[0050] 優(yōu)選地，所述化療藥物與多膚-PEG-陽納米膠束通過物理作用相結(jié)合。
[0051] 優(yōu)選地，所述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束的粒徑為lO-lOOnm;進一步優(yōu)選為 10-SOnm;更優(yōu)選為 15-30nm。
[0052] 具體地說，一種多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束，由聚乙二醇化憐脂(PEG-PE)、上 述癌癥祀向性多膚和化療藥物自組裝形成，所述癌癥祀向性多膚是能夠與表達或過量表達 趨化因子受體CXCR4的癌癥細胞或癌癥組織祀向結(jié)合的多膚。
[0053] 優(yōu)選地，所述的化療藥物選自阿霉素、柔紅霉素、紫杉醇或多西他賽中的一種或幾 種;進一步優(yōu)選為阿霉素和/或紫杉醇;更優(yōu)選為阿霉素。
[0054] 上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束，其中：
[0055] 優(yōu)選地，所述聚乙二醇化憐脂(PEG-PE)、癌癥祀向性多膚和化療藥物的摩爾比為 20~100:0.1~100:0.1~100,進一步優(yōu)選摩爾比為20~50:0.1~100:0.1~30;更優(yōu)選摩 爾比為20:5:0.1、20:5:1.5、20:5:2、20:2:0.6或20:5:8。
[0056] 優(yōu)選地，上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束為溶液形式或凍干形式。
[0057] 本發(fā)明還提供上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束的制備方法，包括如下步驟：
[0058] 分別制備PEG-PE分子溶液、多膚分子溶液和化療藥物分子溶液;將PEG-PE分子溶 液、多膚分子溶液和化療藥物分子溶液混勻，溫育，靜置，獲得多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥 膠束(即PEG-PE膠束包載多膚和化療藥物的聯(lián)合載藥膠束溶液）。
[0059] 優(yōu)選地，上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束的制備方法，包括如下步驟：
[0060]分別制備PEG-PE分子溶液、多膚分子溶液和化療藥物分子溶液；
[0061 ]將PEG-PE分子溶液和多膚分子溶液混勻、解育、靜置，獲得多膚-PEG-TO納米膠束 溶液;進一步優(yōu)選地，所述溶液中聚乙二醇化憐脂(PEG-PE)分子和癌癥祀向性多膚分子的 摩爾比為4~20:1，例如可W是20:1、10:1、5:1、4:1;
[0062] 將化療藥物分子溶液與上述多膚-PEG-TO納米膠束溶液混勻，再次解育、靜置;得 多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束溶液（即"多膚-PEG-PE-化療藥物納米膠束溶液"，或稱 "PEG-陽膠束包載多膚和化療藥物的聯(lián)合載藥膠束溶液"）；進一步優(yōu)選地，所述溶液中所述 聚乙二醇化憐脂(PEG-PE)、癌癥祀向性多膚和化療藥物的摩爾比為20~100:0.1~100:0.1 ~100，進一步優(yōu)選摩爾比為20~50:0.1~100:0.1~30;更優(yōu)選摩爾比為20:5:0.1、20:5: 1.5、20:5:2、20:2:0.6或20:5:8。
[0063] 上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束的制備方法，其中：
[0064] 優(yōu)選地，制備PEG-PE分子溶液、多膚分子溶液和化療藥物分子溶液的溶劑為憐酸 鹽緩沖液（即PBS溶液）、徑乙基贓嗦乙硫橫酸緩沖液、生理鹽水或無菌超純水中的任意一 種;更優(yōu)選為憐酸鹽緩沖液(即PBS溶液）；
[00化]優(yōu)選地，將上述聚乙二醇化憐脂(PEG-PE)分子配制成2-20mg/mL溶液;將上述癌癥 祀向性多膚分子配制成l-5mg/mL溶液;將上述化療藥物配制成0.05-2mg/mL溶液；
[0066] 優(yōu)選地，所述解育溫度為20~60°C，解育時間為10~60min;進一步優(yōu)選地，所述解 育溫度為40~55°C，解育時間為20~30min。
[0067] 優(yōu)選地，所述靜置為室溫(一般15-25°C)靜置2~24小時。
