抗cd70抗體藥物結(jié)合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及包含至少一個(gè)非天然編碼氨基酸的抗⑶70抗體和抗體藥物結(jié)合物。 本文披露具有一或多個(gè)非天然編碼氨基酸的a CD70抗體并且披露還披露抗體藥物結(jié)合 物，其中本發(fā)明的aCD70抗體結(jié)合到一或多種毒素。還披露披露使用所述非天然氨基酸抗 體藥物結(jié)合物的方法，包括治療、診斷和其它生物技術(shù)用途。
【背景技術(shù)】
[0002] ⑶70是由多種正常和惡性細(xì)胞類型表達(dá)的細(xì)胞膜結(jié)合和分泌分子的腫瘤壞死因 子（TNF)家族的成員。CD70的一級(jí)氨基酸（AA)序列預(yù)測(cè)跨膜II型蛋白質(zhì)，其羧基末端暴 露于細(xì)胞外部并且其氨基末端發(fā)現(xiàn)于質(zhì)膜的胞質(zhì)側(cè)（鮑曼（Bowman)等人，1994,免疫學(xué)雜 志（J Immunol) 152:1756-61 ;古德溫（Goodwin)等人，1993,細(xì)胞（Cell) 73:447-56)。人 類⑶70由20AA細(xì)胞質(zhì)域、18AA跨膜域以及具有兩個(gè)潛在N連接糖基化位點(diǎn)的155AA胞質(zhì) 外域構(gòu)成（鮑曼等人，前述；古德溫等人，前述）。放射性同位素標(biāo)記的表達(dá)CD70的細(xì)胞 由抗⑶70抗體造成的特異性免疫沉淀產(chǎn)生29和50kDa的多肽（古德溫等人，前述；新鎮(zhèn) (Hintzen)等人，1994,免疫學(xué)雜志152:1762-73)?；谄渑cTNF-α和TNF-β的同源性， 尤其在結(jié)構(gòu)鏈C、D、H以及I中，預(yù)測(cè)⑶70具有三聚結(jié)構(gòu)（佩奇（Petsch)等人，1995,分子 免疫學(xué)（Mol Immunol)32:761-72)。
[0003] 初始免疫組織學(xué)研究披露表明，⑶70在扁桃體、皮膚以及腸中的生發(fā)中心B細(xì)胞 和罕見T細(xì)胞上表達(dá)（新鎮(zhèn)等人，1994,國(guó)際免疫學(xué)（Int Immunol)6:477-80)。隨后，⑶70據(jù) 報(bào)導(dǎo)在最近經(jīng)抗原活化的T和B淋巴細(xì)胞的細(xì)胞表面上表達(dá)，并且其表達(dá)在去除抗原刺激 之后衰退（倫斯（Lens)等人，1996,歐洲免疫學(xué)雜志（Eur J Immunol) 26:2964-71 ;倫斯等 人，1997,免疫學(xué)（Immunology) 90:38-45)。在淋巴系統(tǒng)內(nèi)，自然殺傷細(xì)胞（奧雷甘（Orengo) 等人，1997,臨床與實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)（Clin Exp Immunol) 107:608-13)和鼠成熟外周樹突狀細(xì)胞 (秋葉（Akiba)等人，2000,實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志（J ExpMed) 191:375-80)也表達(dá)CD70。在非淋巴 譜系中，已經(jīng)在胸腺髓上皮細(xì)胞上檢測(cè)到⑶70 (新鎮(zhèn)等人，1994,前述；飛島（Hishima)等 人，2000,美國(guó)外科病理學(xué)雜志（Am J Surg Pathol) 24:742-46)。
