IO9個(gè)菌落形成單位/ml的劑量）。
[0121] 實(shí)施例2
[0122] 慢性鼓膜穿孔的治療
[0123] 例證慢性TM穿孔的HB-EGF治療的功效。
[0124] 用于耳道中的生長(zhǎng)因子遞送的生物相容性可吸收的可注射聚合物。為了治療慢性 TM穿孔，期望具有可被滴入耳內(nèi)，隨后硬化并在指定的時(shí)幀內(nèi)緩慢再吸收同時(shí)洗脫出藥物 的液體。聚合物的降解速率和藥物洗脫速率是可根據(jù)目標(biāo)靶來容易地調(diào)整的。
[0125] 用于遞送生長(zhǎng)因子的可生物降解的基于殼聚糖的水凝膠被開發(fā)來提供生物可降 解的生物再吸收的可注射聚合物，其可運(yùn)載選擇的藥物并且隨后被滴入耳道。凝膠具有兩 種液體組分，并且在混合兩種成分后在幾分鐘內(nèi)可固化。這可通過雙孔注射器來容易地施 用?；蛘撸蓪⑷芤号c交聯(lián)劑混合，隨后進(jìn)行遞送，以及利用單孔注射器進(jìn)行滴注。
[0126] 新開發(fā)的基于殼聚糖的水凝膠由親水性殼聚糖骨架分子和疏水性聚丙交酯側(cè)鏈 組成?？蓪⒀w蛋白原摻入共聚合物網(wǎng)絡(luò)，以提高結(jié)合親和力，增強(qiáng)細(xì)胞附著，和提供蛋白 水解可降解位點(diǎn)。從聚合物水凝膠的藥物釋放根據(jù)聚合物的特征諸如親水性親和力、泡脹 性能、降解度和交聯(lián)密度而變化。測(cè)量rhBMP-2從基于殼聚糖的水凝膠的藥物釋放特征，和 聚合物水凝膠在各種條件下的降解行為。
[0127] 用于本實(shí)施例中的凝膠的殼聚糖對(duì)聚交酯的具體比率為8:1。另外，將10%w/w的 血纖蛋白原摻入預(yù)聚物溶液。水凝膠制劑可在與用于化學(xué)交聯(lián)的催化劑混合后數(shù)分鐘內(nèi)固 化。這可通過雙孔注射器或利用單孔注射器來容易地施用。
[0128] 水凝膠無耳毒性。在穿孔后將水凝膠注射至小鼠鼓膜中。一只耳朵充注聚合物，而 相對(duì)的耳未注射(對(duì)照）。在于9只小鼠中對(duì)兩個(gè)鼓膜進(jìn)行手術(shù)穿孔后60天測(cè)量聽性腦干反 應(yīng)(ABR)和畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DP0AE)閾值。到鼓膜自行愈合時(shí)，兩側(cè)之間的聽覺閾值沒有 差異(圖2)。數(shù)據(jù)顯示水凝膠是無耳毒的。
[0129] HB-EGF治愈慢性鼓膜穿孔。當(dāng)用40μ1含有5μg/ml (經(jīng)由可生物吸收的基于殼聚糖 的聚合物的持續(xù)釋放劑量)的濃度的重組HB-EGF的凝膠治療一個(gè)組群的小鼠耳中的慢性穿 孔，相較于第4周時(shí)對(duì)照(僅聚合物）的38 % (26只中的10只），92 % (24只中的22只）愈合(p〈 〇. 01)。使用GF激活GFR胞外結(jié)構(gòu)域配體脫落來克服TM慢性傷口愈合中的該關(guān)鍵步驟的能力 證明其對(duì)于使用生物療法的干預(yù)的適用性。這是在慢性穿孔的動(dòng)物動(dòng)物模型中測(cè)試的第一 生長(zhǎng)因子治療，其已顯示超過對(duì)照的顯著益處。
[0130] HB-EGF治愈具有咽鼓管閉塞的慢性鼓膜穿孔。創(chuàng)建慢性TM穿孔和ET閉塞的動(dòng)物模 型，如圖3中所顯示的?，F(xiàn)有ET閉塞大鼠模型（參見Herda等 經(jīng)改造適合用于小鼠 ，并且從此已在 80 只活小鼠中得以成功地進(jìn)行。利用上述慢性穿孔 模型進(jìn)行ET閉塞。這在3個(gè)月時(shí)產(chǎn)生濕的無菌排孔。該模型模擬與ET功能障礙組合的慢性穿 孔的人病狀。
[0131]當(dāng)用40μ1濃度為5μg/ml(經(jīng)由生物可吸收性聚合物殼聚糖的緩釋劑量）的重組HB-EGF治療一個(gè)組群的具有該模型(慢性穿孔和ET閉塞）的小鼠時(shí)，在6周時(shí)，相較于對(duì)照(僅聚 合物）的對(duì)照的9% (23只中的2只），94% (19只中的18只）愈合(p〈0.01)。愈合的或未愈合的 慢性TM穿孔的代表性圖像示于圖4中。在組織學(xué)上，相較于即使在閉合發(fā)生的那些少數(shù)情況 下也不存在解質(zhì)形成細(xì)胞層的對(duì)照，穿孔被厚的角質(zhì)形成細(xì)胞層閉合。在中耳積液和ET閉 塞存在的情況下使用HB-EGF激活EGFR胞外結(jié)構(gòu)域配體脫落來克服TM慢性合口愈合中的該 關(guān)鍵步驟的能力用于治療具有慢性鼓膜穿孔的患者。
