用于鼓膜愈合的肝素結(jié)合表皮生長因子活性的調(diào)節(jié)的制作方法
【專利說明】用于鼓膜愈合的肝素結(jié)合表皮生長因子活性的調(diào)節(jié)
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 鼓膜(TM)穿孔最常見地因中耳炎或創(chuàng)傷而產(chǎn)生。臨床上，TM穿孔的最常見表現(xiàn)是 傳導(dǎo)性聽覺喪失和慢性感染。TM穿孔的最常見原因是感染。與非復(fù)雜型急性中耳炎相關(guān)的 穿孔通常很小;一旦感染消退后大部分自行愈合。另外，大的穿孔可由引起壞死的生物體感 染引起。耳的創(chuàng)傷是TM穿孔的其它主要原因。損傷的常見原因?yàn)殁g性與穿透性創(chuàng)傷、快速氣 壓變化(氣壓傷)和過度聲壓。
[0003] 損傷后，已知組織經(jīng)歷愈合的幾個階段。雖然鼓膜的傷口愈合包括與常規(guī)皮膚愈 合相似的最初的止血和發(fā)炎階段，但鼓膜增殖和移行階段與其它組織的增殖和移行階段截 然不同。在大多數(shù)傷口愈合情形中，肉芽組織床形成，其用作在其上發(fā)生上皮再形成的平 臺。在鼓膜的愈合中，這些事件以相反的方式發(fā)生。鱗狀上皮層最初形成橫跨傷口的橋，只 有這樣隨后才進(jìn)行纖維組分的再形成。TM是獨(dú)特的，因?yàn)楸砥釉谝菩兄衅鹬陵P(guān)重要的 起始作用，基底增殖層控制該過程。
[0004] 大多數(shù)鼓膜穿孔自發(fā)愈合;然而，許多因素可延緩或阻止閉合，從而導(dǎo)致慢性穿 孔。持久性穿孔通常在削弱修復(fù)過程的持續(xù)感染的背景中發(fā)生。在這些情況下，膜的再生性 愈合過程被阻撓，從而阻止趨化作用和隨后橫跨傷口的上皮移行。在組織學(xué)上，在慢性穿孔 中，鱗狀上皮在穿孔邊緣之上生長至接觸TM的中間粘膜層。
[0005] 用于慢性TM穿孔的治療將慢性中耳炎的治療或預(yù)防以及聽力的恢復(fù)包括作為目 標(biāo)。常規(guī)療法包括組織移植瓣的使用，例如用于鼓室成形術(shù)的自體移植可使用顳肌膜作為 自體移植物?？墒褂糜赡z原基質(zhì)中的成纖維細(xì)胞組成的顳淺筋膜。盡管利用自體結(jié)締組織 移植物的鼓室成形術(shù)是用于持久性TM穿孔的修復(fù)的高度成功的方法，但可有益地開發(fā)不需 要顯微手術(shù)技能，不太昂貴并且可在診室環(huán)境中應(yīng)用的方法。本發(fā)明解決了此需求。
[0006] 出版物
[0007] Santa Maria等（2010)J MolHistol.2010年12月；41(6):309-14.Santa Maria (2011)Thesis,University of Western Australia0Johnson和Wang(2013)J Control Release 166(2) = I^d-Hshihara等（2003)J Biomed Mater Res A.64(3) JSUc3Tolino 等（2011)BiochimBiophysActa.1810(9):875-8;Shirakata等（2005)J Cell Sci·I18(Pt 11):2363-70;Hiittenbrink(2005)HN0 53(6):515-6;Ma等（2002)Acta0tolaryngol.122 (6):586-99〇W0 2007/037514〇US 2010/0222265
[0008] 發(fā)明概述
