本發(fā)明屬于生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法。
背景技術(shù)：
膠原是動(dòng)物組織中的一類(lèi)結(jié)構(gòu)蛋白，約占總蛋白量的1/3，廣泛分布于動(dòng)物的皮膚、骨骼、軟骨、結(jié)締組織、腱、角膜、內(nèi)臟細(xì)胞間質(zhì)、肌腔、韌帶、鞏膜等部位。因其具有獨(dú)特的三股螺旋結(jié)構(gòu)、低抗原性、無(wú)毒性、良好的生物相容性和生物可降解性等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于組織工程支架材料、止血海綿、藥物控緩釋系統(tǒng)、基因傳遞載體、美容外科等生物醫(yī)用領(lǐng)域。但是，目前使用的膠原蛋白主要來(lái)源于豬皮、牛皮和豬骨、牛骨，近年來(lái)由于瘋牛病、口蹄疫等人畜交叉流行病的頻發(fā)，豬和牛中來(lái)源的膠原蛋白的應(yīng)用受到了限制。此外，在某些宗教人群中，豬來(lái)源的膠原蛋白被禁止使用。在這種情況下，水產(chǎn)膠原蛋白由于原料豐富、易于提取、低抗原性、低致敏性、高度可溶性、沒(méi)有傳染病危險(xiǎn)和宗教障礙而受到廣泛的關(guān)注。其中深海魚(yú)皮膠原蛋白，顧名思義就是以深海魚(yú)魚(yú)皮為原料提取的膠原蛋白。由于深海的低溫低壓，使這類(lèi)膠原蛋白具有著普通的陸生動(dòng)物膠原蛋白和淡水魚(yú)、淺海魚(yú)膠原蛋白所不具備的特殊性質(zhì)。首先區(qū)別在于膠原蛋白活性激發(fā)的溫度。陸生動(dòng)物內(nèi)提取的膠原蛋白活性要在35度才能把活性全部激發(fā)。也就是說(shuō)要在35度以上吸收的效果才會(huì)達(dá)到最佳。而魚(yú)提取的活性激發(fā)溫度就要低很多，十度以上就能發(fā)揮最好的效果。
自組裝性是膠原的重要特性。通常，溶解于溶液中的膠原是游離的多肽鏈，而不是三股螺旋鏈。膠原通過(guò)自組裝能夠形成三股螺旋結(jié)構(gòu)，進(jìn)而形成纖維等，這是其在生物材料領(lǐng)域應(yīng)用的基礎(chǔ)。以往關(guān)于膠原自組裝性的研究多針對(duì)陸生哺乳動(dòng)物膠原，對(duì)水產(chǎn)膠原的探討較少。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，本發(fā)明將魚(yú)皮膠原蛋白粉作為原料采用檸檬酸對(duì)其溶解反應(yīng)，最終通過(guò)自組裝形成纖維。
為解決現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的提供一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，所述魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法包括如下步驟：
（1）提取魚(yú)皮膠原粉；
（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中；
（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液；
（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH；
（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維。
優(yōu)選地，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：
（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；
（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為0.16-3.0mol/L的氫氧化鉀溶液在0-20℃條件下浸泡1-20h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為10-20∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔2-4h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液1-2次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡2-6h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為5-10％；
（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為0.36-1.68mol/L的醋酸溶液在0-20℃的條件下進(jìn)行溶脹處理12-36h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為10-15∶1；然后在0-30℃條件下凍結(jié)1-10h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.15-0.45mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑2-4mm的顆粒料漿；
（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入0.05-3.56mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為15-30∶1，提取溫度0-25℃，提取時(shí)間為24-48h；提取完畢后，以60-80目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取1-2次，得提取液和濾渣，向提取液中加入1.5-2.5mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。
優(yōu)選地，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：
（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；
（2）中和：把橘汁酸水加熱至60-75℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱2-3h，初溫控制在5-8℃左右，最終可升高到90-100℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；
（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至60-70℃，重復(fù)2-3次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；
（4）酸解脫色：將檸檬酸鈣漿液加熱至60-70℃，摻加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20-30 %的鹽酸，加熱2-3小時(shí)，靜置沉積，上層清液即為檸檬酸溶液，用3-5%活性炭脫色20-30min，則得檸檬酸溶液。
優(yōu)選地，所述步驟（2）中魚(yú)皮膠原粉溶解于0.2-0.6mol/L檸檬酸溶液中，溶解24-48h，制成2-6mg/mL的膠原溶液。
優(yōu)選地，所述步驟（3）中離心條件為2000-2500r/min，離心時(shí)間為20-30min。
優(yōu)選地，所述步驟（4）中的醋酸緩沖液為0.2-0.4mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液。
優(yōu)選地，所述步驟（4）中的上清液與醋酸緩沖液體積比為2-3：1。
優(yōu)選地，所述步驟（5）中的水浴溫度為20-30℃，水浴時(shí)間為12-36h。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：
（1）本發(fā)明探討水產(chǎn)膠原自組裝形成纖維的方法，通過(guò)本發(fā)明方法所得膠原纖維為絲狀纖維，與深海魚(yú)皮中天然存在的膠原纖維形態(tài)極其相似，在醫(yī)用生物材料領(lǐng)域具有很高的應(yīng)用前景；
（2）本發(fā)明采用檸檬酸溶液溶解魚(yú)皮膠原蛋白，由于檸檬酸具有3個(gè)羧基，可同時(shí)與多個(gè)蛋白質(zhì)多肽鏈的羥基脫水縮合，進(jìn)而使多肽鏈的螺旋結(jié)構(gòu)更加緊密牢固，形成的纖維橫紋密而多，提高了纖維的性能。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供的魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，包括如下步驟：
（1）提取魚(yú)皮膠原粉；
（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中，所述魚(yú)皮膠原粉溶解于0.6mol/L檸檬酸溶液中，溶解24h，制成6mg/mL的膠原溶液；
（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液，離心條件為2000r/min，離心時(shí)間為30min；
（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH，所述醋酸緩沖液為0.2mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液，所述上清液與醋酸緩沖液體積比為3：1；
（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維，所述水浴溫度為20℃，水浴時(shí)間為36h。
其中，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：
（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；
（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為0.16mol/L的氫氧化鉀溶液在20℃條件下浸泡1h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為20∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔2h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液2次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡2h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為10％；
