亞烷基-S-烷基，例如包括亞甲基硫代甲氧基(-CH2SCH3)、亞乙基硫代甲氧基(-CH2CH2SCH3)、正亞丙基異硫代丙氧基(-CH2CH2CH2SCH(CH3)2)、亞甲基叔硫代丁氧基(-CH2SC(CH3)3)等。
術(shù)語(yǔ)“烯基”表示一價(jià)直鏈或支鏈不飽和烴基，優(yōu)選地具有2至40個(gè)碳原子，更優(yōu)選2至10個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選2至6個(gè)碳原子，并且具有至少1個(gè)、優(yōu)選1-6個(gè)乙烯基不飽和位置。優(yōu)選的烯基包括乙烯基(-CH＝CH2)、正丙烯基(-CH2CH＝CH2)、異丙烯基(-C(CH3)＝CH2)等。
術(shù)語(yǔ)“取代的烯基”表示如上所定義的烯基，具有1至5個(gè)取代基，優(yōu)選1至3個(gè)取代基，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基?；B氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。
術(shù)語(yǔ)“亞烯基”表示二價(jià)直鏈或支鏈不飽和烴基，優(yōu)選地具有2至40個(gè)碳原子，更優(yōu)選2至10個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選2至6個(gè)碳原子，并且具有至少1個(gè)、優(yōu)選1-6個(gè)乙烯基不飽和位置。該術(shù)語(yǔ)例如有亞乙烯基(-CH＝CH-)、亞丙烯基異構(gòu)體(例如-CH2CH＝CH-和-C(CH3)＝CH-)等。
術(shù)語(yǔ)“取代的亞烯基”表示如上所定義的亞烯基，具有1至5個(gè)取代基，優(yōu)選1至3個(gè)取代基，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧基氨基?；?、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。另外，這類(lèi)取代的亞烯基包括其中該亞烯基上2個(gè)取代基稠合構(gòu)成一個(gè)或多個(gè)下列基團(tuán)的那些環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基，與該亞烯基稠合。
術(shù)語(yǔ)“炔基”表示一價(jià)不飽和烴，優(yōu)選地具有2至40個(gè)碳原子，更優(yōu)選2至20個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選2至6個(gè)碳原子，并且具有至少1個(gè)、優(yōu)選1-6個(gè)乙炔(三鍵)不飽和位置。優(yōu)選的炔基包括乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH2C≡CH)等。
術(shù)語(yǔ)“取代的炔基”表示如上所定義的炔基，具有1至5個(gè)取代基，優(yōu)選1至3個(gè)取代基，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；被Ｑ趸?、氧基氨基酰基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。
術(shù)語(yǔ)“亞炔基”表示二價(jià)不飽和烴，優(yōu)選地具有2至40個(gè)碳原子，更優(yōu)選2至10個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選2至6個(gè)碳原子，并且具有至少1個(gè)、優(yōu)選1-6個(gè)乙炔(三鍵)不飽和位置。優(yōu)選的亞炔基包括亞乙炔基(-C≡C-)、亞炔丙基(-CH2C≡C-)等。
術(shù)語(yǔ)“取代的亞炔基”表示如上所定義的亞炔基，具有1至5個(gè)取代基，優(yōu)選1至3個(gè)取代基，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基?；?、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。
術(shù)語(yǔ)“?；北硎綡C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、環(huán)烷基-C(O)-、取代的環(huán)烷基-C(O)-、環(huán)烯基-C(O)-、取代的環(huán)烯基-C(O)-、芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-和雜環(huán)基-C(O)-，其中烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“酰氨基”或“氨基羰基”表示-C(O)NRR，其中每個(gè)R獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基，或者其中兩個(gè)R連接構(gòu)成雜環(huán)基(例如嗎啉代基)，其中烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“氨基?；北硎?NRC(O)R，其中每個(gè)R獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其中烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“氨基酰氧基”或“烴氧基碳酰氨基”表示-NRC(O)OR，其中每個(gè)R獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其中烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“酰氧基”表示烷基-C(O)O-、取代的烷基-C(O)O-、環(huán)烷基-C(O)O-、取代的環(huán)烷基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、雜芳基-C(O)O-和雜環(huán)基-C(O)O-，其中烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“芳基”表示6至20個(gè)碳原子的不飽和芳族碳環(huán)基團(tuán)，具有單一的環(huán)(例如苯基)或多個(gè)稠合環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的(例如萘基、二氫菲基、芴基或蒽基)。優(yōu)選的芳基包括苯基、萘基等。
除非受到芳基取代基定義的限制，這類(lèi)芳基可以可選地被1至5個(gè)、優(yōu)選1至3個(gè)取代基取代，選自由酰氧基、羥基、巰基、酰基、烷基、烴氧基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的烷基、取代的烴氧基、取代的烯基、取代的炔基、取代的環(huán)烷基、取代的環(huán)烯基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、酰氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵代、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨基酰氧基、氧基酰氨基、磺酰胺、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2--烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基和三鹵甲基組成的組。優(yōu)選的芳基取代基包括烷基、烴氧基、鹵代、氰基、硝基、三鹵甲基和硫代烴氧基。
術(shù)語(yǔ)“芳氧基”表示芳基-O-，其中芳基是如上所定義的，包括可選被取代的芳基，也是如上所定義的。
術(shù)語(yǔ)“亞芳基”表示從如上所定義的芳基(包括取代的芳基)衍生的二價(jià)基團(tuán)，例如1，2-亞苯基、1，3-亞苯基、1，4-亞苯基、1，2-亞萘基等。
術(shù)語(yǔ)“氨基”表示-NH2。
術(shù)語(yǔ)“取代的氨基”表示-NRR，其中每個(gè)R獨(dú)立地選自由氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烯基、取代的烯基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、炔基、取代的炔基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基組成的組，只要兩個(gè)R不都是氫。
“氨基酸”表示任意天然存在的D、L或DL型氨基酸(例如Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Hyl、Hyp、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val)。天然存在的氨基酸的側(cè)鏈?zhǔn)潜绢I(lǐng)域熟知的，例如包括氫(例如在甘氨酸中)、烷基(例如在丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸中)、取代的烷基(例如在蘇氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸和賴氨酸中)、烷芳基(例如在苯丙氨酸和色氨酸中)、取代的芳烷基(例如在酪氨酸中)和雜芳烷基(例如在組氨酸中)。
術(shù)語(yǔ)“羧基”表示-COOH。
術(shù)語(yǔ)“C-末端”在涉及糖肽時(shí)在本領(lǐng)域中有充分理解的含義。例如，關(guān)于式I的糖肽，C-末端是被基團(tuán)R3取代的位置。
術(shù)語(yǔ)“二羧基取代的烷基”表示被兩個(gè)羧基取代的烷基。該術(shù)語(yǔ)例如包括-CH2(COOH)CH2COOH和-CH2(COOH)CH2CH2COOH。
