專(zhuān)利名稱(chēng)：：佐劑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包含聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯和可藥用賦形劑的佐劑組合物，和包含所述佐劑組合物與抗原的疫苗。此外，本發(fā)明還涉及聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯在制備佐劑制劑和疫苗制劑中的應(yīng)用，及其作為藥物的應(yīng)用。粘膜接種，例如鼻內(nèi)和口內(nèi)接種可代表著容易且比通過(guò)系統(tǒng)注射的常規(guī)接種更方便的接種途徑。采用注射來(lái)給予一定劑量疫苗具有很多缺點(diǎn)，即注射后引起注射位點(diǎn)疼痛和刺激。這些因素可導(dǎo)致“針頭恐懼”，已知這種“針頭恐懼”會(huì)導(dǎo)致患者不愿意接種疫苗。此外，常規(guī)系統(tǒng)注射可能是導(dǎo)致皮膚穿刺區(qū)域感染的根源。除了繞開(kāi)注射需求之外，粘膜接種之所以具有吸引力還是因?yàn)?，?jù)在動(dòng)物中顯示，通過(guò)粘膜給予抗原在誘導(dǎo)的粘膜表面的保護(hù)反應(yīng)方面具有更大效力，粘膜表面是多種病原體進(jìn)入的途徑。此外，已經(jīng)有人提出，粘膜接種例如鼻內(nèi)接種不僅在鼻粘膜中誘導(dǎo)粘膜免疫，還在遠(yuǎn)處粘膜位點(diǎn)例如生殖粘膜中誘導(dǎo)粘膜免疫(Mestecky，1987，《臨床免疫雜志》(JournalofClinicalImmunology)，7，265-276；McGhee和Kiyono，傳染媒介和疾病(InfectiousAgentsandDisease)，1993，2，55-73)。為了使粘膜免疫接種替代通過(guò)注射的免疫接種或成為其可供選擇的代替途徑，該接種途徑必須能誘導(dǎo)效力至少與注射誘導(dǎo)的系統(tǒng)免疫反應(yīng)一樣大的系統(tǒng)免疫反應(yīng)。雖然據(jù)報(bào)道，當(dāng)通過(guò)該途徑接種時(shí)有一些抗原能誘導(dǎo)系統(tǒng)反應(yīng)(Cahill等人，1993，F(xiàn)EMSMicrobiologyLetters，107，211-216)，但是大多數(shù)通過(guò)鼻內(nèi)接種的可溶性抗原其自身僅能誘導(dǎo)很小免疫反應(yīng)或不能誘導(dǎo)任何免疫反應(yīng)。有很多作者已經(jīng)研究了有潛力的粘膜佐劑來(lái)克服這個(gè)問(wèn)題，所述粘膜佐劑是通過(guò)包括下述機(jī)制在內(nèi)的各種機(jī)制來(lái)發(fā)揮其佐劑活性的將抗原包封(例如脂質(zhì)體和微顆粒)；或通過(guò)與靶細(xì)胞直接作用，然后從靶細(xì)胞釋放免疫刺激性細(xì)胞因子(例如霍亂毒素和大腸桿菌熱不穩(wěn)定毒素)；或通過(guò)增強(qiáng)穿過(guò)上皮的抗原攝取(例如霍亂毒素)。本申請(qǐng)人驚訝地發(fā)現(xiàn)，聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯能起疫苗佐劑的作用。本發(fā)明佐劑安全、易于滅菌、并便于給予。有利的是，當(dāng)粘膜給予時(shí)，本發(fā)明組合物能足以誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫反應(yīng)，其所誘導(dǎo)的系統(tǒng)免疫反應(yīng)至少與常規(guī)注射疫苗后所觀察到的系統(tǒng)免疫反應(yīng)一樣高。Merk索引(12thedentry7717)中描述了聚氧乙烯醚例如聚氧乙烯十二烷基醚，其中所指出的治療應(yīng)用包括局部麻醉；抗癢；和硬化劑活性。從類(lèi)別上看，這些聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯是非離子表面活性劑。據(jù)描述，鼻內(nèi)給予聚氧乙烯醚和酯可用于增強(qiáng)胰島素在鼻腔內(nèi)的吸收(Hirai等人，1981，《國(guó)際藥劑學(xué)雜志》(InternationalJournalofPharmaceutics)，9，165-172；Hirai等人，1981，《國(guó)際藥劑學(xué)雜志》(InternationalJournalofPharmaceutics)，9，173-184)。其它非離子表面活性劑已用于疫苗制劑。據(jù)報(bào)道，包含聚氧乙烯蓖麻油或辛酸/癸酸甘油酯與聚氧乙烯脫水山梨醇單酯的混合物以及抗原的疫苗制劑局部施予粘膜后能誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫反應(yīng)(WO9417827)。該專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)，TWEEN20TM(聚氧乙烯脫水山梨醇單酯)和Imwitor742TM(辛酸/癸酸甘油酯)的組合，或TWEEN20TM與聚氧乙烯蓖麻油的組合能增強(qiáng)鼻內(nèi)免疫接種后的系統(tǒng)免疫反應(yīng)。文獻(xiàn)中也已經(jīng)詳細(xì)描述了該制劑增強(qiáng)對(duì)鼻內(nèi)給予抗原的免疫反應(yīng)的作用(Gizurarson等人，1996.VaccineResearch，5，69-75；Aggerbeck等人，1997.Vaccine，15，307-316)。Novasomes(US5147725)是包封抗原的包含聚氧乙烯醚和膽固醇的paucilamenar囊狀結(jié)構(gòu)，并且在系統(tǒng)給予后能增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫反應(yīng)。已經(jīng)將表面活性劑以這樣的方式配制以使之形成非離子表面活性劑囊(通常稱(chēng)為新成體，WO95/09651)。在膽固醇存在下，這種囊形成能把抗原吸引入內(nèi)水相或其自身雙層的脂雙層囊內(nèi)。本申請(qǐng)人驚奇地發(fā)現(xiàn)，相當(dāng)?shù)蜐舛鹊木垩跻蚁┟鸦蝓ツ茱@著地增強(qiáng)對(duì)一起給予的抗原的系統(tǒng)免疫反應(yīng)。此外，當(dāng)用于粘膜疫苗制劑中時(shí)，這些佐劑的增強(qiáng)作用將系統(tǒng)免疫反應(yīng)提高到與通過(guò)常規(guī)系統(tǒng)注射抗原所獲得的系統(tǒng)免疫反應(yīng)相等或比其要高的水平。這些分子代表一類(lèi)適用于人常規(guī)系統(tǒng)接種疫苗或替代系統(tǒng)接種的粘膜接種的佐劑。因?yàn)樵S多可用疫苗佐劑是由于包封抗原而起作用，所以本發(fā)明佐劑以非囊性溶液或懸浮液形式所起到的強(qiáng)效疫苗佐劑的作用令人驚奇。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了包含式(Ⅰ)表面活性劑的佐劑制劑，其中所述佐劑制劑是以非囊性溶液或懸浮液形式存在的。本發(fā)明另一實(shí)施方案是不使用膽固醇進(jìn)行配制的、包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗佐劑。本發(fā)明疫苗和佐劑制劑包含通式(Ⅰ)分子HO(CH2CH2O)n-A-R其中n為1-50，A是一個(gè)鍵或-C(O)-，R是C1-50烷基或苯基C1-50烷基。本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案是疫苗制劑，所述制劑包含通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚，其中n為1-50，優(yōu)選為4-24，最優(yōu)選為9；R是C1-50烷基，優(yōu)選為C4-C20烷基，最優(yōu)選為C12烷基，且A是一個(gè)鍵。該聚氧乙烯醚的濃度為0.1％-20％，優(yōu)選為0.1％-10％，最優(yōu)選為0.1％-1％。優(yōu)選的聚氧乙烯醚選自聚氧乙烯-9-十二烷基醚、聚氧乙烯-9-十八烷基醚、聚氧乙烯-8-十八烷基醚、聚氧乙烯-4-十二烷基醚、聚氧乙烯-35-十二烷基醚和聚氧乙烯-23-十二烷基醚。本發(fā)明另一實(shí)施方案是疫苗組合物，所述組合物包含通式(Ⅰ)聚氧乙烯酯，其中n為1-50，優(yōu)選為4-24，最優(yōu)選為9；R是C1-50烷基，優(yōu)選為C4-C20烷基，最優(yōu)選為C12烷基，且A是-C(O)-。該聚氧乙烯酯的濃度為0.1％-20％，優(yōu)選為0.1％-10％，最優(yōu)選為0.1％-1％。優(yōu)選的聚氧乙烯酯選自聚氧乙烯-9-十二烷基酯、聚氧乙烯-9-十八烷基酯、聚氧乙烯-8-十八烷基酯、聚氧乙烯-4-十二烷基酯、聚氧乙烯-35-十二烷基酯和聚氧乙烯-23-十二烷基酯。本發(fā)明實(shí)施方案還有疫苗組合物，所述組合物包含通式(Ⅰ)聚氧乙烯苯基醚，其中n為1-50，優(yōu)選為4-24，最優(yōu)選為9；R是C1-50苯基烷基，優(yōu)選為C4-C20苯基烷基，最優(yōu)選為C12苯基烷基，且A是一個(gè)鍵。該聚氧乙烯醚的濃度優(yōu)選為0.1％-10％，最優(yōu)選為0.25％-1％。通過(guò)粘膜途徑，例如口/頰/腸/陰道/直腸或鼻內(nèi)途徑給予后，本發(fā)明疫苗制劑可用于保護(hù)或治療易患疾病或患有疾病的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明疫苗制劑可以以小滴、噴霧、或干粉形式給予。