專利名稱：含萘基化合物的藥物組合物的制作方法
本申請是1996年2月26日提交的、題為“萘基化合物、中間體、組合物和方法”的發(fā)明專利申請的分案申請，原申請的申請?zhí)枮?6105727.0。
本發(fā)明涉及含萘基化合物的藥物組合物，可用于治療與絕經后綜合癥和子宮纖維性病癥、子宮內膜異位以及主動脈平滑肌細胞增生有關的各種醫(yī)學病癥。
“絕經后綜合癥”是用于描述時常侵襲生理變態(tài)即絕經開始或結束時婦女的各種病理疾病的術語。盡管通過使用該術語可以考慮許多病理情況，但絕經后綜合癥的三種主要作用是長期以來醫(yī)學界最為關注的問題骨質疏松，心血管效應如血脂過多，以及雌激素依性賴癌癥，特別是乳房癌和子宮癌。
骨質疏松描述了一類起因于種種病因的疾病，但其特征表現(xiàn)為每單位體積骨質凈脫失。這種骨質脫失以及所形成的骨折的結果造成對身體提供足夠結構支持的骨骼的衰竭。一種最常見類型的骨質疏松是與絕經有關的骨質疏松癥。大多數婦女在停經后3至6年內損失約20至60％骨小梁隔室內的骨質。這種快速損失一般與骨吸收和形成的增加有關。雖然這種吸收周期更主要但結果仍造成骨質凈脫失。骨質疏松是絕經后婦女中常見的嚴重疾病。
據估計僅美國就有二千五百萬婦女患有這種疾病。骨質疏松的結果對人是有害的并且由于這種病的長期性以及這種病后遺癥所需要的多方面和長期的援助(住院和家庭護理)還將造成巨大的經濟損失。對年齡較大的病人更是如此。此外，雖然骨質疏松一般不被認為是有生命危險的疾病，但20％至30％死亡率與老年婦女髖骨骨折有關。這種死亡率中有較大百分比直接與絕經后骨質疏松有關。
骨內與絕經后骨質疏松作用有關的最易損傷的組織是小梁骨。這種組織通常稱作松質骨且主要集聚在骨頭末端周圍(靠近關節(jié))和脊椎動物的椎骨內。小梁組織的特征是具有較少的彼此間相互連結的骨質結構，以及形成骨外表面和中干的較緊密的皮質組織。這種相互連結的小梁骨網絡提供了對表面皮質結構的外側支柱并對全面結構的生物力學強度十分關鍵。在絕經后骨質疏松中，主要是小梁的凈吸收和損失導致骨衰竭和破裂。鑒于絕經后婦女小梁的損失，故對于那些與高度依賴小梁支柱如錐骨及承重骨如股骨和前臂的頸的骨頭有關的最常見的骨折毫不令人驚奇。的確，髖骨骨折，Collies骨折，以及椎骨粉碎性破裂為絕經后骨質疏松的標志。
目前，治療絕經后骨質疏松癥唯一可普遍接受的方法是雌激素替補治療。盡管這種治療一般是成功的，但接受治療的病人則十分少，這主要是由于雌激素治療時常產生不希望的副作用。
在絕經前期間，與同齡男人相比，大多數婦女心血管疾病的發(fā)生率較低。但在絕經之后，與男人相比，婦女患心血管疾病的機會則緩慢增加到與男人相當。這種保護作用的喪失與雌激素的損失有關，特別是與雌激素調節(jié)血清脂質水平的能力降低有關。雌激素調節(jié)血清脂質的能力尚不能被充分認識，但至今有證據表明雌激素可以正向調節(jié)肝內低密度脂質(LDL)受體的水平以除去過量膽甾醇。另外，雌激素看來似乎對膽甾醇的生物合成具有某些作用，并對心血管健康具有其它有益作用。
已有文獻報道接受雌激素替補療法的絕經后婦女體內的血清脂質水平回復到絕經前狀態(tài)時的濃度。因此，雌激素看來是這種病癥的適當治療藥物。然而，雌激素替補療法的副作用對許多婦女來講是不能被接受的，這樣就限制了這種療法的使用。對于這種病癥，理想的治療藥物應是能與雌激素一樣調節(jié)血清脂質水平但無雌激素治療所存在的副作用和危險的藥劑。
與絕經后綜合癥有關的第三種主要病理疾病是雌激素依賴乳房癌，及從較小范圍來說，其它器官，尤其是子宮的雌激素依賴癌癥。盡管這類腫瘤并不僅限于絕經后婦女，但在年齡較大絕經后婦女中更流行。這些癌癥通用的化學療法主要依賴于使用抗雌激素劑如它莫西芬。盡管這種混合激動劑-拮抗劑在治療這些癌癥時具有有益作用，并且在緊急威脅生命情況下雌激素副作用可以忍受，但它們仍不是理想的。例如，由于它們的雌激素(激動劑)性質，它們可能對子宮中某些癌細胞種群具有刺激作用，因此，在某些情況下它們是抗產生性的。更好的治療這些癌癥的治療物是抗雌激素化合物藥劑，這些化合物對生殖組織具有可以忽略的或完全沒有雌激素激動劑特性。
