nm紫外光照射8min，檢測自由基的信號強(qiáng)度。
[0055]相應(yīng)的檢測結(jié)果如圖3所示，從圖3可得知:實(shí)驗(yàn)組中，在羥基化空心富勒烯水溶液濃度僅為20 μΜ時(shí)，即能有效淬滅由紫外光照射雙氧水產(chǎn)生的自由基，保護(hù)細(xì)胞免受雙氧水所產(chǎn)生的自由基的傷害作用。
[0056]2)羥基化空心富勒烯水溶液保護(hù)細(xì)胞免受雙氧水產(chǎn)生自由基的殺傷作用:
[0057]選用小鼠骨髓細(xì)胞(FDC-P1)為所研究對象，其培養(yǎng)基為添加了細(xì)胞因子IL-3的高糖DMEM。將小鼠骨髓細(xì)胞以每孔ca.lxlO4個(gè)的濃度種在96孔板中，種8X6個(gè)孔，陰性對照組，種6個(gè)孔；陽性對照組種6個(gè)孔；實(shí)驗(yàn)組共有7個(gè)不同羥基化空心富勒烯水溶液濃度，每個(gè)濃度均種6個(gè)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。陰性對照組為不加雙氧水和羥基化空心富勒烯水溶液，僅為接種有小鼠骨髓細(xì)胞的培養(yǎng)基；陽性對照組為僅加入10 μ L、30 μ Μ的羥基化空心富勒稀水溶液，不加雙氧水溶液；實(shí)驗(yàn)組為平行加入濃度為100 μ Μ的雙氧水溶液20 μ L、90 μ L的培養(yǎng)基，以及不同濃度的羥基化空心富勒烯水溶液(使其最終濃度分別為0.5 μ Μ、1 μΜ、2.5 μΜ、5 μΜ、10 μΜ、20 μΜ 和 30 μ Μ) ο
[0058]陰性對照組的加樣順序?yàn)?不加雙氧水也不加羥基化空心富勒烯水溶液，均用相
[0059]同體積的PBS代替。陽性對照組的加樣順序?yàn)?雙氧水用同體積PBS代替，小鼠骨
[0060]髓細(xì)胞孵育lh，之后，加入羥基化空心富勒烯水溶液，孵育3h。
[0061]實(shí)驗(yàn)組加樣順序?yàn)?先加入雙氧水和細(xì)胞培養(yǎng)基，和小鼠骨髓細(xì)胞孵育lh，吸出雙氧水溶液，用PBS緩沖液洗三次，洗去殘留的雙氧水溶液；再加入一定濃度的羥基化空心富勒烯水溶液，同時(shí)加入細(xì)胞培養(yǎng)基，和細(xì)胞孵育3h之后，吸去含有羥基化空心富勒烯水溶液的培養(yǎng)基，用PBS緩沖液洗三次；最后加入細(xì)胞培養(yǎng)基，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h，然后用CCK-8檢測細(xì)胞活性。
[0062]相應(yīng)的檢測結(jié)果如圖4所示，從圖4可得知:當(dāng)加入濃度為100 μ Μ的雙氧水溶液20 μ L時(shí)，雙氧水會對小鼠骨髓細(xì)胞產(chǎn)生一定的殺傷作用，隨著羥基化空心富勒烯水溶液的加入量逐漸增加時(shí)，細(xì)胞的活性也隨著有所提升，表明:在細(xì)胞水平上，羥基化空心富勒烯水溶液對于自由基的清除有效果并且可以保護(hù)細(xì)胞不受其影響。同時(shí)，不添加雙氧水，僅僅加入羥基化空心富勒烯水溶液的陽性對照組，其細(xì)胞活性稍高于陰性對照組，表明材料沒有細(xì)胞毒性。
[0063]實(shí)施例3、水溶性羥基化釓金屬富勒烯在活體水平的骨髓抑制保護(hù):
[0064]動物模型:選用4-5周ICR小鼠，將其隨機(jī)分為4組，每組6只，分別對應(yīng)空白對照組、GFNC實(shí)驗(yàn)組、環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組和CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組。在小鼠右側(cè)大腿上接種106個(gè)小鼠肝癌細(xì)胞(Η22細(xì)胞)，接種5-7天后，腫瘤直徑達(dá)到5mm左右時(shí)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0065]空白對照組:實(shí)驗(yàn)組所注射的藥物均用同體積的生理鹽水所代替，靜脈和腹腔均注射同等體積的生理鹽水。
[0066]GFNC實(shí)驗(yàn)組:小鼠尾靜脈注射GFNC水溶液(lmM)，藥物用量為0.004mmol GFNC/kg小鼠體重。
[0067]環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組:小鼠腹腔注射CTX溶液，藥物用量為60mg/kg小鼠體重
[0068]CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組:鼠腹腔注射CTX溶液，藥物用量為60mg/kg小鼠體重，靜脈注射GFNC溶液，藥物用量為0.004mmol GFNC/kg小鼠體重。
[0069]于腫瘤接種后第七天開始是注射藥物，作為開始實(shí)驗(yàn)的第一天，每天一次，連續(xù)5天腹腔注射CTX或靜脈注射GFNC，分別在第四天，第七天，第十天，第十四天和第十七天，從小鼠眼眶取血(20 μ 1)，置于3ml離心管中，用血細(xì)胞自動分析儀檢測血常規(guī)，其中和骨髓抑制相關(guān)的主要指標(biāo)為白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)，血小板計(jì)數(shù)(PLT)，血紅蛋白測定(HGB)，單核細(xì)胞比例(M0% )。