噴霧或氣霧疫苗制劑也構(gòu)成本發(fā)明一部分。腸溶制劑例如耐胃作用的口服膠囊或顆粒、直腸或陰道給予的栓劑也構(gòu)成本發(fā)明一部分。本發(fā)明還可用于增強(qiáng)施用在皮膚上(透皮或經(jīng)皮給予途徑)的抗原的免疫原性。此外，本發(fā)明佐劑可非胃腸道遞送，例如肌內(nèi)或皮下給予，其特征在于所述佐劑不呈囊形式。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于粘膜疫苗制劑的佐劑。所述佐劑在人體內(nèi)能很好地耐受，并且能強(qiáng)有力地誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫反應(yīng)。本發(fā)明佐劑可呈溶液、或非囊性溶液或懸浮液劑型，其本身沒(méi)有任何與生產(chǎn)、穩(wěn)定性、均勻性、以及顆粒狀佐劑系統(tǒng)的質(zhì)量控制有關(guān)的問(wèn)題。這些制劑是強(qiáng)效佐劑，并且還表現(xiàn)出低的反應(yīng)原性，以及能被患者很好地耐受。本發(fā)明聚氧乙烯醚優(yōu)選具有溶血活性?？砂凑障率龇治龇椒w外測(cè)定聚氧乙烯醚的溶血活性，其活性以不能引起紅細(xì)胞溶解的去污劑最高濃度表示1．在臺(tái)式離心機(jī)中將取自豚鼠的新鮮血液用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌3次。重懸至初體積后，用PBS將血液稀釋10倍。2．將50μl該血液懸浮液加到含有2倍稀釋的去污劑的800μlPBS中。3．8小時(shí)后，憑視力評(píng)定溶血，或者通過(guò)測(cè)定上清液的光密度評(píng)定溶血。在570nm有吸收光的紅色上清液的存在表明發(fā)生了溶血。4．結(jié)果以不再發(fā)生溶血的最初去污劑稀釋液的濃度表示。在這種生物分析的固有實(shí)驗(yàn)變異內(nèi)，本發(fā)明聚氧乙烯醚或通式(Ⅰ)表面活性劑優(yōu)選具有約0.5％-0.0001％、更優(yōu)選0.05％-0.0001％、甚至更優(yōu)選0.005％-0.0001％、最優(yōu)選0.003％-0.0004％的溶血活性。理想的情況是，所述聚氧乙烯醚或酯應(yīng)當(dāng)具有與聚氧乙烯-9-十二烷基醚或聚氧乙烯-8-十八烷基醚的溶血活性相類(lèi)似(即差別在10倍范圍內(nèi))的溶血活性。在表面活性劑中，聚氧乙烯片段長(zhǎng)度與烷基鏈長(zhǎng)度的比例(即n烷基鏈長(zhǎng)的比例)影響這類(lèi)去污劑在水介質(zhì)中的溶解度。因此，本發(fā)明佐劑可以呈溶液形式，或者可以形成顆粒結(jié)構(gòu)例如微團(tuán)。由于其非囊特性，本發(fā)明佐劑是澄清的，不是混濁或不透明的，是穩(wěn)定的，并且易于通過(guò)220nm膜過(guò)濾來(lái)滅菌，以及能以容易且可控方式生產(chǎn)。本發(fā)明疫苗可呈非囊性溶液或懸浮液形式，其中包含在可藥用賦形劑例如PBS和水中的通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚或酯和抗原或抗原制備物。在初次或強(qiáng)化接種中，可將本發(fā)明疫苗制劑施用在哺乳動(dòng)物粘膜表面上；或者可系統(tǒng)給予本發(fā)明疫苗制劑，例如通過(guò)透皮、皮下或肌內(nèi)途徑給予。已知能增強(qiáng)粘膜和系統(tǒng)免疫反應(yīng)的其它佐劑包括源自霍亂和大腸桿茵的細(xì)菌腸毒素(即分別是霍亂毒素(CT)、和熱不穩(wěn)定腸毒素(LT))。CT和LT是由支撐毒性A亞單位的β-亞單位五聚環(huán)構(gòu)成的異二聚物。其結(jié)構(gòu)和生物活性公開(kāi)在Clements和Finklestein，1979，《感染和免疫》(InfecionandImmunity)，24760-769；Clements等人，1980，《感染和免疫》(InfecionandImmunity)，2491-97中。最近已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了LT的非毒性衍生物，其缺少一旦從細(xì)胞中釋放出來(lái)即使LT非毒性形式“接通”變成其毒性形式所需的蛋白水解位點(diǎn)。這種形式的LT(稱(chēng)為mLT(R192G))通過(guò)192位氨基酸精氨酸被甘氨酸取代而被不易于發(fā)生蛋白水解裂解，并且據(jù)顯示其毒性有很大降低，同時(shí)還保留著其強(qiáng)有力的佐劑活性。因此，mLT(R192G)被稱(chēng)為蛋白水解位點(diǎn)突變體。專(zhuān)利申請(qǐng)WO96/06627中公開(kāi)了制備mLT(R192G)的方法。其它LT突變體包括活性位點(diǎn)突變體例如mLT(A69G)，其在LTA序列的69位包含取代了丙氨酸的甘氨酸。專(zhuān)利申請(qǐng)WO96/06627中描述了mLT(R192G)作為粘膜疫苗的應(yīng)用。這種佐劑可有利地與本發(fā)明非離子表面活性劑聯(lián)合使用。因此，在本發(fā)明另一實(shí)施方案中，將聚氧乙烯醚或酯與其它佐劑或免疫刺激劑聯(lián)合使用，所述其它佐劑或免疫刺激劑包括霍亂毒素及其B亞單位，單磷酰脂A及其非毒性衍生物3-去-O-乙?；瘑瘟柞Ｖ珹(如在第GB2220211號(hào)UK專(zhuān)利中所述的)，皂甙例如QuilA(源自南美洲樹(shù)QuillajaSaponariaMolina)，和它們的分離部分，包括QS21和QS17(US5057540；Kensil，C.R.，CritRevTherDrugCarrierSyst，1996，12(1-2)1-55；EP0362279B1；Kensil等人，1991.J.Immunologyvol146，431-437；WO99/10008)，和含有未甲基化CpG二核苷酸的寡聚核苷酸佐劑系統(tǒng)(如WO96/02555所述)。特別優(yōu)選與POE聯(lián)合使用的免疫刺激劑是CpG免疫刺激性寡聚核苷酸，其制劑能在較大動(dòng)物中強(qiáng)有力地誘導(dǎo)和增強(qiáng)免疫反應(yīng)。優(yōu)選的寡聚核苷酸具有下述序列這些序列優(yōu)選含有全二硫代磷酸酯修飾的核苷酸間連接。OLIGO1TCCATGACGTT6CTGACGTTOLIGO2TCTCCCAGCGTGCGCCATOLIGO3ACCGATGACGTCGCCGGTGACGGCACCACG在本發(fā)明中使用的CpG寡聚核苷酸可通過(guò)本領(lǐng)域已知方法(例如EP468520)合成?？墒褂米詣?dòng)合成儀方便地合成這種寡聚核苷酸。或者，可將聚氧乙烯醚或酯與由脫乙酰殼多糖或其它多陽(yáng)離子聚合物組成的疫苗載體，聚交酯、聚交酯-共-乙交酯顆粒，由多糖或化學(xué)修飾多糖組成的顆粒，不含膽固醇的脂質(zhì)體和以脂質(zhì)為基質(zhì)的顆粒，水包油乳液(WO95/17210)，由一甘油酯組成的顆粒等聯(lián)合使用。還可將聚氧乙烯醚或酯與粉狀賦形劑例如可作為干粉給予的含有抗原的乳糖混合在一起。本發(fā)明佐劑包含表面活性劑聚氧乙烯醚或酯，其中所述聚氧乙烯醚或酯不以囊形式存在。因此，本發(fā)明包括通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚和酯在制備佐劑組合物和疫苗中的應(yīng)用，其中通式(Ⅰ)表面活性劑不以囊形式存在。本發(fā)明疫苗制劑優(yōu)選含有能引起抗人病原體的免疫反應(yīng)的抗原或抗原組合物，所述抗原或抗原組合物源自HⅣ-1(例如tat、nef、gp120或gp160)，人皰疹病毒，例如gD或其衍生物、或源自HSV1或HSV2的立即早期蛋白例如ICP27，巨細(xì)胞病毒(尤其是人巨細(xì)胞病毒)(例如gB或其衍生物)，輪狀病毒(包括減毒活病毒)，EB病毒(例如gp350或其衍生物)，水痘-帶狀皰疹病毒(例如gpⅠ、gpⅡ和IE63)，或源自肝炎病毒，例如乙型肝炎病毒(例如乙型肝炎表面抗原或其衍生物)、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、和戊型肝炎病毒，或源自其它病毒病原體，例如副粘病毒呼吸道合胞體病毒(例如F和G蛋白或其衍生物)，副流感病毒、麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、人乳頭狀瘤病毒(如HPV6、11、16、18，…)黃病毒(例如黃熱病病毒、登革熱病毒、蜱傳腦炎病毒、日本腦炎病毒)或流感病毒(全活或滅活病毒、生長(zhǎng)在雞蛋或MDCK細(xì)胞中的分裂流感病毒、Vero細(xì)胞或全流感病毒體(如RGluck，Vaccine，1992，10，915-920所述)或其純化或重組蛋白，例如HA、NP、NA、或M蛋白、或它們的組合體)，或者源自細(xì)菌病原體例如奈瑟氏球菌屬(Neisseriaspp.)細(xì)菌，包括淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhea)和腦膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis)(例如莢膜多糖及其結(jié)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白、乳鐵蛋白結(jié)合蛋白、PilC、粘附素)；釀膿鏈球菌(S.pyogenes)(例如M蛋白或其片段、C5A蛋白酶、脂磷壁酸)、無(wú)乳鏈球菌(S.agalactiae)、變異鏈球菌(S.mutans)；杜氏嗜血菌(H.ducreyi)；莫拉氏菌屬(Moraxellaspp.)