[0009]提供了用于治療慢性鼓膜穿孔的組合物和方法。在本發(fā)明的方法中，將慢性穿孔 的鼓膜與有效劑量的肝素結(jié)合表皮生長因子HB-EGF或具有HB-EGF活性的試劑局部接觸足 以提供改善的膜穿孔的愈合的一段時間。在一些實(shí)施方案中，在持續(xù)釋放制劑中提供HB-EGF的劑量;在其它實(shí)施方案中，提供非持續(xù)釋放制劑的定期施用。在一些實(shí)施方案中，持續(xù) 釋放制劑是可生物降解的。在其它實(shí)施方案中，通過裝置例如栗或其它釋放裝置提供持續(xù) 釋放。
[0010]將待處理的TM與HB-EGF接觸足以改善TM穿孔的愈合（即導(dǎo)致穿孔的基本上閉合， 例如達(dá)到面積小于約0.1mm2的穿孔）的一段時間。閉合可通過目視(包括利用顯微）、通過功 能（例如聽力損失的減少）等來監(jiān)測；與HB-EGF接觸的時期可以是至少1天、至少3天、至少5 天、至少7天、至少10天、至少2周、至少3周;并且可根據(jù)個體的需要達(dá)到1天、達(dá)到3天、達(dá)到5 天、達(dá)到7天、達(dá)到10天、達(dá)到2周、達(dá)到3周或更長時間。
[0011] 在某些具體實(shí)施方案中，在無耳毒性持續(xù)釋放制劑例如凝膠、泡沫、插入物等，優(yōu) 選地可生物降解制劑中提供有效劑量的HB-EGF。在一個此類實(shí)施方案中，在包含殼聚糖、聚 乳酸和血纖蛋白原的凝膠中配制有效劑量的HB-EGF。
[0012] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包括這樣的方法，該方法(i)鑒定具有TM的慢性穿孔的 患者；（i i)將受累TM與有效劑量的HB-EGF (例如，以液滴的一些（以合適的間隔施用的）、以 用于HB-EGF的持續(xù)釋放的裝置、以持續(xù)釋放制劑等提供的）接觸;和（iii)監(jiān)測個體以確定 穿孔的有效閉合的方法。
[0013]本發(fā)明的另一個方面涉及具有HB-EGF活性的試劑在制造用于治療TM的慢性穿孔 的藥物中的用途，其中以足以實(shí)現(xiàn)穿孔閉合的一段時間和劑量向具有TM的慢性穿孔的患者 施用該藥物。
[0014] 本發(fā)明的另一個方面提供了用于治療TM的慢性穿孔的試劑盒。試劑盒包括例如以 滴劑、裝置、制劑等形式提供有效劑量的HB-EGF的制劑。試劑盒還包括遞送裝置，例如用于 制劑的遞送的滴耳器、注射器、用于遞送兩部分制劑的雙筒注射器等。試劑盒還可包括使用 說明書。
[0015] 在其它實(shí)施方案中，提供了用于鼓膜的臨時打開，例如以進(jìn)行管的插入等的方法。 在此類實(shí)施方案中，將TM與有效劑量的HB-EGF抑制劑，包括但不限于EGFR配體脫落的抑制 劑接觸，進(jìn)行足以在TM中產(chǎn)生小穿孔的一段時間。在一些此類實(shí)施方案中，可機(jī)械地產(chǎn)生小 穿孔，隨后與抑制劑接觸。
[0016] 附圖簡述
[0017]圖1.在(a)第2天、（b)第14天、（C)第44天、⑷第90天(3個月）利用0SU8-1(EGFR配 體脫落的抑制劑)處理的穿孔后TM的代表性圖像。以藍(lán)色描畫穿孔的輪廓。
[0018]圖2.在于9只小鼠中對兩個鼓膜進(jìn)行手術(shù)穿孔后60天測量ABR和DPOAE閾值。一只 耳朵未進(jìn)行注射(對照），然而將相對的耳朵充滿殼聚糖、血纖蛋白原和聚交酯的聚合物遞 送媒介物。
[0019]圖3.在利用杜仲膠阻塞之前(a)和之后(b)的ET。通過使用具有0.5mm的鉆孔器的 雕刻裝置打開大皰(bulla)來適應(yīng)大鼠中的操作。側(cè)邊打開大皰允許杜仲膠在較少氣道收 縮的情況下下供ET。死后檢查ET，從而確認(rèn)完全阻塞。
[0020] 圖4.ET阻塞的小鼠模型中的慢性穿孔的GF治療。頂行(a)是顯示愈合的穿孔的處 理組的代表性圖像。底行(b)是顯示持久性穿孔(藍(lán)色輪廓）的對照(僅聚合物）的代表性圖 像。注意:頂圖中的一些TM已愈合且具有鼓室硬化。