[0068] 優(yōu)選地，上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束的制備方法還進一步包括將靜置后 所得多膚-PEG-PE-化療藥物納米膠束溶液除菌的步驟，進一步優(yōu)選地，所述除菌為將靜置 后所得多膚-PEG-PE-化療藥物納米膠束溶液用0.22皿濾膜過濾。
[0069] 根據(jù)需要，上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束的制備方法還進一步包括將除菌 后的多膚-PEG-PE-化療藥物納米膠束溶液進行凍干，制備多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束 凍干粉的步驟。
[0070] 進一步優(yōu)選地，所述凍干包括向所得除菌后的多膚-PEG-PE-化療藥物納米膠束溶 液中添加一定量的凍干保護劑;所述凍干保護劑優(yōu)選為甘露醇，例如濃度為0.01~〇.2g/mL 的甘露醇。
[0071] 本發(fā)明所述聚乙二醇化憐脂(PEG-PE)可由現(xiàn)有常規(guī)技術制備。
[0072] 本發(fā)明中，所述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束也稱"多膚-PEG-PE-化療藥物納 米膠束"，或稱"PEG-陽膠束包載多膚和化療藥物的聯(lián)合載藥膠束"，或稱"多膚-PEG-PE-化 療藥物聯(lián)合載藥膠束"例如，巧5-PEG-陽-Dox聯(lián)合載藥膠束"。
[0073] 本發(fā)明還包括上述多膚納米膠束、上述多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束W及上述 制備方法所制備的多膚納米膠束、多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束在制備治療癌癥藥物中 的應用；優(yōu)選地，在制備抑制癌癥轉(zhuǎn)移藥物中的應用；進一步優(yōu)選地，在制備抑制與表達或 過量表達趨化因子受體CXCR4的癌癥細胞或癌癥組織相關的癌癥轉(zhuǎn)移藥物中的應用。
[0074] 優(yōu)選地，所述與表達或過量表達趨化因子受體CXCR4的癌癥細胞或癌癥組織相關 的癌癥包括乳腺癌、白血病、淋己瘤、膀脫癌或肝癌中的任意一種;進一步優(yōu)選地，為乳腺癌 或肝癌。
[0075] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0076] 本發(fā)明所述多膚納米膠束（即多膚-PEG-TO納米膠束）、多膚和化療藥物聯(lián)合的載 藥膠束具有提高多膚在鹽溶液中溶解性的能力，且增強了其生物穩(wěn)定性;提高了多膚和祀 點的結(jié)合效率。本發(fā)明多膚分子在憐酸緩沖液(PBS)溶液中是不能完全溶解且有肉眼可見 的白色片狀物存在;而多膚-PEG-陽納米膠束在PBS溶液中得到了很好的分散，初始粒徑均 在30nm左右，并且在7化內(nèi)粒徑?jīng)]有發(fā)生明顯改變；同時所得到的多膚和多膚-PEG-陽納米 膠束具有抑制癌癥細胞轉(zhuǎn)移的作用，與單獨的多膚相比，表現(xiàn)出更強的抑制癌癥細胞遷移 的特性。該多膚及多膚-PEG-PE納米膠束可W為抑制癌癥轉(zhuǎn)移和治療癌癥提供可行的方法 和技術。
[0077] 本發(fā)明制得的多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥膠束溶液，經(jīng)透射電子顯微鏡顯示，該 膠束呈球形結(jié)構(gòu)，粒徑較均一，如圖10所示;粒徑測定顯示，所制備的膠束粒徑分布在10~ 30nm，如圖11所示。
[0078] 化療藥物阿霉素(Dox)是一種周期非特異性抗癌化療藥物，臨床上主要用于治療 急性淋己細胞白血病、急性粒細胞性白血病、乳腺癌、肺癌和肝癌等，由于阿霉素化OX)相對 分子量低，在體內(nèi)容易擴散，組織分布特異性差，對正常組織產(chǎn)生毒副作用，并且影響抗腫 瘤作用；祀向CXCR4的多膚括抗劑能夠阻斷SDF-1/CXCR4軸信號通路，抑制腫瘤細胞的遷移 能力，但是對腫瘤細胞的殺傷能力有限，而且多膚存在體內(nèi)外穩(wěn)定性差和溶解性差等缺陷； 結(jié)合聚合物型膠束的核殼結(jié)構(gòu)體系，可W實現(xiàn)對多膚和Dox的自組裝，形成核-殼型的納米 復合物，分子的疏水部分組裝成內(nèi)核用于裝載疏水性藥物，而親水性部分則暴露在水相中 構(gòu)成親水性的殼層。本發(fā)明中PEG-PE聚合物膠束引入到含有多膚和Dox的聯(lián)合給藥傳遞系 統(tǒng)制備得到祀向膠束。經(jīng)實驗證實，相比于單獨的化療藥物，該聯(lián)合給藥膠束系統(tǒng)具有更強 的殺傷腫瘤細胞的能力，可顯著提高藥物的治療效果。