細(xì)菌，包括粘膜炎莫拉氏菌(M.cartarrhalis)，其也稱(chēng)為粘膜炎布蘭漢氏菌(Branhamellacatarrhalis)(例如高分子量和低分子量粘附素和侵染素)；博德氏菌屬(Bordetellaspp.)細(xì)菌，包括百日咳博德特氏菌(B.pertussis)(例如pertactin、百日咳毒素或其衍生物、絲狀血球凝集素、腺苷酸環(huán)化酶、菌毛)、副百日咳博德特氏菌(B.parapertussis)和支氣管炎博德特氏菌(B.bronchiseptica)；分枝桿菌屬(Mycobacteriumspp.)細(xì)菌，包括結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(例如ESAT6、抗原85A、抗原85B或抗原85C)、牛分枝桿菌(M.bovis)、麻風(fēng)分枝桿菌(M.leprae)、鳥(niǎo)分枝桿茵(M.avium)、副結(jié)核分枝桿菌(M.paratuberculosis)、恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)；軍團(tuán)菌屬(Legionellaspp.)細(xì)菌，包括嗜肺軍團(tuán)菌(L.pneumophila)；埃希氏茵屬(Escherichiaspp.)細(xì)茵，包括腸毒性大腸桿菌(enterotoxicE.coli)(例如定居因子、熱不穩(wěn)定毒素或其衍生物、熱穩(wěn)定性毒素或其衍生物)、腸出血性大腸桿菌(enterohemorragicE.coli)、腸致病性大腸桿菌(enteropathogenicE.coli)(例如志賀樣毒素或其衍生物)；弧菌屬(Vibriospp.)細(xì)菌，包括霍亂弧菌(V.cholera)(例如霍亂毒素或其衍生物)；志賀氏菌屬(Shigellaspp.)細(xì)菌，包括索氏志賀氏菌(S.sonnei)、痢疾志賀氏菌(S.dysenteriae)、弗氏志賀氏菌(S.flexnerii)；耶爾森氏菌屬(Yersiniaspp.)細(xì)菌，包括小腸結(jié)膜炎耶爾森氏菌(Y.enterocolitica)(例如Yop蛋白)、鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)、假結(jié)核耶爾森氏菌(Y.pseudotuberculosis)；彎曲桿菌屬(Campylobacterspp.)細(xì)菌，包括空腸彎曲桿菌(C.jejuni)(例如毒素、粘附素和侵染素)和大腸彎曲桿菌(C.coli)；沙門(mén)氏菌屬(Salmonellassp.)細(xì)菌，包括傷寒沙門(mén)氏菌(S.trphi)、副傷寒沙門(mén)氏菌(S.paratyphi)、豬霍亂沙門(mén)氏菌(S.choleraesuis)、腸炎沙門(mén)氏菌(S.enteritidis)；利斯特氏菌屬(Listeriaspp.)細(xì)菌，包括單核細(xì)胞增生利斯特氏菌(L.monocytogenes)；螺桿菌屬(Helicobacterspp.)細(xì)菌，包括幽門(mén)螺桿菌(H.pylori)(例如脲酶、過(guò)氧化氫酶、空泡毒素)；假單胞菌屬(Pseudomonasspp.)細(xì)菌，包括銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)；葡萄球菌屬(Staphylococcusspp.)細(xì)菌，包括金黃色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)；腸球菌屬(Enterococcusspp.)細(xì)菌，包括糞腸球菌(E.faecalis)、屎腸球菌(E.faecium)；梭菌屬(Clostridiumspp.)細(xì)菌，包括破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)(例如破傷風(fēng)毒素及其衍生物)、肉毒梭菌(C.botulinum)(例如肉毒桿菌毒素及其衍生物)、艱難梭菌(C.difficile)(例如梭狀芽胞桿菌毒素A或B及其衍生物)；芽孢桿菌屬(Bacillusspp.)細(xì)菌，包括炭疽芽孢桿菌(B.anthracis)(例如梭狀芽胞桿菌毒素及其衍生物)；棒桿菌屬(Corynebacteriumspp.)細(xì)菌，包括白喉棒桿菌(c.diphtheriae)(例如白喉毒素及其衍生物)；疏螺旋體屬(Borreliaspp.)，包括布氏疏螺旋體(B.burgdorferi)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、嘎氏疏螺旋體(B.garinii)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、阿氏疏螺旋體(B.afzelii)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.andersonii(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、赫氏蜱疏螺旋體(B.hermsii)；埃里希氏體屬(Ehrlichiaspp.)，包括馬埃里希氏體(E.equi)和HumanGranulocyticEhrlichiosis的介質(zhì)；立克次氏體屬(Rickettsiaspp.)，包括立氏立克次氏體(R.rickettsii)；衣原體屬(Chlamydiaspp.)，包括砂眼衣原體(C.trachomatis)(例如MOMP、肝素結(jié)合蛋白)、肺炎衣原體(C.Dneumoniae)(例如MOMP、肝素結(jié)合蛋白)、鸚鵡衣原體(C.psittaci)；鉤端螺旋體屬(Leptospiraspp.)，包括問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體(L.interrogans)；密螺旋體屬(Treponemaspp.)，包括蒼白密螺旋體(T.pallidum)(例如罕見(jiàn)膜外蛋白)、齒垢密螺旋體(T.denticola)、豬痢疾密螺旋體(T.hyodysenteriae)；或源自寄生蟲(chóng)，例如瘧原蟲(chóng)屬(Plasmodiumspp.)，包括惡性瘧原蟲(chóng)(P.falciparum)；弓形體屬(Toxoplasmaspp.)，包括鼠弓形體(T.gondii)(例如SAG2、SAG3、Tg34)；內(nèi)阿米巴屬(Entamoebaspp.)，包括溶組織內(nèi)阿米巴(E.histolytica)；巴貝蟲(chóng)屬(Babesiaspp.)，包括B.microti；錐蟲(chóng)屬(Trypanosomaspp.)，包括克氏錐蟲(chóng)(T.cruzi)；賈第蟲(chóng)屬(Giardiaspp.)，包括蘭伯氏賈第蟲(chóng)(G.lamblia)；leshmaniaspp.，包括L.major；肺囊蟲(chóng)屬(Pneumocystisspp.)，包括卡氏肺囊蟲(chóng)(P.carinii)；毛滴蟲(chóng)屬(Trichomonasspp.)，包括陰道毛滴蟲(chóng)(T.vaginalis)；Schisostomaspp.，包括S.mansoni，或者源自酵母菌，例如念珠菌屬(Candidaspp.)，包括白色念珠菌(C.albicans)；隱球菌屬(Cryptococcusspp.)，包括新型隱球菌(C.neoformans)。優(yōu)選的細(xì)菌疫苗含有源自鏈球菌屬、包括肺炎鏈球菌的抗原(例如莢膜多糖及其結(jié)合物、PsaA、PspA、鏈球菌溶血素、膽堿結(jié)合蛋白)，和蛋白抗原肺炎球菌自溶酶(BiochemBiophysActa，1987，67，1007；Rubins等人，MicrobialPathogenesis，25，337-342)，以及它們的突變解毒衍生物(WO90/06951；WO99/03884)。其它優(yōu)選的細(xì)菌疫苗包含源自嗜血屬(Haemophilusspp.)的抗原，包括B型流感嗜血菌(H.influenzaetypeB)(例如PRP及其結(jié)合物)、不可分型的流感嗜血菌(nontypeableH.influenzae)，例如OMP26、高分子量粘附素、P5、P6、蛋白D和脂蛋白D、和絲束蛋白以及絲束蛋白衍生肽(US5843464)或它們的多拷貝變種或融合蛋白。其它優(yōu)選的細(xì)菌疫苗包含源自粘膜炎莫拉氏菌(MoraxellaCatarrhalis)的抗原(包括其膜外小泡、和OMP106(WO97/41731))和源自腦膜炎奈瑟氏球菌B(NeisseriamengitidisB)的抗原(包括其膜外小泡、和NspA(WO96/29412))。乙型肝炎表面抗原衍生物是本領(lǐng)域眾所周知的，并尤其包括在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)EP-A-414374、EP-A-0304578和EP198-474中描述的PreSl、PreS2S抗原。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明疫苗制劑包含HⅣ-1抗原，gpl20，尤其是在CHO細(xì)胞中表達(dá)的gp120。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明疫苗制劑包含如上所述的gD2t。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，含有本發(fā)明佐劑的本發(fā)明疫苗包含源自導(dǎo)致生殖器瘤的人乳頭瘤病毒(HPV)的抗原(HPV6或HPV11等)，和源自導(dǎo)致子宮頸癌的HPV病毒的抗原(HPV16或HPV18等)。特別優(yōu)選的生殖器瘤預(yù)防或治療疫苗包含L1顆?；驓ち?