(.?.，]\1^7-1^(1;[110，11 Stoynov, K. Berg, C. Shen, X. Jiang, B. R. Gabel, H. Yu, L. J. Foster, and R. C. Brunham. 2008. Immunoproteomic discovery of novel T cell antigens from the obligate intracellular pathogen Chlamydia. J Immunol 180:2459-2465)。在體外通過抗原特 異的⑶4T細(xì)胞識別這些肽，并且包含MHC結(jié)合肽的重組蛋白能夠通過抗小鼠生物型沙眼 衣原體感染的免疫在體內(nèi)部分地誘導(dǎo)保護(hù)（Yu, H, X. Jiang, C. Shen, K. P. Karunakaran, and R.C.Brunham. 2009. Novel Chlamydia muridarum T cell antigens induce protective immunity against lung and genital tract infection in murine models. J Immunol 182:1602-1608)。
[0008] 例如在 US 6030799、US 6696421、US 6676949、US 6464979、US6653461、US 6642023、US 6887843 和 US 7459524 ;或者；在美國專利公開 2005/0232941、2009/0022755 和2008/0102112中公開了衣原體的序列（核酸和多肽）。例如在PCT公開No. WO 2010/085896和W02013/044398中公開了具體的衣原體抗原。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本公開部分地提供了由衣原體屬衍生的融合蛋白。本發(fā)明還部分地提供了使用所 述融合蛋白治療或預(yù)防衣原體感染的方法。
[0010] 在一個方面，提供了免疫原性組合物，其包括融合蛋白以及生理上可接受的載 體，所述融合蛋白包括至少兩種選自以下的衣原體蛋白：多態(tài)膜蛋白G(PmpG)、多態(tài)膜蛋 白F (PmpF)、多態(tài)膜蛋白E (PmpE)、多態(tài)膜蛋白H(PmpH)、核糖體蛋白L6 (RplF)、抗-抗-〇 因子（Anti-anti-sigma factor，Aasf)、轉(zhuǎn)位磷酸肌動蛋白（Tarp)、對應(yīng)于基因座標(biāo)簽 CT143/TC0420的假定蛋白、金屬蛋白酶、胰島素酶家族（CT806/TC0190)、對應(yīng)于基因座標(biāo) 簽CT538/TC0825的假定蛋白、對應(yīng)于基因座標(biāo)簽CT017/TC0285的假定蛋白、對應(yīng)于基因座 標(biāo)簽CT619的假定蛋白、或M0MP，或其免疫原性片段。
[0011] 在備選的實施方式中，所述融合蛋白包括組合：PmpG與M0MP、PmpG與PmpF、PmpG 與 PmpH 或者 PmpE 與 PmpF。
[0012] 在備選的實施方式中，所述組合物進(jìn)一步包括佐劑，例如DDA/TDB、DDA/MMG或 DDA/MPL〇
[0013] 在備選的方面，提供了用于在動物中誘發(fā)抗衣原體屬或其組分的免疫應(yīng)答的方 法，所述方法通過給予有效量的文中所述的組合物給動物而在所述動物中誘發(fā)免疫應(yīng)答。 所述免疫應(yīng)答可為細(xì)胞免疫應(yīng)答。
[0014] 在備選的方面，提供了治療或預(yù)防動物中衣原體屬感染的方法，所述方法通過給 予有效量的文中所述的組合物給所述動物，從而治療或預(yù)防所述動物中的衣原體屬感染。
[0015] 在備選的實施方式中，所述衣原體屬可為沙眼衣原體或小鼠生物型沙眼衣原體。
[0016] 在備選的實施方式中，所述動物可為人類。
[0017] 在備選的方面，提供了文中描述的組合物用于在動物中誘導(dǎo)抗衣原體屬或其組分 的免疫應(yīng)答的用途。所述免疫應(yīng)答可為細(xì)胞免疫應(yīng)答。
[0018] 在備選的方面，提供了文中描述的組合物用于治療或防止動物中衣原體屬或其組 分的感染的用途。所述衣原體屬可為沙眼衣原體或小鼠生物型沙眼衣原體。所述動物可為 人類。
[0019] 該概述并不必然描述了本發(fā)明的全部特征。
【附圖說明】
