一種注射用總蟾毒內(nèi)酯固體脂質(zhì)納米粒給藥系統(tǒng)及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種總蟾毒內(nèi)酯納米制劑，具體是注射用總蟾毒內(nèi)酯固體脂質(zhì)納米粒 給藥系統(tǒng)及其制備方法，屬于藥物制劑領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 總蟾毒內(nèi)酯類(lèi)化合物是一類(lèi)在(Μ7β位連接有α-吡喃酮環(huán)（Ctpyrone) 的C-24留體或其苷，是一類(lèi)脂溶性化合物，為傳統(tǒng)中藥干蟾皮發(fā)揮抗癌活性的 主要藥效成分?？傮付緝?nèi)酯主要含有蟾毒配基（resibufogenin)、華蟾酥毒基 (cinobufagin)、蟾毒靈（bufalin)、蟾毒它靈（Bufotalin)、日蟾毒它靈-3-半辛二酸酯 (Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾蜍靈-3- 丁二酰精氨酸酯、華蟾毒精-3- 丁二 酰精氨酸酯等內(nèi)酯類(lèi)成分。研究表明，總蟾毒內(nèi)脂具有明顯的抗腫瘤作用，而且還能將腫瘤 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞（誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化）、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞新生血管形 成、降低腫瘤轉(zhuǎn)移等作用。目前，臨床上已有類(lèi)似總蟾毒內(nèi)脂類(lèi)注射劑且已廣泛應(yīng)用于中晚 期腫瘤和慢性乙型肝炎病人。但在臨床應(yīng)用過(guò)程中常出現(xiàn)靜脈輸注不暢、輸液部位紅腫、靜 脈內(nèi)疼痛等血管刺激性不良反應(yīng)。
[0003] 而固體脂質(zhì)納米粒（lipid Solid nanoparticles，SLN)是20世紀(jì)90年代初發(fā)展 起來(lái)的新一代亞微粒給藥系統(tǒng)，粒徑在10~lOOOnm，以固態(tài)天然或合成的類(lèi)脂如卵磷脂、 三酰甘油等為載體，將藥物包裹或夾嵌于類(lèi)脂核中制成的固體膠粒給藥系統(tǒng)，以毒性低、 生物相容性好、生物可降解的固態(tài)天然或合成的類(lèi)脂為載體，將藥物吸附或包裹于脂質(zhì)膜 中制成的新一代納米粒給藥系統(tǒng)。因其在制備時(shí)使用的載體材料在室溫下是固體，使得其 既具有聚合物納米球和納米囊的物理穩(wěn)定性高、藥物泄露少、具有緩釋性和靶向性、可以滅 菌等特點(diǎn)，又兼有減小藥物刺激性、毒性小、易于大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，是一種極有發(fā)展前景 的新型給藥系統(tǒng)。目前實(shí)驗(yàn)室多采用微乳法、溶劑蒸發(fā)法、沉淀法以及注射法等方法來(lái)制備 SLN0

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之一，是提供一種其中納米粒粒徑小于1000 nm的注射 用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒。
[0005] 本發(fā)明的目的在于研制和提供一種性質(zhì)穩(wěn)定并且可以采用工業(yè)化生產(chǎn)的注射用 總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒及其固體制劑，本發(fā)明將總蟾毒內(nèi)脂包裹于類(lèi)脂核中，增加了 總蟾毒內(nèi)脂的溶解度，減小了它的刺激性，可達(dá)到靶向、控釋等效果，并且物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn) 定。
[0006] 本發(fā)明的目的是提供注射用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒及其固體制劑的制備方 法。本發(fā)明的制備方法靈活多樣，均可以采用常規(guī)的方法和工藝設(shè)備，可進(jìn)行工業(yè)化大生 產(chǎn)。本發(fā)明所述的固體脂質(zhì)納米粒，含有下列單位為重量份的成分：
[0007] 總蟾毒內(nèi)脂0· 01~10份
[0008] 脂質(zhì)材料0· 1~50份
[0009] 脂溶性乳化劑〇· 1~50份
[0010] 水溶性乳化劑〇· 1~40份
[0011] 抗氧化劑0· 0005~10份
[0012] 糖 0.001 ~50 份
[0013] 其余為注射用水組成加至適量
[0014] 優(yōu)選后，本發(fā)明所述的固體脂質(zhì)納米粒，含有下列單位為重量份的成分：
