1.一種分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于包括以下步驟:
1)、制備產(chǎn)品A:將新鮮的海洋藻類植物洗凈、除雜,浸泡12-48h后,磨漿,轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi),在110-150℃滅菌15-30min,冷卻至20-35℃得到產(chǎn)品A,備用;
并制備酶溶液:將蠟樣芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌分別活化后接種到同一個(gè)種子發(fā)酵罐混合富集培養(yǎng),接種量均為10%-20%,溫度為30℃-38℃,培養(yǎng)10h-24h,將發(fā)酵液離心后經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾除去菌體得到纖維素分解酶溶液甲;將嗜糖芽孢桿菌活化后轉(zhuǎn)入種子發(fā)酵罐富集培養(yǎng),接種量為10%-20%,,溫度為30℃-38℃,培養(yǎng)10h-24h,將發(fā)酵液離心后經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾除去菌體得到褐藻酸降解酶溶液乙;
所述的接種量是指種子液占發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量百分比;
2)、制備產(chǎn)品B:按酶溶液甲和產(chǎn)品A的重量比為1:3-10,將酶溶液甲加入到產(chǎn)品A中,控制溫度為30-40℃,用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為5-8,反應(yīng)時(shí)間為2-10h,得到產(chǎn)品B;
3)、制備產(chǎn)品C:按酶溶液乙和產(chǎn)品B的重量比為1:3-10,將酶溶液乙加入到產(chǎn)品B中,控制溫度為30-40℃,用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH值為5-8,反應(yīng)時(shí)間為2-10h,得到產(chǎn)品C;
4)、制備產(chǎn)品D:將發(fā)酵罐內(nèi)產(chǎn)品C溫度冷卻至0℃~5℃,保存2~7天,然后將溫度恢復(fù)至25℃~35℃,得到產(chǎn)品D;
5)、制備海藻有機(jī)肥:向產(chǎn)品D中加入硝酸鉀10-15重量份、磷酸二氫鉀5-15重量份、尿素10-15份,攪拌使溶解均勻得到100重量份的海藻有機(jī)肥。
2.如權(quán)利要求1所述的分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于:所述的海洋藻類植物為銅藻、海帶、褐藻、鼠尾藻和馬尾藻中的一種或者任意比例的兩種以上。
3.如權(quán)利要求1所述的分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于:所述混合富集培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基配方為:豆粕粉20g,蛋白胨15g,酵母膏6g,海藻酸鈉1.2g,磷酸二氫鉀0.04g,碳酸鈣0.2g,硫酸鎂0.2g,甘露醇4.5g,水1000mL,調(diào)節(jié)pH6.8-7.0。
4.如權(quán)利要求1所述的分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于:嗜糖芽孢桿菌活化與擴(kuò)培的培養(yǎng)基配方為:紅薯粉22g,谷氨酸0.03g,酵母膏5g,蛋白胨11g,二氧化錳0.02g,磷酸二氫鉀0.02g,氯化鐵0.005g,硫酸鎂0.2g,硫酸鈣0.1g,新鮮海水1000mL,調(diào)節(jié)pH7.2-7.5。
5.如權(quán)利要求1所述的分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于:所述的步驟2)至步驟3)中的酸堿調(diào)節(jié)劑為檸檬酸,草酸,醋酸,氨水,碳酸鈉,醋酸鈉中的一種或幾種。
6.如權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于:所述海藻有機(jī)肥料的寡糖含量在20g/L以上,褐藻酸含量在20g/L以上,pH值為7.0-8.5,N、P、K含量比例為1-2:1:0.8-1.5。
7.如權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的分級(jí)酶解法制備含寡糖海藻有機(jī)肥的方法,其特征在于:所述嗜糖芽孢桿菌是嗜糖芽孢桿菌YIC~Alg3,其保藏號(hào)為CGMCC No12155。