[0004] 除在正常細(xì)胞上的表達(dá)以外，已在包括淋巴瘤、癌瘤和神經(jīng)起源的腫瘤的不同 類型的癌癥中報(bào)導(dǎo)⑶70表達(dá)。在惡性B細(xì)胞中，已報(bào)導(dǎo)71%的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、 33%的濾泡中心淋巴瘤、25%的套細(xì)胞淋巴瘤和50%的B-CLL表達(dá)⑶70 (倫斯（Lens)等 人，1999,英國(guó)血液學(xué)雜志（Br J Haematol) 106:491-503)。CD70連同其它淋巴活化標(biāo)記 物頻繁表達(dá)于霍奇金氏?。℉odgkin's disease)的惡性霍奇金和里德-斯騰伯格細(xì)胞 (Reed-Sternberg cell)上（格魯斯（Gruss)和卡?。↘adin)，1996,百立樂臨床血液學(xué) (Bailieres Clin Haematol) 9:417-46)。一個(gè)報(bào)導(dǎo)表明在88% (8例中的7例）的胸腺癌和 20% (5例中的1例）的非典型胸腺瘤上的⑶70表達(dá)（肥島（Hishima)等人，2000,前述）。 已檢測(cè)到⑶70的第二類型的癌為鼻咽癌。一個(gè)研究報(bào)導(dǎo)在80% (20例中的16例）的從未 分化鼻咽癌獲得的快速冷凍腫瘤活檢體上存在⑶70 (阿加桑耶盧（Agathanggelou)等人， 1995,美國(guó)病理學(xué)雜志（Am J Path) 147:1152-60)。也已在腦腫瘤細(xì)胞，尤其是神經(jīng)膠瘤細(xì) 胞系、固體人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤和脊膜瘤上檢測(cè)到CD70 (赫德-法因特（Held-Feindt)和門特 雷（Mentlein)，2002,國(guó)際癌癥雜志（Int J Cancer) 98:352-56 ;威斯克呂森（Wischlusen) 等人，2002,癌癥研究（Can Res) 62:2592-99)。
[0005] 已提出轉(zhuǎn)化包括埃-巴二氏病毒（Epstein-Barr virus) (EBV)和人類T白血病病 毒-I(HTLV-I)的病毒可以在通常不表達(dá)⑶70的細(xì)胞（如上皮細(xì)胞）上誘發(fā)⑶70 (阿加 桑耶盧等人，前述；施泰因（Stein)等人，1989,牛津大學(xué)出版社，第446頁）。因此，在惡性 B細(xì)胞上的CD70表達(dá)可以是致癌轉(zhuǎn)化的反映（倫斯等人，1999,前述）。另外，由于在抗原 相遇之后在B細(xì)胞上誘發(fā)⑶70表達(dá)（毛瑞爾（Maurer)等人，1990,歐洲免疫學(xué)雜志（Eur J Immunol)20:2679-84 ;倫斯等人，1996,前述），⑶70的穩(wěn)定表達(dá)可以反映長(zhǎng)期的抗原刺 激。基于進(jìn)行中的體細(xì)胞超突變，已假設(shè)此出現(xiàn)于濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤（follicular non-Hodgkin's lymphomas)中（巴勒（Bahler)等人，1992,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc Natl Acad Sci USA) 89:6770-74 ;巴勒等人，1992,癌癥研究 52:增刊 5547S-51S)。
[0006] ⑶70的受體為⑶27,約55kDa的糖基化I型跨膜蛋白（古德溫等人，1993,細(xì) 胞（Cell)73:447-56;新鎮(zhèn)等人，1994,前述）。CD70有時(shí)被稱為CD27L。以細(xì)胞表面上 的同型二聚體形式存在的⑶27 (格拉文施泰因（Gravestein)等人，1993,歐洲免疫學(xué)雜 志23:943-50)為如通過細(xì)胞外域中的約40個(gè)氨基酸的富含半胱氨酸的重復(fù)序列定義的 TNF受體總科的成員（史密斯（Smith)等人，1990,科學(xué)（Science) 248:1019-23;洛克斯利 (Locksley)等人，2001，細(xì)胞104:487-501)。