[0020] 根據(jù)下面參照附圖所做的說明，本公開的這些和其它特征將變得更明顯，其中：
[0021] 圖IA~II顯示了小鼠生物型沙眼衣原體和沙眼衣原體蛋白的氨基酸序列以及相 應(yīng)的核酸序列（SEQ ID No: 1~35)。
[0022] 圖2A~F顯示了 PmpE-PmpF&PmpG-PmpH融合蛋白的氨基酸和核酸序列（斜體的 序列表示第二個蛋白；加下劃線的序列表示連接兩個蛋白結(jié)構(gòu)域的a螺旋連接子；SEQ ID NO :36 ~41)。
[0023] 圖3A~B為顯示在第6天（A)和第12天（B)由融合蛋白引起的抗衣原體生殖道 感染的保護(hù)的圖。
[0024] 圖4A~C為顯示在C57 (A)、Balb/c⑶或C3H(C)小鼠中用單獨的（混合的）或 融合的形式的PmpE、F、G、H加上MOMP免疫后，小鼠生物型沙眼衣原體特異的細(xì)胞因子反應(yīng) 的圖。
[0025] 圖5A~C為顯示在用單獨的（混合的）或融合的形式的PmpE、F、G、H加上MOMP 免疫后，在C57(A)、Balb/c(B)或C3H(C)小鼠中的小鼠生物型沙眼衣原體個抗原特異的 IFN-y反應(yīng)的圖。
[0026] 圖6A~C為顯示在用單獨的（混合的）或融合的形式的PmpE、F、G、H加上MOMP 免疫后，疫苗在C57 (A)、Balb/c (B)或C3H(C)小鼠中引起的抗小鼠生物型沙眼衣原體生殖 道感染的保護(hù)的圖。
[0027] 圖7A~C為顯示在用單獨的（混合的）或融合的形式的PmpE、F、G、H加上MOMP 免疫后，疫苗在C57 (A)、Balb/c (B)或C3H(C)小鼠中引起的抗小鼠生物型沙眼衣原體生殖 道感染的保護(hù)的圖。
【具體實施方式】
[0028] 本公開部分地提供了衍生自衣原體屬蛋白的融合蛋白。本公開還部分地提供了使 用所述融合蛋白治療或預(yù)防衣原體感染的方法。
[0029] 在一些實施方式中，這些融合蛋白可用作用于預(yù)防或治療衣原體屬感染的疫苗。
[0030]衣原體屬（Chlamydia spp.)
[0031] "衣原體屬"意思是為專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲的細(xì)菌的屬。衣原體屬包括沙眼衣原體 (人病原體）和小鼠生物型沙眼衣原體（對小鼠和倉鼠致?。Ｓ捎谛∈笊镄蜕逞垡略?體和沙眼衣原體是與它們的寄主物種共進(jìn)化的高度直系同源的致病微生物，小鼠生物型沙 眼衣原體已經(jīng)用作用于研宄細(xì)胞免疫和疫苗開發(fā)的穩(wěn)?。╮obust)動物模型。
[0032] 在一些實施方式中，沙眼衣原體無限制地包括沙眼衣原體血清型D/UW-3/CX，以及 血清型A、B、Ba、C (沙眼中涉及）、血清型D、E、F、G、H、I、J、K (泌尿生殖道感染中涉及）和 LI、L2、L3 (性病性淋巴肉芽腫血清型）。
[0033] 在一些實施方式中，小鼠生物型沙眼衣原體包括小鼠生物型沙眼衣原體小鼠肺炎 (MoPn)菌株 Nigg。
[0034] 已經(jīng)確定了各種衣原體屬的基因組序列。例如，在Stephens, R. S?等 人,1998 (Genome sequence of an obligate intracellular pathogen of humans:Chlamydia trachomatis. Science 282(5389):754-759)中描述了沙眼衣原體菌株 D/UW-3/CX的基因組序列，并以GenBank登錄號NC_000117. I, GI: 15604717提供；文中稱為 "沙眼衣原體基因組序列"。
[0035]例如，在 Read, T.，等人，2000 (Genome sequences of Chlamydia trachomatis muridarum MoPn and Chlamydia pneumoniae AR39Nucleic Acids Res. 28(6) :1397-1406)中描述了小鼠生物型沙眼衣原體的基因組序列，并以GenBank登錄 號NC_002620. 2, GI :29337300提供；文中稱為"小鼠生物型沙眼衣原體基因組序列"。
[0036] 衣原體屬融合多肽和核酸分子
[0037] 用于根據(jù)本公開的組合物和方法中的化合物無限制地包括含有兩條或更多條文 中描述的衣原體多肽的序列的融合蛋白，例如表1或表2，或圖IA-II中列出的蛋白或多肽， 或其免疫原性片段，以及編碼這樣的融合蛋白的核酸分子。
[0038] 表1:小鼠生物型沙眼衣原體衍生的源蛋白相對于沙眼衣原體、其它細(xì)菌和人類 的同源性