術(shù)語(yǔ)“羧基烷基”或“烴氧羰基”表示“-C(O)O-烷基”、“-C(O)O-取代的烷基”、“-C(O)O-環(huán)烷基”、“-C(O)O-取代的環(huán)烷基”、“-C(O)O-烯基”、“-C(O)O-取代的烯基”、“-C(O)O-炔基”和“-C(O)O-取代的炔基”，其中烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烯基、取代的烯基、炔基和取代的炔基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”表示3至20個(gè)碳原子的環(huán)狀烷基，具有單一的環(huán)或多個(gè)稠合的環(huán)。這類(lèi)環(huán)烷基例如包括單環(huán)結(jié)構(gòu)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等，或多環(huán)結(jié)構(gòu)，例如金剛烷基等。
術(shù)語(yǔ)“取代的環(huán)烷基”表示具有1至5個(gè)取代基、優(yōu)選1至3個(gè)取代基的環(huán)烷基，取代基選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基?；B氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”表示4至20個(gè)碳原子的環(huán)狀烯基，具有單一的環(huán)和至少一個(gè)內(nèi)不飽和點(diǎn)。適合的環(huán)烯基的實(shí)例例如包括環(huán)丁-2-烯基、環(huán)戊-3-烯基、環(huán)辛-3-烯基等。
術(shù)語(yǔ)“取代的環(huán)烯基”表示具有1至5個(gè)取代基、優(yōu)選1至3個(gè)取代基的環(huán)烯基，取代基選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基和-SO2-雜芳基組成的組。
術(shù)語(yǔ)“鹵代”或“鹵素”表示氟、氯、溴和碘。
“鹵代烷基”表示被1-4個(gè)如本文所定義的鹵代基團(tuán)取代的如本文所定義的烷基，這些鹵代基團(tuán)可以是相同或不同的。代表性鹵代烷基例如包括三氟甲基、3-氟十二烷基、12，12，12-三氟十二烷基、2-溴辛基、3-溴-6-氯庚基等。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示1至15個(gè)碳原子的芳族基團(tuán)，在至少一個(gè)環(huán)(如果存在一個(gè)以上的環(huán))內(nèi)具有1至4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子。
除非受到雜芳基取代基定義的限制，這類(lèi)雜芳基可以可選地被1至5個(gè)、優(yōu)選1至3個(gè)取代基取代，選自由酰氧基、羥基、巰基、?；?、烷基、烴氧基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的烷基、取代的烴氧基、取代的烯基、取代的炔基、取代的環(huán)烷基、取代的環(huán)烯基、氨基、取代的氨基、氨基?；Ⅴ０被?、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵代、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨基酰氧基、氧基酰氨基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基和三鹵甲基組成的組。優(yōu)選的芳基取代基包括烷基、烴氧基、鹵代、氰基、硝基、三鹵甲基和硫代烴氧基。這類(lèi)雜芳基可以具有單一的環(huán)(例如吡啶基或呋喃基)或多個(gè)稠合的環(huán)(例如吲哚嗪基或苯并噻吩基)。優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基、吡咯基和呋喃基。
“雜芳烷基”表示(雜芳基)烷基-，其中雜芳基和烷基是如本文所定義的。代表性實(shí)例包括2-吡啶甲基等。
術(shù)語(yǔ)“雜芳氧基”表示雜芳基-O-。
術(shù)語(yǔ)“亞雜芳基”表示從如上所定義的雜芳基(包括取代的雜芳基)衍生的二價(jià)基團(tuán)，例如2，6-亞吡啶基、2，4-亞吡啶基、1，2-亞喹啉基、1，8-亞喹啉基、1，4-亞苯并呋喃基、2，5-亞吡啶基、2，5-亞吲哚基等。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”表示一價(jià)飽和或不飽和基團(tuán)，具有單一的環(huán)或多個(gè)稠合的環(huán)，具有1至40個(gè)碳原子和環(huán)內(nèi)1至10個(gè)、優(yōu)選1至4個(gè)選自氮、硫、磷和/或氧的雜原子。
除非受到雜環(huán)基取代基定義的限制，這類(lèi)雜環(huán)基可以可選地被1至5個(gè)、優(yōu)選1至3個(gè)取代基取代，選自由烴氧基、取代的烴氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧基氨基酰基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烴氧基、取代的硫代烴氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥基氨基、烴氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、氧代(＝O)和-SO2-雜芳基組成的組。這類(lèi)雜環(huán)基可以具有單一的環(huán)或多個(gè)稠合的環(huán)。優(yōu)選的雜環(huán)基包括嗎啉代基、哌啶基等。
氮雜環(huán)和雜芳基的實(shí)例包括但不限于吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、吲哚嗪、異吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氫吲哚、嗎啉代基、哌啶基、四氫呋喃基等，以及含有N-烴氧基-氮的雜環(huán)。
另一類(lèi)雜環(huán)被稱為“冠狀化合物”，它表示特殊的一類(lèi)雜環(huán)化合物，具有一個(gè)或多個(gè)式[-(CH2-)aA-]的重復(fù)單元，其中a等于或大于2，A在每次單獨(dú)出現(xiàn)時(shí)可以是O、N、S或P。冠狀化合物的實(shí)例例如包括[-(CH2)3-NH-]3、[-((CH2)2-O)4-((CH2)2-NH)2]等。通常，這類(lèi)冠狀化合物可以具有4至10個(gè)雜原子和8至40個(gè)碳原子。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)氧基”表示雜環(huán)基-O-。
術(shù)語(yǔ)“硫代雜環(huán)氧基”表示雜環(huán)基-S-。
術(shù)語(yǔ)“N-末端”在涉及糖肽時(shí)是本領(lǐng)域熟知的。例如，關(guān)于式II糖肽，N-末端是被基團(tuán)R19和R20取代的位置。
術(shù)語(yǔ)“氧基酰氨基”或“氨基碳酰氧基”表示-OC(O)NRR，其中每個(gè)R獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其中烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“膦酰基”表示-PO3H2。
術(shù)語(yǔ)“膦酰基甲氨基”表示-NH-CH2-P(O)(OH)2。
術(shù)語(yǔ)“膦酰基甲氨基甲基”表示-CH2-NH-CH2-P(O)(OH)2。
術(shù)語(yǔ)“前體藥物”是本領(lǐng)域熟知的，包括在哺乳動(dòng)物系統(tǒng)內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明藥物活性化合物的化合物。例如參見(jiàn)Remington’sPharmaceutical Sciences，1980，vol.16，Mack PublishingCompany，Easton，Pennsylvania，61和424。
術(shù)語(yǔ)“R-末端”在涉及糖肽時(shí)是本領(lǐng)域熟知的。例如，關(guān)于式I糖肽，R-末端是被基團(tuán)R5取代的位置。
術(shù)語(yǔ)“糖基”表示被氧化、還原或取代的糖一價(jià)基，經(jīng)由糖部分的任意原子(優(yōu)選經(jīng)由糖苷配基碳原子)與糖肽或其他化合物共價(jià)連接。該術(shù)語(yǔ)包括含有氨基的糖基。代表性糖例如包括己糖，例如D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖、D-半乳糖、萬(wàn)古胺、3-脫甲基-萬(wàn)古胺、3-表-萬(wàn)古胺、4-表-萬(wàn)古胺、acosamine、actinosamine、道諾糖胺(daunosamine)、3-表-道諾糖胺、利托糖胺(ristosamine)、D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖胺、D-葡糖醛酸、N-乙酰基-D-氨基葡糖、N-乙?；?D-半乳糖胺、sialyic acid、艾杜糖醛酸、L-巖藻糖等；戊糖，例如D-核糖或D-阿拉伯糖；酮糖，例如D-核酮糖或D-果糖；二糖，例如2-O-(α-L-萬(wàn)古胺基)-β-D-吡喃葡萄糖、2-O-(3-脫甲基-α-L-萬(wàn)古胺基)-β-D-吡喃葡萄糖、蔗糖、乳糖或麥芽糖；衍生物，例如縮醛、胺、酰化、硫酸化與磷酸化的糖；具有2至10個(gè)糖單元的寡糖。出于該定義的目的，這些糖用常規(guī)的三字母命名法表示，糖可以是它們的開(kāi)放形式，或者優(yōu)選為它們的吡喃糖形式。