、和含有一種或多種選自HPV6和HPV11蛋白E6、E7、L1和L2的抗原的融合蛋白。最優(yōu)選的融合蛋白是如WO96/26277所公開(kāi)的L2E7和在GB9717953.5(PCT/EP98/05285)中公開(kāi)的蛋白D(1/3)-E7。優(yōu)選的HPV子宮頸感染或癌預(yù)防或治療疫苗組合物可含有HPV18或HPV18抗原。例如L1或L2抗原單體、或作為病毒樣顆粒(VLP)一起存在的L1或L2抗原、或單獨(dú)在VLP或殼粒結(jié)構(gòu)中存在的L1蛋白。這些抗原、病毒樣顆粒和殼粒本身是已知的。參見(jiàn)例如WO94/00152、WO94/20137、WO94/05792和WO93/02184?？砂▎为?dú)或作為融合蛋白形式的其它早期蛋白，例如E7、E2或E5；在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，包括含有L1E7融合蛋白的VLP(WO96/11272)。特別優(yōu)選的HPV16抗原包含與蛋白D載體融合的早期蛋白E6或E7，以形成HPV16的蛋白D-E6或D-E7融合蛋白，或其組合體；或E6或E7與L2的組合體(WO96/26277)。或者HPV16或18早期蛋白E6和E7可存在于單一分子中，優(yōu)選存在于蛋白D-E6/E7融合蛋白中。這種疫苗可任選含有HPV18的E6或E7蛋白或者E6和E7蛋白，優(yōu)選呈蛋白D-E6或蛋白D-E7融合蛋白或者蛋白D-E6/E7融合蛋白形式。本發(fā)明疫苗還可包含源自其它HPV株的抗原，優(yōu)選來(lái)自HPV6、11、31、33、或45株的抗原。本發(fā)明疫苗還可包含源自引起瘧疾的寄生蟲(chóng)的抗原。例如，源自惡性瘧原蟲(chóng)的優(yōu)選抗原包括RTS，S和TRAP。RTS是雜合蛋白，其基本上包含惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子(CS)蛋白的所有C-末端部分，所述CS蛋白的C-末端部分是通過(guò)乙型肝炎表面抗原preS2的4個(gè)氨基酸連接到乙型肝炎病毒表面(S)抗原上。公開(kāi)號(hào)為WO93/10152、并且要求第9124390.7號(hào)UK專(zhuān)利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)PCT/EP92/02591公開(kāi)了其全部結(jié)構(gòu)。當(dāng)在酵母中表達(dá)時(shí)，RTS是作為脂蛋白顆粒生成的，當(dāng)與源自HBV的S抗原一起表達(dá)時(shí)，其會(huì)生成稱(chēng)為RTS，S的混合顆粒。公開(kāi)號(hào)為WO90/01496的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)PCT/GB89/00895中描述了TRAP抗原。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案是瘧疾疫苗，其中所述抗原制劑包含RTS，S和TRAP的組合物。可作為多階段瘧疾疫苗組分的其它瘧原蟲(chóng)抗原是惡性瘧原蟲(chóng)MSP1、AMA1、MSP3、EBA、GLURP、RAP1、RAP2、鉗合蛋白、PfEMP1、Pf332、LSA1、LSA3、STARP、SALSA、PfEXP1、Pfs25、Pfs28、PFS27/25、Pfs16、Pfs48/45、Pfs230及它們的瘧原蟲(chóng)屬類(lèi)似物。本發(fā)明疫苗制劑還可含有抗腫瘤抗原，并可用于免疫治療癌癥。例如，佐劑制劑可以與腫瘤排斥抗原一起使用來(lái)增強(qiáng)其作用，例如排斥前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、胰腺癌、腎癌或黑素瘤癌的抗原。這種抗原的實(shí)例包括用于治療黑素瘤的MAGE1和MAGE3或其它MAGE抗原，PARME、BAGE或GAGE(Robbins和Kawakami，1996，CurrentOpinionsinImmunology8，pps628-636；VandenEynde等人，InternationalJournalofClinical&amp;LaboratoryResearch(submitted1997)；Correale等人(1997)，JournaloftheNationalCancerInstitute89，p293)。實(shí)際上，這些抗原是在很多種腫瘤例如黑素瘤、肺腫瘤、肉瘤和膀胱腫瘤中表達(dá)的。其它腫瘤特異性抗原也適于和本發(fā)明佐劑一起使用，其包括但不限于前列腺特異性抗原(PSA)或Her-2/neu、KSA(GA733)、MUC-1和癌胚抗原(CEA)。因此，在本發(fā)明一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明佐劑組合物和腫瘤排斥抗原的疫苗。此外，所述抗原可以是自身肽激素，例如全長(zhǎng)度的促性腺素釋放激素(GnRH，WO95/20600)，其是長(zhǎng)度為10個(gè)氨基酸的短肽，可用于治療多種癌癥或用于免疫修正?？梢灶A(yù)計(jì)，本發(fā)明組合物可用于配制含有源自疏螺旋體屬的抗原的疫苗。例如，抗原可包括核酸、病原體衍生抗原或抗原制備物、重組制得的蛋白或肽、和化學(xué)融合蛋白?？乖绕涫荗spA。OspA可以是由于宿主細(xì)胞(大腸桿菌)所致的脂化形式的全成熟蛋白(稱(chēng)為L(zhǎng)ipo-OspA)或非脂化衍生物。這種非脂化衍生物包括非脂化NS1-OspA融合蛋白，其具有流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)的前81個(gè)N-末端氨基酸、和全OspA蛋白，另一MDP-OspA是攜帶3個(gè)另外N-末端氨基酸的非脂化形式的OspA。本發(fā)明疫苗可用于預(yù)防或治療變態(tài)反應(yīng)。這種疫苗包含變應(yīng)原特異性抗原(例如Derpl)和變應(yīng)原非特異性抗原(例如衍生自人IgE的肽，包括但不限于stanworth十肽(EP0477231B1))。每劑疫苗中蛋白的量應(yīng)當(dāng)選取為，對(duì)于一般的疫苗能誘導(dǎo)免疫保護(hù)反應(yīng)、同時(shí)沒(méi)有顯著的不利副作用。蛋白的量將隨所用的具體免疫原及其存在形式的不同而不同。每劑疫苗中通常含有1-1000μg、優(yōu)選1-500μg、更優(yōu)選1-100μg、最優(yōu)選1-50μg蛋白?？赏ㄟ^(guò)包括觀察接種個(gè)體中適當(dāng)免疫反應(yīng)在內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定最佳量。初次接種后，接種個(gè)體可接受適當(dāng)間隔的一次或多次強(qiáng)化免疫接種?？梢灶A(yù)計(jì)，本發(fā)明組合物可用于配制含有具有不同來(lái)源的抗原的疫苗。例如，抗原可包括人、細(xì)菌、或病毒核酸、病原體衍生抗原或抗原制備物、腫瘤衍生抗原或抗原制備物、宿主衍生抗原包括GnRH和IgE肽、重組制得的蛋白或肽、和化學(xué)融合蛋白。本發(fā)明疫苗可通過(guò)口服途徑給予。在這種情況下，可藥用賦形劑可還包括堿性緩沖劑、或腸溶膠囊或微膠囊。本發(fā)明疫苗還可通過(guò)陰道途徑給予。在這種情況下，可藥用賦形劑可還包括乳化劑、聚合物例如CARBOPOL、以及陰道用霜?jiǎng)┖退▌┑钠渌阎€(wěn)定劑。本發(fā)明疫苗還可通過(guò)直腸途徑給予。在這種情況下，可藥用賦形劑可還包括本領(lǐng)域內(nèi)用于形成直腸用栓劑的已知蠟和聚合物。本發(fā)明制劑既可用于預(yù)防目的，也可用于治療目的。因此，本發(fā)明提供了治療易患有或患有傳染性疾病或癌癥或變態(tài)反應(yīng)或自身免疫性疾病的哺乳動(dòng)物的方法。另一方面，本發(fā)明提供了如本說(shuō)明書(shū)所述用于醫(yī)藥的疫苗?！兑呙缧纶厔?shì)和開(kāi)發(fā)》(NewTrendsandDevelopmentsinVaccines)，Voller等人編輯，UniversityParkPress，Baltimore，Maryland，U.S.A.1978中對(duì)疫苗制劑作了一般性描述。本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚或酯在制備含有通式(Ⅰ)表面活性劑和可藥用賦形劑的佐劑制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚或酯在制備含有通式(Ⅰ)表面活性劑和可藥用賦形劑以及抗原的疫苗制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚或酯在制備不含有膽固醇的上述佐劑制劑或疫苗制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了通式(Ⅰ)聚氧乙烯醚或酯在制備上述佐劑制劑或疫苗制劑中的應(yīng)用，其中所述制劑是非囊性溶液或懸浮液。適當(dāng)可藥用賦形劑的實(shí)例包括水、磷酸鹽緩沖鹽水、等滲緩沖溶液。CAS登記名冊(cè)中公開(kāi)了聚氧乙烯十二烷基醚的可替代術(shù)語(yǔ)或名稱(chēng)。聚氧乙烯十二烷基醚的CAS登記號(hào)為CASREGISTRYNUMBER9002-92-0。下述實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明，但不是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1用于測(cè)定抗原特異性抗體(Ab)反應(yīng)的技術(shù)用于測(cè)定OspA-特異性血清IgG的ELISA在4℃，用1μg/ml在PBS中稀釋的抗原OspA以50μl/孔的量(平板的B-H排)或5μg/ml在PBS中稀釋的純化山羊抗鼠Ig(Boerhinger)以50μl/孔的量(平板的A排)將MaxisorpNunc免疫平板過(guò)夜包被。