Immunol Lett) 55:99-104)。 所述'反向信號(hào)傳導(dǎo)'也已描述于B慢性淋巴細(xì)胞性白血病（B-CLL)細(xì)胞的子組中，且⑶70 可以充當(dāng)轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)以促進(jìn)PM刺激的純化B-CLL細(xì)胞的增殖的受體（倫斯等人，1999,前 述）。這些觀察結(jié)果表明⑶27和⑶70接合的情況可以導(dǎo)致將激動(dòng)信號(hào)傳遞到表達(dá)⑶27和 ⑶70的細(xì)胞。
[0010] 已在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE)的模型中研究⑶70/⑶27共刺激在細(xì) 胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病中的作用（中島（Nakajima)等人，2000,神經(jīng)免疫學(xué)雜志（J Neuroimmunol) 109:188-96)。體內(nèi)投與特定抗小鼠 CD70mAb(克隆株FR-70)通過在不影響 T細(xì)胞激活、Ig產(chǎn)生或TH1/TH2細(xì)胞平衡的情況下抑制抗原誘發(fā)的TNF-α產(chǎn)生而顯著抑制 EAE的起始。但是，所述治療在已確立的疾病中具有極小功效。已報(bào)導(dǎo)通過TNF-α和IL-12 增強(qiáng)T細(xì)胞上的⑶70的表達(dá)且通過IL4下調(diào)（倫斯等人，1998,前述）。因此，⑶70/⑶27 介導(dǎo)的T細(xì)胞-T細(xì)胞相互作用可以在增強(qiáng)T hi介導(dǎo)的免疫反應(yīng)而不是T Η2介導(dǎo)的反應(yīng)中起 一定作用。支持這個(gè)假定，抗小鼠 CD70mAb FR-70也在抑制Tm介導(dǎo)的膠原蛋白誘發(fā)的關(guān) 節(jié)炎中有效（中島等人，2000,前述）。相比之下，相同抗小鼠⑶70mAb在調(diào)節(jié)NZB/NZW Fl 小鼠中的狼瘡和敏感BALB/c小鼠中的實(shí)驗(yàn)利什曼原蟲（Leishmania)主要感染中不顯示任 何功效，所述二者均主要為T h2介導(dǎo)的自體免疫性反應(yīng)（中島等人，1997,免疫學(xué)雜志158， 1466-72;秋葉（Akiba)等人，2000,實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志（J Exp Med) 191:375-380)。
[0011] 尚未在另一種^介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，急性移植物抗宿主疾病（aGVHD)中研究CD70 的作用。GVHD為當(dāng)移植的BM供體與受者之間存在組織相容性抗原差異時(shí)發(fā)生的同種異 體骨髓移植（BMT)療法的主要且通常致死性的結(jié)果（登哈恩（den Haan)等人，1995,科 學(xué)268:1476)。GVHD由存在于移植骨髓以及其它小細(xì)胞群中的成熟T細(xì)胞造成（格拉特 (Giralt)和錢普林（Champlin)，1994,血液84:3603)。值得注意的是已在特征為同種異體 反應(yīng)的病況中的CD4+細(xì)胞上，如在嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷患者中的母本T細(xì)胞移植的情況下體 內(nèi)檢測(cè)到⑶70 (布魯尼奧尼（Brugnoni)等人，免疫學(xué)快報(bào)55:99-104)。通過如環(huán)孢靈、皮 質(zhì)類固醇或甲氨蝶呤的pan-T細(xì)胞免疫抑制劑實(shí)現(xiàn)GVHD的預(yù)防。除缺乏特異性以外，這些 藥劑也與顯著不良副作用相關(guān)。為限制這些非所要作用和正常T細(xì)胞功能的破壞，非常需 要基于直接參與同種異體識(shí)別和移植排斥反應(yīng)的T細(xì)胞的選擇性定向的其它治療性干預(yù)。