術(shù)語(yǔ)“含有氨基的糖基”表示具有氨基取代基的糖基。代表性含有氨基的糖包括L-萬(wàn)古胺、3-脫甲基-萬(wàn)古胺、3-表-萬(wàn)古胺、4-表-萬(wàn)古胺、acosamine、actinosamine、道諾糖胺、3-表-道諾糖胺、利托糖胺、N-甲基-D-葡糖胺等。
術(shù)語(yǔ)“螺旋連接的環(huán)烷基”表示經(jīng)由兩個(gè)環(huán)共用的一個(gè)碳原子與另一個(gè)環(huán)連接的環(huán)烷基。
術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”在涉及給定的化合物時(shí)是本領(lǐng)域熟知的，表示具有相同分子式的另一種化合物，其中組成另一化合物的原子在空間取向的方式上是不同的，但是其中在另一化合物中的原子在原子與其他原子連接方面如同給定化合物中的原子(例如對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體)。例如參見(jiàn)Morrison和Boyde OrganicChemistry，1983，第4版，Allyn and Bacon，Inc.，Boston，Mass.，p.123。
術(shù)語(yǔ)“磺酰胺”表示式-SO2NRR基團(tuán)，其中每個(gè)R獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其中烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基是如本文所定義的。
術(shù)語(yǔ)“巰基”表示-SH。
術(shù)語(yǔ)“硫代烴氧基”表示-S-烷基。
術(shù)語(yǔ)“取代的硫代烴氧基”表示-S-取代的烷基。
術(shù)語(yǔ)“硫代芳氧基”表示芳基-S-，其中芳基是如上所定義的，包括可選被取代的芳基，也是如上所定義的。
術(shù)語(yǔ)“硫代雜芳氧基”表示雜芳基-S-，其中雜芳基是如上所定義的，包括可選被取代的芳基，也是如上所定義的。
術(shù)語(yǔ)“硫醚衍生物”在用于表示本發(fā)明糖肽化合物時(shí)包括硫醚(-S-)、亞砜(-SO-)和砜(-SO2-)。
至于任何含有一個(gè)或多個(gè)取代基的上述基團(tuán)，當(dāng)然可以理解這類(lèi)基團(tuán)不含有任何空間上不切實(shí)際的和/或合成上不可行的取代或取代方式。另外，本發(fā)明化合物包括所有由這些化合物的取代產(chǎn)生的立體化學(xué)異構(gòu)體。
“糖肽”表示寡肽(例如七肽)抗生素(dalbaheptides)，是以可選被糖基取代的多環(huán)肽核心為特征的，例如萬(wàn)古霉素。包括在該定義內(nèi)的糖肽實(shí)例可以參見(jiàn)″Glycopeptides Classification，Occurrence，and Discovery″，Raymond C.Rao和Louise W.Crandall，(″Drugs and the Pharmaceutical Sciences″Volume 63，edited by Ramakrishnan Nagarajan，published by Marcal Dekker，Inc.)。其他糖肽實(shí)例公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利No.4,639,433；4,643,987；4,497,802；4,698,327；5,591,714；5,840,684；和5,843,889；EP0 802 199；EP 0 801 075；EP 0 667 353；WO 97/28812；WO 97/38702；WO 98/52589；WO 98/52592；和J.Amer.Chem.Soc.，1996，118，13107-13108；J.Amer.Chem.Soc.，1997，119，12041-12047；和J.Amer.Chem.Soc.，1994，116，4573-4590。代表性糖肽包括A477、A35512、A40926、A41030、A42867、A47934、A80407、A82846、A83850、A84575、AB-65、阿克他寧、類(lèi)放線菌素(Actinoidin)、阿達(dá)星(Ardacin)、阿伏帕星、Azureomycin、Balhimycin、Chloroorientiein、Chloropolysporin、Decaplanin、N-脫甲基萬(wàn)古霉素、Eremomycin、Galacardin、Helvecardin、Izupeptin、Kibdelin、LL-AM374、甘露糖肽素、MM45289、MM47756、MM47761、MM49721、MM47766、MM55260、MM55266、MM55270、MM56597、MM56598、OA-7653、Orenticin、Parvodicin、利托菌素、利托霉素、Synmonicin、替考拉寧(Teicoplanin)、UK-68597、UK-69542、UK-72051、萬(wàn)古霉素等。本文所用的術(shù)語(yǔ)“糖肽”還打算包括上面公開(kāi)的一大類(lèi)肽，其上沒(méi)有糖部分存在，也就是糖肽的糖苷配基系列。例如，附著在萬(wàn)古霉素酚環(huán)上的二糖部分被溫和水解作用除去，得到萬(wàn)古霉素糖苷配基。在本發(fā)明范圍內(nèi)還有附加有另外的糖殘基、尤其是氨基苷的糖肽，方式類(lèi)似于萬(wàn)古胺。
“可選的”或“可選地”意味著隨后所述的事件或環(huán)境可以發(fā)生也可以不發(fā)生，該說(shuō)明包括其中所述事件或環(huán)境發(fā)生的場(chǎng)合和其中它不發(fā)生的場(chǎng)合。例如，“可選被取代的”意味著基團(tuán)可以被所述取代基取代或者可以不被取代。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“惰性有機(jī)溶劑”或“惰性溶劑”或“惰性稀釋劑”表示這樣一種溶劑或稀釋劑，在采用它作為溶劑或稀釋劑的反應(yīng)條件下本質(zhì)上是惰性的?？梢杂米鞫栊匀軇┗蛳♂寗┑牟牧系拇硇詫?shí)例例如包括苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿(“CHCl3”)、亞甲基氯(或二氯甲烷或”CH2Cl2)、二乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲乙酮、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、叔丁醇、二噁烷、吡啶等。除非有相反指定，用在本發(fā)明反應(yīng)中的溶劑是惰性溶劑。
術(shù)語(yǔ)“氮-連接的”或“N-連接的”表示基團(tuán)或取代基是通過(guò)該基團(tuán)或取代基氮上的鍵而與化合物(例如式I化合物)其余部分連接的。術(shù)語(yǔ)“氧-連接的”表示基團(tuán)或取代基是通過(guò)該基團(tuán)或取代基氧上的鍵而與化合物(例如式I化合物)其余部分連接的。術(shù)語(yǔ)“硫-連接的”表示基團(tuán)或取代基是通過(guò)該基團(tuán)或取代基硫上的鍵而與化合物(例如式I化合物)其余部分連接的。
“藥學(xué)上可接受的鹽”表示這樣的鹽，它們保留母體化合物的生物功效和性質(zhì)，在給藥劑量下不是生物學(xué)有害的或其它方面有害的。本發(fā)明化合物能夠生成酸鹽和堿鹽，因?yàn)榉謩e存在氨基和羧基。
藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可以從無(wú)機(jī)與有機(jī)堿制備。從無(wú)機(jī)堿衍生的鹽包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂的鹽。從有機(jī)堿衍生的鹽包括但不限于伯胺、仲胺與叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)和環(huán)狀胺的鹽，堿包括異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨基丁三醇、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺、膽堿、甜菜堿、乙二胺、氨基葡糖、N-烷基葡糖胺、可可堿、嘌呤類(lèi)、哌嗪、哌啶和N-乙基哌啶。還應(yīng)當(dāng)理解，其他羧酸衍生物也將可用于實(shí)施本發(fā)明，例如羧酸酰胺，包括甲酰胺、低級(jí)烷基甲酰胺、二(低級(jí)烷基)甲酰胺等。
藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以從無(wú)機(jī)與有機(jī)酸制備。從無(wú)機(jī)酸衍生的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等的鹽。從有機(jī)酸衍生的鹽包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋(píng)果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)-甲苯磺酸、水楊酸等的鹽。
本文所述化合物通常含有一個(gè)或多個(gè)手性中心。因此，新穎的糖肽化合物打算包括外消旋混合物、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和富含一種或多種立體異構(gòu)體的混合物。
