一種去甲異波爾定殼聚糖微球及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于殼聚糖微球的制備領(lǐng)域，具體涉及一種去甲異波爾定殼聚糖微球及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 去甲異波爾定是從樟科山胡椒屬植物烏藥a辟?rebate(Sims)Kosterm. 的干燥塊根中分離得到，含量高達1%。近年來對烏藥的抗炎鎮(zhèn)痛的研究發(fā)現(xiàn)，烏藥總生物 堿能夠顯著抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)性足腫脹，對原發(fā)性足腫脹也有抑制趨勢。同時烏 藥總生物堿還能夠減輕小鼠膠原關(guān)節(jié)炎的嚴重程度，減少血清中抗膠原抗體，保護骨關(guān)節(jié) 的損壞，其作用機制是通過阻止脂多糖誘導的RAW264. 7細胞的NF-kB激活和MAPKs磷酸 化而發(fā)揮作用。而去甲異波爾定作為烏藥總堿中的主要活性成分(在烏藥總堿中的含量為 37. 8%)，具有與烏藥總堿相似的藥理作用。去甲異波爾定通過下調(diào)MAPKs信號通路的活性 抑制巨噬細胞的活化和致炎因子的釋放，從而顯著減少RAW264. 7巨噬細胞釋放一氧化氮、 腫瘤壞死因子和白細胞介素-10。但藥動學研究表明，去甲異波爾定的生物利用度僅有 2. 7%，而代謝產(chǎn)物去甲異波爾定-9-0-a-葡萄醛酸苷的血藥濃度大大高于其原型藥物，且 在體內(nèi)停留時間也超過原形藥。去甲異波爾定的動物實驗表明能夠顯著減少關(guān)節(jié)炎小鼠 (CIA)的疾病嚴重程度，保護關(guān)節(jié)受損，減少血清中抗膠原蛋白抗體的含量等，藥理作用明 確且毒副作用小，但由于其自身微溶于水，體內(nèi)代謝迅速、血藥濃度生物利用度低等極大地 限制了它在臨床上的應用。
[0003] 因此如何通過改變劑型來提高去甲異波爾定的生物利用度，減少代謝作用，提高 去甲異波爾定的應用價值成了目前的主要問題。
[0004] 殼聚糖作為一種資源豐富的天然高分子化合物，因其不僅具有良好的生物相容 性、生物黏附性、低毒性、易降解吸收，而且還具有消炎、抗菌、止血、抑制癌細胞轉(zhuǎn)移等大多 數(shù)聚合物所不具有的功能，成為了藥物控釋劑的新熱點。殼聚糖中大量的-0H和-NH2，使其 具有較強的吸附性，易進行化學修飾。通過醛氨縮合反應可以使殼聚糖形成網(wǎng)狀聚合物，從 而降低氨基被質(zhì)子化的幾率，防止殼聚糖使用時的損耗及流失，提高其應用特性，因此殼聚 糖常用于制備微球。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對去甲異波爾定的生物利用度低的問題，提供一種去甲異波 爾定殼聚糖微球及其制備方法。將去甲異波爾定制成殼聚糖微球，能顯著提高去甲異波爾 定的生物利用度、改善口服吸收、延長藥物釋放時間，為去甲異波爾定新劑型的研究和開發(fā) 提供了新的思路。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種去甲異波爾定殼聚糖微球的制備方法，包括以下步驟： 1)先將去甲異波爾定溶于醋酸溶液，然后加入殼聚糖溶脹后超聲脫氣，配制成去甲異 波爾定殼聚糖醋酸溶液； 2) 在圓底燒瓶中加入液體石蠟和乳化劑，攪拌下逐滴加入步驟1)制得的去甲異波爾定 殼聚糖醋酸溶液，40 °C下攪拌乳化0.5h; 3) 逐滴加入交聯(lián)劑，升溫至60°C后，反應5小時；然后用石油醚沖洗干凈，離心分離棄 去上清液，并于30 °C干燥3h得去甲異波爾定殼聚糖微球。
[0007] 步驟1)中醋酸溶液的體積分數(shù)為2%，去甲異波爾定殼聚糖醋酸溶液中殼聚糖的 濃度為10g/L，去甲異波爾定與殼聚糖的質(zhì)量比為1:20-3:1。
[0008] 步驟2 )所述的乳化劑為Span-80，乳化劑用量為液體石蠟體積的4%。
[0009] 步驟2)中液體石蠟與去甲異波爾定殼聚糖醋酸溶液的體積比為8:1。
[0010] 步驟2)中攪拌速度為1000-1500r/min。
[0011] 步驟3)中所述的交聯(lián)劑為50%戊二醛，交聯(lián)劑與去甲異波爾定殼聚糖醋酸溶液的 體積比為1:60。
[0012] -種如上所述的制備方法制得的去甲異波爾定殼聚糖微球，當采用以上最優(yōu)參數(shù) 時，去甲異波爾定的包封率達到69. 27%。
[0013] 包封率的計算 微球包封率是指被包裹物質(zhì)（如去甲異波爾定)在微球中占藥物總量的百分量。本文包 封率按照以下公式計算： 包封率=微球中藥物含量/投入的藥物總量X100% ; 微球中藥物含量=供試品峰面積/對照品峰面積X對照品濃度X容量瓶體積。
