白樺脂酸在制備抗真菌生物被膜藥物中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是白樺脂酸在制備抗真菌生物被膜藥 物中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物被膜是一個微生物聚集群體，是微生物不可逆的與無活力生物或活組織表面 接觸，由自身產(chǎn)生的細胞外基質(zhì)包裹著活細菌細胞形成的微生態(tài)結(jié)構(gòu)。生物被膜可形成于 自然環(huán)境中，也可形成于人類宿主體內(nèi)，它具有保護微生物細胞，抵抗各種理化刺激，調(diào)節(jié) 基因表達等作用。在日常生活和工業(yè)生產(chǎn)中，細菌生物被膜普遍存在，絕大多數(shù)細菌為了 生產(chǎn)，聚集形成生物被膜，從而可以生長在各種物體表面的保護膜中。早在1991年有研宄 表明，細菌生物被膜具有三維結(jié)構(gòu)，細菌含量不到1/3,而絕大部分是細菌分泌的粘性物質(zhì)。 生長在細菌生物被膜上的細菌在其生物學特性上，與浮游菌有明顯的不同。浮游菌易獲得 營養(yǎng)和氧氣，也易于排出代謝物，故繁殖快；而被膜細菌由于胞外多糖基質(zhì)的屏障難以獲得 營養(yǎng)供給而代謝緩慢。微生物產(chǎn)生生物被膜是一種重要的耐藥機制，在植入性器材，比如各 種人工假體、血管內(nèi)插管等常常發(fā)生真菌生物被膜感染，微生物形成生物被膜之后，耐藥性 可發(fā)生極為顯著的變化，據(jù)文獻報道，白色念珠菌形成生物被膜之后，對唑類抗真菌藥物的 MIC大大增加，是游離細胞的128倍以上。如何防治和克服生物被膜耐藥問題，已成為臨床 醫(yī)學亟需客服的難題。
[0003] 白樺脂酸（Betulinicacid，BA)是一種五環(huán)三貓類化合物，在自然界中廣泛存在， 在白樺樹皮中含量尤為豐富，1995年P(guān)isha發(fā)現(xiàn)體內(nèi)外實驗中白樺脂酸都能誘導黑色素瘤 細胞的凋亡。此外，研宄表明該類化合物具有顯著的抗腫瘤和抗HIV活性。白樺脂酸結(jié)構(gòu) 如下所示。
[0005] 中國期刊《華中科技大學學報（醫(yī)學版）》，2010年10月第39卷第5期刊登的論 文《白樺脂酸抑制鼻咽癌細胞CNE-1生長及其機制探討》，公開了白樺脂酸對鼻咽癌細胞的 抑制作用，MTT結(jié)果顯示：小劑量的白樺脂酸即對鼻咽癌CNE-1細胞有抑制生長作用。中國 期刊《中國藥學雜志》，2012年5月第47卷第9期刊登的論文《白樺脂酸抑制食管鱗狀細胞 癌增殖及相關(guān)機制的實驗研宄》，研宄抗腫瘤藥物白樺脂酸對人食管鱗癌細胞的抑制作用 及抗腫瘤作用機制，結(jié)果顯示：白樺脂酸能抑制人食管鱗癌KYSE170細胞的生長，這一作用 可能是通過誘導細胞凋亡、阻滯細胞停留在S期來實現(xiàn)的。中國期刊《吉林大學學報》，2009 年5月第40卷第3期刊登的論文《白樺脂酸體外抗腫瘤的活性和機制》，公開了白樺脂酸對 腫瘤細胞（人宮頸癌細胞HeLa，人乳腺癌細胞MCF-7,ZR)的生長具有抑制作用，細胞生長 抑制率隨劑量的增加而增加。黑龍江中醫(yī)藥大學2012年6月博士學位論文《白樺脂酸誘導 人宮頸癌HeLa細胞凋亡及機制的研宄》公開了白樺脂酸有明顯的抑制宮頸癌HeLa細胞生 長的作用，并誘導HeLa細胞凋亡，其作用機制可能與誘導caspase-3、CytoC蛋白的過度表 達，開放線粒體凋亡通路有關(guān)。
[0006] 但是，關(guān)于白樺脂酸的抗真菌生物被膜作用，目前還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的主要目的是提供白樺脂酸的新的藥理用途。
[0008] 本發(fā)明的再一的目的是，提供一種抗真菌生物被膜的藥物組合物。
[0009] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0010] 白樺脂酸及其藥學上可接受的鹽在制備抗真菌生物被膜藥物中的應用。
[0011] 所述的鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽等；所述的真菌為白念珠菌。