術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基團(tuán)”或“封閉基團(tuán)”表示任何這樣的基團(tuán)，在與化合物的一個(gè)或多個(gè)羥基、巰基、氨基、羧基或其他基團(tuán)鍵合時(shí)，防止在這些基團(tuán)上發(fā)生不需要的反應(yīng)，這些保護(hù)基團(tuán)能夠被常規(guī)的化學(xué)或酶學(xué)步驟除去，以重建羥基、巰基、氨基、羧基或其他基團(tuán)。所采用的具體的可除去的保護(hù)基團(tuán)不是關(guān)鍵性的，優(yōu)選的可除去的羥基保護(hù)基團(tuán)包括常規(guī)的取代基，例如烯丙基、芐基、乙?；?、氯乙?；⒘虼S基、亞芐基、苯乙酮基、叔丁基-二苯基甲硅烷基和任何其他這樣的基團(tuán)，能夠通過(guò)化學(xué)方法引入到羥基官能度上，隨后在與產(chǎn)物性質(zhì)相容的溫和條件下被化學(xué)或酶學(xué)方法選擇性除去。保護(hù)基團(tuán)更具體地公開(kāi)在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″Protective Groups inOrganic Synthesis″3rdEd.，1999，John Wiley and Sons，N.Y.。
優(yōu)選的可除去的氨基保護(hù)基團(tuán)包括常規(guī)的取代基，例如叔丁氧羰基(t-BOC)、芐氧羰基(CBZ)、芴基甲氧羰基(FMOC)、烯丙氧羰基(ALOC)等，它們可以被與產(chǎn)物性質(zhì)相容的常規(guī)條件除去。
優(yōu)選的羧基保護(hù)基團(tuán)包括酯，例如甲基、乙基、丙基、叔丁基等的酯，它們可以被與產(chǎn)物性質(zhì)相容的溫和條件除去。
“萬(wàn)古霉素”表示具有下式的糖肽抗生素
在描述萬(wàn)古霉素衍生物時(shí)，術(shù)語(yǔ)“Nvan_”表示取代基是與萬(wàn)古霉素的萬(wàn)古胺部分的氨基共價(jià)連接的。類(lèi)似地，術(shù)語(yǔ)“Nleu_”表示取代基是與萬(wàn)古霉素的亮氨酸部分的氨基共價(jià)連接的。
一般合成工藝?yán)孟铝幸话惴椒ê凸に嚕梢詮目扇菀椎孬@得的原料制備糖肽化合物。將被領(lǐng)會(huì)到的是盡管給出典型的或優(yōu)選的方法條件(也就是反應(yīng)溫度、事件、反應(yīng)物摩爾比、溶劑、壓力等)，還可以使用其他方法條件，另有規(guī)定除外。最佳反應(yīng)條件可以因所用特定反應(yīng)物或溶劑而異，但是這類(lèi)條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員借助常規(guī)優(yōu)化工藝加以確定。
另外，正如將為本領(lǐng)域技術(shù)人員所顯而易見(jiàn)的，常規(guī)的保護(hù)基團(tuán)可能需要用于防止某些官能團(tuán)經(jīng)歷不需要的反應(yīng)。適合于特定官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)和適合于保護(hù)與去保護(hù)的條件的選擇是本領(lǐng)域熟知的。例如，大量保護(hù)基團(tuán)和它們的引入與除去描述在T.W.Greene和G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis″3rdEd.，Wiley，N.Y.1999，和其中引用的參考文獻(xiàn)。
下列反應(yīng)流程中，糖肽化合物被簡(jiǎn)化為方框“G”，羧基末端標(biāo)以[C]，萬(wàn)古胺氨基末端標(biāo)以[V]，“非糖”氨基末端(亮氨酸胺部分)標(biāo)以[N]，可選地，間苯二酚部分標(biāo)以[R]，如下 在C-末端被包含一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4或5個(gè))膦?；?-PO3H2)的取代基取代的糖肽化合物可以這樣制備，使對(duì)應(yīng)的其中C-末端是羧基的糖肽化合物與適合的含膦酰基化合物偶聯(lián)。例如，其中C-末端是羧基的糖肽化合物可以與含有膦?；陌?、醇或硫醇化合物偶聯(lián)，分別生成酰胺、酯或硫酯。例如，其中R3是包含一個(gè)或多個(gè)膦酰基的氮-連接的部分的式I糖肽化合物可以這樣制備，使對(duì)應(yīng)的其中R3是羥基的式I糖肽化合物與必需的含膦?；放悸?lián)，生成其中R3是包含一個(gè)或多個(gè)膦酰基的氮-連接的部分的式I化合物。
在C-末端被包含一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4或5個(gè))膦?；?-PO3H2)的取代基取代、并且其中萬(wàn)古胺氨基末端(V)被取代的糖肽化合物可以這樣制備，首先還原性烷基化對(duì)應(yīng)的糖肽化合物，其中萬(wàn)古胺氨基末端(V)是游離的胺(NH2)，然后使對(duì)應(yīng)的糖肽化合物與必需的含膦?；衔?例如含有膦?；陌?、醇或硫醇)偶聯(lián)。
舉例而言，糖肽化合物、例如萬(wàn)古霉素可以首先如下反應(yīng)所示被還原性烷基化 其中A代表Ra減去一個(gè)碳原子，Ra、Rb、Y、Z和x是如本文所定義的。該反應(yīng)通常這樣進(jìn)行，首先在過(guò)量、優(yōu)選約2.0當(dāng)量叔胺的存在下，例如二異丙基乙胺(DIPEA)等，使一當(dāng)量糖肽(例如萬(wàn)古霉素)與過(guò)量、優(yōu)選1.1至1.3當(dāng)量所需醛接觸。該反應(yīng)通常是這樣進(jìn)行的，在惰性溶劑中，例如DMF或乙腈/水，在環(huán)境溫度下，時(shí)間約0.25至約2小時(shí)，直至對(duì)應(yīng)的亞胺和/或半縮醛胺的生成基本上完全。通常不分離所得亞胺和/或半縮醛胺，而是就地與還原劑反應(yīng)，例如氰基硼氫化鈉、吡啶硼烷等，得到對(duì)應(yīng)的胺。該反應(yīng)優(yōu)選地是這樣進(jìn)行的，在環(huán)境溫度下，在甲醇或乙腈/水中，使亞胺和/或半縮醛胺與過(guò)量、優(yōu)選約3當(dāng)量的三氟乙酸接觸，再與約1至1.2當(dāng)量還原劑接觸。所得烷基化產(chǎn)物容易經(jīng)過(guò)常規(guī)工藝純化，例如沉淀法和/或反相HPLC法。驚人地，通過(guò)在三烷基胺的存在下生成亞胺和/或半縮醛胺，然后用三氟乙酸酸化，再與還原劑接觸，還原性烷基化反應(yīng)的選擇性大為改善，也就是說(shuō)，糖氨基(例如萬(wàn)古胺)的還原性烷基化優(yōu)先于N-末端(例如亮氨?；?的還原性烷基化達(dá)至少10∶1，更優(yōu)選20∶1。
上述方法在選擇性烷基化糖肽抗生素的氨基糖基方面比以前的方法有顯著改進(jìn)。烷基化包含糖-胺的糖肽的方法包括將醛或酮、適合的堿和糖肽混合，得到反應(yīng)混合物；酸化該反應(yīng)混合物；和將反應(yīng)混合物與適合的還原劑混合，得到在糖-胺處被烷基化的糖肽。
優(yōu)選地，除了糖-胺以外，糖肽還包含至少一個(gè)氨基。
優(yōu)選地，糖-胺處的還原性烷基化優(yōu)先于糖肽另一氨基處的還原性烷基化達(dá)至少約10∶1，更優(yōu)選至少約15∶1或約20∶1。
還原性烷基化方法通常是在適合的溶劑或溶劑組合的存在下進(jìn)行的，例如鹵代烴(例如亞甲基氯)、直鏈或支鏈醚(例如二乙醚、四氫呋喃)、芳族烴(例如苯或甲苯)、醇(甲醇、乙醇或異丙醇)、二甲基亞砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺、乙腈、水、1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮、四甲基脲、N，N-二甲基乙酰胺、二乙基甲酰胺(DMF)、1-甲基-2-吡咯烷酮、四亞甲基亞砜、甘油、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、N，N-二甲基亞丙基脲(DMPU)或二噁烷。優(yōu)選地，烷基化是在乙腈/水或DMF/甲醇中進(jìn)行的。
優(yōu)選地，還原作用(也就是用還原劑處理)是在質(zhì)子溶劑的存在下進(jìn)行的，例如醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇或丁醇)、水等。
本發(fā)明的還原性烷基化方法可以在任何適合的溫度下進(jìn)行，從反應(yīng)混合物的凝固點(diǎn)到回流溫度。優(yōu)選地，反應(yīng)是在約0℃至約100℃的溫度下進(jìn)行的，更優(yōu)選約0℃至約50℃的溫度，或者約20℃至約30℃的溫度。
在本發(fā)明的還原性烷基化方法中可以采用任意適合的堿。適合的堿包括叔胺(例如二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉或三乙胺)等。
可以使用任意適合的酸來(lái)酸化反應(yīng)混合物。適合的酸包括羧酸(例如乙酸、三氯乙酸、檸檬酸、甲酸或三氟乙酸)、無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸、硫酸或磷酸)等。優(yōu)選的酸是三氟乙酸。
適合于進(jìn)行本發(fā)明還原性烷基化方法的還原劑是本領(lǐng)域已知的。在本發(fā)明的方法中可以采用任意適合的還原劑，只要它與存在于糖肽中的官能度是相容的即可。例如，適合的還原劑包括氰基硼氫化鈉、三乙酰氧基硼氫化鈉、吡啶/硼烷、硼氫化鈉和硼氫化鋅。還原作用還可以在過(guò)渡金屬催化劑(例如鈀或鉑)的存在下、在氫源(例如氫氣或環(huán)己二烯)的存在下進(jìn)行。例如參見(jiàn)Advanced Organic Chemistry，F(xiàn)ourth Edition，John Wiley & Sons，New York(1992)，899-900。
然后使還原性烷基化所得糖肽衍生物與含有膦酰基的胺(R3-H)偶聯(lián)，生成酰胺鍵。該反應(yīng)如下反應(yīng)所述 其中R3是氮-連接的基團(tuán)，包含一個(gè)或多個(gè)膦?；Ｔ摲磻?yīng)中，通常在肽偶聯(lián)劑的存在下，例如PyBOP和HOBT，使糖肽衍生物與胺接觸，得到酰胺。該反應(yīng)通常是這樣進(jìn)行的，在惰性稀釋劑中，例如DMF，在約0℃至約60℃的溫度下，時(shí)間為約1至24小時(shí)或者直至偶聯(lián)反應(yīng)基本上完全。隨后利用常規(guī)工藝和試劑去保護(hù)，得到本發(fā)明的化合物。