[0070]相應(yīng)的檢測結(jié)果如圖5所示，從圖5可得知:與空白對照組相比，環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組中的小鼠中與骨髓抑制相關(guān)的指標(biāo):白細(xì)胞，血小板，血紅蛋白在小鼠體內(nèi)都有著不同程度的減少，其中以白細(xì)胞的減少最為明顯，其單核細(xì)胞出現(xiàn)了異常的增生現(xiàn)象，也說明其骨髓受到損傷，相關(guān)指標(biāo)都有明顯的異常；而CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組中的小鼠，由于GFNC的保護(hù)作用，其白細(xì)胞，血小板，血紅蛋白的量相較于環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組都有著很大程度的提高，單核細(xì)胞的數(shù)值更接近于正常組，并且隨著時(shí)間的延長，相關(guān)指標(biāo)越來越接近于正常小鼠的值，表明:GFNC對于化療藥物CTX所導(dǎo)致的小鼠骨髓抑制有明顯的保護(hù)效果。
[0071]實(shí)施例4、水溶性羥基化釓金屬富勒烯在活體水平對于化療藥物CTX腫瘤治療效果的影響和毒性實(shí)驗(yàn):
[0072]動物模型:選用4-5周ICR小鼠，將其隨機(jī)分為4組，每組6只，分別對應(yīng)空白對照組、GFNC實(shí)驗(yàn)組、環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組和CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組。在小鼠右側(cè)大腿上接種106個(gè)小鼠肝癌細(xì)胞(H22細(xì)胞)，接種5-7天后，腫瘤直徑達(dá)到5mm左右時(shí)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0073]空白對照組:實(shí)驗(yàn)組所注射的藥物均用同體積的生理鹽水所代替。
[0074]環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組:小鼠腹腔注射CTX溶液，藥物用量為60mg/kg小鼠體重。
[0075]金屬富勒烯衍生物(GFNC)實(shí)驗(yàn)組:小鼠靜脈注射GFNC溶液，藥物用量為0.04mmolGd3+/kg小鼠體重。
[0076]CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組:鼠腹腔注射CTX溶液，藥物用量為60mg/kg小鼠體重，靜脈注射GFNC溶液，藥物用量為0.04mmol Gd3+/kg小鼠體重。
[0077]于腫瘤接種后第七天開始是注射藥物，作為開始實(shí)驗(yàn)的第一天，每天一次，連續(xù)5天腹腔注射CTX或靜脈注射GFNC，每兩天測量小鼠的體重和腫瘤直徑，在第17天，取小鼠摘眼球眼眶取血，置于5ml離心管中，于3500r，離心15min，將得到的血清轉(zhuǎn)移到200 μ L離心管中，在血生化檢測儀中檢測小鼠的血生化指標(biāo)，ALT，ALP, AST，BUN，LDH，UA，脫頸處死小鼠后，取小鼠主要組織器官(心，肝，脾，肺，腎)稱重，泡在4%福爾馬林溶液中，之后做組織病理切片，H&E染色。同時(shí)空白對照組、環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組和金屬富勒烯衍生物(GFNC)實(shí)驗(yàn)組做相同的處理用以對比。
[0078]相應(yīng)的檢測結(jié)果如圖6和7所示，從圖6可得知:與環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組相比，CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組中的小鼠的腫瘤直徑不僅沒有增大，還變小，表明:GFNC不會影響化療藥物CTX對于小鼠腫瘤的治療效果，同時(shí)又可以顯著的抑制化療藥物所導(dǎo)致的骨髓抑制毒性，兩者之間具有協(xié)同作用；從圖7可得知:通過對比不同組的小鼠的體重變化，環(huán)磷酰胺(CTX)實(shí)驗(yàn)組中的小鼠其體重在打藥初期有著明顯的下降，之后由于停止打藥，而靠著小鼠自身的恢復(fù)功能有一定程度的回升，但仍是體重最輕的一組，而CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組中的小鼠，雖然在打藥初期，其體重也略有下降，但是后期明顯恢復(fù)，并且接近于正常小鼠的體重值，說明GFNC可以保護(hù)小鼠盡可能的免于化療藥物所帶來的副作用，保護(hù)小鼠骨髓抑制毒性的同時(shí)，其本身的毒性較小，可以進(jìn)一步用于臨床研究。
[0079]從圖8可得知:CTX+GFNC實(shí)驗(yàn)組所測試得到的酶活性相對于CTX實(shí)驗(yàn)組有一定