用飽和緩沖液將該平板上的空余位點(diǎn)阻斷(1小時(shí)、37℃)，所述緩沖液為含有1％BSA、0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20)、和4％正常牛血清(NBS)的PBS。然后，將加入的用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的、在飽和緩沖液(50μl/孔)中稀釋的、IgG同種型混合物的連續(xù)2倍稀釋物(在飽和緩沖液中，50μl/孔)(得自Sigma的鼠單克隆抗體IgG1、IgG2a和IgG2b的混合物，初始濃度為200ng/ml，置于A排中)和血清樣本(初始為1/100稀釋?zhuān)糜贐-H排)在37℃培養(yǎng)1.5小時(shí)。然后將平板用洗滌緩沖液(PBS，0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20))洗滌(×3)。之后把在飽和緩沖液中稀釋1/5000的生物素化的山羊抗鼠IgG(Amersham)在37℃培養(yǎng)(50μl/孔)1.5小時(shí)。洗滌3次后，加入氯霉抗生物素蛋白-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物(Amersham)，將平板洗滌5次，與50μl/孔顯示緩沖液(含有0.4mg/mlOPDA(Sigma)和0.03％H2O2的50mMpH4.5檸檬酸緩沖液)一起在室溫培養(yǎng)20分鐘。通過(guò)加入50μl/孔的2N硫酸來(lái)中止顯示。用Biorad3550免疫讀取器在492和630nm讀取光密度。使用SoftMaxPro軟件通過(guò)4參數(shù)數(shù)學(xué)方法計(jì)算抗體效價(jià)。采用類(lèi)似技術(shù)，通過(guò)用TT、FHA或全流感抗原替換OspA包被抗原來(lái)測(cè)定抗-TT、抗-FHA和抗流感的IgE效價(jià)。TT是商購(gòu)獲得的(Behring)。FHA是按照在EP0427462中描述的方法制備和純化的。用β-丙醇酸內(nèi)酯(BPL)滅活的全流感病毒是由SSDGmBH(DresdenGermany)提供的。用于測(cè)定小鼠肺炎鏈球菌多糖(PS14和PS19)-特異性血清IgG的ELISA在37℃，用在PBS中稀釋的5μg/ml(PS14)或20μg/ml(PS19)抗原以100μl/孔的量將MaxisorpNunc免疫平板包被2小時(shí)。然后將平板用洗滌緩沖液(含有0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20)的PBS)洗滌(×3)。之后，將加入的用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的PS14或PS19-特異性單克隆Ab(mAb)IgG1的連續(xù)2倍稀釋物(在PBSTWEEN20中稀釋?zhuān)?00μl/孔)(對(duì)于PS14初始濃度為785ng/ml，對(duì)于PS19初始濃度為2040ng/ml，置于A排中)和血清樣本(初始為1/20稀釋?zhuān)糜贐-H排)在20℃培養(yǎng)30分鐘。在加入并在平板上稀釋之前，用普通多糖(CPS)將mAb標(biāo)準(zhǔn)物和血清樣本在37℃預(yù)培養(yǎng)1小時(shí)，以消除非特異性反應(yīng)。然后將平板用洗滌緩沖液(PBSTWEEN20)洗滌(×3)。之后把在PBSTWEEN20中稀釋1/5000的結(jié)合有過(guò)氧化物酶的山羊抗鼠IgG(Jackson)在攪拌下于20℃培養(yǎng)(100μl/孔)30分鐘。洗滌3次后，將平板與100μl/孔顯示緩沖液(含有0.4mg/mlOPDA(Sigma)和0.03％H2O2的50mMpH4.5檸檬酸緩沖液)一起在室溫培養(yǎng)15分鐘。通過(guò)加入50μl/孔的1N鹽酸來(lái)中止顯示。用Biorad3550免疫讀取器在492和630nm讀取光密度。使用SoftMaxPro軟件通過(guò)4參數(shù)數(shù)學(xué)方法計(jì)算抗體效價(jià)。用于測(cè)定猴OspA-特異性血清IgAbs的ELISA在4℃，用1μg/ml在PBS中稀釋的OspA以50μl/孔的量將MaxisorpNunc免疫平板過(guò)夜包被。用飽和緩沖液將該平板上的空余位點(diǎn)阻斷(1小時(shí)、37℃)，所述緩沖液為含有1％BSA、0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20)的PBS。然后將加入的用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的參照血清的連續(xù)2倍稀釋物(用飽和緩沖液稀釋?zhuān)?0μl/孔)(中間效價(jià)為60000ELISA單位/ml的血清，初始濃度為12EU/ml，置于A排中)和血清樣本(初始為1/100稀釋?zhuān)糜贐-H排)在37℃培養(yǎng)1.5小時(shí)。然后將平板用洗滌緩沖液(PBS，0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20))洗滌(×3)。之后將在飽和緩沖液中稀釋1/3000的生物素化的山羊抗鼠IgG(Amersham)在37℃培養(yǎng)(50μl/孔)1.5小時(shí)。洗滌3次后，加入氯霉抗生物素蛋白-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物(Amersham)，將平板洗滌5次，與50μl/孔顯示緩沖液(含有0.4mg/mlOPDA(Sigma)和0.03％H2O2的50mMpH4.5檸檬酸緩沖液)一起在室溫培養(yǎng)20分鐘。通過(guò)加入50μl/孔的2N硫酸來(lái)中止顯示。用Biorad3550免疫讀取器在492和630nm讀取光密度。使用SoftMaxPro軟件通過(guò)4參數(shù)數(shù)學(xué)方法計(jì)算抗體效價(jià)。采用類(lèi)似技術(shù)，通過(guò)用由SSDGmBH(DresdenGermany)提供的、用β-丙醇酸內(nèi)酯(BPL)滅活的全流感抗原替換OspA包被抗原來(lái)測(cè)定抗流感免疫球蛋白效價(jià)。用于測(cè)定猴OspA-特異性鼻IgAAbs的ELISA在4℃，用1μg/ml在PBS中稀釋的OspA以50μl/孔的量(置于平板的B-H排)或者5μg/ml在PBS中稀釋的純化山羊抗-人IgA(Sigma)以50μl/孔的量(置于平板的A排)將MaxisorpNunc免疫平板過(guò)夜包被。用飽和緩沖液將該平板上的空余位點(diǎn)阻斷(1小時(shí)、37℃)，所述緩沖液為含有1％BSA、0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20)和4％正常牛血清(NBS)的PBS。然后將加入的用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的參照分泌物的連續(xù)2倍稀釋物(用飽和緩沖液稀釋?zhuān)?0μl/孔)(中間效價(jià)為3000ELISA單位/ml的分泌物，初始濃度為30EU/ml，置于A排中)和鼻拭子(初始為1/5稀釋?zhuān)糜贐-H排)在22℃培養(yǎng)2小時(shí)。然后將平板用洗滌緩沖液(PBS，0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN20))洗滌(×3)。之后將在飽和緩沖液中的0.2μg/ml生物素化的山羊抗-人IgA(ICN)在37℃培養(yǎng)(50μl/孔)1.5小時(shí)。洗滌3次后，加入氯霉抗生物素蛋白-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物(Amersham)，將平板洗滌5次，與50μl/孔顯示緩沖液(TBM，Biorad)一起在室溫培養(yǎng)10分鐘。通過(guò)加入50μl/孔的0.4N硫酸來(lái)中止顯示。用Biorad3550免疫讀取器在450和630nm讀取光密度。使用SoftMaxPro軟件通過(guò)4參數(shù)數(shù)學(xué)方法計(jì)算抗體效價(jià)。當(dāng)樣本IgA效價(jià)超過(guò)該分析的截距(0.3EU/ml)時(shí)，則認(rèn)為其為陽(yáng)性。用于測(cè)定血清LA2-樣抗體對(duì)lipo-OspA的效價(jià)的抑制分析測(cè)定疫苗在其LA2-樣特異性方面的抗體效價(jià)。LA2是能識(shí)別細(xì)菌表面的OspA表位的鼠單克隆抗體，據(jù)表明其能在體外殺死Bburgdorferi，以及保護(hù)小鼠抗實(shí)驗(yàn)室生長(zhǎng)的螺旋體的攻擊(Schaible等人。1990.ProcNatlAcadSciUSA873768-3772)。此外，據(jù)表明LA-2mab與細(xì)菌抗體有關(guān)，并且對(duì)人血清的實(shí)驗(yàn)表明，在總的抗-OspAIgG效價(jià)和LA-2效價(jià)(通過(guò)ELISA測(cè)定的)之間有很好相關(guān)性。在4℃用50μl/孔在PBS中稀釋的0.5μg/mllipo-OspA將MaxisorpNunc免疫平板過(guò)夜包被。