一種蛻皮激素用于制備改善動(dòng)物胸腺健康和/或功能藥物的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物應(yīng)用領(lǐng)域，特別是涉及蛻皮激素用于制備改善動(dòng)物胸腺健康和/ 或功能藥物的用途，所述蛻皮激素可以是純品蛻皮激素或者是提取物形式提供的蛻皮激素 (例如來源于植物、動(dòng)物的蛻皮激素），優(yōu)選來源于植物的蛻皮激素。 技術(shù)背景
[0002] 蛻皮激素是在調(diào)控昆蟲或甲殼動(dòng)物的生長(zhǎng)、變態(tài)、繁殖和滯育方面具有重要作用 的內(nèi)源留醇類化合物，原來被發(fā)現(xiàn)廣泛存在于昆蟲等無(wú)脊椎動(dòng)物體內(nèi)。后來，包括中國(guó)在內(nèi) 的許多國(guó)家發(fā)現(xiàn)了許多含蛻皮激素的植物和植物來源的新結(jié)構(gòu)的蛻皮激素。由于該類物質(zhì) 在植物中的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于在昆蟲及節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)的含量，植物蛻皮激素成為了人們研究和 開發(fā)的重點(diǎn)。
[0003] 植物蛻皮激素是天然存在的三菇烯類分子，在植物界中相對(duì)豐富，存在于5%的 野生植物中（Bathori和Pongracs，2005)。相關(guān)研究人員已經(jīng)對(duì)植物脫皮激素的生理作 用、特別是存在于哺乳動(dòng)物中的植物蛻皮激素的生理作用進(jìn)行了研究。尤其已經(jīng)證明，這 些分子促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成（Otaka等人，1968;Khimiko等人，2000;Syrov，2000)以及動(dòng)物 發(fā)育（Purser和Baker，1994)。還報(bào)告 了其有降血糖（Uchiyama等人，1970;Mironova和 Kholodova，1982;Takahashi和Nishimoto, 1992;Yang等人，2001;Chen等人，2004, 2006)、 降血脂（Mironova等人，1982 ;Syrov等人，1983)和利膽（Syrov等人，1986)的效果。此外， 這些分子具有抗氧化性（Kuzmenko等人，2001)并且是無(wú)毒的。
[0004] 植物蛻皮激素可以以純的形式或者以或多或少濃縮的植物提取物形式提供。水 龍骨、百葉青、川牛膝、紫背金盤、續(xù)斷、女貞子、熟地、山茱萸、懷山藥、丹皮、澤瀉、茯苓等重 要中藥也含有很高的植物蛻皮激素，可以用來提取植物蛻皮激素。本發(fā)明優(yōu)選使用露水草 (CyanotisarachnoidesC.B.Clarke)來提取植物脫皮激素。
[0005] 胸腺具有許多重要的功能，例如它是強(qiáng)有力的免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵參與者。胸腺是 負(fù)責(zé)產(chǎn)生功能性T細(xì)胞的器官。胸腺的一種作用是分化和成熟T淋巴細(xì)胞，造成自體反 應(yīng)性T細(xì)胞的陰性選擇和有用的T細(xì)胞的陽(yáng)性選擇（Marrack等1998Cell53 :627 ;Lo等 1997Tmmuno1Resl6 :3;Anderson等 1996AnnuRevImmunol14 :73) 〇
[0006] 盡管胸腺在出生后繼續(xù)發(fā)育并在青春期期間達(dá)到其最大尺寸，然而胸腺的逐漸縮 減，稱為衰退，在青春期后隨年齡穩(wěn)定地發(fā)生（Linton&Dorshkind2004NatImmunol5 :133)。 這種胸腺衰退是很正常的過程，其在衰老過程中例如提早和漸進(jìn)地發(fā)生。胸腺經(jīng)歷了與胸 腺上皮細(xì)胞的喪失和胸腺發(fā)生（thymopoiesis)減少相關(guān)的解剖學(xué)的顯著改變。這種新產(chǎn) 生的T細(xì)胞的輸出量的降低導(dǎo)致了循環(huán)的幼稚T細(xì)胞數(shù)量的減少以及細(xì)胞介導(dǎo)的免疫消 弱。
[0007] 除與年齡相關(guān)的胸腺衰退（即慢性胸腺萎縮）外，在對(duì)多種生理或病理的情 形應(yīng)答時(shí)，胸腺也顯示出急速衰退（即急性胸腺萎縮）（Taub&Longo2006Imuunological RevieWS205 :72)。例如，已經(jīng)報(bào)道了在妊娠、多種炎性疾病、細(xì)菌和病毒的感染、身體和情緒 壓力、營(yíng)養(yǎng)不良化學(xué)療法以及暴露于毒素期間，胸腺細(xì)胞數(shù)量和胸腺大小的改變。