為響應能特別減輕絕經后綜合癥癥狀的新藥劑的一直需要，本發(fā)明提供了新的苯并噻吩化合物，其藥物組合物，以及使用這類化合物治療絕經后綜合癥和其它雌激素相關病理病癥如下述病癥的方法。
子宮纖維變性(子宮纖維性疾病)是一種古老且到目前仍存在的臨床難題，它具有多種名稱，包括子宮纖維性疾病，子宮肥大，子宮增生(UterineLieomyomata)，子宮肌層肥大，子宮纖維變性，以及纖維變性子宮炎。實質上，子宮纖維變性是子宮壁上纖維性結構不適當沉積的病癥。
這種病癥是造成婦女痛經和不育的起因。這種病癥的確切起因目前很難認識但有證據表明這是由纖維性組織對雌激素的不適當應答引起的。這樣一種病癥可通過連續(xù)3個月每天對兔子給用雌激素而產生。通過連續(xù)4個月每天給用雌激素也可在豚鼠體內產生這種病癥。此外，雌激素也可以在大鼠體內引起類似肥大。
治療子宮纖維變性的最常用的方法包括外科手術，但這種方法費用較高且有時又是合并癥如造成腹粘連和感染的起因。對于某些病人，初次外科手術僅是暫時性治療且子宮肌瘤重生長。在這些情況下，進行子宮切除能有效防止子宮肌瘤但也終止了病人的生殖壽命。同樣可給用促性腺激素釋放激素拮抗劑，然而由于它們能導致骨質疏松，故它們的使用也逐漸減少。因此，目前仍需要治療子宮纖維變性的新方法。本發(fā)明的方法能滿足這種需要。
子宮內膜異位是一種嚴重痛經病癥，這種病伴有劇烈疼痛，并放血到子宮內膜塊或腹膜腔內，并且常常導致不育。這種病癥的癥狀起因似乎是異位子宮內膜生長，這種生長不適當地響應正常激素控制并定位于不適當的組織中。由于子宮內膜生長的不適當位置，組織似乎引發(fā)導致巨噬細胞浸入的局部類炎癥響應和一系列導致引發(fā)疼痛響應的活動。這種疾病確切的病因學尚未被充分認識且其通過激素療法的治療也有多種人們不清楚的方面，并且具有大量不想要的甚至可能有危險的副作用。
治療這種疾病的方法之一是使用低劑量雌激素通過對中央促性腺激素釋放的負反饋效應抑制子宮內膜生長且隨后抑制卵巢雌激素的生成，但是，有時有必要持續(xù)使用雌激素以控制上述癥狀。這種雌激素的使用常常能產生不希望的副作用并且甚至產生子宮內膜瘤的危險性。
另一治療方法包括連續(xù)給用誘發(fā)閉經的孕激素并通過抑制卵巢雌激素的生成可以造成子宮內膜生長退步。慢性孕激素療法的使用常常伴有不希望的孕激素CNS副作用并且由于抑制卵巢功能而常常引起不育。
第三種治療方法包括給用弱雄激素，這種激素對控制子宮內膜異位是有效的；但是，它們能誘發(fā)嚴重的男性化作用。這幾種治療子宮內膜異位的方法還與連續(xù)治療時導致輕微程度骨脫失有連帶關系。因此仍希望有治療子宮內膜異位的新方法。
主動脈平滑肌細胞增生在如動脈粥樣硬化和再狹窄疾病中起著重要作用。經皮經管腔冠狀血管成形術(PTCA)之后的血管再狹窄已顯示為由早相和晚相所表征的組織應答。PTCA后存在數小時至數天的早相是由某些血管痙攣引起的血栓所造成的，而晚相似乎是由主動脈平滑肌細胞的過多增生和移生所控制。在這種疾病中，由這類肌細胞和巨噬細胞所引起的增加的細胞能動性和移去對這種疾病的發(fā)病機理產生較大影響。血管主動脈平滑肌細胞的過多增生和遷移可以是在PTCA，粉瘤切除術，激光血管成形術和動脈分流術移植外科手術之后冠狀動脈再閉塞的主要機理。參見“IntimalProliferation of Smooth Muscle Cells as an Explanationfor Recurrent Coronary Artery Stenosis afterPercutaneous Transluminal Coronary Angio plasty”，Austin等，Journal of the Amerfcan College ofCardiology，8369-375(Aug，1985)。