[0132] 在慢性化膿性中耳炎的動(dòng)物模型進(jìn)行測(cè)試。在創(chuàng)建具有ET閉塞的慢性穿孔模型 后，將銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) (6 X IO9菌落形成單位/ml的劑量)通過現(xiàn) 有慢性穿孔接種至中耳中。在2周時(shí)，收集耳液，并將其送去進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，以 確認(rèn)細(xì)菌的存在。該最性PCR驗(yàn)證了 CSOM模型。
[0133] 隨后將小鼠分成兩個(gè)組群。一個(gè)組群只接受聚合物。另一組群接受聚合物和5yg/ ml (用于上述模型的相同劑量）的HB-EGF。相較于對(duì)照組中的41 % (7/17)，100 % (16只中的 16只）的HB-EGF組愈合(p〈0.01)。在對(duì)照組中，當(dāng)愈合確實(shí)發(fā)生時(shí)，其也是不同的。TM通常非 常薄，并且相較于稍微有點(diǎn)不透明的正常TM是半透明的。HB-EGF組中的愈合表現(xiàn)正常。仍然 使用HB-EGF激活與人CSOM最接近的模型中的EGFR胞外結(jié)構(gòu)域配體來克服TM慢性傷口愈合 中的該關(guān)鍵步驟的能力驗(yàn)證了治療方法。
[0134] 實(shí)施例3
[0135] 經(jīng)鼓膜遞送法（圖5、6和7)。將用于HB-EGF或HB-EGF遞送的媒介物緊貼鼓膜或通過 鼓膜插入(經(jīng)外耳道或經(jīng)由咽鼓管）。其可在一段時(shí)間后被除去，或可以是可生物降解的。媒 介物可含有將其約束在鼓膜內(nèi)的設(shè)計(jì)。這可以是圈、羅口、凸緣、凹槽或?qū)挾然蚋叨鹊娜魏?變化。其可具有不止一個(gè)這些設(shè)計(jì)來將其保持在適當(dāng)?shù)奈恢?。媒介物可被穿孔或具有任?適當(dāng)?shù)某叽绲膬?nèi)腔。可存在許多凸緣或被認(rèn)為是足夠的或過量的對(duì)于待保留在鼓膜中的媒 介物是所需的寬度和尺寸的任何寬度和尺寸。
[0136] 圖5中描繪的是耳道100;外耳110;和鼓膜120。還描繪了跨膜藥物遞送裝置125,其 具有寬度130和長(zhǎng)度140。
[0137] 圖6中描繪的是可選的經(jīng)鼓膜遞送裝置126的替代實(shí)施方案。裝置具有寬度131和 長(zhǎng)度141。裝置126包括外部約束150和內(nèi)部約束155的一個(gè)或兩個(gè)，其中該約束具有寬度 160〇
[0138] 圖7A-7B中描繪的是經(jīng)鼓膜遞送裝置127的另一個(gè)實(shí)施方案。圖7A是顯示耳道100 和鼓膜120的頂視圖。遞送裝置127具有寬度132和長(zhǎng)度142。裝置包含多個(gè)沿著裝置縱向排 列的凸緣170,凸緣具有長(zhǎng)度171和寬度172。圖7B描繪裝置的橫截面。
[0139] 實(shí)施例4
[0140] 鼓室內(nèi)遞送裝置
[0141]可將生長(zhǎng)因子遞送裝置置于鼓膜的層之間。如果是固體媒介物，可通過將一個(gè)或 多個(gè)層提升為翼片，隨后在放置后替換翼片來放置其。如果是液體，則可注射其。
[0142] 圖8中描繪的是鼓膜內(nèi)遞送裝置128。該裝置被插入在鼓膜120中。裝置具有寬度 133和長(zhǎng)度143。
[0143] 實(shí)施例5
[0144] 將媒介物以固體物體形式緊鄰鼓膜放置（圖9)?？蓪⒚浇槲锞o貼鼓膜并且提供HB-EGF或HB-EGF抑制劑的本地源。將媒介物置于中間或側(cè)面，部分或全部通過鼓膜。通過鼓膜 的媒介物可比穿孔(如果存在的話)更小，更大或與其具有相同的尺寸。