[0012] 所述的白樺脂酸結(jié)構(gòu)如下所示：
[0014] 白樺脂酸在制備抑制白念珠菌生物被膜形成的藥物中的應用。
[0015]白樺脂酸在制備消除白念珠菌生物被膜的藥物中的應用。
[0016] 所述的藥物為膏藥、乳劑、噴霧劑或膜劑。
[0017] 為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0018] 一種抗真菌被膜的藥物組合物，包括有效量的白樺脂酸和藥學上可接受的輔料或 載體。
[0019] 所述的真菌為白念珠菌。
[0020] 所述的藥物為膏藥、乳劑、噴霧劑或膜劑。所述的藥物用于抑制真菌生物被膜的生 長增殖，或用于抑制已形成的真菌生物被膜。
[0021] 本發(fā)明優(yōu)點在于：
[0022] 本發(fā)明提供了一種有效的抗白念珠菌生物被膜的方法，本發(fā)明所用化合物白樺脂 酸在較低的濃度下具有抑制白念珠菌生物被膜生長，或抑制已成熟的生物被膜的作用，其 最低有效濃度僅為2.0ymol/ml。本發(fā)明不僅為白樺脂酸提供了一種新的用途，也為臨床上 抑制真菌生物被膜的形成或破壞成熟的真菌生物被膜提供了有效的藥物。
【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作詳細說明，但是應理解所述實施例僅是范例， 不對本發(fā)明構(gòu)成任何限制。應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明 技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0024] 實施例1白樺脂酸對白念珠菌生物被膜的作用
[0025] 1、藥物
[0026] 白樺脂酸：購自上海一研生物科技有限公司；氟康唑：購自Sigma公司；兩性霉素 B:購自Sigma公司；XTT購自Sigma公司；二甲亞砜（DMSO)購自Sigma公司；PBS溶液購自 Sigma公司
[0027] 白樺脂酸用DMSO溶解，使用前經(jīng)0. 22ym的過濾器過濾除菌，-20°C避光保存； 兩性霉素B與氟康唑分別溶解于DMSO溶液中。XTT用滅菌的PBS緩沖溶液配成.5mg/ml 的飽和溶液，經(jīng)0. 22ym的過濾器過濾除菌；menadione用100%丙酮配成10M溶液，XTT、 menadione于-80°C保存。實驗前先將藥液取出并于保溫箱中梯度融化。
[0028] 2、實驗用菌株
[0029] 白念珠菌SC5315,購自ATCC。實驗菌株于沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA)劃板活化， 于30°C培養(yǎng)48h后，挑取單克隆再次劃板活化，取第二次所得單克隆置于SDA平板，用上述 方法培養(yǎng)后于4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0030] 3、培養(yǎng)液的配置
[0031]RPMI1640 液體培養(yǎng)液：RPMI1640(GibcoBRL) 10g、NaHC032. 0g、嗎啡丙磺酸 (MOPS，Sigma) 34. 5g，加三蒸水900ml溶解，NaOH調(diào)pH至7.0,三蒸水定容至1000ml， 0. 22ym微孔濾膜過濾除菌，分裝后于4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0032] 沙堡葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基（SDA):蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂18g，加三蒸水 900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，調(diào)整pH至7. 0,以三蒸水定容至1000ml，高壓 滅菌（121°C，15min)后子4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0033]