甲氨喋呤磷脂復(fù)合物、其納米粒子及其靶向緩釋制劑三者的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥類抗腫瘤藥物制劑和抗風(fēng)濕藥物領(lǐng)域，特別涉及甲氨喋呤磷脂復(fù)合物、其納米粒子及其靶向緩釋制劑三者的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]甲氨喋呤(MTX)是一種葉酸類抗代謝藥劑，能與腫瘤細(xì)胞表面的葉酸受體進(jìn)行結(jié)合起到很好的靶向作用，常用于各種惡性腫瘤治療，也是常用的抗風(fēng)濕藥物，MTX在藥用上也有許多不利之處，治療腦部腫瘤時(shí)很少量能通過血腦屏障，本品可增加肝腎功能毒性，由于藥物作用機(jī)理是通過對二氫葉酸還原酶的抑制而達(dá)到阻礙腫瘤細(xì)胞DNA的合成，所以對正常的生物細(xì)胞也有藥物作用，毒性反應(yīng)較大。
[0003]經(jīng)過修飾的納米粒子作為藥物載體進(jìn)入體內(nèi)，可以有效地減少人體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)巨噬細(xì)胞的吞噬，作為納米級的粒子能穿越細(xì)胞間隙，可通過人體最小的毛細(xì)血管及血腦屏障(BBB)，并被細(xì)胞組織吸收，納米粒子藥物載體可以控制藥物在靶向部位控制釋放、減少藥物用量、增強(qiáng)藥物療效并降低藥物毒性。同時(shí)，粒子系統(tǒng)可以避免藥物活性喪失，有利于藥物的貯藏和運(yùn)輸。因?yàn)榧{米粒子的諸多優(yōu)點(diǎn)，使其成為一種很有前途的藥物新劑型。
[0004]目前通過透析法進(jìn)行的自組裝主要用于應(yīng)用于疏水性藥物制備成核殼結(jié)構(gòu)的球形納米粒子，由于透析法制備的納米粒子粒徑均勾，雜質(zhì)較少，制備方法簡單，應(yīng)用越來越廣泛；但對于親水性較好的MTX，很難利用透析法與載體形成載藥的粒子。
[0005]申請?zhí)枮?01310239345.8、名稱為“一種甲氨喋呤靶向納米粒緩釋制劑及其制備方法”的中國專利申請公開了將甲氨蝶呤化學(xué)交聯(lián)到高分子載體上，但該載體是MPEG-PLA，該制劑中的靶向納米粒子粒徑較大，一般大于200nm，屬于實(shí)體粒子；專利申請?zhí)枮?01410181451.X、名稱為“一種新的甲氨蝶呤靶向膠束制劑與制備方法”的中國專利申請公開了將MTX化學(xué)交聯(lián)到雙親性分子DSPE-PEG上面，然后自組裝形成膠束。
[0006]上述兩個(gè)相關(guān)專利中的MTX都是與載體材料是通過化學(xué)鍵合制得的高分子化合物，制備過程復(fù)雜且成本較高，此外，其在藥物申報(bào)規(guī)定的條例中屬于一類新藥的范圍，申報(bào)新藥的周期也很長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種通過物理復(fù)合的方式將甲氨喋呤與載體結(jié)合、制備簡單且成本低的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物的制備方法，進(jìn)一步提供一種甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子的制備方法，以及一種甲氨喋呤磷脂復(fù)合物靶向緩釋制劑的制備方法。
[0008]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0009]甲氨喋呤磷脂復(fù)合物的制備方法，將甲氨喋呤和卵磷脂溶解于有機(jī)溶劑A中，于20-40°C下進(jìn)行混合反應(yīng)，所述混合反應(yīng)的時(shí)間為12-24h，將混合反應(yīng)后的混合液中的有機(jī)溶劑A去除，然后采用有機(jī)溶劑B對去除有機(jī)溶劑A后的混合液進(jìn)行純化，獲得所述甲氨喋呤磷脂復(fù)合物，所述有機(jī)溶劑A為四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、甲醇、乙醇、乙腈和丙酮中的一種或兩種以上，所述有機(jī)溶劑B為氯仿和二氯甲烷中的一種或兩種。
[0010]本發(fā)明還提供甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子的制備方法，將上述的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物與二硬脂?；字Ｒ掖及?甲氧基聚乙二醇(DSPE-mPEG)或二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-葉酸(DSPE-PEG-FA)或二硬脂?；字Ｒ掖及?透明質(zhì)酸(DSPE-HA)溶解于有機(jī)溶劑C中，然后將溶解后的混合液中的有機(jī)溶劑C去除，將去除有機(jī)溶劑C的混合液通過微孔濾膜，所述微孔濾膜的孔徑為0.22 μ m，獲得所述甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子，所述有機(jī)溶劑C為氯仿、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和丙酮中的一種或兩種以上。
[0011]本發(fā)明還提供甲氨喋呤磷脂復(fù)合物靶向緩釋制劑的制備方法，于上述的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子中加入防凍劑，凍干后獲得所述甲氨喋呤磷脂復(fù)合物靶向緩釋制劑。
[0012]本發(fā)明的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物及其納米粒子的制備方法的有益效果在于:
[0013]制備獲得的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子以卵磷脂為載體，形狀為球形，粒徑在100-500nm之間分布，穩(wěn)定性好，具有較好的腫瘤靶向及緩釋特性，具有裸藥所不具備的低毒性、長效性和高效性等優(yōu)點(diǎn)。
[0014]本發(fā)明的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物靶向緩釋制劑的制備方法的有益效果在于:
[0015]制備獲得的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物靶向緩釋制劑，以DSPE-mPEG或者DSPE-PEG-FA或者DSPE-HA為載體，易溶于生理鹽水或者葡萄糖氯化鈉注射液，適合作為靜脈注射或者靜脈推注，具有靶向、長循環(huán)、低毒性和治療效果好的優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說明】
[0016]圖1為本發(fā)明實(shí)施例的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子的30微米下掃描電鏡圖；
[0017]圖2為本發(fā)明實(shí)施例的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子的2微米下掃描電鏡圖；
[0018]圖3為本發(fā)明實(shí)施例的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物的紅外光譜圖；
[0019]圖4為本發(fā)明實(shí)施例的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物與甲氨喋呤的紫外吸收對比圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0020]為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式并配合附圖予以說明。
[0021]本發(fā)明的中英文名稱對應(yīng)如下:
[0022]甲氨喋呤:即MTX，分子式(希爾表示法)為C2qH2具O5;
[0023]聚乙二醇單甲醚:mPEG ;
[0024]二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇單甲醚:DSPE-mPEG ;
[0025]二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-葉酸:DSPE-PEG-FA ;
[0026]二硬脂?；字Ｒ掖及?透明質(zhì)酸:DSPE_HA。
[0027]本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于:以卵磷脂分子上帶負(fù)電的極性磷酸根與甲氨喋呤帶正電的胺基通過靜電吸引的物理方式復(fù)合，以獲得甲氨喋呤磷脂復(fù)合物，再以dspe-peg-fa或DSPE-mPEG或DSPE-HA的疏水性基團(tuán)(DSPE)與甲氨喋呤磷脂復(fù)合物上的疏水性基團(tuán)(兩個(gè)疏水性長脂肪酸鏈)通過疏水作用力復(fù)合從而獲得甲氨喋呤磷脂復(fù)合物和DSPE為內(nèi)核，mPEG或者PEG-FA或者HA為殼的納米粒子。
[0028]請參照圖1以及圖2，本發(fā)明的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物的制備方法，將甲氨喋呤和卵磷脂溶解于有機(jī)溶劑A中，于20-40°C下進(jìn)行混合反應(yīng)，所述混合反應(yīng)的時(shí)間為12-24h，將混合反應(yīng)后的混合液中的有機(jī)溶劑A去除得到干燥物，然后采用有機(jī)溶劑B對此干燥物進(jìn)行純化，去除不溶物，獲得所述甲氨喋呤磷脂復(fù)合物有機(jī)溶液，真空旋蒸去除有機(jī)溶劑B，得到甲氨喋呤磷脂復(fù)合物干燥品。所述有機(jī)溶劑A為四氫呋喃、二甲基甲酰胺和丙酮中的一種或兩種以上，所述有機(jī)溶劑B為二氯甲烷和氯仿中的一種或兩種。
[0029]進(jìn)一步的，將獲得的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物依次進(jìn)行純化和干燥。
[0030]由上述描述可知，可將獲得的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物依次進(jìn)行純化和干燥，以獲得固體狀的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物，便于轉(zhuǎn)移和存放。
[0031]進(jìn)一步的，所述甲氨蝶呤與卵磷脂的摩爾比為1:1-4。
[0032]由上述描述可知，當(dāng)甲氨蝶呤與卵磷脂的摩爾比為1:1-4時(shí)，可以獲得較好的復(fù)合率。
[0033]進(jìn)一步的，所述卵磷脂為蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂。
[0034]由上述描述可知，優(yōu)選的，卵磷脂為大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。
[0035]本發(fā)明的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物納米粒子的制備方法，將上述的甲氨喋呤磷脂復(fù)合物與DSPE-PEG-FA或DSPE-mPEG或者DSPE-HA溶解于有機(jī)溶劑C中，然后將此有機(jī)溶液緩慢加入到純凈水中并伴隨超聲分散，攪拌5-12h去除有機(jī)溶劑C，或者轉(zhuǎn)移至截留分子量為1000-10000的透析袋中，然后置于去離子水中進(jìn)行透析去除有機(jī)溶劑C ;將去除有機(jī)溶劑C的混合液通過微孔濾膜，所述微孔濾膜的孔徑為0