[0145] 圖9中描繪的是靠近鼓膜120的生長(zhǎng)因子遞送裝置128。裝置具有寬度134和長(zhǎng)度 144〇
[0146] 實(shí)施例6
[0147] 生長(zhǎng)因子施用的注射方法示于圖10中。可將包含生長(zhǎng)因子的制劑200遞送進(jìn)耳道 100以在其側(cè)表面和/或近中面上與鼓膜120接觸，并且還可流進(jìn)鼓膜穿孔121的區(qū)域?？蓮?注射器210通過遞送管220分配制劑?？梢砸詥我蝗芤旱姆绞剑蛞栽谶f送時(shí)混合的兩部分 溶液的方式提供制劑。
[0148] 雙腔注射器在本領(lǐng)域已知的并且和是可容易獲得的，例如除其它以外見： Lyo-Jecttg;雙腔注射器；或美國(guó)專利第5，971，953號(hào)、美國(guó)專利申請(qǐng)第US20030040701、 US20140012196、US 20130060232號(hào)、國(guó)際申請(qǐng)W01999017820A1 等中的任一個(gè)。
[0149] 此類制劑包括在混合物后變得更加粘稠或固態(tài)的組合物。致粘劑包括，但不限于， 結(jié)冷膠、N-異丙基丙烯酰胺與丙烯酸鈉和n-N-烷基丙烯、聚丙烯酸與聚乙二醇、聚甲基丙烯 酸與聚乙二醇、CARBOPOL?與羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸氫醋酸纖維素乳液、海藻 酸鈉或、反向熱固性膠諸如泊洛沙姆或泊洛沙胺。
[0150] 可將此類制劑以液體狀態(tài)（即，可流動(dòng)形式)遞送至鼓膜的外表皮表面。然而，施用 后，組合物轉(zhuǎn)化成固體狀態(tài)，以便組合物與鼓膜保持接觸。因此，組合物保持局部緊貼鼓膜， 并且藥物試劑可轉(zhuǎn)移至鼓膜。粘性或固體組合物可以是可生物降解的或不可生物降解的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種在個(gè)體中改善慢性鼓膜穿孔的愈合的方法，所述方法包括： 將慢性鼓膜穿孔的部位與包含有效劑量的提供肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)活性 的試劑接觸，持續(xù)足以基本上閉合所述穿孔的一段時(shí)間。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中提供HB-EGF活性的試劑是HB-EGF蛋白的可溶性形 式。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述個(gè)體是人，并且所述HB-EGF是人HB-EGF。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將包含有效劑量的HB-EGF的制劑與所述受累鼓膜 接觸，持續(xù)至少7天的時(shí)期。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將包含有效劑量的HB-EGF的制劑與所述受累鼓膜 接觸，持續(xù)至少2周的時(shí)期。6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中至少每天施用一次所述制劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中所述制劑提供所述HB-EGF的持續(xù)釋放。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以水溶液、凝膠、洗劑、香膏、糊劑或其它媒介物形 式提供所述制劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中通過噴霧施用所述組合物。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以液體形式施用組合物，所述組合物隨后固化以 停留在所述鼓膜附近。11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述制劑是包含交聯(lián)的殼聚糖與聚交酯的共聚物 的持續(xù)釋放凝膠。