CD27通常通過胸腺細(xì)胞、NK、T和B細(xì)胞來表 達(dá)（新鎮(zhèn)等人，1994,今日免疫學(xué)（Immunol Today) 15:307-11 ;倫斯等人，1998,免疫學(xué)研討 文輯（Semin Immunol) 10:491-99)。在靜止性T細(xì)胞上，⑶27構(gòu)成性地表達(dá)，但抗原觸發(fā) 進(jìn)一步上調(diào)⑶27表達(dá)（德容（de Jong)等人，1991，免疫學(xué)雜志146:2488-94 ;新鎮(zhèn)等人， 1993,免疫學(xué)雜志151:2426-35)。另外，僅通過其T細(xì)胞抗原受體復(fù)合物或與輔助分子⑶28 組合觸發(fā)T細(xì)胞從活化T細(xì)胞釋放可溶⑶27 (新鎮(zhèn)等人，1991，免疫學(xué)雜志147:29-35)。未 處理B細(xì)胞并不表達(dá)⑶27,但在B細(xì)胞的抗原觸發(fā)之后誘發(fā)其表達(dá)，且相比于⑶70仍持續(xù) (雅克 S (Jacquot S)等人，1997 免疫學(xué)雜志 159:2652-57 ;小畑 T (Kobata T)等人，1995， 美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊92:11249-53)。
[0007] 與⑶27和⑶70在正常B系細(xì)胞中受限的表達(dá)形成顯著對(duì)比，⑶27和⑶70二者 在許多B細(xì)胞非霍奇金氏淋巴瘤和白血病中頻繁地共表達(dá)。這可能潛在地導(dǎo)致呈自分泌環(huán) 形式的這些細(xì)胞上的功能性⑶27-⑶70相互作用，導(dǎo)致⑶27信號(hào)傳導(dǎo)和⑶70誘發(fā)的增殖， 從而為惡性細(xì)胞提供生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)（倫斯等人，1999,前述）。
[0008] 可獲得的數(shù)據(jù)支持通過⑶70將信號(hào)傳遞到表達(dá)⑶27的細(xì)胞，包括T、B和NK 細(xì)胞中的共刺激信號(hào)在活化淋巴細(xì)胞上接合CD27的模型。（參見例如古德溫等人，前 述；新鎮(zhèn)等人，1995,免疫學(xué)雜志154:2612-23 ;歐什納（Oshina)等人，1998,國(guó)際免疫學(xué) 10:517-26;史密斯等人，前述；凡里爾（Van Lier)等人，1987,免疫學(xué)雜志139:1589-96; 格拉文施泰因等人，1995,國(guó)際免疫學(xué)7:551-7;泰斯勒（Tesselaar)等人，1997,免疫學(xué)雜 志 159:4959-65 ;雅克等人，前述；上松（Agematsu)等人，1998,血液（Blood) 91:173-80 ;小 畑等人，前述；上松等人，1997,歐洲免疫學(xué)雜志27:2073-79 ;杉田（Sugita)等人，1992,免 疫學(xué)雜志149:1199-1203 ;奧雷甘（Orengo)等人，1997,臨床實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)107:608-13)。已 表明針對(duì)鼠類和人類⑶70二者的抗體抑制所述活性，大概是通過阻斷⑶70/⑶27相互作用 (新鎮(zhèn)等人，1994,前述；新鎮(zhèn)等人，1995,前述；奧什馬等人，前述）。
[0009] 關(guān)于在⑶70/⑶27相互作用時(shí)通過⑶70信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)變細(xì)胞功能即'反向信號(hào)傳 導(dǎo)'可獲得的信息有限。一些⑶70抗體具有當(dāng)其呈現(xiàn)于與二次抗體交聯(lián)或固定于組織培養(yǎng) 板上的表達(dá)⑶70的T細(xì)胞時(shí)增強(qiáng)T細(xì)胞增殖的能力（鮑曼（Bowman)等人，1994,免疫學(xué)雜 志 152:1756-61 ;布魯尼奧尼（Brugnoni)，1997,免疫學(xué)快報(bào)（