在37℃用飽和緩沖液(100μl/孔飽和緩沖液PBS/BSA1％/Tween200.1％/NBS4％)將空余位點(diǎn)阻斷1小時(shí)。將初始濃度為4μg/ml的LA2單克隆Ab(mAb)的連續(xù)2倍稀釋物在飽和緩沖液(50μl/孔)中稀釋以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。還加入疫苗的血清樣本稀釋物(初始為1/10稀釋)，將平板在37℃培養(yǎng)2小時(shí)。培養(yǎng)后將平板用PBS/TWEEN20(0.1％)洗滌3次。向每一孔中加入(50μl/孔)在飽和緩沖液中稀釋的LA2mAb-過(guò)氧化物酶結(jié)合物(1/10000)，并在37℃培養(yǎng)1小時(shí)。洗滌5次后，將平板與50μl/孔顯示緩沖液(含有0.4mg/mlOPDA和0.03％H2O2的50mMpH4.5檸檬酸緩沖液)一起在室溫培養(yǎng)20分鐘。用2N硫酸來(lái)中止反應(yīng)和顏色形成。用Biorad3550免疫讀取器在492和630nm讀取光密度。使用SoftMaxPro軟件通過(guò)4參數(shù)數(shù)學(xué)方法計(jì)算LA2-樣Ab效價(jià)。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較來(lái)確定LA2-樣抗體效價(jià)。實(shí)施例2用OspA抗原鼻內(nèi)接種加強(qiáng)小鼠的免疫通過(guò)肌內(nèi)注射吸附在50μg/明礬上的1μg抗原lipo-OspA來(lái)給8周大小的雌性Balb/c小鼠(每組8只)免疫接種。3個(gè)月后，用含有下述組分的10μl溶液通過(guò)鼻內(nèi)給予(每個(gè)鼻孔5μl，通過(guò)吸移管滴加)來(lái)強(qiáng)化小鼠(麻醉狀態(tài)下)的免疫A5μglipo-OspA；B在36％Tween20、10％Imwitor742中的5μglipo-OspA；C在36％Tween20中的5μglipo-OspA；D在18％聚氧乙烯-9十二烷基醚中的5μglipo-OspA。強(qiáng)化接種14天后，通過(guò)IgG和LA2抗-OspAELISA(參見(jiàn)實(shí)施例1)來(lái)分析血清以測(cè)定抗lipo-OspA的Abs。附圖1所示結(jié)果表明，鼻內(nèi)給予lipo-OspA能提高系統(tǒng)lipo-OspA特異性IgG效價(jià)。存在的Tween20加Imwitor742或者單獨(dú)的Tween20很小程度地提高了該免疫增強(qiáng)作用。與之相反，聚氧乙烯-9十二烷基醚引起了非常顯著的提高作用。對(duì)于LA2反應(yīng)也觀察到了類(lèi)似模式(參見(jiàn)附圖2)。實(shí)施例3用OspA抗原鼻內(nèi)接種加強(qiáng)小鼠的免疫各組小鼠的原始狀況如實(shí)施例2所述。然后僅用5μglipo-OspA(組A和C)或在下述組分存在下用lipo-OspA來(lái)加強(qiáng)小鼠的免疫(使用實(shí)施例2所述方法)B1％牛磺膽酸鈉；Dl％十二烷基麥芽糖苷；E36％Tween20；或F18％聚氧乙烯-9十二烷基醚。因?yàn)榻MA和B的實(shí)驗(yàn)與組C、D、E和F的實(shí)驗(yàn)是在不同時(shí)刻進(jìn)行的，所以在附圖(參見(jiàn)附圖3)中將其分開(kāi)。結(jié)果清楚地顯示，與僅使用抗原所獲得的結(jié)果相比，1％牛磺膽酸鈉沒(méi)有顯著提高免疫加強(qiáng)作用。1％十二烷基麥芽糖苷或36％Tween20提供了輕微的促進(jìn)效果，但是只有聚氧乙烯-9十二烷基醚非常顯著地增強(qiáng)了IgG反應(yīng)。對(duì)于LA2反應(yīng)也觀察到了類(lèi)似作用(參見(jiàn)附圖4)。實(shí)施例4鼻內(nèi)接種加強(qiáng)小鼠免疫-劑量范圍研究為了確定提供在上一實(shí)施例中觀察到的輔助作用所需的聚氧乙烯-9十二烷基醚濃度，我們進(jìn)行劑量范圍分析，為了證明使用其它聚氧乙烯醚也可獲得該輔助作用，我們還使用聚氧乙烯-23十二烷基醚進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)原始狀況如實(shí)施例1所述的小鼠鼻內(nèi)接種在下述材料中含5μglipo-OspA的10μl制劑來(lái)加強(qiáng)其免疫APBS；B1％聚氧乙烯-9十二烷基醚；C2％聚氧乙烯-9十二烷基醚；D5％聚氧乙烯-9十二烷基醚；E1％聚氧乙烯-23十二烷基醚；F10％聚氧乙烯-23十二烷基醚。接種14天后，如實(shí)施例2所述分析血清。附圖5和6表明，低至1％的聚氧乙烯-9十二烷基醚濃度使免疫反應(yīng)有非常顯著的增強(qiáng)。聚氧乙烯-23十二烷基醚也顯著地增強(qiáng)了鼻內(nèi)接種的免疫反應(yīng)。實(shí)施例5組合疫苗-鼻內(nèi)強(qiáng)化接種為了評(píng)價(jià)使用聚氧乙烯醚來(lái)強(qiáng)化鼻內(nèi)接種后系統(tǒng)免疫反應(yīng)的作用，通過(guò)肌內(nèi)注射市售DTPa疫苗(Diptheria，Teanus，accelularPertussis疫苗INFANRIXTMSmithKlineBeecham，Belgium)來(lái)給雌性balb/c小鼠初始接種。用相當(dāng)于20％人用劑量的2×50μl注射液通過(guò)肌內(nèi)注射給小鼠進(jìn)行一次初始接種。3個(gè)月后，通過(guò)下述途徑給小鼠接種以強(qiáng)化免疫A鼻內(nèi)給予(如實(shí)施例2所述)在PBS中的破傷風(fēng)類(lèi)毒素(TT5μg)或絲狀血凝集素(FHA5μg)；B鼻內(nèi)給予(如實(shí)施例2所述)在1％聚氧乙烯-9十二烷基醚中的破傷風(fēng)類(lèi)毒素(TT5μg)或絲狀血凝集素(FHA5μg)；C肌內(nèi)注射DTPa疫苗(2×50μl)。強(qiáng)化接種14天后，分析血清以測(cè)定其TT和FHA特異性IgG。效價(jià)如附圖7和8所示。結(jié)果清楚地表明，對(duì)于TT，該蛋白自身不引起顯著的提高免疫反應(yīng)的作用，但是聚氧乙烯-9十二烷基醚能顯著地提高其免疫反應(yīng)。令人驚奇的是，在該佐劑存在下通過(guò)鼻內(nèi)接種所獲得的反應(yīng)比通過(guò)肌內(nèi)注射接種后所獲得的反應(yīng)要大。給予FHA自身誘導(dǎo)了免疫反應(yīng)，該免疫反應(yīng)通過(guò)加入作為佐劑的聚氧乙烯-9十二烷基醚而被顯著地增強(qiáng)。實(shí)施例6鼻內(nèi)強(qiáng)化接種AGMs據(jù)表明許多佐劑在小的嚙齒動(dòng)物中起作用，但是當(dāng)在較大哺乳動(dòng)物中測(cè)試時(shí)則不起任何作用。為了評(píng)價(jià)聚氧乙烯醚在較大物種中是否能增強(qiáng)鼻內(nèi)接種的免疫反應(yīng)，通過(guò)肌內(nèi)注射吸附在明礬(500μg)上的lipo-OspA(10μg)來(lái)給非洲綠猴(AGMs每組4只)進(jìn)行初次接種。10個(gè)月后，在麻醉狀態(tài)下用產(chǎn)自PfeifferGmBHGermany的雙劑量噴霧裝置把200μl(每個(gè)鼻孔100μl)在APBS；或B1％聚氧乙烯-9-十二烷基醚中含有60μglipo-OspA的制劑給動(dòng)物鼻內(nèi)強(qiáng)化接種。接種14天后，測(cè)試血清中的抗-OspA免疫球蛋白和LA2效價(jià)。附圖9和10表明了每一組的幾何平均效價(jià)。對(duì)于由10只AGMs組成、并且初次接種和強(qiáng)化接種都是通過(guò)肌內(nèi)注射吸附在明礬上的lipo-OspA來(lái)進(jìn)行的組C，分析其抗-OspA免疫球蛋白反應(yīng)(附圖10僅表明了對(duì)于LA2的幾何平均效價(jià))。當(dāng)鼻內(nèi)給予綠猴時(shí)，單獨(dú)的lipo-OspA不能增強(qiáng)系統(tǒng)反應(yīng)，但是加入1％聚氧乙烯-9十二烷基醚非常顯著地提高了該免疫加強(qiáng)作用。令人驚奇的是，在聚氧乙烯-9十二烷基醚存在下鼻內(nèi)強(qiáng)化接種后所獲得的效價(jià)也比肌內(nèi)注射(組C)后所獲得的效價(jià)大。實(shí)施例7通過(guò)鼻內(nèi)途徑給AGMs實(shí)施初次接種和強(qiáng)化接種在前述實(shí)施例中我們證實(shí)了聚氧乙烯醚能促進(jìn)鼻內(nèi)強(qiáng)化接種的系統(tǒng)反應(yīng)。在本實(shí)施例中，我們測(cè)定能否通過(guò)鼻內(nèi)途徑給幼小動(dòng)物進(jìn)行初次接種和強(qiáng)化接種來(lái)誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫反應(yīng)。此外，為了研究這些佐劑對(duì)于較大動(dòng)物的適用性，用非洲綠猴(AGMs)進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)。用在200μl(每個(gè)鼻孔100μl，用產(chǎn)自PfeifferGmBHGermany的雙劑量噴霧裝置給予)APBS；或Bl％聚氧乙烯-9-十二烷基醚中的60μglipo-OspA通過(guò)鼻內(nèi)途徑進(jìn)行初次接種和強(qiáng)化接種。強(qiáng)化接種14天后，測(cè)試血清中的OspA特異性免疫球蛋白。附圖11表明，當(dāng)不用佐劑輔助lipo-OspA時(shí)，鼻內(nèi)初次接種和強(qiáng)化接種后檢測(cè)不到任何系統(tǒng)免疫反應(yīng)。