如果需要的話，可以首先進(jìn)行上述胺偶聯(lián)步驟，得到酰胺，然后進(jìn)行還原性烷基化和去保護(hù)，得到本發(fā)明的化合物。
如果需要的話，糖肽化合物還可以按逐步方式制備，其中首先通過(guò)還原性烷基化連接-Ra-Y-Rb-(Z)x基團(tuán)的前體與糖肽，隨后利用常規(guī)試劑和工藝修飾所連接的前體，生成-Ra-Y-Rb-(Z)x基團(tuán)。另外，在上述還原性烷基化反應(yīng)中還可以采用酮，得到α-取代的胺。
在這些還原性烷基化反應(yīng)中可以采用任何具有氨基的糖肽。這類(lèi)糖肽是本領(lǐng)域熟知的，它們是商業(yè)上可得到的或者可以利用常規(guī)工藝分離。適合的糖肽例如公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利Nos.3,067,099；3,338,786；3,803,306；3,928,571；3,952,095；4,029,769；4,051,237；4,064,233；4,122,168；4,239,751；4,303,646；4,322,343；4,378,348；4,497,802；4,504,467；4,542,018；4,547,488；4,548,925；4,548,974；4,552,701；4,558,008；4,639,433；4,643,987；4,661,470；4,694,069；4,698,327；4,782,042；4,914,187；4,935,238；4,946,941；4,994,555；4,996,148；5,187,082；5,192,742；5,312,738；5,451,570；5,591,714；5,721,208；5,750,509；5,840,684和5,843,889中。優(yōu)選地，用在上述反應(yīng)中的糖肽是萬(wàn)古霉素。
正如下列流程所述，可以經(jīng)由Mannich反應(yīng)在糖肽、例如萬(wàn)古霉素的間苯二酚部分上引入含有膦?；陌被榛鶄?cè)鏈(該流程中，為清楚起見(jiàn)闡述糖肽的間苯二酚部分)。該反應(yīng)中，使式NHRR’胺(其中R和R’中的一個(gè)或兩個(gè)是包含一個(gè)或多個(gè)膦?；幕鶊F(tuán))和醛(例如CH2O)、例如福爾馬林(甲醛的來(lái)源)與糖肽在堿性條件下反應(yīng)，得到糖肽衍生物。
包含亞砜或砜的本發(fā)明化合物可以利用常規(guī)試劑和工藝從對(duì)應(yīng)的硫代化合物制備。適合于氧化硫代化合物為亞砜的試劑例如包括過(guò)氧化氫、過(guò)酸類(lèi)(例如3-氯過(guò)苯甲酸(MCPBA))、高碘酸鈉、亞氯酸鈉、次氯酸鈉、次氯酸鈣、次氯酸叔丁酯等。還可以采用手性氧化試劑(旋光試劑)，以得到手性亞砜。這類(lèi)旋光試劑是本領(lǐng)域熟知的，例如包括Kagen等，Synlett.，1990，643-650所述的試劑。
用在上述反應(yīng)性烷基化反應(yīng)中的醛和酮也是本領(lǐng)域熟知的，它們是商業(yè)上可得到的，或者可以利用商業(yè)上可得到的原料和常規(guī)試劑借助常規(guī)工藝加以制備(例如參見(jiàn)March，Advanced Organic Chemistry，F(xiàn)ourth Edition，John Wiley & Sons，New York(1992)，和其中引用的參考文獻(xiàn))。
膦?；〈幕衔?例如膦?；〈陌?、醇或硫醇)是商業(yè)上可得到的，或者可以利用商業(yè)上可得到的原料和試劑借助常規(guī)工藝加以制備。例如參見(jiàn)Advanced Organic Chemistry，Jerry March，4thed.，1992，John Wiley and Sons，New York，page 959；和FrankR.Hartley(ed.)The Chemistry of Organophosphorous Compounds，vol.1-4，John Wiley and Sons，New York(1996)。氨甲基膦酸在商業(yè)上可從Aldrich Chemical Company，Milwaukee，Wisconsin獲得。
下列實(shí)施例描述另外的細(xì)節(jié)和其它制備本發(fā)明化合物的方法。
純化方法本發(fā)明提供借助樹(shù)脂色譜法純化上述糖肽的膦?；苌锏姆椒?，使用基于聚苯乙烯與二乙烯基苯的共聚物的樹(shù)脂。這類(lèi)樹(shù)脂是以孔徑約30_至約1000_的多孔珠粒為特征的，大量實(shí)例在商業(yè)上都有提供。關(guān)于本發(fā)明，優(yōu)選的樹(shù)脂孔徑為約50_至約1000_。下表II給出可用于本發(fā)明方法的樹(shù)脂的示范性列表，包括廠商、孔徑和珠粒大小。
表II聚苯乙烯-二乙烯基苯樹(shù)脂
在示范性純化方法中，聚苯乙烯樹(shù)脂、例如表II所列舉的樹(shù)脂是這樣制備的，在過(guò)量水中濕潤(rùn)，用水(可選地酸化)洗滌，和/或用極性有機(jī)溶劑的水溶液(可選地酸化)洗滌，裝上色譜柱。將所要純化的糖肽樣本溶于含有極性有機(jī)溶劑的酸化水。樣本溶液的pH優(yōu)選地在約2與5之間。取出小部分樣本溶液，用作HPLC分析的標(biāo)準(zhǔn)物。
將樣本溶液裝上柱子，用極性有機(jī)溶劑的第二酸化水溶液洗脫，分批從柱子上收集之。優(yōu)選地，第二酸化水溶液的濃度為約10mM酸，相應(yīng)地，極性有機(jī)溶劑∶水之比為約1∶4至約1∶15。
借助薄層色譜法監(jiān)測(cè)每一部分中樣本的存在。當(dāng)在洗脫液中不再觀察到樣本時(shí)，使用有機(jī)含量更高的洗脫溶液洗滌柱子上的剩余樣本。將柱子用酸化極性有機(jī)溶劑和酸化水洗滌，使其再生。
借助HPLC分析含樣本部分的樣本濃度和純度。匯集樣本濃度高于所需閾值的部分，從洗脫液中分離所純化的產(chǎn)物。正如實(shí)施例所述，通過(guò)冷凍干燥所匯集的部分，可以從洗脫液中回收所純化的產(chǎn)物。
作為替代選擇，可以借助沉淀和過(guò)濾從洗脫液中分離所純化的產(chǎn)物。例如，可以向洗脫液加入過(guò)量極性有機(jī)溶劑，例如乙腈，生成純化產(chǎn)物的固體沉淀，然后過(guò)濾之。
可選地，可以在分離過(guò)程的第一步中從洗脫液形成比洗脫液濃縮更多純化產(chǎn)物的溶液。然后從更濃縮的溶液中分離產(chǎn)物。例如，更濃縮的溶液可以這樣形成，向合并的洗脫部分加入NaCl，將所得溶液裝上色譜柱，柱子含有聚苯乙烯二乙烯基苯樹(shù)脂，例如上述樹(shù)脂，用極性有機(jī)溶劑濃度高于前面色譜步驟中有機(jī)溶劑濃度的溶液洗脫。作為替代選擇，更濃縮的溶液可以在分批過(guò)程中形成，方法是，使用聚苯乙烯二乙烯基苯樹(shù)脂，向低溫的洗脫液加入樹(shù)脂，以便產(chǎn)物被吸附在樹(shù)脂上；過(guò)濾樹(shù)脂，利用室溫的含水極性有機(jī)溶液使糖肽從樹(shù)脂上解吸。
如下實(shí)施例4所述，利用本發(fā)明的方法，最初膦酸化糖肽濃度在67與74％之間的樣本已被純化至濃度在約83與94％之間。
盡管已經(jīng)利用柱色譜法描述了純化方法，不過(guò)正如本領(lǐng)域所知，可以使樣本溶液與樹(shù)脂按可供替代的排列方式接觸，例如使用成批加工容器。
下列實(shí)施例供闡述本發(fā)明，決不被解釋為限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例下列實(shí)施例中，下列縮寫(xiě)具有下列含義。任何沒(méi)有被定義的縮寫(xiě)具有它們普遍被接受的含義。除非另有規(guī)定，所有溫度均為攝氏度。
ACN ＝乙腈BOC，Boc ＝叔丁氧羰基DIBAL-H ＝氫化二異丁基鋁DIPEA＝二異丙基乙胺DMF ＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO ＝二甲基亞砜eq. ＝當(dāng)量EtOAc＝乙酸乙酯Fmoc ＝9-芴基甲氧羰基HOBT ＝1-羥基苯并三唑水合物Me ＝甲基MS ＝質(zhì)譜法PyBOP＝苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸鹽TEMPO＝2，2，6，6-四甲基哌啶氧基，游離基TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氫呋喃TLC，tlc ＝薄層色譜法下列實(shí)施例中，鹽酸萬(wàn)古霉素半水合物是從Alpharma，Inc.FortLee，NJ 07024(Alpharma AS，Oslo Norway)購(gòu)買(mǎi)的。其它試劑和反應(yīng)物可從Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，WI 53201獲得。
一般工藝A萬(wàn)古霉素的還原性烷基化向萬(wàn)古霉素(1eq.)與所需醛(1.3eq.)在DMF中的混合物加入DIPEA(2eq.)。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌1-2小時(shí)，用反相HPLC監(jiān)測(cè)。向溶液加入甲醇和NaCNBH3(1eq.)，然后加入TFA(3eq.)。繼續(xù)在環(huán)境溫度下攪拌另外一小時(shí)。反應(yīng)完全后，在真空中除去甲醇。使殘余物在乙腈中沉淀。過(guò)濾得到粗產(chǎn)物，然后經(jīng)過(guò)反相HPLC純化。如果需要的話，在該工藝中可以使用其它糖肽抗生素。
一般工藝B2-(癸硫基)乙醛的合成在氮下，向碳酸鉀(27g，200mmol)的丙酮(100ml)懸液加入癸基溴(10ml，50mmol)和巰基乙醇(4.4ml，63mmol)。將懸液在室溫下攪拌2天，然后在水與80％己烷/乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相用2N氫氧化鈉洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空下除去揮發(fā)物，得到2-(癸硫基)乙醇(10.2g，47mmol)，為無(wú)色液體，使用時(shí)無(wú)需進(jìn)一步純化。