[0012] CD70為抗體定向免疫療法的潛在有用標(biāo)靶。如前文指示，CD70在正常細(xì)胞中具 有受限的表達(dá)模式：在生理?xiàng)l件下，⑶70表達(dá)大多限制最近抗原活化的T和B細(xì)胞，且當(dāng)抗 原刺激停止時(shí)，其表達(dá)下調(diào)。認(rèn)為⑶70的關(guān)鍵作用為便于漿細(xì)胞分化和促進(jìn)長(zhǎng)期T細(xì)胞記 憶的產(chǎn)生和維持。另外，來自動(dòng)物模型的證據(jù)表明不受調(diào)控的CD70/CD27相互作用可以促 進(jìn)免疫病癥，且在人類中，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也指向如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬和多發(fā)性硬化癥的T hi 介導(dǎo)的免疫病癥中的CD70/CD27路徑的潛在異常調(diào)節(jié)。備受關(guān)注的是CD70在包括淋巴瘤 B細(xì)胞、霍奇金和里德-斯騰伯格細(xì)胞、神經(jīng)來源和多種癌瘤的惡性細(xì)胞的多種轉(zhuǎn)化細(xì)胞上 表達(dá)。
[0013] 若干小組已表明抗⑶70mAb在淋巴細(xì)胞活化的體外模型和Thi介導(dǎo)的反應(yīng)的動(dòng)物 模型中的抑制性作用。焦點(diǎn)在于抗體阻斷CD70/CD27共刺激路徑以達(dá)成療效的用途。但是， 所述方法的一個(gè)主要缺點(diǎn)為已知參與免疫疾病的大量信號(hào)傳導(dǎo)受體，例如CD28/CD80/CD86 共刺激路徑。因此，阻斷一個(gè)特異性信號(hào)傳導(dǎo)路徑可以對(duì)疾病發(fā)展僅具有最小影響。這通過 抗CD70mAb可以僅部分抑制通過同種異體刺激劑細(xì)胞誘發(fā)的體外T細(xì)胞活化（新鎮(zhèn)等人， 1995,前述）和一旦疾病確立，抗⑶70mAb在EAE中不顯示療效（中島等人，2000,前述）的 觀察結(jié)果予以支持。
[0014] 因此，在所屬領(lǐng)域中需要開發(fā)一種通過不同于阻斷⑶70/⑶27相互作用或除其以 外的方法消耗或抑制涉及癌癥和/或免疫疾病的表達(dá)CD70的細(xì)胞的生長(zhǎng)的方法。由于CD70 表達(dá)于呈現(xiàn)樹突狀細(xì)胞、活化T細(xì)胞和活化B細(xì)胞的成熟抗原的表面上，可以證實(shí)可以靶向 和抑制或消耗CD70+細(xì)胞的藥劑在去除呈現(xiàn)自身抗原的抗原呈現(xiàn)細(xì)胞和攻擊自體反應(yīng)性活 化T或B細(xì)胞中與表達(dá)⑶70的腫瘤細(xì)胞一樣有效。
[0015] 已用于增加抗體療效的方法為放射性標(biāo)記和與化學(xué)治療組合；但是，這些方法包 括與非所要副作用相關(guān)。舉例來說，同位素療法與骨髓抑制相關(guān)（維齊希（WitZig)，2001， 癌癥化療與藥理學(xué)（Cancer Chemother Pharmacol) 48 (增刊1):S91_5)，且與抗體和化學(xué)治 療劑的組合療法與免疫抑制相關(guān)。另外，同位素標(biāo)記的物質(zhì)為難以生產(chǎn)的，且患者通常在用 同位素標(biāo)記的物質(zhì)的初始治療之后經(jīng)歷復(fù)發(fā)。
[0016] 因此，需要以使能夠?qū)Ρ磉_(dá)⑶70的細(xì)胞施加臨床上有用的細(xì)胞毒性、細(xì)胞生長(zhǎng)抑 制或免疫抑制作用（尤其在不對(duì)不表達(dá)CD70的細(xì)胞施加非所要作用的情況下）的方式構(gòu) 建抗CD70ADC。所述化合物將為針對(duì)表達(dá)CD70的癌癥或通過表達(dá)CD70的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫 病癥的有用治療劑。最近，已鑒別mAb，如2H5?？梢杂糜陲@像、診斷和/或治療用途的抗 CD70抗體-藥物結(jié)合物因此為所需的。本發(fā)明提供用于免疫學(xué)和腫瘤學(xué)的所述抗體-藥物 結(jié)合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 本文披露通過一或多個(gè)具有一或多個(gè)連接子的非天然氨基酸連接于毒性部分的 抗CD70抗體，和制造所述非天然氨基酸和多肽的方法。