[0008] 妥協(xié)的免疫應(yīng)答對(duì)不良的健康狀況、疲乏以及許多疾病狀態(tài)有貢獻(xiàn)。因此，再生胸 腺的能力是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的主要挑戰(zhàn)之一。這種方法將會(huì)應(yīng)用于許多威脅生命的疾病包括免疫 缺陷癥、癌癥和自身免疫??；嚴(yán)重的感染包括AIDS以及在抗衰老應(yīng)用中使用。這種方法可 以有利于多種情況，例如增加疫苗的有效性；逆轉(zhuǎn)免疫抑制狀態(tài)例如后化學(xué)療法/后放射 療法；器官移植；恢復(fù)特異的抗腫瘤免疫應(yīng)答；恢復(fù)特異的抗微生物免疫例如細(xì)菌、病毒、 真菌、寄生蟲；正?；疶細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)異常狀態(tài)例如自身免疫（多發(fā)性硬化、狼瘡、類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎）、變態(tài)反應(yīng)和皮炎/牛皮癬。
[0009] 己經(jīng)測(cè)試了許多不同的方法用以維持衰老期間的胸腺健康。己報(bào)道，胸腺組 織和骨髓的移植以及胸腺提取物的施用可以有助于逆轉(zhuǎn)與年齡相關(guān)的胸腺衰老和免疫 系統(tǒng)弱化的影響（Kouttab等 1989MedOncolTumorPharmacother. 6 :5;Pandolfi等 1983Thymus. 5 :235;Dabrowski等 1987AnnNYAcadSci496 :697;Valesini等 1986EurJ CancerClinOncol. 22 :531)〇
[0010] 最近，細(xì)胞因子（例如IL-7)和激素（例如GH、IGF-1)的全身施用己經(jīng)造成了隨 年齡增加的胸腺活性和T細(xì)胞輸出量（Henson等，ExpGerontol. 200439 :673 ;Virts等， 2006RejuvenationRes. 9：134)〇
[0011] 己經(jīng)報(bào)道了一些營(yíng)養(yǎng)方法，例如鋅的經(jīng)口施用（Dardenne等，1993ClinImmunol Immunopathol. 66 :127;Mocchegiani等，1995IntJImmunopharmacol. 17 :703)在一定程 度上改善了胸腺的功能。在建立小鼠應(yīng)激模型（stressmodel)前10天給予鋅和二乙基二 流代氨基甲酸鈉的組合恢復(fù)了應(yīng)激損害的胸腺重量和免疫功能（Obminska-Mrukowicz等， 2005JVetSci. 6 :25)。
[0012] 然而，過量的鋅補(bǔ)充可能具有缺點(diǎn)。最近的綜述報(bào)道，盡管認(rèn)為鋅是相對(duì)無(wú)毒的， 但是隨著高度的鋅攝取，將會(huì)發(fā)生明顯的毒性癥狀表現(xiàn)（惡心、嘔吐、上腹痛、昏睡和疲 乏）。己經(jīng)報(bào)道，低度攝取，但是超出了RecommendedDietaryAllowance(RDA)的量，例如 100-300mg鋅/天，誘導(dǎo)了具有貧血和中性粒細(xì)胞減少的伴隨癥狀的缺銅癥以及削弱免疫 力能的證據(jù)，和對(duì)低密度脂蛋白與高密度脂蛋白（LDL/HDL)膽固醇比率的不利影響。己經(jīng) 表明，甚至更低水平的鋅補(bǔ)充，接近于RDA的量也會(huì)妨礙銅和鐵的使用并對(duì)HDL膽固醇濃度 有不利的影響（Fosmire，AmericanJournalofClinicalNutrition. 51:225)。因此，介 于目前對(duì)于改善胸腺健康和/或功能的藥物的需求，本申請(qǐng)的發(fā)明人對(duì)多種物質(zhì)進(jìn)行了篩 選，發(fā)現(xiàn)蛻皮激素，特別是植物蛻皮激素在改善胸腺健康和/或功能上有顯著的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 為了改善胸腺健康以保護(hù)胸腺免于誘導(dǎo)的衰退，以及為了加速胸腺細(xì)胞的產(chǎn)生， 本發(fā)明提供一種將蛻皮激素用于制備改善動(dòng)物胸腺健康和/或功能藥物的用途。