[0079] 本發(fā)明中，W乳腺癌和肝癌細胞為模型，采用MTS法考察游離藥物(Dox)、單一膠束 (多膚-PEG-陽或者Dox-PEG-陽）和聯(lián)合膠束（多膚-PEG-PE-Dox)對腫瘤細胞的生長抑制情 況，并W市售的CXCR4小分子非膚類括抗劑AMD3100作為多膚的對照實驗組。結(jié)果顯示:聯(lián)合 載藥膠束(多膚-PEG-PE-Dox)對腫瘤細胞的抑制率顯著強于單一膠束、游離藥物和AMD3100 組(如圖12和圖13所示）。
[0080] 本發(fā)明中，細胞內(nèi)吞是包括藥物在內(nèi)的多種物質(zhì)進入細胞的一種重要方式，由于 阿霉素(Dox)自身具有紅色巧光信號，因此可W通過流式細胞技術或者巧光共聚焦顯微技 術考察兩種腫瘤細胞系(MCF-7和H邱G2)對聯(lián)合膠束化5-PEG-PE-Dox)、單一膠束化OX-PEG-PE)和游離藥物(Dox)的攝取情況。從圖14和圖15可W看出，兩種細胞對聯(lián)合載藥膠束的攝 取量要優(yōu)于單一膠束，而單一膠束要優(yōu)于游離藥物。
[0081] 本發(fā)明將具有腫瘤祀向性治療作用的多膚和化療藥物聯(lián)用，制備成腫瘤祀向性多 膚-聚乙二醇化憐脂復合物-化療藥物載藥膠束;所述腫瘤祀向性治療作用的多膚與趨化因 子受體CXCR4特異性結(jié)合，利用CXCR4多膚括抗劑提高藥物對腫瘤組織的祀向滲透能力，利 用聚乙二醇化憐脂膠束提高藥物生物穩(wěn)定性和載藥量，與單獨的化療藥物阿霉素相比，聯(lián) 合載藥膠束表現(xiàn)出更強的抑制腫瘤細胞活力的特性。本發(fā)明的多膚和化療藥物聯(lián)合的載藥 膠束為改善腫瘤治療效果提供可行的方法和技術。
[0082] 本發(fā)明的聯(lián)合載藥膠束的優(yōu)點有:可提高膠束的載藥量，提高多膚和小分子化療 藥物的生物穩(wěn)定性，增加抗腫瘤藥物在腫瘤細胞中的祀向滲透能力和藥物濃度，能有效地 提高腫瘤治療效果。
【附圖說明】
[0083] 附圖是用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具 體實施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
[0084] 圖1為實驗例1中，E5-PEG-PE納米膠束(FITC標記的E5多膚)在PBS溶液中的溶解 度。
[00化]圖2a-2b為實驗例1中，PEG-陽空膠束和E5-PEG-陽納米膠束在PBS溶液中的動態(tài)光 散射粒徑分析。
[00化]圖3a-3b為實驗例1中，PEG-陽空膠束和E5-PEG-陽納米膠束在PBS溶液中的透射電 鏡圖片。
[0087] 圖4a-4b為實驗例2中，F(xiàn)ITC-E5多膚和FITC-E5-PEG-PE納米膠束與MCF-7細胞 CXCR4受體在不同多膚濃度或不同解育時間條件下的親和力檢測。
[008引圖5a-5b為實驗例3中，F(xiàn)ITC-E5多膚和FITC-E5-PEG-PE納米膠束與HepG2細胞 CXCR4受體在不同多膚濃度或不同解育時間條件下的親和力檢測。
[0089] 圖6為實驗例4中，E5多膚和E5-陽G-陽納米膠束對CX化12誘導MCF-7細胞遷移過程 中相關基因表達的抑制作用結(jié)果圖。
[0090] 圖7為實驗例5中，E5多膚和E5-陽G-陽納米膠束對CX化12誘導化pG2細胞遷移過程 中相關基因表達的抑制作用結(jié)果圖。
[0091] 圖8a-加為實驗例6中，E5多膚和E5-陽G-陽納米膠束對CX化12誘導MCF-7細胞遷移 的抑制作用結(jié)果圖。
[0092] 圖9a-9b為實驗例7中，E5多膚和E5-陽G-陽納米膠束對CX化12誘導化pG2細胞遷移 的抑制作用結(jié)果圖。
[0093] 圖IOa-IOb為實驗例8中，陽G-陽空膠束和E5-PEG-PE-DOX納米膠束在PBS溶液中的 透射電鏡圖片。
[0094] 圖11為實驗例8中，E5-PEG-PE-DOX納米膠束在PBS溶液中的動態(tài)光散射粒徑分析。 [00M]圖12a-12c為實驗例9中，游離藥物、單一膠束和聯(lián)合膠束對MCF-7腫瘤細胞的生長 抑制情況。
[0096] 圖13a-13c為實驗例10中，游離藥物、單一膠束和聯(lián)合膠束對化pG2腫瘤細胞的生 長抑制情況。
[0097] 圖14為實驗例11中，MCF-7腫瘤細胞系對游離藥物、單一膠束和聯(lián)合膠束中Dox的 攝取情況。
[0098] 圖15為實驗例8中，胎pG2腫瘤細胞系對游離藥物、單一膠束和聯(lián)合膠束中Dox的攝 取情況。
[0099] 圖16為實施例19中形成聯(lián)合的載藥膠束示意圖。
【具體實施方式】
[0100] W