【主權(quán)項】
1. 一種免疫原性組合物，其包括融合蛋白以及生理學(xué)上可接受的載體，所述融合蛋白 包括至少兩種選自以下的衣原體蛋白：多態(tài)膜蛋白G(PmpG)、多態(tài)膜蛋白F(PmpF)、多態(tài)膜 蛋白E(PmpE)、多態(tài)膜蛋白H(PmpH)、核糖體蛋白L6(RplF)、抗-抗-〇因子（Aasf)、轉(zhuǎn)位 磷酸肌動蛋白（Tarp)、對應(yīng)于基因座標(biāo)簽CT143/TC0420的假定蛋白、金屬蛋白酶、胰島素 酶家族（CT806/TC0190)、對應(yīng)于基因座標(biāo)簽CT538/TC0825的假定蛋白、對應(yīng)于基因座標(biāo)簽 CT017/TC0285的假定蛋白、對應(yīng)于基因座標(biāo)簽CT619的假定蛋白、M0MP，或其免疫原性片 段。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述融合蛋白包括PmpG和M0MP。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述融合蛋白包括PmpG和PmpF。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述融合蛋白包括PmpG和PmpH。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述融合蛋白包括PmpE和PmpF。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的組合物，其中，所述組合物進(jìn)一步包括佐劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中，所述佐劑選自DDA/TDB、DDA/MMG或DDA/MPL。
8. -種在動物中誘發(fā)抗衣原體屬或其組分的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括將有效量 的權(quán)利要求1至7任一項所述的組合物施予所述動物，借此在所述動物中誘發(fā)免疫應(yīng)答。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述免疫應(yīng)答為細(xì)胞免疫應(yīng)答。
10. -種治療或預(yù)防動物中衣原體屬感染的方法，所述方法包括將有效量的權(quán)利要求 1至7任一項所述的組合物施予所述動物，借此治療或預(yù)防所述動物中的衣原體屬感染。
11. 根據(jù)權(quán)利要求8~10任一項所述的方法，其中，所述衣原體屬為沙眼衣原體或小鼠 生物型沙眼衣原體。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8~11任一項所述的方法，其中，所述動物為人類。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1~7任一項所述的組合物用于在動物中誘發(fā)抗衣原體屬或其組分 的免疫應(yīng)答的用途。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其中，所述免疫應(yīng)答為細(xì)胞免疫應(yīng)答。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1~7任一項所述的組合物用于治療或預(yù)防動物中衣原體屬感染的 用途。
16. 根據(jù)權(quán)利要求13~15任一項所述的用途，其中，所述衣原體屬為沙眼衣原體或小 鼠生物型沙眼衣原體。
17. 根據(jù)權(quán)利要求13~16任一項所述的用途，其中，所述動物為人類。
【專利摘要】本發(fā)明部分地提供了源自衣原體屬的融合蛋白。本發(fā)明還部分地提供了使用所述融合蛋白治療或預(yù)防衣原體感染的方法。
【IPC分類】A61K39-118, A61P37-04, A61K31-04
【公開號】CN104812406
【申請?zhí)枴緾N201380052435
【發(fā)明人】R·C·布魯漢姆, K·P·卡魯納卡拉恩, 俞紅
【申請人】英屬哥倫比亞大學(xué)
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2013年8月8日
【公告號】CA2881213A1, WO2014022936A1