[0014] 本發(fā)明的有益效果在于： 1) 去甲異波爾定是烏藥中的一種異喹啉生物堿，將其制成殼聚糖微球，克服了去甲異 波爾定在水溶液中的難溶性問題，增加去甲異波爾定的吸收，提高其生物利用度，為進一步 新藥開發(fā)奠定重要基礎(chǔ)； 2) 本發(fā)明通過對去甲異波爾定殼聚糖微球的制備工藝進行優(yōu)化，所測得的去甲異波爾 定的包封率69. 27%，比優(yōu)化前的處方制備的微球的包封率提高了 27. 97% ; 3) 本發(fā)明將去甲異波爾定制成殼聚糖微球，極大提高了去甲異波爾定的生物利用度， 延長了藥物釋放時間，減少臨床給藥頻次，減少給藥量，降低不良反應。此去甲異波爾定殼 聚糖微球的制備方法操作簡單，易重復，可控性好，具有很好的應用前景。
【附圖說明】
[0015] 圖1實施例1制得的去甲異波爾定殼聚糖微球的電鏡圖；A為0. 25mg/mL的微球 電鏡圖；B為0. 5mg/mL的微球電鏡圖；C為1.Omg/mL的微球電鏡圖； 圖2A為實施例1制得的去甲異波爾定殼聚糖微球的液相色譜圖；B為對照品的液相 色譜圖。
【具體實施方式】
[0016] 本發(fā)明用下列實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于下列實 施例。
[0017] 實施例1 實驗原料： 去甲異波爾定（由上海中藥標準化研究中心提供，純度> 98%);殼聚糖(上海伯奧生物 科技有限公司，批號130204,脫乙酰度多90.0%，粘度<lOOcps);乙腈、甲酸（默克公司，色 譜純);乙酸（國藥集團化學試劑有限公司，分析純）;液體石蠟（國藥集團化學試劑有限公司， 分析純)、乙酸乙酯、石油醚(天津恒興化學試劑制造有限公司，分析純);司盤-80、吐溫-20、 吐溫_80(國藥集團化學試劑有限公司，化學純);戊二醛(阿拉丁工業(yè)公司，質(zhì)量分數(shù)為50%， 化學純）；水為超純水。
[0018] 主要儀器： 美國WatersAlliance高效液相色譜儀；Waters2998PAD檢測器；HITACH公司H7650 型透射電鏡（TEM) ;SIS公司400萬像素(XD;DF-101S集熱式磁力攪拌器(杭州明遠儀器有 限公司）;納米粒度儀（NIC0MP? 380ZLSZetapotential/particlesizer);BSA系列十萬分 之一分析天平(德國塞多利斯科學儀器有限公司）;Mi11i-Q超純水儀（Millipore，Bedford， MA,USA)〇
[0019] 微球的制備： 1) 先將去甲異波爾定溶于體積分數(shù)為2%的醋酸溶液中，然后加入殼聚糖溶脹后超聲 脫氣，配制成去甲異波爾定殼聚糖醋酸溶液；其中殼聚糖的濃度為l〇g/L; 2) 在50mL圓底燒瓶中加入24mL液體石錯，乳化劑0. 96mL，攪拌下逐滴加入去甲異波 爾定殼聚糖醋酸溶液3mL，40°C下攪拌乳化0. 5h; 3) 逐滴加入交聯(lián)劑50%戊二醛0. 05mL，升溫至60°C后，繼續(xù)反應5h后；用石油醚反 復沖洗干凈，離心分離棄去上清液，并于30 °C干燥3h得去甲異波爾定殼聚糖微球。
[0020] 對照品制備 精密稱取去甲異波爾定對照品8. 42mg，用甲醇-稀鹽酸（0. 5%，v/v)的混合液（2:1) 溶解后，定量轉(zhuǎn)移至10mL的容量瓶中，并用甲醇-稀鹽酸（0. 5%，v/v)的混合液（2:1)定 容，過0. 22ym微孔濾膜，得到0. 842mg?mL1的對照品儲備液。
[0021] 供試品制備 將殼聚糖微球研細，精確稱取一定量加入到50mL圓底燒瓶中，加入甲醇-稀鹽酸 (0.5%，￥八）的混合液（2:1)3〇!^，超聲3〇1^11，90°(：水浴回流4 11，冷卻轉(zhuǎn)移至5〇1^容 量瓶，并用甲醇-稀鹽酸（〇. 5%，v/v)的混合液（2:1)定容，搖勻，靜置，取上清液過0. 22ym 微孔濾膜即得。
[0022] 為了使微球的包封率達到最佳，本發(fā)明對各條件參數(shù)進行了優(yōu)化研究。
[0023] 1、醋酸濃度的優(yōu)化 用體積分數(shù)分別為1%，2%，3%的醋酸溶液制得質(zhì)量濃度為10g/L的殼聚糖醋酸溶液， 其他條件不變，進行未載藥微球的制備，由表1可見，2%醋酸濃度制備的殼聚糖微球粒徑分 散度為〇. 457,分布最均勻，且經(jīng)納米粒徑儀測量發(fā)現(xiàn)，2%醋酸溶液得到的微球形態(tài)良好， 大小適中，分散均勻；因此，選用2%醋酸濃度來制備微球。
[0024] 表1不同的醋酸濃度制得的殼聚糖微球?qū)Ρ缺?br>2、 殼聚糖醋酸濃度的優(yōu)化 使用體積分數(shù)2%的醋酸水溶液來配制質(zhì)量濃度分別為5g/L，10g/L，15g/L的殼聚糖 醋酸溶液，其他條件不變，制備未載藥殼聚糖微球；經(jīng)納米粒徑儀測量發(fā)現(xiàn)，10g/L的殼聚 糖醋酸溶液制備的微球形態(tài)良好，大小適中，分散均勻；由表2可知，當殼聚糖醋酸濃度為 5g/L時，制得的微球粒徑偏小，且分散也不夠均勻