[0014] 優(yōu)選地，所述改善動(dòng)物胸腺健康為有效減少胸腺萎縮。關(guān)于胸腺萎縮的產(chǎn)生，其通 常是在對(duì)多種生理的或者病理的情形，例如多種炎性疾病、細(xì)菌和病毒感染、身體和情緒壓 力、化學(xué)療法和/或暴露于毒素應(yīng)答時(shí)發(fā)生。
[0015] 優(yōu)選地，所述改善動(dòng)物胸腺健康為維持或者改善淋巴細(xì)胞功能和/或免疫系統(tǒng)， 以用于治療或預(yù)防淋巴細(xì)胞減少癥。
[0016] 優(yōu)選地，所述改善動(dòng)物胸腺健康為恢復(fù)胸腺重量和功能。
[0017] 優(yōu)選地，所述蛻皮激素為植物蛻皮激素。特別優(yōu)選為20-羥基蛻皮激素。所述植物 蛻皮激素可以是從露水草、水龍骨、百葉青、川牛膝、紫背金盤、續(xù)斷、女貞子、熟地、山茱萸、 懷山藥、丹皮、澤瀉或茯苓中提取到的植物蛻皮激素；特別優(yōu)選所述植物蛻皮激素是從露水 草中提取。
[0018] 優(yōu)選地，所述植物蛻皮激素是從露水草中提取到的20-羥基蛻皮激素，所述提取 方法如下：
[0019] 取露水草l〇〇〇g，水煮提取3次，每次加水10L，煮沸l(wèi)h，過濾，合并提取液，濃縮 至2L左右，加95 %乙醇1. 5L，攪拌靜置沉淀；取上清液，回收乙醇，濃縮液用等體積的混合 有機(jī)溶劑（V 正丁醇?v乙酸乙酯=1 ? 1)萃取3次，合并有機(jī)相，回收溶劑，浸膏用少量含水乙 醇稀釋，上HPD600大孔吸附樹脂，依次用三倍柱體積的水、20%乙醇、50%乙醇、80%乙醇 和95%乙醇洗依次脫；收集50%乙醇洗脫液，回收溶劑，殘?jiān)眠m量甲醇加熱溶解，冷卻靜 置，有晶體析出，反復(fù)重結(jié)晶，得20-羥基蛻皮激素晶體7. 8g。
[0020] 優(yōu)選地，所述植物蛻皮激素也可以是濃縮了植物蛻皮激素的露水草粗提取物，所 述粗提取物的提取方法如下：
[0021] 取露水草l〇〇〇g，水煮提取3次，每次加水10L，煮沸l(wèi)h，過濾，合并提取液，濃縮至 2L左右，加95%乙醇1. 5L，攪拌靜置沉淀；取上清液，加水至約2L，加95%乙醇3L攪拌靜 置沉淀；取上清液回收乙醇，噴霧干燥，得干膏粉106g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，含20-羥基蛻皮激素 12. 2%。
[0022] 所述20-羥基蛻皮激素的用量為成人口服150~lOOOrng/日，優(yōu)選地，所述20-羥 基蛻皮激素的用量為300~400mg/日。
[0023] 在應(yīng)用方面，本發(fā)明將所述蛻皮激素在青春期后服用，特別是給成年人和/或老 年受試者服用，以及受到外部條件影響而使得胸腺萎縮退化的個(gè)體服用。本發(fā)明將蛻皮激 素成功地應(yīng)用于特別是具有健康受損的，例如上述的所有情形的受試者。它也可以例如用 作為處于發(fā)生受損的健康危險(xiǎn)的受試者的預(yù)防措施。
[0024] 關(guān)于實(shí)驗(yàn)方面，本發(fā)明已經(jīng)在地塞米松誘導(dǎo)的胸腺萎縮模型中研究了蛻皮激素對(duì) 恢復(fù)胸腺重量和功能的作用。研究發(fā)現(xiàn)：用地塞米松（DEX)腹腔注射誘導(dǎo)的動(dòng)物胸腺退化 模型中，以動(dòng)物模型胸腺指數(shù)的大幅下降為表觀特征。即模型中觀察到的特征是嚴(yán)重的胸 腺萎縮。胸腺是主要的淋巴器官，其中T細(xì)胞進(jìn)行分化，導(dǎo)致陽(yáng)性選擇的胸腺細(xì)胞向外周淋 巴器官的T細(xì)胞依賴區(qū)域遷移。利用地塞米松腹腔注射誘導(dǎo)的胸腺退化小鼠模型進(jìn)行實(shí) 驗(yàn)，結(jié)果顯示服用（注射）蛻皮激素能有效地減少胸腺萎縮。結(jié)果表明，服用（注射）蛻皮 激素在維持或者改善胸腺健康和淋巴細(xì)胞功能中是有益的
[0025] 關(guān)于胸腺健康，雖然胸腺通常在青春期階段達(dá)到完整大小，但之后它有萎縮的趨 勢(shì)。因此，胸腺萎縮是例如隨年齡發(fā)生的熟知情形。這種萎縮的后果是如上所述，雖然在年 輕時(shí)建立了T淋巴細(xì)胞的儲(chǔ)備，但是這種功能在成年時(shí)降低。此外，胸腺大小也取決于營(yíng)養(yǎng) 狀態(tài)。營(yíng)養(yǎng)不良可能導(dǎo)致胸腺大小縮小和胸腺活性降低。
[0026] 此外，雖然在出生的時(shí)候，人類免疫系統(tǒng)仍是未成熟的，但是在生命的第一年內(nèi)， 胸腺就在T淋巴細(xì)胞的成熟中起著關(guān)鍵的作用，例如，用于分化未成熟的T淋巴細(xì)胞為成熟 的有能力的T淋巴細(xì)胞。因此，通過本發(fā)明將蛻皮激素也