（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為0.36mol/L的醋酸溶液在20℃的條件下進(jìn)行溶脹處理12h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為15∶1；然后在0℃條件下凍結(jié)10h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.15mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑4mm的顆粒料漿；
（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入0.05mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為30∶1，提取溫度0℃，提取時(shí)間為48h；提取完畢后，以60目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取2次，得提取液和濾渣，向提取液中加入1.5mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。
其中，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：
（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；
（2）中和：把橘汁酸水加熱至75℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱2h，初溫控制在8℃左右，最終可升高到90℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；
（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至70℃，重復(fù)2次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；
（4）酸解脫色：將檸檬酸鈣漿液加熱至70℃，摻加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的鹽酸，加熱3小時(shí)，靜置沉積，上層清液即為檸檬酸溶液，用3%活性炭脫色30min，則得檸檬酸溶液。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供的魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，包括如下步驟：
（1）提取魚(yú)皮膠原粉；
（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中，所述魚(yú)皮膠原粉溶解于0.2mol/L檸檬酸溶液中，溶解48h，制成2mg/mL的膠原溶液；
（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液，離心條件為2500r/min，離心時(shí)間為20min；
（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH，所述醋酸緩沖液為0.4mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液，所述上清液與醋酸緩沖液體積比為2：1；
（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維，所述水浴溫度為30℃，水浴時(shí)間為12h。
其中，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：
（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；
（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為3.0mol/L的氫氧化鉀溶液在0℃條件下浸泡20h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為10∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔4h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液1次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡6h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為5％；
（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為1.68mol/L的醋酸溶液在0℃的條件下進(jìn)行溶脹處理36h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為10∶1；然后在30℃條件下凍結(jié)1h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.45mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑2mm的顆粒料漿；
（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入3.56mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為15∶1，提取溫度25℃，提取時(shí)間為24h；提取完畢后，以80目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取1次，得提取液和濾渣，向提取液中加入2.5mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。
其中，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：
（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；
（2）中和：把橘汁酸水加熱至60℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱3h，初溫控制在5℃左右，最終可升高到100℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；
（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至60℃，重復(fù)3次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；
（4）酸解脫色：將檸檬酸鈣漿液加熱至60℃，摻加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30 %的鹽酸，加熱2小時(shí)，靜置沉積，上層清液即為檸檬酸溶液，用5%活性炭脫色20min，則得檸檬酸溶液。
實(shí)施例3
本實(shí)施例提供的魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，包括如下步驟：
（1）提取魚(yú)皮膠原粉；
（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中，所述魚(yú)皮膠原粉溶解于0.4mol/L檸檬酸溶液中，溶解40h，制成5mg/mL的膠原溶液；
（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液，離心條件為2200r/min，離心時(shí)間為25min；
（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH，所述醋酸緩沖液為0.3mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液，所述上清液與醋酸緩沖液體積比為3：1；
（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維，所述水浴溫度為25℃，水浴時(shí)間為30h。
其中，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：
（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；
（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為1.5mol/L的氫氧化鉀溶液在15℃條件下浸泡15h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為15∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔3h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液1次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡4h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為7％；
（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為1.4mol/L的醋酸溶液在10℃的條件下進(jìn)行溶脹處理30h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為13∶1；然后在20℃條件下凍結(jié)6h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.35mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑3mm的顆粒料漿；
（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入0.25mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為20∶1，提取溫度20℃，提取時(shí)間為40h；提取完畢后，以70目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取1次，得提取液和濾渣，向提取液中加入2.0mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。