當(dāng)使用聚氧乙烯-9十二烷基醚作為佐劑時(shí)，該接種方案誘導(dǎo)了顯著的抗-OspA效價(jià)。實(shí)施例8CpG對(duì)于在靈長(zhǎng)目動(dòng)物中誘導(dǎo)對(duì)lipo-OspA的系統(tǒng)和鼻體液免疫反應(yīng)的鼻內(nèi)輔助作用該模型是設(shè)計(jì)用來(lái)測(cè)定在靈長(zhǎng)目動(dòng)物初次接種和強(qiáng)化接種模型中，在和不在其它免疫刺激劑存在下，聚氧乙烯-9十二烷基醚(POE-9LE)的初次接種和強(qiáng)化接種的作用。測(cè)定血清和鼻免疫球蛋白反應(yīng)。在該實(shí)驗(yàn)中使用的免疫刺激劑是如實(shí)施例9所述的CpG1001。實(shí)驗(yàn)方法在第0(pⅠ)天和第14(pⅡ)天通過(guò)鼻內(nèi)途徑給非洲綠猴初次接種和強(qiáng)化接種。疫苗是用產(chǎn)自Pfeiffer公司的雙劑量噴霧給藥裝置給予的(每個(gè)鼻孔100μl，在麻醉狀態(tài)下)。測(cè)試制劑如下<tablesid="table1"num="001"><table>組抗原佐劑n=途徑1LipoOspA(60μg)無(wú)2i.n.2lipoOspA(60μg)CpG(100μg)3i.n.3lipoOspA(60μg)CpG(100μg)，POE-9LE(0.25％)3i.n.4lipoOspA(60μg)POE(0.25％)4i.n.5lipoOspA(60μg)POE(0.5％)4i.n.</table></tables>測(cè)定在pⅡ后第14天所采集的血清中的對(duì)lipo-OspA的IgAb效價(jià)。用非常靈敏的ELISA測(cè)定在同一時(shí)間采集的鼻拭子中的抗原特異性鼻IgA，當(dāng)其IgA效價(jià)超過(guò)了明顯在本底水平之上的預(yù)定水平時(shí)，則認(rèn)為該動(dòng)物顯陽(yáng)性。結(jié)果血清OspA特異性免疫球蛋白附圖12表明了在pⅡ后第14天觀測(cè)到的血清抗-lipo-OspA免疫球蛋白反應(yīng)。單獨(dú)作為初次接種和強(qiáng)化接種制劑的lipo-OspA沒(méi)有誘導(dǎo)此后可檢測(cè)到的血清免疫球蛋白。在CpG存在下不能改善該反應(yīng)。與僅用CpG進(jìn)行接種后所觀測(cè)到的免疫反應(yīng)相比，0.25％和0.5％POE-9LE誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)更大。然而，當(dāng)與CpG聯(lián)合使用時(shí)，0.25％POE-9LE誘導(dǎo)的Ab反應(yīng)與用0.5％POE-9LE所獲得的Ab反應(yīng)相類(lèi)似，這表明CpG和POE組分有協(xié)同作用。鼻OspA-特異性IgA如同所觀測(cè)的血清Ig反應(yīng)一樣，僅含有l(wèi)ipo-OspA或與CpG合用的lipo-OspA不能引起可檢測(cè)到的鼻IgAAbs(參見(jiàn)總結(jié)所有鼻反應(yīng)的附圖13)。在給予與0.25％聚氧乙烯十二烷基醚合用的lipo-OspA的動(dòng)物中，僅有25％呈“鼻IgA”陽(yáng)性(在0.5％POE-9LE中是50％)。當(dāng)把CpG加到該0.25％POE制劑中時(shí)，100％動(dòng)物表現(xiàn)出IgA反應(yīng)。因此，對(duì)于誘導(dǎo)粘膜抗體，CpG和聚氧乙烯十二烷基醚也具有協(xié)同作用。在誘導(dǎo)抗原特異性血清免疫球蛋白和鼻IgA方面，在猴子中獲得了CpG和聚氧乙烯十二烷基醚之間的協(xié)同作用。實(shí)施例9CpG對(duì)于增強(qiáng)對(duì)lipo-OspA抗原的系統(tǒng)體液免疫反應(yīng)的鼻內(nèi)輔助作用本實(shí)施例是設(shè)計(jì)用來(lái)測(cè)定在鼠強(qiáng)化免疫性接種模型中向聚氧乙烯醚(POE-9LE)佐劑系統(tǒng)內(nèi)加入其它免疫刺激劑的作用。CpG是在PCTWO96/02555中描述過(guò)的免疫調(diào)節(jié)寡聚核苷酸。由這些疫苗制劑所增強(qiáng)的免疫反應(yīng)至少與通過(guò)常規(guī)肌內(nèi)注射強(qiáng)化接種所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)一樣高。將這些疫苗制劑與眾所周知的鼻內(nèi)佐劑-得自大腸桿菌的熱不穩(wěn)定腸毒素(mLT)作進(jìn)一步比較。在本實(shí)驗(yàn)中使用的CpG的序列是CpG1001(TCCATGAGCTTCCTGACGTT)、CpG1002(TCTCCCAGCCTGCGCCAT)，陰性對(duì)照是非免疫刺激序列CpG1005(TCCATGAGCTTCCTGAGCTT)實(shí)驗(yàn)方法在第0天，通過(guò)肌內(nèi)給予含有吸附在50μg氫氧化鋁上的1μglipo-OspA的100μl疫苗來(lái)對(duì)Balb/c小鼠進(jìn)行初次接種。在第107天，在麻醉狀態(tài)下用微量吸移管通過(guò)滴鼻方式給予10μl(每個(gè)鼻孔5μl)疫苗來(lái)進(jìn)行強(qiáng)化接種。通過(guò)鼻內(nèi)(i.n.)或肌內(nèi)(i.m.)給予下述疫苗制劑來(lái)給由6只小鼠組成的各組進(jìn)行強(qiáng)化接種在強(qiáng)化接種當(dāng)天和強(qiáng)化接種(pⅡ)后14天采集血樣。通過(guò)ELISA測(cè)定各血清中對(duì)OspA和LA2的特異性血清IgG效價(jià)。結(jié)果如附圖14(表明通過(guò)抗原特異性ELISA測(cè)定的OspA特異性血清IgG)和附圖15(表明血清中殺菌LA2效價(jià))所示，單獨(dú)的CpG不能使血清OspA-特異性Ab反應(yīng)得到任何改善。OspA與聚氧乙烯十二烷基醚的制劑提高了IgG和LA2效價(jià)。當(dāng)把聚氧乙烯十二烷基醚與CpG一起配制時(shí)，觀測(cè)到了最佳反應(yīng)。實(shí)施例10劑量研究如實(shí)施例4所述，低至1％的聚氧乙烯-9十二烷基醚濃度使免疫反應(yīng)有非常顯著的提高。為了確定提供在前述實(shí)施例中觀測(cè)到的鼻內(nèi)免疫增強(qiáng)效果所需的聚氧乙烯-9十二烷基醚的濃度，使用較低劑量進(jìn)行劑量-范圍分析。通過(guò)下述方式對(duì)按照實(shí)施例2所述方法進(jìn)行過(guò)初次接種的Balb/c小鼠實(shí)施強(qiáng)化接種鼻內(nèi)給予在下述材料中含有5μglipo-OspA的10μl制劑APBS；B1％聚氧乙烯-9十二烷基醚；C0.5％聚氧乙烯-9十二烷基醚；D0.25％聚氧乙烯-9十二烷基醚；或者E通過(guò)肌內(nèi)注射吸附在50μg明礬上的lμglipo-OspA來(lái)進(jìn)行強(qiáng)化接種。該強(qiáng)化接種后14天，如實(shí)施例1所述分析血清。結(jié)果附圖16和17表明，低至0.25％的聚氧乙烯-9十二烷基醚濃度使免疫反應(yīng)有非常顯著的提高。即使采用這么低劑量的佐劑，所達(dá)到的Ab反應(yīng)也與通過(guò)非胃腸道途徑給予疫苗所達(dá)到的Ab反應(yīng)相似。實(shí)施例11在小鼠中接種抗流感疫苗為了確定聚氧乙烯醚在增強(qiáng)鼻內(nèi)強(qiáng)化接種后系統(tǒng)抗流感免疫反應(yīng)方面的適用性，用常規(guī)單價(jià)分裂流感疫苗通過(guò)肌內(nèi)注射對(duì)雌性Balb/c小鼠實(shí)施初次接種。通過(guò)在第0和7天肌內(nèi)注射2次含有1.5μgA/Singapore/6/86分裂單體的等效血凝集素A(HA)的100μl注射劑來(lái)給小鼠實(shí)施初次接種。3個(gè)月后，通過(guò)下述方式給小鼠實(shí)施強(qiáng)化接種鼻內(nèi)給予(如實(shí)施例2所述)在APBS；B1％聚氧乙烯-9十二烷基醚中的1.5μg滅活的全A/Singapore/6/86病毒的等效HA；或者C肌內(nèi)注射分裂A/Singapore/6/86疫苗(1.5μg等效HA)。強(qiáng)化接種后14天，分析血清的A/Singapore/6/86病毒-特異性IgG。結(jié)果效價(jià)如附圖18所示。結(jié)果清楚地表明，該抗原自身沒(méi)有引起顯著的免疫加強(qiáng)，但是聚氧乙烯-9十二烷基醚能顯著地提高免疫反應(yīng)。在該佐劑存在下所達(dá)到的Ab效價(jià)不顯著地低于通過(guò)非胃腸道途徑接種疫苗所達(dá)到的Ab效價(jià)。實(shí)施例12在猴子中接種抗流感疫苗在實(shí)施例11中，我們證實(shí)了聚氧乙烯-9十二烷基醚能顯著增強(qiáng)流感抗原在小鼠中的免疫原性。為了確定該表面活性劑在較大物種中能否起類(lèi)似輔助作用，給非洲綠猴(AGMs2只/組，每次采集2只的血樣)實(shí)施初次接種，并用在200μlAPBS；B0.5％聚氧乙烯-9十二烷基醚中的50μg滅活的全A/Beijing/262/95病毒的等效HA進(jìn)行鼻內(nèi)強(qiáng)化接種(如實(shí)施例6所示)。強(qiáng)化接種后第2、7和14天，分析血清中的A/Beijing/262/95病毒-特異性IgAbs。附圖19清楚地表明，當(dāng)使用聚氧乙烯-9十二烷基醚作為佐劑時(shí)，改善了對(duì)流感抗原的免疫反應(yīng)。實(shí)施例13用多糖抗原進(jìn)行的接種實(shí)驗(yàn)前述實(shí)施例證實(shí)了聚氧乙烯-9十二烷基醚能增強(qiáng)由蛋白型抗原引起的免疫反應(yīng)。