[0047] 3.體內(nèi)抗瘤活性:將生長(zhǎng)狀態(tài)好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期4T1細(xì)胞，膜酶消化，離屯、收集細(xì)胞， 用生理鹽水將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)成5 X106個(gè)的細(xì)胞，液，在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中，按每只0.2ml細(xì) 胞懸液量接種于Ba化/C小鼠右側(cè)腹部皮下乳頭周圍，共60只。按照分組不同給藥。陰性對(duì)照 組和所有制劑每天給藥1次，連續(xù)給藥28天。第28天處死動(dòng)物，稱體重、瘤重，計(jì)算各組平均 瘤重，求出腫瘤抑制率并進(jìn)行t檢驗(yàn)，優(yōu)選出最佳治療組，結(jié)果見(jiàn)表1。
[004引
[0049] 表1 2-甲氧基雌二醇可注射植入劑的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)
[0050]
[0051] 通過(guò)皮下種植4T1載瘤小鼠藥效學(xué)試驗(yàn)，W 口服生理鹽水為陰性對(duì)照組，由表1可 知，2-ME納米粒微球口服制劑在兩個(gè)劑量下的試驗(yàn)組均具有良好的抗腫瘤效果，高劑量組 的療效明顯高于低劑量組的療效。而其他的2-ME制劑包括靜注納米粒組和口服納米粒組， 口服原料藥微球組腫瘤生長(zhǎng)抑制率均低于40%?？梢?jiàn)，單獨(dú)口服納米?；騿为?dú)口服微球抗 腫瘤效果均較差，而2-ME納米粒微球口服制劑具有顯著的較理想的抗腫瘤效果，說(shuō)明納米 粒和微球的聯(lián)合制備的兩相轉(zhuǎn)運(yùn)體系納米粒微球?qū)?-ME而言是一個(gè)抗腫瘤有效的口服制 劑。
[0052] 本發(fā)明所述的納米粒微球，成固體微球，服用前加水形成混懸液服用，能起到在胃 內(nèi)不釋放，在腸道內(nèi)緩慢的釋放納米粒。本發(fā)明采用具有抑敏感性質(zhì)的聚合物高分子材料 加到徑丙基甲基纖維素 HPMC溶液中，制成噴霧干燥的微球材料溶液。根據(jù)藥物性質(zhì)和特點(diǎn)， 將其制備成納米粒，如固體脂質(zhì)納米粒，脂質(zhì)體，聚合物納米粒等。所制的納米粒加入到微 球材料溶液中噴成微球，可口服給藥。對(duì)于原來(lái)采用常規(guī)制劑口服無(wú)效的原料藥特別適合， 將運(yùn)些原料藥制備成納米粒微球，可W明顯提高其口服利用度，使其口服有效。納米粒微球 主要適合于水難溶性藥物，納米?？蒞提高藥物的水溶解度，可W直接口服給藥，病人可W 自行用藥，服藥方便，病人依從性大大提高，微球的pH敏感性實(shí)現(xiàn)納米粒的腸祀向釋放，避 免在胃中的大量釋放，提高了納米粒腸轉(zhuǎn)運(yùn)的效率，而且微球可緩釋納米粒，實(shí)現(xiàn)納米粒的 緩釋長(zhǎng)效，更重要的是納米粒微球可W實(shí)現(xiàn)納米粒的腸吸收，克服常規(guī)制劑中原料藥的分 子狀態(tài)腸吸收過(guò)程中存在的障礙，如肝首過(guò)效應(yīng)，腸吸收飽和現(xiàn)象，腸外排現(xiàn)象等，提高藥 物的口服生物利用度，改變?cè)瓉?lái)用原料藥制備的常規(guī)制劑口服無(wú)效的現(xiàn)狀，使其口服有效， 并經(jīng)臨床試驗(yàn)，取得了非常滿意的療效，有關(guān)資料如下：
[0053] 臨床對(duì)108例腫瘤患者試用，其中乳腺癌58人、前列腺癌50人，按原有同類抗腫瘤 藥物治療方案進(jìn)行，口服時(shí)，先用溫開(kāi)水溶化成口服液，服用6個(gè)月后統(tǒng)計(jì)療效，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件單因素方差比較分析，P<0.01，比同類藥物提高療效40% W上，有極顯著性差 異，具體結(jié)果如下：
[0054] 癥狀明顯改善者58人，其中乳腺癌32人、前列腺癌26人，占53.7% ;
[0055] 癥狀改善者40人，其中乳腺癌22人、前列腺癌18人，占37%;
[0056] 無(wú)效10人，其中乳腺癌4人、前列腺癌6人，占9.3%，連續(xù)用藥5年W上，平均生命存 活5年W上者70人，2-4年者21人，1年左右者17人，可見(jiàn)本發(fā)明納米粒微球有效改變了原同 類難溶性口服藥物生物利用度低、療效低的問(wèn)題，開(kāi)拓了治療腫瘤藥物的新途徑，具有很強(qiáng) 的實(shí)用性，有顯著的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種提高難溶性藥物口服生物利用度的納米粒微球的制備方法，其特征在于，由以 下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 、在70-85°C，將單硬脂酸甘油酯400-600mg，山崳酸甘油酯100-200mg混合熔融作為 