在通過經皮經管腔冠狀血管成形術(PTCA)，粉瘤切除術，激光血管成形術和動脈分流術移植手術外科處置閉塞動脈之后，血管再狹窄仍然是嚴重的長期并發(fā)癥。有約35％接受PTCA的病人在手術后的三至六個月內發(fā)生再閉塞。治療血管再狹窄的現(xiàn)行對策包括用裝置如移植片固定膜進行機械處置或藥理治療包括用肝素，低分子量肝素，香豆素，阿斯匹靈，魚油，鈣拮抗物，類固醇，和前列環(huán)素治療。這些對策未能控制再閉塞率并且對血管再狹窄的治療和預防是無效的。參見“”Pre-vention of Restenosis after Percutaneous TransluminalCoronary AngioplastyThe Search of a‘ MagicBullet’”，Hermans等，American Heart Journal，122；171-187(1991年7月)。
在再狹窄的發(fā)病機理中，細胞過多增生和遷移是由血液和損傷動脈血管壁上的細胞成分產生的生長因子引起的結果，而這一因子可在血管再狹窄中調節(jié)平滑肌細胞的增生。
抑制主動脈平滑肌細胞增生和/或遷移的藥劑可用于治療和預防再狹窄。本發(fā)明提供了化合物作為主動脈平滑肌細胞增生抑制劑并因此作為再狹窄抑制劑的用途。
本發(fā)明涉及式I化合物或其可藥用鹽
其中R1為-H，-OH，-O(C1-C4烷基)，-OCOC6H5，-OCO(C1-C6烷基)，或-OSO2(C2-C6烷基)；R2為-H，-OH，-O(C1-C4烷基)，-OCOC6H5，-OCO(C1-C6烷基)，-OSO2(C2-C6烷基)，或鹵素；R3為1-哌啶基，1-吡咯烷基，甲基-1-吡咯烷基，二甲基-1-吡咯烷基，4-嗎啉代，二甲氨基，二乙氨基，二異丙基氨基，或1-六亞甲基亞氨基；和n為2或3。
本發(fā)明還提供了式II中間體化合物，此中間體是用于制備本發(fā)明藥物活性化合物，如下式所示
其中R1a為-H或-OR5，其中R5為羥基保護基；R2a為-H，鹵素，或-OR6，其中R6為羥基保護基；以及R4為-OH或-CHO；或它們可藥用的鹽。
本發(fā)明進一步涉及藥物組合物，它包含式I化合物，并任選地含有雌激素或孕激素，本發(fā)明化合物可以單獨，或與雌激素或孕激素結合用于緩解絕經后綜合癥，特別是骨質疏松癥，心血管相關病理病癥，以及雌激素依賴癌癥的癥狀。本文所用的術語“雌激素”包括具有雌激素活性的甾族化合物，例如，17β-雌二醇，雌酮，結合雌酮(Premarin)，孕馬雌激素17β-乙炔基雌二醇等。本文所用的術語“孕激素”包括具有促孕激素活性的化合物，例如象孕酮，異炔諾酮，nongestrel，乙酸甲地羥孕酮，炔諾酮等。
本發(fā)明化合物還可用于抑制婦女的子宮纖維變性疾病和子宮內膜異位以及人的主動脈平滑肌細胞增生，尤其是再狹窄。
本發(fā)明的另一個方面包括式I化合物或其可藥用鹽
其中R1為-H，-OH，-O(C1-C4烷基)，-OCOC6H5，-OCO(C1-C6烷基)，或-OSO2(C2-C6烷基)；R2為-H，-OH，-O(C1-C4烷基)，-OCOC6H5，-OCO(C1-C6烷基)，-OSO2(C2-C6)烷基，或鹵素；R3為1-哌啶基，1-吡咯烷基，甲基-1-吡咯烷基，二甲基-1-吡咯烷基，4-嗎啉代，二甲氨基，二乙氨基，二異丙基氨基，或1-六亞甲基亞氨基；以及n為2或3。
本文所述化合物的定義中所用的一般術語具有其通常的含義。例如，“C1-C6烷基”是指具有1至6個碳原子的直或支脂族鏈并包括下述部分如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，正丁基，戊基，異戊基，己基，異己基等等。同樣術語“C1-C4烷氧基”表示通過氧原子所連接的C1-C4烷基并包括如甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基等部分。這些烷氧基基團中，在大多數情況下高度優(yōu)選甲氧基。
制備本發(fā)明化合物的起始原料為下述式III化合物