在氮下，將2-(癸硫基)乙醇(50g，230mmol)、N，N-二異丙基乙胺(128ml，730mmol)和亞甲基氯(400ml)冷卻至-40℃。歷經(jīng)15分鐘向該溶液加入三氧化硫-吡啶配合物(116g，730mmol)的二甲基亞砜(600ml)與亞甲基氯(200ml)溶液。加入后，將混合物在-40℃下攪拌另外15分鐘，然后加入600ml冰水。除去混合物的冷卻浴，加入1L水，使液體分配。將有機(jī)相用1L 1N鹽酸洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥。過(guò)濾得到600ml液體，用600ml己烷稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)200ml硅石。將硅石用100ml50％亞甲基氯/己烷洗滌，然后用300ml亞甲基氯洗滌。合并有機(jī)相，在真空中濃縮，得到2-(癸硫基)乙醛(48g，220mmol)，為無(wú)色液體，使用時(shí)無(wú)需進(jìn)一步純化。
一般工藝CNvan-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素的合成工藝A在氮下，向2-(癸硫基)乙醛(139mg，0.64mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(8ml)溶液中加入鹽酸萬(wàn)古霉素水合物(1g，0.64mmol)。加入N，N-二異丙基乙胺(336μl，1.9mmol)，將懸液劇烈攪拌2.5小時(shí)，在此過(guò)程中所有萬(wàn)古霉素溶解。加入固體氰基硼氫化鈉(60mg，0.96mmol)，然后加入甲醇(5ml)和三氟乙酸(250μl，3.2mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌55分鐘，用反相HPLC法分析?；?80nm下UV吸收的產(chǎn)物分布如下
洗脫時(shí)間(min)面積％產(chǎn)物2.029 萬(wàn)古霉素3.150 Nvan-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素3.22 ---3.37 Nleu-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素3.913 Nvan，Nleu-雙-[2-(癸硫基)乙基]萬(wàn)古霉素4.00.5 ---工藝B在氮下，向2-(癸硫基)乙醛(粗，48g，220mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.4L)溶液中加入固體鹽酸萬(wàn)古霉素水合物(173g，110mmol)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(58ml，330mmol)。將懸液在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)，其間所有萬(wàn)古霉素完全溶解。然后加入三氟乙酸(53ml，690mmol)。將溶液攪拌另外90分鐘，然后加入固體氰基硼氫化鈉(10.5g，170mmol)，然后加入甲醇(800ml)。三小時(shí)后，用反相HPLC法分析反應(yīng)?；?80nm下UV吸收的產(chǎn)物分布如下洗脫時(shí)間(min)面積％產(chǎn)物2.015 萬(wàn)古霉素3.277 Nvan-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素3.33---3.40.5 Nleu-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素4.00.8 Nvan，Nleu-雙-[2-(癸硫基)乙基]萬(wàn)古霉素4.14---將來(lái)自上述任一工藝的反應(yīng)混合物倒入水(7L)中，得到略微渾濁的溶液。用飽和碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液的pH至5，導(dǎo)致白色沉淀的生成。過(guò)濾收集該沉淀，用水洗滌，再用乙酸乙酯洗滌，在真空下干燥，得到Nvan-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素，使用時(shí)無(wú)需進(jìn)一步純化。
工藝C在25℃下，將鹽酸萬(wàn)古霉素(3.0g，2.1mmol)的ACN/H2O(1∶1，30ml)溶液用二異丙基乙胺(0.54g，0.72ml，4.2mmol)處理，然后用2-(癸硫基)乙醛(0.91g，4.2mmol)處理。30分鐘后，將反應(yīng)混合物用TFA(1.92g，1.29ml，16.8mmol)處理，然后用NaCNBH3(0.132g，2.1mmol)處理。5至10分鐘后，使粗產(chǎn)物Nvan-2-(癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素在乙腈(300ml)中沉淀。
實(shí)施例1化合物3的制備(式I，其中R3是N-(膦酰甲基)-氨基；R5是氫；R19是氫；R20是-CH2CH2-S-(CH2)9CH3)將NVAN(2-癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素雙三氟乙酸鹽(1g，0.53mmol)和二異丙基乙胺(0.23ml，1.33mmol)混合在DMF(10ml)中，攪拌直至均勻。然后向反應(yīng)混合物加入HOBt(0.080g，0.58mmol)和PYBOP(0.300g，0.58mmol)。5-10分鐘后，加入含有(氨甲基)膦酸(0.060g，0.53mmol)和二異丙基乙胺(0.23ml，1.33mmol)在水(3ml)中的均勻溶液。將反應(yīng)物在室溫下攪拌，用MS監(jiān)測(cè)。當(dāng)判斷反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物用乙腈(40ml)稀釋?zhuān)x心。棄去上清液，將含有所需產(chǎn)物的剩余粒狀沉淀溶于50％含水乙腈(10ml)，經(jīng)過(guò)反相制備型HPLC純化，得到標(biāo)題化合物。MS計(jì)算值(M+)1742.7；實(shí)測(cè)值(MH+)1743.6。
實(shí)施例2化合物11的制備(式I，其中R3是-OH；R5是N-(膦酰甲基)-氨甲基；R19是氫；R20是-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3)將(氨甲基)膦酸(3.88g，35mmol)和二異丙基乙胺(6.1ml，35mmol)混合在水(40ml)中，攪拌直至均勻。然后向反應(yīng)混合物加入乙腈(50ml)和甲醛(37％H2O溶液；0.42ml，05.6mmol)。大約15分鐘后，向反應(yīng)混合物加入NVAN-癸氨基乙基萬(wàn)古霉素三三氟乙酸鹽(10.0g，5.1mmol)和二異丙基乙胺(6.1ml，35mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌大約18小時(shí)，此時(shí)用20％TFA調(diào)節(jié)pH至約7，在真空中除去乙腈，將殘余物冷凍干燥。將所得固體用水(100ml)研制，過(guò)濾收集，在真空中干燥，經(jīng)過(guò)反相制備型HPLC純化，得到標(biāo)題化合物。MS計(jì)算值(MH+)1756.6；實(shí)測(cè)值(MH+)1756.6。
化合物11也是如下制備的。
將NVAN-(癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素的奎寧環(huán)鹽(500mg，0.28mmol，下列f子部分)和氨甲基膦酸(155mg，1.4mmol)懸浮在50％含水乙腈(10ml)中。加入二異丙基乙胺(972μl，720mg，5.6mmol)，將混合物在室溫下攪拌，直至固體溶解。然后將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻，加入福爾馬林(3.7％，將商品37％福爾馬林用50％ACN/水按1∶9稀釋?zhuān)?20μl，8.8mg，0.29mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌15小時(shí)，此時(shí)反應(yīng)完全。在0℃下加入3N HCl至約pH2，猝滅反應(yīng)。將混合物用50％ACN/水稀釋至50ml，然后加入乙腈(75ml，然后5×10ml，間隔5分鐘，總計(jì)125ml)，使產(chǎn)物沉淀。借助真空過(guò)濾收集固體，在真空中干燥。經(jīng)過(guò)反相制備型HPLC純化，得到標(biāo)題化合物。
中間體NVAN-癸氨基乙基萬(wàn)古霉素三三氟乙酸鹽是如下制備的。
a.N-Fmoc-2-(癸氨基)乙醇。將2-(正癸氨基)乙醇(2.3g，11mmol，1.1eq)和DIPEA(2.0ml，11mmol，1.1eq)溶于亞甲基氯(15ml)，在冰浴中冷卻。加入9-芴基甲基氯甲酸酯(2.6g，10mmol，1.0eq)的亞甲基氯(15ml)溶液，將混合物攪拌30分鐘，然后用3N鹽酸(50ml)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉(50ml)洗滌。有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥，在減壓下除去溶劑。N-Fmoc-2-(癸氨基)乙醇(4.6g，11mmol，108％)在使用時(shí)無(wú)需進(jìn)一步純化。