油相； (2) 、將2-ME15_30mg、聚乙二醇-聚已內(nèi)酯100-200mg，溶于2_3ml無(wú)水乙醇中，邊攪拌 邊加熱至70-85°C溶解均勻，加入油相中，攪拌至無(wú)水乙醇完全揮發(fā)，成無(wú)醇混合物油相;所 述的聚乙二醇分子量5000，聚已內(nèi)酯分子量10000; (3) 、在70-85°C、900rpm磁力攪拌下，將大豆卵磷脂200-400mg、吐溫80 100-300mg加水 溶解，制成水相8_12ml，將水相以8-12ml·min4滴加速度滴入無(wú)醇混合物油相中，滴加完 畢，繼續(xù)攪拌4-6min，形成初乳，將初乳以9000-11000rpm的剪切速度剪切2-4min，然后 在功率為350-450W下探頭超聲2-4min，過(guò)0.45μπι的微孔濾膜，得2-ME的固體脂質(zhì)納米 ?；鞈乙?所述的大豆卵磷脂為大豆卵磷脂PC-80,磷脂酰膽堿含量>80%，注射級(jí)； (4) 、將聚丙烯酸樹(shù)脂L100 600-900mg加入pH為4-6的roS溶液100-300ml中，攪拌均勻， 用1111〇1/1的似0!1調(diào)節(jié)?!1為6-7，加入80-1201111質(zhì)量濃度0.5-1.5%的羥丙基甲基纖維素溶液， 用超純水稀釋至500ml，細(xì)紗布過(guò)濾，得微球材料溶液； (5) 按體積比15-25:1，將微球材料溶液與2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙簲嚢杌靹?，噴 霧干燥，即得納米粒微球。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高難溶性藥物口服生物利用度的納米粒微球的制備方法， 其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 、在80°C，將單硬脂酸甘油酯500mg，山崳酸甘油酯100mg混合熔融作為油相； (2) 、將2-ME20mg、聚乙二醇-聚已內(nèi)酯100mg，溶于2.5ml無(wú)水乙醇中，邊攪拌邊加熱至 80°C溶解均勻，加入油相中，攪拌至無(wú)水乙醇完全揮發(fā)，成無(wú)醇混合物油相； (3) 、在80°C、900rpm磁力攪拌下，將大豆卵磷脂400mg、吐溫80 200mg加水溶解，制成水 相10ml，將水相以10ml·min4滴加速度滴入無(wú)醇混合物油相中，滴加完畢，繼續(xù)攪拌5min ，形成初乳，將初乳以l〇〇〇〇rpm的剪切速度剪切3min，然后在功率為400W下探頭超聲3min， 過(guò)0.45μηι的微孔濾膜，得2-ME的固體脂質(zhì)納米粒混懸液； (4) 、將聚丙烯酸樹(shù)脂L100 750mg加入pH為7的PBS溶液200ml中，攪拌均勻，用lmol/L的 NaOH調(diào)節(jié)pH為6.5,加入100ml質(zhì)量濃度1%的羥丙基甲基纖維素溶液，用超純水稀釋至 500ml，細(xì)紗布過(guò)濾，得微球材料溶液； (5) 按體積比15:1，將微球材料溶液與2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙簲嚢杌靹?，噴霧干 燥，即得納米粒微球。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高難溶性口服藥物生物利用度的納米粒微球的制備方法， 其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 、在75°C，將單硬脂酸甘油酯400mg，山崳酸甘油酯120mg混合熔融作為油相； (2) 、將2-ME50mg、聚乙二醇-聚已內(nèi)酯160mg，溶于2ml無(wú)水乙醇中，邊攪拌邊加熱至75 °〇溶解均勻，加入油相中，攪拌至無(wú)水乙醇完全揮發(fā)，成無(wú)醇混合物油相； (3) 、在75°C、900rpm磁力攪拌下，將大豆卵磷脂250mg、吐溫80 140mg加水溶解，制成水 相8ml，將水相以10ml·min4滴加速度滴入無(wú)醇混合物油相中，滴加完畢，繼續(xù)攪拌4min， 形成初乳，將初乳以9000rpm的剪切速度剪切2min，然后在功率為350W下探頭超聲2min， 過(guò)0.45μηι的微孔濾膜，得2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙海? (4) 、將聚丙烯酸樹(shù)脂L100 700mg加入pH為4的roS溶液30ml中，攪拌均勻，用lmol/L的 NaOH調(diào)節(jié)pH為6，加入50ml質(zhì)量濃度1%的羥丙基甲基纖維素溶液，用超純水稀釋至500ml，細(xì) 紗布過(guò)濾，得微球材料溶液； (5) 按體積比20:1，將微球材料溶液與2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙簲嚢杌靹?，噴霧干 燥，即得納米粒微球。