其中R1a為-H或-OR5，其中R5為羥基保護基；以及R2a為-H，鹵素，或-OR6，其中R6為羥基保護基；式III化合物為本領域公知的并基本上可按Boyle等人在U.S.P.4,910,212中所述的方法制備，此專利在此處可并入用作參考。還可以參見Collins，D.J.等，Aust.J.Chem.，41745-756(1988)；和Collins，D.J.等，Aust.J.Chem.，372279-2294(1984)。
在制備本發(fā)明化合物時，一般是將式III酮芳化，得到式IV酚，然后將酚與4-鹵代苯甲醛反應得到式IIa二芳基醚，此醚本身又被轉化成式IIb酚。該合成途徑如下面反應流程圖I所示，且R1a和R2a的定義同上。
反應流程圖I
在本方法的第一步中，式III化合物可基本上按Wang G.等人，M.Syn.Commun.，21989(1991)中所述的方法，通過三步方案轉化成式IV酚。實質上，式III酮通過在合適的乙酸酯溶劑中，于酸催化劑存在下回流式III化合物溶液而烯醇化。所得到的烯醇乙酸酯直接轉化成萘醇乙酸酯，然后將此酯水解成式IV酚。
在轉化式III酮變成其相應的烯醇時，可使用各種已知的酸催化劑。優(yōu)選非水酸，特別優(yōu)選對-甲苯磺酸。
合適的乙酸酯溶劑包括乙酸的簡單醇酯，尤為乙酸異丙烯酯。
當進行回流時，可回流6至約48小時以使反應完全。此反應的烯醇產物不被分離，但當反應完成后將所得到的溶液用適當氧化劑處理并加熱回流，最好回流1至3小時。
反應流程圖I中所示第一反應步驟的第二階段所用的合適氧化劑限于本領域公知的氧化劑，它們能引起飽和體系部分的氫原子消除而得到芳化體系。它們包括氫化催化劑如鉑，鈀和鎳，元素硫和硒，以及醌。對于本申請，優(yōu)選醌氧化劑，尤其是2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)。本方法階段中每當量底物使用約1至2當量DDQ。
將此階段所得產物萘醇乙酸酯隨后進行水解，得到式IV化合物，從而完成了反應流程I中所示的第一步驟。該水解階段可通過在極性質子溶劑如水或一種或多種含有醇如甲醇或乙醇的溶劑中，用酸或堿水解底物而完成。可以向溶液中加入共溶劑如四氫呋喃(THF)或二噁烷以增加溶解性。適合該階段的合適堿包括氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋰等等。合適的酸包括如鹽酸，甲磺酸，對-甲苯磺酸等等。
上述反應流程I中所示第一步驟的最后階段可以在室溫下進行且反應時間較短，一般為1至12小時。反應的完成通過常規(guī)色譜技術如薄層色譜測定。
在反應流程I的第二步中，式IV酚首先與堿反應，隨后在隋性氣氛如氮氣氣氛下，在極性非質子傳遞溶劑中通過加入4-鹵代苯甲醛得到式IIa二芳基醚。此反應是本專業(yè)公知的反應并基本上按Yeager，G.W.等人，Syhthesis，63(1991)中所述的方法進行。
更具體地說是將1當量式IV化合物在適當溶劑中首先用至少一當量堿金屬氫化物或碳酸鹽處理，然后在與如上所用的相同溶劑中滴加4-鹵代苯甲醛與底物進行反應。
此反應的合適溶劑包括在反應過程中保持隋性的那些溶劑或其混合物。優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，尤其是其無水形式。
優(yōu)選氫化鈉作為所需要的堿，并且使用4-氟苯甲醛作為優(yōu)選的4-鹵代苯甲醛。
在本發(fā)明方法的該步中所采用的溫度應足以導致反應完成，而不促進不希望副產物的形成。此反應優(yōu)選的溫度范圍為約30至100℃。
在優(yōu)選的反應條件下，通過優(yōu)選方法式IIa化合物可在約24至48小時內被制得。
反應流程I的最后一步反應在本專業(yè)領域中稱作Bayer-Villiger氧化，在該步反應中，式IIa化合物的醛部分轉化成酚基，從而形成式IIb化合物。例如上述反應可參見Fiesers，L.等人，Reagents for Organic Synthe-sis，1467，Wiley(New York，1967)；Hassall，C.H.，Organic Reactions，973-106(Wiley，NewYork，1967)。