[0021] 圖5.經(jīng)鼓膜生長因子遞送。
[0022]圖6.經(jīng)鼓膜生長因子遞送。
[0023]圖7.經(jīng)鼓膜生長因子遞送。
[0024]圖8.鼓室內(nèi)生長因子遞送。
[0025]圖9.鄰近鼓膜的藥物遞送媒介物。
[0026] 圖10.可流動的藥物遞送制劑。
[0027] 當(dāng)與附圖結(jié)合起來時，通過參考下列詳細(xì)描述將更好地理解本發(fā)明的特性和許多 其它有利方面。
[0028]實(shí)施方案的詳述
[0029] 在進(jìn)一步描述主題發(fā)明之前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于下述發(fā)明的特定實(shí)施方案，如 可產(chǎn)生特定實(shí)施方案的變型并且其仍然落在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。應(yīng)理解，所使用的術(shù) 語是為了描述特定實(shí)施方案的目的，并且不旨在限制。在本說明書和所附權(quán)利要求書中，除 非上下文另外清楚地指明，否則單數(shù)形式"一個(a)"、"一種(an)"和"所述/該(the)"包括復(fù) 數(shù)指示物。
[0030] 當(dāng)提供數(shù)值范圍時，要理解的是，該范圍的上限和下限之間的每個居間數(shù)值(至下 限單位的十分之一，除非本文另外清楚地規(guī)定）以及該范圍內(nèi)的任意其它所述或居間的數(shù) 值都包括在本發(fā)明中。這些較小范圍的上限和下限可被獨(dú)立地包含在該較小的范圍內(nèi)，并 也被涵蓋在本發(fā)明內(nèi)，受制于在規(guī)定范圍中明確排除的限值。在該規(guī)定的范圍包含該限值 中的一個或二個的情況下，排除所包含的限值中的任一個或兩個的范圍也包括在本發(fā)明 內(nèi)。
[0031] 除非另外限定，否則本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。盡管在實(shí)踐或測試本發(fā)明中能使用與本文描述的那些 方法和材料相似或等同的任何方法和材料，但是現(xiàn)在描述舉例說明性方法、裝置和材料。
[0032] 本文中提及的所有出版物為了描述和公開在出版物中描述的本發(fā)明的主題組分 的目的通過引用并入本文，可將組分與現(xiàn)在描述的發(fā)明結(jié)合使用。
[0033] 本發(fā)明已根據(jù)由本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)或提出的包含用于實(shí)踐本發(fā)明的優(yōu)選模式的特定 實(shí)施方案進(jìn)行了描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，根據(jù)本公開，可在不背離本發(fā)明的預(yù)期范圍 的情況下在例舉的實(shí)施方案中進(jìn)行許多修改和變化。例如，由于出于生物功能等同性考慮， 可在種類或量上在不影響生物作用的情況下對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改變。所有此類修改旨在包 含在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
[0034] 定義
