嵌段共聚物載多烯紫杉醇納米膠束制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及包載難溶性抗腫瘤藥物多烯紫杉醇的甲基聚乙二 醇聚D, L-乳酸I父束制劑及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 多烯紫杉醇（docetaxel，商品名Taxotere?、多帕菲?等）是新一代紫杉烷類抗腫 瘤藥物，最初從歐洲漿果紫杉（Taxus baccata)針葉中提取的無(wú)活性化合物再經(jīng)半合成得 到。它通過(guò)與小管蛋白結(jié)合，使腫瘤細(xì)胞停止在有絲分裂期而死亡，有效抑制腫瘤細(xì)胞的復(fù) 制。臨床研究表明，多烯紫杉醇可單獨(dú)或與其它抗腫瘤藥物合用治療非小細(xì)胞性肺癌、乳腺 癌、卵巢癌、胃癌等癌癥。由于多烯紫杉醇水溶性差，現(xiàn)有注射劑多采用Tween-80作溶劑， 同時(shí)配有含13%乙醇的溶媒，臨用前稀釋，并且腫瘤靶向性不高。
[0003] Tween-80具有溶血性，且粘性大，因此市售制劑注射后容易引起較嚴(yán)重的過(guò)敏反 應(yīng)，刺激性反應(yīng)大，中重度過(guò)敏發(fā)生率高達(dá)25. 9%，75mg/m2和lOOmg/m2劑量使用時(shí)，中度以 上過(guò)敏發(fā)生率分別為31%和41. 3%，注射部位反應(yīng)率也高達(dá)13. 3%。故臨床使用多烯紫杉醇 時(shí)需要作防過(guò)敏反應(yīng)處理。另外，臨床使用多烯紫杉醇也頗為繁瑣，輸液過(guò)程中需嚴(yán)密觀察 輸液部位有無(wú)滲漏，如有滲漏必須立即更換注射部位，并行局部封閉。同時(shí)，用藥期間需常 規(guī)心電監(jiān)護(hù)，密切觀察呼吸、心率、血壓變化，高度警惕過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生，做好嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng) 的醫(yī)護(hù)搶救準(zhǔn)備。目前，降低多烯紫杉醇制劑毒副作用、提高治療效果，是人們廣泛關(guān)注的 技術(shù)難點(diǎn)，也是一個(gè)世界性技術(shù)難點(diǎn)。
[0004] 聚合物膠束研究是藥劑學(xué)納米體系研究的重要領(lǐng)域之一，近年來(lái)發(fā)展迅速。由于 聚合物膠束具有臨界膠束濃度較低、增溶空間較大、熱力學(xué)穩(wěn)定性較好的優(yōu)點(diǎn)，加之利用聚 合物疏水嵌段的不同性質(zhì)，可采用化學(xué)、物理以及靜電作用等多種方法包裹藥物，使聚合物 膠束在藥物載體領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。聚乳酸（PLA)是可生物降解材料，其最終代謝 產(chǎn)物為二氧化碳和水，中間代謝產(chǎn)物乳酸也是體內(nèi)正常代謝產(chǎn)物，不會(huì)在體內(nèi)蓄積。聚乙二 醇（PEG)為常用的親水性嵌段，作為一種聚醚類高分子物質(zhì)，PEG具有良好的親水性和生物 相容性。然而，現(xiàn)有技術(shù)中沒(méi)有任何文獻(xiàn)教導(dǎo)將疏水性的PLA和PEG兩者鍵合在一起所合 成的、既有親水性鏈段又有疏水性鏈段的高分子嵌段聚合物可作為用于多烯紫杉醇的膠束 的載體。
[0005] 評(píng)價(jià)聚合物膠束系統(tǒng)的參數(shù)有粒徑、載藥量和穩(wěn)定性等參數(shù)。世界上已報(bào)道包載 多烯紫杉醇的膠束，其載藥量一般為5%左右，幾乎沒(méi)有超過(guò)10%者，且對(duì)于凍干制劑穩(wěn)定性 研究也較少論述，大大限制了多烯紫杉醇膠束在臨床方面的真正應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個(gè)目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種包載難溶性抗腫瘤藥物多烯 紫杉醇的甲基聚乙二醇 2_-b-聚D，L-乳酸_(mPEG-a-b-PDLUU。~·)膠束制劑。所 述膠束制劑包含抗腫瘤藥物多烯紫杉醇、兩親性嵌段共聚物甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳 酸~ 15〇。、以及任選的藥學(xué)上可接受的凍干保護(hù)劑。
