專利名稱：從組織樣品中分離rna的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生化領(lǐng)域，特別涉及生物組織樣品中RNA、DNA和蛋白質(zhì)的純化領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種從組織樣品中分離RNA的方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，大多數(shù)病理樣品往往不是制備成冰凍樣品形態(tài)，更常規(guī)的是福爾馬林固定、石蠟包埋的，以便于進(jìn)行組織學(xué)分析和檔案存儲(chǔ)。在這種固定、包埋的樣品中，可以使用免疫組織化學(xué)染色來(lái)測(cè)定蛋白表達(dá)水平，從而半定量地、間接地測(cè)定基因表達(dá)水平。由于石蠟包埋的樣品是廣泛使用的，因此需要一種快速可靠的方法來(lái)從樣品中分離核酸，尤其是RNA。目前已存在許多從生物樣品中純化RNA的技術(shù)，但沒(méi)有一種可靠地從福爾馬林固定的、石蠟包埋的組織樣品中分離出RNA的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是由于現(xiàn)有技術(shù)中，沒(méi)有一種可靠地從福爾馬林固定的、石蠟包埋的組織樣品中分離出RNA的方法，本發(fā)明為解決已有技術(shù)中的上述技術(shù)問(wèn)題，所采用的技術(shù)方案是提供一種從組織樣品中分離RNA的方法，所述的方法包括如下步驟首先進(jìn)行脫蠟，脫蠟的方法采用二甲苯洗滌石蠟包埋樣品，然后利用低級(jí)醇的水溶液進(jìn)行再水化和均質(zhì)化，所述的低級(jí)醇優(yōu)選的為乙醇，再水化法方法是用濃度逐漸降低的乙醇水溶液逐步洗滌，樣品與醇溶液充分混合并且離心，然后再均質(zhì)化，樣品在硫氰酸胍離液劑的存在下進(jìn)行均質(zhì)化，均質(zhì)化的樣品加熱到90-100℃，然后從溶液中回收RNA，使用的方法采用已有技術(shù)中的苯酚氯仿抽提法，接著RNA可以采用已有技術(shù)中的抽提、電泳、層析、沉淀或其他適用的技術(shù)進(jìn)一步純化。
本發(fā)明的方法所分離獲得的RNA在分子生物學(xué)上可以有許多的應(yīng)用，包括使用隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄以制備cDNA文庫(kù)。通過(guò)反轉(zhuǎn)錄、多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增。
本發(fā)明和已有技術(shù)相對(duì)照，采用本發(fā)明獲得RNA其活性更高，而且方便，簡(jiǎn)單實(shí)用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明一種從組織樣品中分離RNA的方法，所述的方法包括如下步驟首先進(jìn)行脫蠟，脫蠟的方法采用二甲苯洗滌石蠟包埋樣品，然后利用低級(jí)醇的水溶液進(jìn)行再水化和均質(zhì)化，所述的低級(jí)醇優(yōu)選的為乙醇，再水化法方法是用濃度逐漸降低的乙醇水溶液逐步洗滌，樣品與醇溶液充分混合并且離心，然后再均質(zhì)化，樣品在硫氰酸胍離液劑的存在下進(jìn)行均質(zhì)化，均質(zhì)化的樣品加熱到90-100℃，然后從溶液中回收RNA，使用的方法采用已有技術(shù)中的苯酚氯仿抽提法，接著RNA可以采用已有技術(shù)中的抽提、電泳、層析、沉淀或其他適用的技術(shù)進(jìn)一步純化。
權(quán)利要求
1.一種從組織樣品中分離RNA的方法，其特征在于所述的方法包括如下步驟首先進(jìn)行脫蠟，脫蠟的方法采用二甲苯洗滌石蠟包埋樣品，然后利用低級(jí)醇的水溶液進(jìn)行再水化和均質(zhì)化，再水化法方法是用濃度逐漸降低的乙醇水溶液逐步洗滌，樣品與醇溶液充分混合并且離心，然后再均質(zhì)化，樣品在硫氰酸胍離液劑的存在下進(jìn)行均質(zhì)化，均質(zhì)化的樣品加熱到90-100℃，然后從溶液中回收RNA，使用的方法采用已有技術(shù)中的苯酚氯仿抽提法，接著RNA可以采用已有技術(shù)中的抽提、電泳、層析、沉淀或其他適用的技術(shù)進(jìn)一步純化。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從組織樣品中分離RNA的方法，其特征在于所述的低級(jí)醇為乙醇。
全文摘要
本發(fā)明一種從組織樣品中分離RNA的方法，所述的方法包括如下步驟首先進(jìn)行脫蠟，脫蠟的方法采用二甲苯洗滌石蠟包埋樣品，然后利用低級(jí)醇的水溶液進(jìn)行再水化和均質(zhì)化，所述的低級(jí)醇優(yōu)選的為乙醇，再水化法方法是用濃度逐漸降低的乙醇水溶液逐步洗滌，樣品與醇溶液充分混合并且離心，然后再均質(zhì)化，樣品在硫氰酸胍離液劑的存在下進(jìn)行均質(zhì)化，均質(zhì)化的樣品加熱到90－100℃，然后從溶液中回收RNA，使用的方法采用已有技術(shù)中的苯酚氯仿抽提法，接著RNA可以采用已有技術(shù)中的抽提、電泳、層析、沉淀或其他適用的技術(shù)進(jìn)一步純化。
文檔編號(hào)C07H21/02GK1488639SQ0213735
公開(kāi)日2004年4月14日 申請(qǐng)日期2002年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月9日
發(fā)明者曾立波 申請(qǐng)人:上海市刑事科學(xué)技術(shù)研究所