在本實(shí)施例中，我們?cè)谕ㄟ^(guò)非胃腸道途徑初次接種的小鼠中測(cè)定該佐劑能否增強(qiáng)鼻內(nèi)給予多糖抗原的免疫加強(qiáng)作用。用含有與蛋白D載體結(jié)合的肺炎鏈球菌多糖PS14和PS19(每種是1μg)的100μl注射劑通過(guò)皮下注射給小鼠實(shí)施一次初次接種。2個(gè)月后，用在ANaCl150mMpH6.1；B1％聚氧乙烯-9十二烷基醚中含有1μgPS14和1μgPS19結(jié)合物的40μl溶液(使用吸移管，在0分鐘時(shí)每個(gè)鼻孔滴加10μl，30分鐘后，每個(gè)鼻孔再滴加10μl)通過(guò)鼻內(nèi)途徑給小鼠(在麻醉狀態(tài)下)實(shí)施強(qiáng)化接種。14天后，分析血清的PS14和PS19-特異性IgGAbs。結(jié)果如附圖20和21所示，僅給予PS14或PS19本身即引起了免疫加強(qiáng)反應(yīng)，加入作為佐劑的聚氧乙烯-9十二烷基醚使得該反應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)了。實(shí)施例14聚氧乙烯-8十八烷基醚為了證明使用其它聚氧乙烯醚也能獲得聚氧乙烯-9十二烷基醚的免疫增強(qiáng)作用，我們用聚氧乙烯-8十八烷基醚進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。通過(guò)下述方式對(duì)按照實(shí)施例2所述方法進(jìn)行過(guò)初次接種的Balb/c小鼠實(shí)施強(qiáng)化接種鼻內(nèi)給予在下述材料中含有5μglipo-OspA的10μl制劑APBS；B1％聚氧乙烯-9十二烷基醚；C1％聚氧乙烯-8十八烷基醚；或者D通過(guò)肌內(nèi)注射吸附在50μg明礬上的1μglipo-OspA來(lái)進(jìn)行強(qiáng)化接種。該強(qiáng)化接種后14天，如實(shí)施例1所述分析血清。結(jié)果附圖22和23表明，在增強(qiáng)對(duì)抗原的反應(yīng)方面，聚氧乙烯-8十八烷基醚與聚氧乙烯-9十二烷基醚一樣有效。采用這兩種聚氧乙烯醚所達(dá)到的Ab效價(jià)與通過(guò)非胃腸道途徑給予疫苗所達(dá)到的Ab效價(jià)相似。權(quán)利要求1．包含聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯與可藥用賦形劑以及抗原或抗原組合物的疫苗組合物，其中所述聚氧乙烯醚或酯不呈囊形式。2．包含式(Ⅰ)表面活性劑HO(CH2CH2O)n-A-R其中n為1-50，A是一個(gè)鍵或-C(O)-，R是C1-50烷基或苯基C1-50烷基，可藥用賦形劑和抗原或抗原組合物的疫苗組合物，其中所述表面活性劑不呈囊形式。3．權(quán)利要求2的包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗組合物，其中n為4-24。4．權(quán)利要求2的包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗組合物，其中n為9。5．權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)的包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗組合物，其中R是C8-20烷基或苯基C8-20烷基。6．權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)的包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗組合物，其中R是C12烷基或苯基C12烷基。7．權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)的包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗組合物，其中A是一個(gè)鍵，以由此形成醚。8．權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)的包含式(Ⅰ)表面活性劑的疫苗組合物，其中A是-C(O)-，以由此形成酯。9．權(quán)利要求1的疫苗組合物，其中包含選自聚氧乙烯-9-十二烷基醚、聚氧乙烯-9-十二烷基酯、聚氧乙烯-9-十八烷基醚、聚氧乙烯-8-十八烷基醚、聚氧乙烯-4-十二烷基醚、聚氧乙烯-35-十二烷基醚、和聚氧乙烯-23-十二烷基醚的聚氧乙烯醚或酯。10．權(quán)利要求2的疫苗組合物，其中包含選自聚氧乙烯-9-十二烷基醚、聚氧乙烯-9-十二烷基酯、聚氧乙烯-9-十八烷基醚、聚氧乙烯-8-十八烷基醚、聚氧乙烯-4-十二烷基醚、聚氧乙烯-35-十二烷基醚、和聚氧乙烯-23-十二烷基醚的表面活性劑。11．權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中表面活性劑的濃度為0.1％-10％。12．權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中表面活性劑的濃度為0.25％-1％。13．權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中所述抗原或抗原組合物源自人免疫缺陷病毒、水痘帶狀皰疹病毒、1型單純性皰疹病毒、2型單純性皰疹病毒、人巨細(xì)胞病毒、登革熱病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、呼吸道合胞體病毒、人乳頭狀瘤病毒、流感病毒、Hib、柔腦脊膜炎病毒、沙門(mén)氏菌屬、奈瑟氏菌屬、疏螺旋體屬、衣原體屬、博德特氏菌屬、鏈球菌屬、支原體屬、分枝桿菌屬、嗜血菌屬、瘧原蟲(chóng)屬或弓形體屬、stanworth十肽；或腫瘤相關(guān)抗原(TMA)、RAGE、BAGE、GAGE、MUC-1、Her-2neu、LnRH、CEA、PSA、KSA、或PRAME。14．權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中還包含其它佐劑。15．權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中還包含選自L(fǎng)T、CT、MPL、CpG、QS21的其它佐劑。16．權(quán)利要求15的疫苗組合物，其中所述CpG佐劑是TCCATGACGTTCCTGACGTT。17．權(quán)利要求1-16任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中還包含載體，所述載體包含任一下述物質(zhì)脫乙酰殼多糖或其它多陽(yáng)離子聚合物、聚交酯和聚交酯-共-乙交酯顆粒、由多糖或化學(xué)修飾多糖組成的顆粒、或由一甘油酯組成的顆粒。18．聚氧乙烯醚或酯在制備佐劑組合物中的應(yīng)用，其中所述聚氧乙烯醚或酯在佐劑組合物中以非囊形式存在。19．通式(Ⅰ)表面活性劑在制備佐劑組合物中的應(yīng)用，其中所述通式(Ⅰ)表面活性劑在佐劑組合物中以非囊形式存在。20．權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的疫苗組合物在制備用于治療病毒感染、細(xì)菌感染、寄生蟲(chóng)感染、變態(tài)反應(yīng)或癌癥的疫苗中的應(yīng)用。21．治療患有或易患有病原體感染、或癌癥、或變態(tài)反應(yīng)的哺乳動(dòng)物的方法，包括給予安全且有效量的權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的組合物。22．治療患有或易患有病原體感染、或癌癥、或變態(tài)反應(yīng)的哺乳動(dòng)物的方法，包括粘膜給予安全且有效量的權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的組合物。23．治療患有或易患有病原體感染、或癌癥、或變態(tài)反應(yīng)的哺乳動(dòng)物的方法，包括鼻內(nèi)給予安全且有效量的權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的組合物。24．制備權(quán)利要求1的疫苗組合物的方法，包括將聚氧乙烯醚或酯、可藥用賦形劑、和抗原或抗原組合物混合在一起。25．制備權(quán)利要求2-17任一項(xiàng)的疫苗組合物的方法，包括將通式(Ⅰ)表面活性劑、可藥用賦形劑、和抗原或抗原組合物混合在一起。26．包含聚氧乙烯醚或酯和可藥用賦形劑的佐劑組合物，其特征在于，所述佐劑組合物不呈囊形式。27．用作藥物的前述權(quán)利要求所述的任一疫苗或佐劑。全文摘要本發(fā)明涉及包含聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯和可藥用賦形劑的佐劑組合物,和包含所述佐劑組合物與抗原的疫苗。此外,本發(fā)明還涉及聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯在制備佐劑制劑和疫苗制劑中的應(yīng)用,及其作為藥物的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K39/118GK1296416SQ99804894公開(kāi)日2001年5月23日申請(qǐng)日期1999年3月29日優(yōu)先權(quán)日1998年4月9日發(fā)明者M(jìn)·弗里德,P·赫爾曼德申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司