[0015] 總蟾毒內(nèi)脂0.01~5份
[0016] 脂質(zhì)材料0· 1~30份
[0017] 脂溶性乳化劑0· 1~30份
[0018] 水溶性乳化劑0· 1~20份
[0019] 抗氧化劑0· 0025~5份
[0020] 糖 0.01 ~30 份
[0021 ] 其余為注射用水組成加至適量
[0022] 經(jīng)過(guò)進(jìn)一步優(yōu)化后，本發(fā)明的注射用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒包括以下重量份 的組分：
[0023] 總蟾毒內(nèi)脂0· 1~2份
[0024] 脂質(zhì)材料0· 5~20份
[0025] 脂溶性乳化劑0. 5~15份
[0026] 水溶性乳化劑0. 5~10份
[0027] 抗氧化劑0· 002~2. 5份
[0028] 糖 0· 1 ~25 份
[0029] 其余為注射用水組成加至適量
[0030] 本發(fā)明所說(shuō)的總蟾毒內(nèi)脂是一類(lèi)在C-17 β位連接有α -吡喃酮環(huán)（a pyrone)的 C-24留體或其苷，是一類(lèi)脂溶性化合物。它是蟾皮的乙醇提取物，其提取工藝照專(zhuān)利《具有 抗腫瘤作用的總蟾毒內(nèi)酯提取物、其制備方法及用途》（專(zhuān)利號(hào)：200610167378. 6)進(jìn)行，提 取液經(jīng)濃縮分離后得總蟾毒內(nèi)酯提取物。
[0031] 本發(fā)明所說(shuō)的脂質(zhì)材料是指在SLN中作為載體材料、與生理相容性好、且室溫下 呈固態(tài)的類(lèi)脂材料，如三酸甘油酯、混合甘油酯、脂肪酸、類(lèi)固醇、蠟、磷脂等。為使本發(fā)明 注射用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒對(duì)總蟾毒內(nèi)脂等有效成分具有較高的包封率及載藥量， 且考慮到其應(yīng)用到臨床時(shí)，需適應(yīng)不同使用途徑，特別是經(jīng)血管，如靜脈注射時(shí)能減少局部 刺激及全身的副反應(yīng)，以提高安全性，故本發(fā)明優(yōu)選適于靜脈制劑的硬脂酸和三硬脂酸甘 油酯，經(jīng)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)原用于口服制劑的山榆酸甘油酯較多的被用于總蟾毒內(nèi)脂SLN的制 備，故本發(fā)明對(duì)其制成的SLN進(jìn)行了注射用藥安全性的考察，發(fā)現(xiàn)其安全性、綜合性均較 佳。因此，本發(fā)明脂質(zhì)材料更優(yōu)選山榆酸甘油酯。
[0032] 而本發(fā)明所說(shuō)的乳化劑是具有乳化、穩(wěn)定、分散作用的藥物輔劑。本發(fā)明乳化劑 由脂溶性乳化劑及水溶性乳化劑組成。其中，脂溶性乳化劑有磷脂類(lèi)、膽酸鹽類(lèi)、脫氧膽酸 鹽類(lèi)、短鏈醇類(lèi)，其中磷脂類(lèi)包括卵磷脂、卵黃磷脂及其混合物；膽酸鹽類(lèi)包括膽酸鹽、甘膽 酸鈉、牛黃膽酸鈉及其混合物；脫氧膽酸鹽類(lèi)包括自脫氧膽酸鈉、去氧牛黃膽酸鈉及其混合 物；短鏈醇類(lèi)包括丁醇、丁酸、甘油、異丙醇。本發(fā)明脂溶性乳化劑選用氫化大豆卵磷脂和卵 磷脂。水溶性乳化劑選自泊洛沙姆（Poloxamer)系列和土溫（Tween)系列。泊洛沙姆包 括泊洛沙姆108、182、188、407、908 ;聚山梨醇酷優(yōu)選吐溫一 80、85、65、60、40。為更好地適 應(yīng)于注射用藥，本發(fā)明乳化劑更優(yōu)選氫化大豆卵磷脂和泊洛沙姆188的組合。
[0033] 本發(fā)明為注射用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒，因此還加入了注射劑常用的添加 劑，如等滲劑：甘油、葡萄糖等；抗氧劑：維生素 E、C及亞硫酸氫鈉等。本發(fā)明抗氧劑更優(yōu)選 亞硫酸氫鈉，等滲劑優(yōu)選葡萄糖。
[0034] 本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問(wèn)題是提供上述注射用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒的 制備方法?？梢酝ㄟ^(guò)以下方法進(jìn)行制備：
[0035] 方法一：乳化一沉淀法制備，稱(chēng)取一定量總蟾毒內(nèi)脂、脂質(zhì)材料、脂溶性乳化劑溶 于一定量與水不混溶的有機(jī)溶劑（如正己烷、氯仿等）中，加入到水溶性乳化劑、抗氧化劑 及葡糖糖形成的均勻水相中進(jìn)行乳化，然后蒸去有機(jī)溶劑，即可得到固體脂質(zhì)納米粒分散 體系；
[0036] 方法二：微乳法制備，將脂質(zhì)材料和脂溶性乳化劑熔融，加入總蟾毒內(nèi)脂、水溶性 乳化劑、抗氧化劑、葡糖糖和注射用水制成外觀(guān)透明、熱力學(xué)穩(wěn)定的0/W型微乳，然后在攪 拌條件下將微乳分散于冷水中即可制成固體脂質(zhì)納米粒分散體系；
