一種以金納米籠為載體的復(fù)合靶向藥物控釋系統(tǒng)的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種以金納米籠為載體的復(fù)合靶向藥物控釋系統(tǒng)的制備 方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 金納米籠是一種中空多孔的金納米材料，具有非常大的光吸收截面，只需要1. 5 mW/ cm2的激光能量，就可以有效殺死癌細(xì)胞，同時(shí)并不傷害到周圍沒有被照射的細(xì)胞，因 此，金納米籠狀顆粒在光熱療方面的效果也比其他結(jié)構(gòu)的金納米顆粒強(qiáng)；其空腔結(jié)構(gòu)能夠 裝載藥物，使藥物處于一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的環(huán)境，減少體內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境對(duì)藥物的影響；其表面易 于修飾，可以結(jié)合有機(jī)高分子聚合物、抗體、配體等生物分子；另外，還具有密度低、比表面 積高、粒徑分布范圍寬、無重金屬毒性等特點(diǎn)。因此金納米籠在生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有良好的應(yīng) 用前景。
[0003] 錳鋅鐵氧體納米粒是一種軟磁性的材料，可以運(yùn)用外加恒定磁場將錳鋅鐵氧體靶 向至腫瘤部位。靶部位施以外加交變磁場，其溫度會(huì)逐漸升高，而達(dá)到其居里溫度以上時(shí)， 錳鋅鐵氧體失去磁性，即使外加交變磁場依然存在，其溫度也不會(huì)繼續(xù)增加，待溫度降至居 里溫度以下時(shí)，錳鋅鐵氧體會(huì)繼續(xù)升溫。因此，錳鋅鐵氧體能夠在熱療的過程中使溫度在居 里溫度附近波動(dòng)，實(shí)現(xiàn)智能控溫的目的，從而減少腫瘤熱療過程中溫度過高而對(duì)正常細(xì)胞 造成的損傷。
[0004] 目前以錳鋅鐵氧體/金納米籠復(fù)合納米粒為載體的藥物遞送系統(tǒng)的制備及其在 腫瘤治療領(lǐng)域中的應(yīng)用還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種以金納米籠 為載體的復(fù)合靶向藥物控釋系統(tǒng)的制備方法及應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用 大、治療效果不佳、腫瘤光熱治療的用藥問題。
[0006] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，包括以下步驟： 1)、制備包裹有錳鋅鐵氧體的金納米籠： 在室溫、轉(zhuǎn)速為 500-3000rpm 攪拌下，向 HNO3中加入 Re 203、Fe(N03)3、Mn(N03) 2、 Zn(NO3)2,磁力攪拌下再分別加入檸檬酸、乙二醇，摩爾比為HNO3: Re2O3: Fe(NO3)3: Mn(NO3)2: Zn(NO3)2:檸檬酸：乙二醇=1 : 0.07 : 0.5 : 0.5 : 1.86 : 1 : 1，然后 按照HNO3與金納米籠摩爾比為1000 : 1加入金納米籠，用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為6,探頭超 聲5-90min，加入超純水至5-30mL，15000rpm離心5 min，棄上清，沉淀物再加入超純水至 5-30mL，15000rpm離心5 min，棄上清，得沉淀物；沉淀物再加入超純水至5-30mL，如此反復(fù) 