[0007] 本發(fā)明中，膠束載體材料選用HiPEG2cicicTb-PDLLAicicic^ 15cici作為載體材料。本發(fā)明同時(shí) 提供了 mPEG2_-b-PDLLA1QQ卜15QQ的優(yōu)選合成方法，所述方法為：將mPEG_減壓除水后，加入 0. 5% (w/w)辛酸亞錫，在IKTC下攪拌0. 5小時(shí)，然后加入D，L-丙交酯，在N2保護(hù)和130°C 加熱條件下，反應(yīng)5小時(shí)，靜置室溫后，用二氯甲烷溶解，然后滴入在-20°C下冰凍2小時(shí)以 上的乙醚中，將析出的產(chǎn)物過(guò)濾，室溫減壓干燥，后處理工作（以二氯甲烷溶解后滴入冰凍 乙醚中）重復(fù)2次即可得產(chǎn)物。PDLLA嵌段分子量通過(guò) 1H-NMR測(cè)定為1000~1500。載體 材料優(yōu)選mPEG2(IQ(l-b-PDLLA 13(l(l嵌段聚合物。
[0008] 本發(fā)明中，當(dāng)加入凍干保護(hù)劑時(shí)，所述凍干保護(hù)劑為PEG2000、泊洛沙姆 188 (Poloxamerl88)、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、mPEG2(l(IQ-b-PDLLA13(l(l、人血白蛋白 (HAS)、PVP K30中的任意一種或多種的混合物，優(yōu)選葡萄糖、mPEG2_-b-PDLLA13QQ、HAS中的 一種或多種的混合物。凍干保護(hù)劑的添加量為基于凍干制劑總量的質(zhì)量計(jì)的1~10%，優(yōu)選 5%質(zhì)量。
[0009] 本發(fā)明中，多烯紫杉醇與πιΡΕ6_-?3-Ρ0?Λ_~15(ι(ι的質(zhì)量比為1:3~1:9,優(yōu)選 1:5。
[0010] 本發(fā)明的納米膠束制劑的載藥量在10%~25%之間，優(yōu)選15%~18% ;復(fù)溶后的納 米粒徑在15nm~25nm之間，粒子的分散系數(shù)Ρ. I.在0. 09~0. 15之間；多烯紫杉醇在所 述膠束中包封率至少達(dá)到85%。本發(fā)明的納米膠束制劑可以為凍干形式，即凍干納米膠束制 劑，可供靜脈注射。
[0011] 本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供該所述多烯紫杉醇膠束制劑的制備方法。
[0012] 本發(fā)明的包載多烯紫杉醇的mPEG2_-b-PDLLA_~ 15QQ膠束凍干制劑的制備方法， 其包括步驟：
[0013] (1)采用薄膜水化法制備載多烯紫杉醇膠束水溶液；
[0014] 將多烯紫杉醇與HiPEG2cicicTb-PDLLAicicic^ 15Μ溶于有機(jī)溶劑中，去除有機(jī)溶劑，得到凝 膠狀含藥脂膜，隨后加入水溶液溶解分散含藥脂膜，制得膠束溶液；
[0015] (2)所述膠束溶液(任選地加入凍干賦形劑)，經(jīng)過(guò)除菌過(guò)濾、冷凍干燥，制得載藥 聚合物膠束的凍干制劑。
[0016] 在一個(gè)具體方案中，本發(fā)明的多烯紫杉醇納米膠束制劑的制備方法包括如下步 驟：
[0017] (1)將多烯紫杉醇和甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳酸1(ι(ι(ι~15(ι(ι溶于有機(jī)溶劑中；
[0018] ⑵除去有機(jī)溶劑，得到含多烯紫杉醇的聚合物脂膜；
[0019] (3)加入注射用水，在25°C~60°C下水化；