b.N-Fmoc-癸氨基乙醛。在-35至-45℃下，歷經(jīng)20分鐘向草酰氯(12.24ml)和亞甲基氯(50ml)的溶液加入DMSO(14.75g)的亞甲基氯(25ml)溶液。將反應(yīng)混合物在-35至-45℃下攪拌10分鐘。歷經(jīng)25分鐘加入N-Fmoc-癸氨基乙醇(20.0g)的亞甲基氯(70ml)溶液，然后在-35至-45℃下攪拌40分鐘。然后加入三乙胺(21.49g)，將混合物在-10至-20℃下攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物用水(120ml)、然后用濃硫酸(20.0g)猝滅，同時(shí)保持內(nèi)部溫度在0-5℃。分離有機(jī)層，用2％硫酸(100ml)洗滌，然后用水洗滌(2×100ml)。將有機(jī)溶液在60℃真空下蒸餾至約100ml。加入庚烷(100ml)，將油浴的溫度升至80℃，繼續(xù)蒸餾，直至殘留體積為100ml。加入更多的庚烷(100ml)，重復(fù)蒸餾至體積100ml。將加熱浴用15℃冷水浴代替。歷經(jīng)20分鐘緩慢將冷水浴冷卻至5℃，引發(fā)產(chǎn)物的沉淀。然后將漿液冷卻至-5至-10℃，攪拌2小時(shí)。然后在布氏漏斗上收集固體，用冷(-5℃)庚烷洗滌(2×15ml)。將濕固體在真空中干燥，得到醛。
c.Nvan-(N-Fmoc-2-正癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素三氟乙酸鹽將鹽酸萬(wàn)古霉素(12g，7.7mmol，1.0eq)、N-Fmoc-2-(正癸氨基)-乙醛(3.2g，7.6mmol，1.0eq)和DIPEA(2.6ml，14.9mmol，2.0eq)在室溫DMF(120ml)中攪拌90分鐘。加入氰基硼氫化鈉(1.4g，22mmol，3.0eq)，然后加入甲醇(120ml)，然后加入三氟乙酸(1.8ml，23mmol，3.0eq)。將混合物在室溫下攪拌60分鐘，然后在減壓下除去甲醇。向600ml二乙醚加入所得溶液，生成沉淀，過(guò)濾之，用乙醚洗滌，在真空下干燥。粗產(chǎn)物經(jīng)過(guò)反相快速柱純化，用含10、20、30％乙腈的水(含有0.1％三氟乙酸)洗脫，除去極性雜質(zhì)(例如殘留的萬(wàn)古霉素)，然后將產(chǎn)物用含70％乙腈的水(含有0.1％三氟乙酸)洗脫，得到9gNvan-(N-Fmoc-2-正癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素，為它的三氟乙酸鹽(4.3mmol，56％)。
d.Nvan-2-(正癸氨基)乙基萬(wàn)古霉素三氟乙酸鹽。將Nvan-(N-Fmoc-2-正癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素(100mg)溶于1ml DMF(1ml)，用哌啶(200μl)處理30分鐘。使混合物沉淀到乙醚中，離心，用乙腈洗滌。反相制備型HPLC(含10-70％乙腈的水，含有0.1％三氟乙酸，歷經(jīng)120分鐘)得到Nvan-2-(正癸氨基)乙基萬(wàn)古霉素，為它的TFA鹽。
中間體NVAN癸氨基乙基萬(wàn)古霉素的奎寧環(huán)鹽是如下制備的。
e.Nvan-(N’-Fmoc-癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素。向裝有機(jī)械攪拌器的2L燒瓶加入鹽酸萬(wàn)古霉素(50.0g)、N-Fmoc-癸氨基乙醛(13.5g)、DMF(400ml)和N，N-二異丙基乙胺(11.7ml)。將懸液在室溫下攪拌2小時(shí)，此時(shí)固體已經(jīng)溶解。加入甲醇(190ml)，然后加入三氟乙酸(10.4ml)。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘后，一次性加入硼烷-吡啶配合物(3.33g)，用甲醇(10ml)沖洗。攪拌4小時(shí)后，將反應(yīng)物用冰浴冷卻至5-10℃，加入水(675ml)，加水的速度要保持溫度低于20℃。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，加?0％NaOH至pH4.2-4.3(大約15ml)。將所得漿液在冰浴中冷卻1小時(shí)，然后借助真空過(guò)濾收集產(chǎn)物，用冷水洗滌(2×100ml)。將濕固體在50℃真空中干燥，得到標(biāo)題化合物，為灰白色至淡粉紅色固體。
f.NVAN-(癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素奎寧環(huán)鹽。將Nvan-(N’-Fmoc-癸氨基乙基)萬(wàn)古霉素(88g，42mmol)溶于DMF(500ml)，在室溫下攪拌1小時(shí)。加入奎寧環(huán)(9.4g，84mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌18小時(shí)。在真空中除去DMF，將固體用乙腈(700ml)研制3小時(shí)。在布氏漏斗上收集固體，用乙腈(200ml)研制16小時(shí)。此時(shí)加入更多的乙腈(700ml)，在布氏漏斗上收集固體，用乙腈(500ml)洗滌，然后重新懸浮在乙腈(500ml)中。攪拌2小時(shí)后，在布氏漏斗上收集固體，在真空中干燥，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例3化合物12的制備(式I，其中R3是-OH；R5是N-(膦酰甲基)-氨甲基；R19是氫；R20是-CH2CH2-S-(CH2)9CH3)將(氨甲基)膦酸(0.295g，266mmol)和二異丙基乙胺(0.649ml，3.72mmol)混合在水(5ml)中，攪拌直至均勻。然后向反應(yīng)混合物加入甲醛(37％H2O溶液；0.044ml，0.585mmol)和乙腈(5ml)。大約15分鐘后，向反應(yīng)混合物加入NVAN-(2-癸硫基)乙基萬(wàn)古霉素雙三氟乙酸鹽(1g，0.53mmol)和二異丙基乙胺(0.649ml，3.72mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌大約18小時(shí)，此時(shí)將反應(yīng)混合物用ACN(40ml)稀釋?zhuān)x心。棄去上清液，將含有所需產(chǎn)物的剩余粒狀沉淀溶于50％含水乙腈(10ml)，經(jīng)過(guò)反相制備型HPLC純化，得到標(biāo)題化合物。MS計(jì)算值(M+)1772.7；實(shí)測(cè)值(MH+)1773.4。
利用上述工藝和適當(dāng)?shù)脑?，制備如表I所示化合物。關(guān)于這些化合物的質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下
實(shí)施例4化合物11的純化(式I，其中R3是-OH；R5是N-(膦酰甲基)-氨甲基；R19是氫；R20是-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3)將2g Amberlite XAD 1600與過(guò)量HPLC級(jí)水混合4小時(shí)。除去過(guò)量水，將樹(shù)脂連續(xù)用(1)過(guò)量HPLC級(jí)水；(2)過(guò)量10mM乙酸的甲醇溶液；(3)過(guò)量10mM乙酸的50/50v/v ACN/水溶液；(4)過(guò)量5/95 v/v乙酸/水；和(5)過(guò)量10/90 v/v乙酸/水洗滌。
將樹(shù)脂裝上1cm內(nèi)徑的柱子(Omnifit #56001)，柱子裝有20psi反壓調(diào)節(jié)器(Upchurch P-791)、蠕動(dòng)泵(Ranin Dynamax Model RP-1)和分級(jí)收集器(BioRad 2110)，調(diào)節(jié)流速，每小時(shí)洗脫1柱床體積的溶液，得到1ml部分。
將50mg粗化合物11溶于5ml 10/90 v/v乙酸/水，制備樣本。將溶液用聲波處理5分鐘，裝上柱子，流速為1柱床體積/小時(shí)。將20微升上柱溶液用水按1∶50 v/v稀釋?zhuān)米鱄PLC分析的標(biāo)準(zhǔn)物。
將上柱樣本用10mM乙酸的17.5/82.5 v/v ACN/水溶液稀釋。收集每一部分，借助薄層色譜法(TLC)測(cè)試樣本的存在。將每一部分點(diǎn)在TLC板(EM Science #15341)上，與來(lái)自上柱溶液的參照斑點(diǎn)比較，以確認(rèn)化合物11的存在。收集各部分，直至TLC不再檢測(cè)到化合物11。然后將洗脫溶液轉(zhuǎn)移至10mM乙酸的50/50 v/v ACN/水溶液，目的是洗除柱上任何剩余的樣本。洗除部分也用TLC測(cè)試樣本的存在。一旦在洗除部分中不再見(jiàn)到樣本，則終止收集。然后將柱子用各為5柱床體積的10mM乙酸的甲醇溶液、10mM乙酸的50/50 v/v ACN/水溶液和10/90 v/v乙酸/水溶液洗滌。
使每一部分渦旋，用水按1∶10稀釋到自動(dòng)進(jìn)樣小瓶?jī)?nèi)。使自動(dòng)進(jìn)樣小瓶渦旋，在Varian HPLC系統(tǒng)上分析，在214nm下紫外檢測(cè)。將20微升的每一稀釋部分注射到室溫的Zorbax Bonus-RP，4.6×150mm柱子上。從柱子上洗脫樣本，洗脫梯度為82％A(5/95 v/v ACN/水，0.1％TFA)/18％B(95/5 ACN/水，0.1％TFA)至60％A/40％B，時(shí)間7分鐘。
匯集含有純度超過(guò)89％的化合物11的部分。將所匯集的部分在VirTis benchtop凍干器上冷凍干燥過(guò)夜，稱重，測(cè)定收率。將固體化合物11溶于10/90 v/v乙酸/水，用水稀釋至100微克/毫升。將100微克/ml純化合物11用上述HPLC方法分析，以檢驗(yàn)它的純度。從下式確定經(jīng)過(guò)校正的收率 如下表III第一行所示，起始濃度74％的化合物11被純化至90％濃度，收率59％。
實(shí)施例5-13用多種樹(shù)脂和洗脫溶液純化化合物11使用多種樹(shù)脂和洗脫溶液，借助實(shí)施例4的方法純化化合物11。結(jié)果列在下表III中。
表III化合物11的純化
從上述結(jié)果可以明顯看出，本發(fā)明的方法提供膦酸化糖肽衍生物的純化，純度超過(guò)80％。
盡管已經(jīng)參照其具體實(shí)施方式