離心3-5次，沉淀物用超純水復(fù)溶，加入碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為6,100-120°C油浴中蒸發(fā)得到 棕黑色固體，110 °C下干燥后研磨成粉，放入電阻爐中，1_5°C/ min程控升溫至350°C，保 溫3-7h，取出二次研磨15-90min，再升溫至450°C保溫30-90min，再冷卻至室溫，得包裹有 錳鋅鐵氧體的金納米籠； 2)、制備載藥的金納米籠： 磁力攪拌下將Ig溫敏材料加熱到40-70°C，加入0.1 g的藥物，然后將上述包裹有錳 鋅鐵氧體的金納米籠Ig加入到溫敏材料與藥物的混合物中，40-70°C下避光攪拌4-72h， 8000-15000rpm離心3-30min，棄上清，沉淀物用超純水重復(fù)洗滌3次，即得載有錳鋅鐵氧體 和溫敏材料的金納米籠-錳鋅鐵氧體復(fù)合物； 所述的溫敏材料為卜十四醇（I-Tetradecanol)或熱敏聚合物中的一種或者兩種的組 合物； 所述的藥物為多柔比星、柔紅霉素、紫杉醇、多西他賽、或microRNA、siRNA基因藥物中 的一種或兩種以上的組合物； 3 )、對(duì)載有錳鋅鐵氧體和溫敏材料的金納米籠進(jìn)行表面修飾： 將摩爾濃度為 I mm〇l/L、Mff=400-5000 的 OPSS-PEG-SVA 5_20ml 加入體積為 IO-1000 ml、摩爾濃度為I y mol/L的帶伯氨基靶頭分子的pH7. 4的PBS緩沖溶液，使 OPSS-PEG-SVA與帶伯氨基靶頭分子的摩爾比為1-1000 : 1，置于0-4°C下避光保存4-72h， 加入步驟2)制得的金納米籠-錳鋅鐵氧體復(fù)合物，金納米籠-錳鋅鐵氧體復(fù)合物與 OPSS-PEG-SVA 的摩爾比為 I : 104-106,室溫下避光放置 0.5-24 h，8000-15000rpm 離心 3-30min，棄上清，沉淀用pH7. 4的PBS緩沖液洗滌3次，再加入pH7. 4的PBS緩沖液至25 mL，成以金納米籠為載體的復(fù)合靶向藥物控釋系統(tǒng)，4°C下避光保存。
[0007] 所述的金納米籠的粒徑為15-300nm。
[0008] 所述的錳鋅鐵氧體的粒徑為3-30 nm。
[0009] 所述的帶伯氨基靶頭分子為單克隆抗體anti-VEGFR-1、靶向肽NGR、靶向肽RGD、 靶向肽A54或透明質(zhì)酸的一種。
[0010] 金納米籠為載體的復(fù)合靶向藥物控釋系統(tǒng)可有效用于腫瘤的治療，實(shí)現(xiàn)在制備腫 瘤熱療、化療藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明使用金納米籠作為藥物的載體，中空多孔結(jié)構(gòu)能夠包載錳鋅鐵氧體以及藥 物，猛鋅鐵氧體作為物理化學(xué)靶向材料，靶向肽、透明質(zhì)酸、葉酸等作為主動(dòng)靶向分子，從而 實(shí)現(xiàn)復(fù)合靶向治療，相變材料或熱敏聚合物實(shí)現(xiàn)控釋的目的。幾者的聯(lián)用，同時(shí)實(shí)現(xiàn)熱療、 化學(xué)(基因）治療、靶向、控釋的目的，是治療腫瘤藥物上的一大創(chuàng)新。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0013] 實(shí)施例1 本發(fā)明在具體實(shí)施中，可由以下步驟實(shí)現(xiàn)： 1)、制備包裹有錳鋅鐵氧體的金納米籠： 在室溫、轉(zhuǎn)速為 1000 rpm 攪拌下，向 HNO3中加入 Re 203、Fe (NO3) 3、Mn (NO3) 2、Zn(NO3)2, 磁力攪拌下再分別加入檸檬酸、乙二醇，摩爾比為HNO3: Re2O3: Fe(NO3)3: Mn(NO3)2: Zn(NO3)2:檸檬酸：乙二醇=1 : 0.07 : 0.5 : 0.5 : 1.86 : 1 : 1，然后按照 HNO3與金 納米籠摩爾比為1000 : 1加入金納米籠，用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為6,探頭超聲45min，加入 超純水至15mL，15000rpm離心5 min，棄上清，沉淀物再加入超純水至15mL，15000rpm離心 5min，棄上清，得沉淀物；沉淀物再加入超純水至15mL，如此反復(fù)離心3-5次，沉淀物用超純 水復(fù)溶，加入碳酸氫銨調(diào)節(jié)PH為6,100-120°C油浴中蒸發(fā)得到棕黑色固體，110 °C下干燥 后研磨成粉，放入電阻爐中，1_5°C / min程控升溫至350°C，保溫6h，取出二次研磨20min， 再升溫至450°C保溫45min，再冷卻至室溫，得包裹有錳鋅鐵氧體的金納米籠； 2)、制備載藥的金納米籠： 磁力攪拌下將Ig溫敏材料卜十四醇（I-Tetradecanol)加熱到45°C，加入0? Ig的多 柔比星，然后將上述包裹有錳鋅鐵氧體的金納米籠Ig加入到溫敏材料與多柔比星的混合 物中，45°C下避光攪拌24h，1000 Orpm離心5min，棄上清，沉淀物用超純水重復(fù)洗滌3次，即 得載有錳鋅鐵氧體和溫敏材料的金納米籠_錳鋅鐵氧體復(fù)合物； 3 )、對(duì)載有錳鋅鐵氧體和溫敏材料的金納米籠進(jìn)行表面修飾： 將摩爾濃度為I mm〇l/L、Mff=400-5000的OPSS-PEG-SVA IOml加入體積為10ml、摩爾 濃度為I y mol/L的單克隆抗體anti-VEGFR-1的pH7. 4的PBS緩沖溶液，使0PSS-PEG-SVA 與單克隆抗體anti-VEGFR-1的摩爾比為1000 : 1，置于0-4°C下避光保存24h，加入步驟2) 制得的金納米籠-錳鋅鐵氧體復(fù)合物，金納米籠-錳鋅鐵氧體復(fù)合物與OPSS-PEG-SVA的摩 爾比為I : 1〇4-1〇6,室溫下避光放置4h，8000rpm離心25min，棄上清，沉淀用pH7. 4的PBS 緩沖液洗滌3次，再加入pH7. 4的PBS緩沖液至25mL，成以金納米籠為載體的復(fù)合靶向藥物 控釋系統(tǒng)，4°C下避光保存。
[0014] 實(shí)施例2 本發(fā)明在具體實(shí)施中，還可由以下步驟實(shí)現(xiàn)： 1) 、制備包裹有錳鋅鐵氧體的金納米籠： 在室溫、轉(zhuǎn)速為 1500rpm 攪拌下，向 HNO3中加入 Re 203、Fe (NO3) 3、Mn (NO3) 2、Zn(NO3)2, 磁力攪拌下再分別加入檸檬酸、乙二醇，摩爾比為HNO3: Re2O3: Fe(NO3)3: Mn(NO3)2: Zn(NO3)2:檸檬酸：乙二醇=1 : 0.07 : 0.5 : 0.5 : 1.86 : 1 : 1，然后按照 HNO3與金 納米籠摩爾比為1000 : 1加入金納米籠，用碳酸氫銨調(diào)節(jié)pH為6,探頭超聲30min，加入超 純水至10mL，15000rpm離心5 min，棄上清，沉淀物再加入超純水至10mL，15000rpm離心5 min，棄上清，得沉淀物；沉淀物再加入超純水至10mL，如此反復(fù)離心3-5次，沉淀物用超純 水復(fù)溶，加入碳酸氫銨調(diào)節(jié)PH為6,100-120°C油浴中蒸發(fā)得到棕黑色固體，110 °C下干燥 后研磨成粉，放入電阻爐中，1-5°C / min程控升溫至350°C，保溫5h，取出二次研磨30min， 再升溫至450°C保溫30min，再冷卻至室溫，得包裹有錳鋅鐵氧體的金納米籠； 2) 、制備載藥的金納米籠： 磁力攪拌下將Ig溫敏材料熱敏聚合物加熱到60°C，加入作為藥物的多柔比星0. 05g、 siRNA 0.05g，然后將上述包裹有猛鋅鐵