[0020] (4)渦旋振蕩或超聲，得到納米膠束溶液；
[0021] (5)任選地加入凍干保護(hù)劑，0. 22μπι無(wú)菌微孔濾膜過(guò)濾除菌，放入-50°C~_70°C 冰箱冷凍12小時(shí)之后冷凍干燥，即可得包載多烯紫杉醇的甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳 酸ICICICI ~ 1KICI納米膠束制劑。
[0022] 在更具體的實(shí)施方案中，在步驟（2)中通過(guò)減壓除去有機(jī)溶劑和/或在真空條件 下除去有機(jī)溶劑；在步驟（3)中在25°C~60°C、優(yōu)選35°C~45°C下水化1~2小時(shí)；在步 驟（4)中渦旋振蕩或超聲1~5分鐘。
[0023] 本發(fā)明中，所述的有機(jī)溶劑，是指可以完全溶解HiPEG2cicicTb-PDLLA icicic^ 15TO和多烯 紫杉醇的有機(jī)溶劑，包括乙腈、甲醇、乙醇和三氯甲烷等，上述溶劑可單獨(dú)或者混合使用；所 述有機(jī)溶劑優(yōu)選乙腈；所述有機(jī)溶劑的加入量體積（ml)與藥物和輔料總量(mg)的比例為 1:5 ~1:60,優(yōu)選 1:60。
[0024] 本發(fā)明中，所述溶解藥膜（即，含藥脂膜）的分散溶液選自注射用水。
[0025] 本發(fā)明中，所述的膠束溶液可直接凍干，或者在加入凍干保護(hù)劑后凍干。
[0026] 所述的凍干制劑可以采用注射用水、5%葡萄糖注射液或0.9%氯化鈉注射液作為 臨床用藥的分散介質(zhì)。
[0027] 本發(fā)明中，凍干前和復(fù)溶后膠束粒徑范圍為15~25nm，分散系數(shù)P. I介于0. 09~ 0· 15。
[0028] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得，或者采用本說(shuō)明書中記載的制備方法獲得 (如果說(shuō)明書中描述了制備方法）；對(duì)于本發(fā)明中沒(méi)有具體描述的裝置、條件（溫度、時(shí)間 等）、物質(zhì)、用量、方法等，均可采用本領(lǐng)域已知的或本領(lǐng)域技術(shù)人員按照常規(guī)技術(shù)可確定 的。
[0029] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供所述凍干制劑在制備用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌或胰腺 癌的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明以小鼠轉(zhuǎn)移性乳腺癌4T1和Capan-2胰腺癌為腫瘤研究模型， 顯示了多烯紫杉醇膠束比現(xiàn)有多烯紫杉醇市售制劑更有效的抑制了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，提高了 治療效果，同時(shí)降低了系統(tǒng)毒性。
[0030] 由于胰腺癌解剖位置深、癥狀隱匿、導(dǎo)致其不易早期發(fā)現(xiàn)；即使影像學(xué)能夠發(fā)現(xiàn)的 小胰癌，相當(dāng)一部分已有淋巴轉(zhuǎn)移和神經(jīng)浸潤(rùn)，術(shù)后易于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，而且對(duì)常規(guī)的化療、 放療均不敏感。傳統(tǒng)的一線化療藥物只有吉西他濱；而紫杉烷類藥物，尤其是多烯紫杉醇， 是在腫瘤繼發(fā)轉(zhuǎn)移灶治療和頑固性腫瘤治療中使用最為廣泛的化療藥物。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)， 將本發(fā)明的多烯紫杉醇納米膠束制劑用于治療胰腺癌或轉(zhuǎn)移性胰腺癌，可取得意想不到的 治療效果，這為為紫杉烷類藥物在胰腺癌治療中的應(yīng)用提供了重要的借鑒意義。
[0031] 本發(fā)明的包