其中，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：
（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；
（2）中和：把橘汁酸水加熱至65℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱3h，初溫控制在7℃左右，最終可升高到95℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；
（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至66℃，重復(fù)3次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；
（4）酸解脫色：將檸檬酸鈣漿液加熱至68℃，摻加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24%的鹽酸，加熱2小時(shí)，靜置沉積，上層清液即為檸檬酸溶液，用4%活性炭脫色28min，則得檸檬酸溶液。
實(shí)施例4
本實(shí)施例提供的魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，包括如下步驟：
（1）提取魚(yú)皮膠原粉；
（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中，所述魚(yú)皮膠原粉溶解于0.3mol/L檸檬酸溶液中，溶解42h，制成5mg/mL的膠原溶液；
（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液，離心條件為2100r/min，離心時(shí)間為22min；
（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH，所述醋酸緩沖液為0.3mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液，所述上清液與醋酸緩沖液體積比為2：1；
（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維，所述水浴溫度為21℃，水浴時(shí)間為17h。
其中，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：
（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；
（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為1.65mol/L的氫氧化鉀溶液在15℃條件下浸泡18h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為14∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔2h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液2次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡3h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為6％；
（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為0.78mol/L的醋酸溶液在14℃的條件下進(jìn)行溶脹處理23h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為12∶1；然后在12℃條件下凍結(jié)3h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.35mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑3mm的顆粒料漿；
（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入2.56mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為19∶1，提取溫度12℃，提取時(shí)間為33h；提取完畢后，以64目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取1次，得提取液和濾渣，向提取液中加入2.5mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。
其中，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：
（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；
（2）中和：把橘汁酸水加熱至73℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱3h，初溫控制在6℃左右，最終可升高到99℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；
（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至61℃，重復(fù)3次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；
（4）酸解脫色：將檸檬酸鈣漿液加熱至63℃，摻加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為23%的鹽酸，加熱3小時(shí)，靜置沉積，上層清液即為檸檬酸溶液，用4%活性炭脫色26min，則得檸檬酸溶液。
實(shí)施例5
本實(shí)施例提供的魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，包括如下步驟：
（1）提取魚(yú)皮膠原粉；
（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中，所述魚(yú)皮膠原粉溶解于0.4mol/L檸檬酸溶液中，溶解46h，制成5mg/mL的膠原溶液；
（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液，離心條件為2400r/min，離心時(shí)間為23min；
（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH，所述醋酸緩沖液為0.3mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液，所述上清液與醋酸緩沖液體積比為2：1；
（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維，所述水浴溫度為27℃，水浴時(shí)間為23h。
其中，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：
（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；
（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為0.22mol/L的氫氧化鉀溶液在13℃條件下浸泡5h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為17∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔3h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液2次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡3h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為8％；
（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為1.48mol/L的醋酸溶液在13℃的條件下進(jìn)行溶脹處理19h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為12∶1；然后在25℃條件下凍結(jié)9h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.25mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑3mm的顆粒料漿；
（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入2.56mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為17∶1，提取溫度13℃，提取時(shí)間為37h；提取完畢后，以63目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取1次，得提取液和濾渣，向提取液中加入1.9mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。
其中，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：
（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；
（2）中和：把橘汁酸水加熱至65℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱3h，初溫控制在6℃左右，最終可升高到98℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；
（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至63℃，重復(fù)3次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；
（4）酸解脫色：將檸檬酸鈣漿液加熱至67℃，摻加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22 %的鹽酸，加熱2小時(shí)，靜置沉積，上層清液即為檸檬酸溶液，用4%活性炭脫色24min，則得檸檬酸溶液。
以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。