[0037] 方法三：熱高壓乳勻法制備，即將脂質(zhì)材料、總蟾毒內(nèi)脂及脂溶性乳化劑溶解或均 勻分散于熔融液中，然后將該熔融液在高速攪拌的條件下分散于溫度相近的含水溶性乳化 劑、抗氧化劑及葡糖糖的混合溶液中形成初乳，初乳該熔融溫度和100~2000Pa下經(jīng)高壓 乳勻3次冷卻結(jié)晶后，即得；
[0038] 方法四：冷高壓乳勻法制備，即將脂質(zhì)材料、脂溶性乳化劑與總蟾毒內(nèi)脂共融并充 分混合后，在液氮等介質(zhì)中迅速冷卻，經(jīng)機(jī)械攪拌研磨，得到的固體脂質(zhì)納米粒微粒在高速 攪拌下混入冷的含水溶性乳化劑、抗氧化劑及葡糖糖的混合溶液中得到初乳，再于室溫下 以更高壓力通過(guò)高壓乳勻機(jī)3個(gè)循環(huán)以上就得到固體脂質(zhì)納米粒分散體系；
[0039] 方法五：超聲法制備，稱(chēng)取一定量的總蟾毒內(nèi)脂，脂質(zhì)材料及脂溶性乳化劑于一定 量的有機(jī)溶劑中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干成膜，加入一定量含水溶性乳化劑、抗氧化劑及 葡糖糖的混合水溶液，超聲即得固體脂質(zhì)納米粒分散體系。
[0040] 上述制備方法中所提到的有機(jī)溶劑可以選自氯仿、乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酷、丙 酮、二氯甲烷。
[0041] 為延長(zhǎng)總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒的血液循環(huán)時(shí)間，提高它的生物利用度，降低 毒副作用，可以將總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒修飾成隱形固體脂質(zhì)納米粒A，隱形材料可以 選用非離子表面活性劑聚乙二醇（PEG)、泊洛沙姆（Poloxamer)、聚山梨酷80 (Tween80)。 [0042] 本發(fā)明為注射用固體脂質(zhì)納米粒，其中注射方式可以是靜脈注射、靜脈滴注、皮下 注射、肌肉注射、腹腔注射。根據(jù)需要，還可以在總蟾毒內(nèi)脂SLN中加入各種添加劑，如等滲 劑：甘油、葡萄糖等；抗氧劑：維生素 E、C及亞硫酸氫鈉等。
[0043] 為方便保存和運(yùn)輸，本發(fā)明可通過(guò)冷凍干燥等干燥方法將水分散體系制成干粉 針。
[0044] 本發(fā)明以脂質(zhì)為載體材料，以乳化劑為穩(wěn)定劑，采用熔融法和高壓均質(zhì)相結(jié)合的 方法，使藥物包載于脂質(zhì)納米粒中。本發(fā)明采用高壓勻化則有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0045] 本發(fā)明的注射用總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0046] 1.該固體脂質(zhì)納米粒毒性低，保證了用藥安全，提高了肌體的耐受性；
[0047] 2.該固體脂質(zhì)納米粒將總蟾毒內(nèi)脂包裹在類(lèi)脂核中，增加了藥物的水溶性和穩(wěn)定 性，可實(shí)現(xiàn)靶向、控釋效果，提高了藥物的生物利用度。
[0048] 3.該固體脂質(zhì)納米粒可經(jīng)表面修飾，提高藥物的治療效果。
[0049] 4.該固體脂質(zhì)納米?？蓢婌F干燥或冷凍干燥制成固體成品，延長(zhǎng)存放時(shí)間、運(yùn)輸 便捷，延長(zhǎng)了產(chǎn)品的有效期，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0050] 5.該固體脂質(zhì)納米粒制備工藝成熟。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，偏于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0051] 對(duì)本發(fā)明的總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒的粒徑和包封率等指標(biāo)的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)如 下：
[0052] (1)攝總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒的透射電鏡（TEM)照片
[0053] 將本發(fā)明總蟾毒內(nèi)脂納米?；鞈乙哼m當(dāng)稀釋?zhuān)渭釉诟采w碳膜的銅網(wǎng)上，用2. 0% 磷鎢酸鈉負(fù)染色液染色，用JEM-2010透射電子顯微鏡拍攝透射電鏡照片。
[0054] ⑵測(cè)定總蟾毒內(nèi)脂固體脂質(zhì)納米粒的粒徑大小及分布
[0055] 將