[0035] 本說明書中使用的術(shù)語通常具有它們在本領(lǐng)域中，本發(fā)明的上下文中和在其中使 用每一個術(shù)語的具體上下文中的普通含義。在下文中或本說明書中的其它地方面描述了某 些術(shù)語，以在描述本發(fā)明的組合物和方法以及如何產(chǎn)生和使用它們中提供另外的指導(dǎo)。
[0036] 受試者。利用本發(fā)明的方法進(jìn)行治療的個體可來自任何哺乳動物或禽類物種，包 括人。非人動物包括，但不限于，哺乳動物、實(shí)驗(yàn)室動物諸如小鼠、大鼠、兔、倉鼠、豚鼠、南美 栗鼠等;家養(yǎng)動物諸如狗和貓;和農(nóng)場動物諸如綿羊、山羊、豬、馬和牛。本發(fā)明的非人類動 物可以是哺乳動物或非哺乳動物的動物;脊椎動物或無脊椎動物。
[0037]本文中的受試者的"治療(Treatment)"或"治療(treating)"受試者的疾病或病狀 意指減少或減輕疾病或病狀諸如慢性TM穿孔的臨床癥狀。
[0038] 〃促進(jìn)"、"增強(qiáng)"或"改善"鼓膜或傷口愈合通常意指增加傷口或穿孔愈合的速度或 在傷口或穿孔愈合過程中或之后減小殘留疤痕或瘢痕疙瘩或壞死組織的程度。
[0039] "傷口"是器官或組織，包括上皮、結(jié)締組織和肌肉組織的結(jié)構(gòu)的斷裂或中斷。傷口 的實(shí)例包括，但不限于，皮膚創(chuàng)傷、跌打損傷、潰瘍、褥瘡、擦傷、撕裂、割傷、刺傷、牛皮癬傷 口、鼓膜穿孔、角膜擦傷以及斷裂和燒傷。
[0040] "局部"施用是指對傷口表面進(jìn)行的活性成分的非全身性局部給藥。
[0041] 鼓膜。鼓膜是在人和其他哺乳動物中將外耳與中耳隔開的薄的錐形膜。其功能是 將聲音從空氣傳遞至中耳內(nèi)的聽小骨，隨后傳遞至充滿液體的耳蝸中的卵圓窗。因此，其最 終將空氣中的振動轉(zhuǎn)換成液體中的振動并將其放大。錘骨橋接鼓膜與其它聽小骨之間的間 隙。
[0042] 鼓膜有兩個普遍區(qū)域:松馳部和緊張部。松弛部由兩層組成，是相對脆的，并且與 咽鼓管功能障礙和膽脂瘤相關(guān)聯(lián)。較大的緊張部區(qū)域由皮膚、纖維組織和粘膜三層組成。其 是比較結(jié)實(shí)的，并且是最常見地與穿孔相關(guān)聯(lián)的區(qū)域。
[0043] TM的破裂或穿孔可由多種創(chuàng)傷、感染等造成。TM的穿孔可導(dǎo)致范圍從可忽略不計 至50分貝的傳導(dǎo)性聽覺喪失（CHL)。穿孔可以在面積和位置（例如前部、后部或兩者）上變 化;并且在面積上從約0.1 mm2變化至約60mm2,通常在約2.5mm2至IOmm2的范圍內(nèi)（見Mehta等 (2006)0tol Neurotol.27(2): 136-143)。穿孔可以是急性或慢性的。通常不治療急性穿孔， 因?yàn)門M通常自愈。然而，在一些個體中，TM不愈合，從而導(dǎo)致慢性穿孔。
[0044] 鼓膜的慢性穿孔。在治療不存在的情況下或當(dāng)通過常規(guī)方法(例如，利用抗生素治 療)治療時不愈合的穿孔，可被認(rèn)為是慢性穿孔。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，個體間愈合所需 的時間長度可以不同，但通常地在達(dá)到約3個月后，在達(dá)到約2個月后，在達(dá)到約1個月后不 愈合的穿孔可被分類為慢性病狀。
[0045] 慢性或非愈合傷口是在合理時間量內(nèi)未能形成上皮和閉合的開放性創(chuàng)傷。這些傷 口在臨床上停滯，并且沒有進(jìn)一步閉合的證據(jù)。慢性傷口可被認(rèn)為缺乏適當(dāng)?shù)?起始"信號。 (參見，例如，Lorenz和Longaker，在Wounds :Biology ,Pathology ,and Management，第