描述了本發(fā)明，不過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以進(jìn)行各種改變和等價(jià)替換，而不背離發(fā)明的真正精神和范圍。另外，可以進(jìn)行很多修飾，使特定的情形、材料、物質(zhì)組成、方法、方法步驟適應(yīng)本發(fā)明的目的、精神和范圍。所有這樣的修飾都打算包括在所附權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。另外，上文引用的所有出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利文獻(xiàn)都全文結(jié)合在此作為參考文獻(xiàn)，如同單獨(dú)結(jié)合作為參考文獻(xiàn)一樣。
權(quán)利要求
1.純化式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或前體藥物的方法 其中R19是氫；R20是-Ra-Y-Rb-(Z)x、Rf、-C(O)Rf或-C(O)-Ra-Y-Rb-(Z)x；R3是-ORc、-NRcRc、-O-Ra-Y-Rb-(Z)x、-NRc-Ra-Y-Rb-(Z)x、-NRcRe或-O-Re；或者R3是包含一個(gè)或多個(gè)膦?；牡?連接的、氧-連接的或硫-連接的取代基；R5選自由氫、鹵代、-CH(Rc)-NRcRc、-CH(Rc)-NRcRe、-CH(Rc)-NRc-Ra-Y-Rb-(Z)x、-CH(Rc)-Rx、-CH(Rc)-NRc-Ra-C(＝O)-Rx和包含一個(gè)或多個(gè)膦酰基的取代基組成的組；每個(gè)Ra獨(dú)立地選自由亞烷基、取代的亞烷基、亞烯基、取代的亞烯基、亞炔基和取代的亞炔基組成的組；每個(gè)Rb獨(dú)立地選自由共價(jià)鍵、亞烷基、取代的亞烷基、亞烯基、取代的亞烯基、亞炔基和取代的亞炔基組成的組，其條件是當(dāng)Z是氫時(shí)，Rb不是共價(jià)鍵；每個(gè)Rc獨(dú)立地選自由氫、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基和-C(O)Rd組成的組；每個(gè)Rd獨(dú)立地選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基組成的組；Re是糖基；每個(gè)Rf獨(dú)立地是烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基；Rx是N-連接的氨基糖或N-連接的雜環(huán)；每個(gè)Y獨(dú)立地選自由氧、硫、-S-S-、-NRc、-S(O)-、-SO2-、-NRcC(O)-、-OSO2-、-OC(O)-、-NRcSO2-、-C(O)NRc-、-C(O)O-、-SO2NRc-、-SO2O-、-P(O)(ORc)O-、-P(O)(ORc)NRc-、-OP(O)(ORc)O-、-OP(O)(ORc)NRc-、-OC(O)O-、-NRcC(O)O-、-NRcC(O)NRc-、-OC(O)NRc-、-C(＝O)-和-NRcSO2NRc-組成的組；每個(gè)Z獨(dú)立地選自氫、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜芳基和雜環(huán)基；且x是1或2；其條件是，R3和R5至少有一個(gè)是包含一個(gè)或多個(gè)膦?；娜〈?；該方法包含下列步驟(a)使包含式I化合物的第一酸化水溶液與包含聚苯乙烯和二乙烯基苯的樹(shù)脂接觸；(b)將所接觸的樹(shù)脂用包含極性有機(jī)溶劑的第二酸化水溶液洗脫，形成洗脫液；和(c)從洗脫液中分離式I化合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中存在于第二酸化水溶液中的極性有機(jī)溶劑包含乙腈。
3.權(quán)利要求1的方法，其中存在于第二酸化水溶液中的極性有機(jī)溶劑與水之比為約1∶4至約1∶15極性有機(jī)溶劑∶水。
4.權(quán)利要求1的方法，其中存在于第二酸化水溶液中的酸包含乙酸。
5.權(quán)利要求1的方法，其中存在于第二酸化水溶液中的酸包含鹽酸。
6.權(quán)利要求1的方法，其中存在于第二酸化水溶液中的極性有機(jī)溶劑的溶液中的酸的濃度為約5毫摩爾至約50毫摩爾。
7.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(a)中，聚苯乙烯二乙烯基苯樹(shù)脂的孔徑為約50_至約1000_。
8.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(c)包含借助冷凍干燥分離式I化合物。
9.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(c)包含借助包含沉淀的過(guò)程分離式I化合物。
10.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(c)進(jìn)一步包含形成式I化合物濃度高于洗脫液的溶液。
11.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(c)產(chǎn)物中的式I化合物純度大于約80％。
12.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(b)包含將所接觸的樹(shù)脂用包含極性有機(jī)溶劑的水溶液洗滌多次，形成多個(gè)部分，合并這些部分，形成洗脫液。
13.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R3是-OH。
14.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R3是包含一個(gè)或多個(gè)膦?；牡?連接的、氧-連接的或硫-連接的取代基。
15.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R3是式-O-Ra-P(O)(OH)2、-S-Ra-P(O)(OH)2或-NRc-Ra-P(O)(OH)2基團(tuán)。
16.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R5是式-(CH(R21)-N(Rc)-Ra-P(O)(OH)2基團(tuán)；其中R21是氫或Rd。
17.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R20是-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3；-CH2CH2CH2-NH-(CH2)8CH3；-CH2CH2CH2CH2-NH-(CH2)7CH3；-CH2CH2-NHSO2-(CH2)9CH3；-CH2CH2-NHSO2-(CH2)11CH3；-CH2CH2-S-(CH2)8CH3；-CH2CH2-S-(CH2)9CH3；-CH2CH2-S-(CH2)10CH3；-CH2CH2CH2-S-(CH2)8CH3；-CH2CH2CH2-S-(CH2)9CH3；-CH2CH2CH2-S-(CH2)3-CH＝CH-(CH2)4CH3(反式)；-CH2CH2CH2CH2-S-(CH2)7CH3；-CH2CH2-S(O)-(CH2)9CH3；-CH2CH2-S-(CH2)6Ph；-CH2CH2-S-(CH2)8Ph；-CH2CH2CH2-S-(CH2)8Ph；-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2-NH-CH2-4-[4-(CH3)2CHCH2-]-Ph；-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-CF3-Ph)-Ph；-CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2-S(O)-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-S(O)-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-S-CH2-4-[3，4-二-Cl-PhCH2O-)-Ph；-CH2CH2-NHSO2-CH2-4-[4-(4-Ph)-Ph]-Ph；-CH2CH2CH2-NHSO2-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；-CH2CH2CH2-NHSO2-CH2-4-(Ph-C≡C-)-Ph；-CH2CH2CH2-NHSO2-4-(4-Cl-Ph)-Ph；或-CH2CH2CH2-NHSO2-4-(萘-2-基)-Ph。
18.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R3是-OH；R5是N-(膦酰甲基)-氨甲基；R19是氫；R20是-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
19.權(quán)利要求1的方法，其中在式I化合物中，R3是-OH；R5是N-(膦酰甲基)-氨甲基；R19是氫；R20是-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3。
全文摘要
公開(kāi)了純化糖肽的方法，這些糖肽被一個(gè)或多個(gè)各自包含一個(gè)或多個(gè)膦?；娜〈〈?，可用作抗細(xì)菌劑。該方法包括使糖肽衍生物的溶液與含有聚苯乙烯的樹(shù)脂接觸，用水溶液洗脫樹(shù)脂，再分離所純化的糖肽衍生物。
文檔編號(hào)C07K9/00GK1671732SQ02816615
公開(kāi)日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2002年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月24日
發(fā)明者D·小施密特, J·D·斯甘伽 申請(qǐng)人:施萬(wàn)制藥