[0018] 本發(fā)明的一些實(shí)施例提供一種包含一或多個(gè)非天然編碼氨基酸的抗⑶70抗體。 在一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體包含一個(gè)非天然編碼氨基酸。在一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體 包含兩個(gè)非天然編碼氨基酸。在一些實(shí)施例中，抗CD70抗體包含兩個(gè)或兩個(gè)以上非天然編 碼氨基酸。在一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體另外包含3、4、5或6個(gè)非天然編碼氨基酸或更多 翻譯后修飾。在一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體包含SEQ ID NO. 1中給定的重鏈序列。在本發(fā) 明的一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體包含SEQ ID NO. 1和2。在一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體連 接于連接子、聚合物或生物活性分子。在一些實(shí)施例中，抗⑶70抗體通過抗⑶70抗體中的 非天然編碼氨基酸連接于連接子、聚合物或生物活性分子。
[0019] 本發(fā)明的一些實(shí)施例描述一種毒性部分或其鹽，其包含式（I):
[0020]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種化合物，其包含式（VIII)或（IX):
A是任選的，且當(dāng)存在時(shí)為低碳亞烷基、經(jīng)取代低碳亞烷基、低碳亞環(huán)烷基、經(jīng)取代低碳 亞環(huán)烷基、低碳亞烯基、經(jīng)取代低碳亞烯基、亞炔基、低碳亞雜烷基、經(jīng)取代亞雜烷基、低碳 亞雜環(huán)烷基、經(jīng)取代低碳亞雜環(huán)烷基、亞芳基、經(jīng)取代亞芳基、亞雜芳基、經(jīng)取代亞雜芳基、 亞烷芳基、經(jīng)取代亞烷芳基、亞芳烷基或經(jīng)取代亞芳烷基； B為任選的，且當(dāng)存在時(shí)為選自由以下組成的群組的連接子：低碳亞烷基、經(jīng)取 代低碳亞烷基、低碳亞烯基、經(jīng)取代低碳亞烯基、低碳雜亞烷基、經(jīng)取代低碳雜亞烷 基、-0-、-0-(亞烷基或經(jīng)取代亞烷基）-、-S-、-S-(亞烷基或經(jīng)取代亞烷基）-、-S(0) k_(其中k為1、2或3)、-S(0)k(亞烷基或經(jīng)取代亞烷基）-、-C(0)-、-C(0)-(亞烷基或 經(jīng)取代亞烷基）-、-C(S)-、-C(S)_(亞烷基或經(jīng)取代亞烷基）-、-N(R' )-、-NR'-(亞 烷基或經(jīng)取代亞烷基）-、_C(0)N(R' )-、-CON(R')-(亞烷基或經(jīng)取代亞烷 基）-、-CSN(R' )-、-CSN(R')-(亞烷基或經(jīng)取代亞烷基）-、-N(R' )C0-(亞烷基或 經(jīng)取代亞烷基）-、_N(R' )C(0)0-、-S(0)kN(R' )-、-N(R' )C(0)N(R，）-、-N(R') C(S)N(R' )-, )S(0)kN(R' )-, )-N=,-C(R/ ) =N-,-C(R')= N-N(R，）-、-C(R，）=N-N=、-C(R，）2-N=N-以及-C(R，）2-N(R，）-N(R，）-，其中 每個(gè)R'獨(dú)立地為H、烷基或經(jīng)取代烷基； R為H、烷基、經(jīng)取代烷基、環(huán)烷基或經(jīng)取代環(huán)烷基； 札為H、氨基保護(hù)基、樹脂、至少一個(gè)氨基酸、多肽或多核苷酸； 馬為0H、酯保護(hù)基、樹脂、至少一個(gè)氨基酸、多肽或多核苷酸； 馬和R4各自獨(dú)立地為H、鹵素、低碳烷基或經(jīng)取代低碳烷基，或R3與R4或兩個(gè)R3基團(tuán) 任選地形成環(huán)烷基或雜環(huán)烷基； Z具有以下結(jié)構(gòu)：
尺5為H、COR8、CrC6烷基或噻唑； 馬為〇H; &為OH或H; Ar為苯基或吡啶； 1?7為Ci-Cj；燒基或氫； L為選自由以下組成的群組的連接子：_