12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述持續(xù)釋放凝膠還包含血纖蛋白原。13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中通過提供所述HB-EGF的持續(xù)釋放的裝置遞送所述 制劑。14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述制劑還包含至少一種另外的活性劑。15. -種藥物制劑，其包含有效劑量的用于權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法中的HB- EGF〇16. 具有HB-EGF活性的試劑在制造用于治療TM的慢性穿孔的藥物中的用途，其中以足 以實(shí)現(xiàn)所述穿孔的閉合的一段時(shí)間和劑量向具有TM的慢性穿孔的患者施用所述藥物。17. -種在個(gè)體中抑制鼓膜穿孔的愈合的方法，所述方法包括： 將鼓膜穿孔的部位與包含有效劑量的抑制HB-EGF活性的試劑的制劑接觸。18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其還包括在所述接觸步驟之前在所述鼓膜中產(chǎn)生穿 孔的步驟。19. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述個(gè)體是人。20. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中以水溶液、凝膠、洗劑、香膏、糊劑或其它媒介物 形式提供所述制劑。21. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中以液體形式施用所述組合物，所述組合物隨后固 化以在停留在所述鼓膜附近。22. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述制劑是包含交聯(lián)的殼聚糖與聚交酯的共聚 物的持續(xù)釋放凝膠。23. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述持續(xù)釋放凝膠還包含血纖蛋白原。24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中通過提供所述HB-EGF抑制劑的持續(xù)釋放的裝置遞 送所述制劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于通過調(diào)節(jié)HB-EGF活性產(chǎn)生或治療慢性鼓膜穿孔的組合物和方法。在本發(fā)明的方法中，將慢性穿孔的鼓膜與有效劑量的肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子HB-EGF或具有HB-EGF活性的試劑局部接觸足以提供改善的膜穿孔的愈合的一段時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，在持續(xù)釋放制劑中提供HBEGF的劑量；在其它實(shí)施方案中，提供非持續(xù)釋放制劑的定期施用。在一些實(shí)施方案中，持續(xù)釋放制劑是可生物降解的。在其它實(shí)施方案中，通過裝置例如泵或其它釋放裝置提供持續(xù)釋放。
【IPC分類】A61K38/18
【公開號(hào)】CN105555296
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480034653
【發(fā)明人】彼得·盧克·桑塔·瑪利亞, 云志·彼得·楊, 金圣宇, 克洛伊·多明維爾-劉易斯
【申請(qǐng)人】小利蘭·斯坦福大學(xué)托管委員會(huì)
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2014年4月9日
【公告號(hào)】CA2912411A1, EP2996709A2, US20160074476, WO2014186075A2, WO2014186075A3