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高難溶性口服藥物生物利用度的納米粒微球的制備方法， 其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 、在85°C，將單硬脂酸甘油酯600mg，山崳酸甘油酯200mg混合熔融作為油相； (2) 、將2-ME30mg、聚乙二醇-聚已內(nèi)酯200mg，溶于3ml無(wú)水乙醇中，邊攪拌邊加熱至85 °〇溶解均勻，加入油相中，攪拌至無(wú)水乙醇完全揮發(fā)，成無(wú)醇混合物油相； (3) 、在85°C、900rpm磁力攪拌下，將大豆卵磷脂400mg、吐溫80 300mg加水溶解，制成水 相12ml，將水相以12ml·min4滴加速度滴入無(wú)醇混合物油相中，滴加完畢，繼續(xù)攪拌6min ，形成初乳，將初乳以ll〇〇〇rpm*min-1的剪切速度剪切4min，然后在功率為450W下探頭超 聲4min，過(guò)0.45μηι的微孔濾膜，得2-ME的固體脂質(zhì)納米粒混懸液； (4) 、將聚丙烯酸樹(shù)脂L100 900mg加入pH為5的PBS溶液300ml中，攪拌均勻，用lmol/L的 NaOH調(diào)節(jié)pH為7，加入200ml質(zhì)量濃度1%的羥丙基甲基纖維素溶液，用超純水稀釋至500ml， 細(xì)紗布過(guò)濾，得微球材料溶液； (5) 按體積比15:1，將微球材料溶液與2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙簲嚢杌靹颍瑖婌F干 燥，即得納米粒微球。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高難溶性口服藥物生物利用度的納米粒微球的制備方法， 其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1)、在70°C，將單硬脂酸甘油酯600mg，山崳酸甘油酯150mg混合熔融作為油相； (2 )、將2-ME25mg、聚乙二醇-聚已內(nèi)酯150mg，溶于2.5ml無(wú)水乙醇中，邊攪拌邊加熱至 70°C溶解均勻，加入油相中，攪拌至無(wú)水乙醇完全揮發(fā)，成無(wú)醇混合物油相； (3) 、在70°C、900rpm磁力攪拌下，將大豆卵磷脂300mg、吐溫80 200mg加水溶解，制成水 相11ml，將水相以11ml·min4滴加速度滴入無(wú)醇混合物油相中，滴加完畢，繼續(xù)攪拌6min ，形成初乳，將初乳以ll〇〇〇rpm*min4的剪切速度剪切2min，然后在功率為350W下探頭超 聲4min，過(guò)0.45μηι的微孔濾膜，得2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?； (4) 、將聚丙烯酸樹(shù)脂L100 700mg加入pH為5的PBS溶液150ml中，攪拌均勻，用lmol/L的 NaOH調(diào)節(jié)pH為6.5,加入200ml質(zhì)量濃度1%的羥丙基甲基纖維素溶液，用超純水稀釋至 500ml，細(xì)紗布過(guò)濾，得微球材料溶液； (5) 按體積比25:1，將微球材料溶液與2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙簲嚢杌靹?，噴霧干 燥，即得納米粒微球。6. 權(quán)利要求1或2-5任一項(xiàng)所述方法制備的提高難溶性藥物口服生物利用度的納米粒 微球在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及提高難溶性口服藥物生物利用度的納米粒微球的制備方法及應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有藥物口服生物利用度低，藥效低，毒副作用大，藥物突釋造成胃內(nèi)不適的問(wèn)題，方法是，將單硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯混合熔融作為油相；將2-ME、聚乙二醇-聚已內(nèi)酯溶于無(wú)水乙醇，加入油相中，成混合物油相；將大豆卵磷脂、吐溫80加水溶解，制成水相，將水相滴入混合物油相中，成初乳，過(guò)微孔濾膜，得2-ME的固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?；將聚丙烯酸樹(shù)脂加入PBS溶液中，加入羥丙基甲基纖維素，得微球材料溶液；將微球材料溶液與2-ME的固體脂質(zhì)納米粒混懸液攪拌混勻，噴霧干燥，即得納米粒微球。本發(fā)明提高藥物的口服生物利用度，提高口服有效率。
【IPC分類】A61P35/00, A61K9/16, A61K31/565
【公開(kāi)號(hào)】CN105456200
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510901622
【發(fā)明人】郭新紅, 劉欣, 侯盼盼, 丁芳, 郭曉楠, 陳彩萍, 郭冀民, 李丹
【申請(qǐng)人】鄭州大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2015年12月8日