一般來講,上述反應包括苯甲醛與過酸如過乙酸或間氯過苯甲酸在隋性溶劑如氯仿或二氯甲烷中化合。此反應產物甲酸酯隨后很容易被水解成所要苯酚。例如參見Yeager等，Supra；Godfrey，I.M.等，J.Chem.Soc，Perkins.Trans.I1353(1974)；和Rue，R.等；Bull.Soc.Shim.Fr.，3617(1970)。
對于該反應，優(yōu)選的變異方法見Matsumoto，M.等在J.Org.Chem.，494741(1984)中所述。此方法包括在催化酸存在下，式IIa苯甲醛與至少一至約二當量30％過氧化氫在醇溶劑中化合。在這些條件下，酚直接被形成，因此省去了所必需的附加水解步驟。
此方法優(yōu)選的溶劑和酸催化劑分別為甲醇和濃硫酸。
在優(yōu)選的反應條件下，式IIa化合物向式IIb化合物的轉換可在室溫下攪拌12至48小時之后完成。
式IIa和IIb化合物在此共同稱作新的式II中間體化合物，此化合物用于制備本發(fā)明式I藥學活性化合物。
在式IIb化合物制備之后，將其與式V化合物反應形成式Ia化合物或其可藥用鹽R3-(CH2)n-QV其中R3和n的定義同上且Q為溴或(優(yōu)選)氯。然后當R5和/或R6為羥基保護基時將式Ia化合物脫保護形成式Ib化合物或其可藥用鹽。這些方法步驟見下反應流程II所示。
反應流程II
其中R1a，R2a，R3及n的定義同上；
R1b為-H或-OH；以及R2b為-H，-OH或鹵素在反應流程II所示方法的第一步中，烷基化通過常規(guī)方法進行。式V化合物在市場上可以買到或可利用本專業(yè)熟知的方法制備。優(yōu)選使用式V化合物的鹽酸鹽，尤其是2-氯乙基哌啶鹽酸鹽。
通常是將至少約1當量式IIb底物與2當量式V化合物在至少約4當量堿金屬碳酸鹽，優(yōu)選碳酸銫，以及適當溶劑存在下進行反應。
此反應的所用溶劑是那些在反應期間保持隋性的溶劑或溶劑混合物。優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺，優(yōu)選是其無水形式。
此步所采用的溫度應以使該烷基化反應完成。一般室溫就足以并且也是優(yōu)選溫度。
此反應優(yōu)選在隋性氣氛，尤其是氮氣中進行。
在優(yōu)選的反應條件下，此反應進行約16至20小時便反應完全。當然，反應過程可通過一般色譜技術監(jiān)測。
制備式Ia化合物的另一方法是式IIb化合物與過量下式烷基化劑在堿溶液中反應Q-(CH2)n-Q′其中Q和Q′各自相同或不同并代表離去基團。合適的離去基團包括磺酸酯如甲磺酸酯，4-溴苯磺酸酯，甲苯磺酸酯，乙磺酸酯，異丙基磺酸脂，4-甲氧基苯磺酸酯，4-硝基苯磺酸酯，2-氯苯磺酸酯，三氟甲磺酸酯等，鹵素如溴，氯，和碘，以及其它相關離去基團。鹵素為優(yōu)選的離去基團且特別優(yōu)選溴。
上述烷基化反應所用的堿溶液優(yōu)選含有溶于隋性溶劑中的碳酸鉀，溶劑如甲基乙基酮(MEK)或DMF。在這種溶液中，式IIb化合物的苯甲?；糠值?-羥基基團以酚鹽離子形式存在，此離子置換一個烷基化劑的離去基團。
此反應最好通過將含有反應物和反應試劑的堿溶液進行回流并使其按反應完全的方式進行。當使用MEK作為優(yōu)選溶劑時，反應時間約為6至約20小時。
該步的反應產物隨后通過標準技術與1-哌啶，1-吡咯烷，甲基-1-吡咯烷，二甲基-1-吡咯烷，4-嗎啉，二甲胺，二乙胺或1-六亞甲基亞胺反應形成式Ia化合物。優(yōu)選哌啶鹽酸鹽與烷基化的式IIb化合物在隋性溶劑如無水DMF中反應并加熱到約60至約110℃。當混合物加熱到約90℃的優(yōu)選溫度時，上述反應僅需要30分鐘至約1小時。然而，反應條件的變化將影響，該反應進行完全所需要的時間。當然，該反應步驟的反應進程可以通過標準色譜技術監(jiān)測。
其中R5和/或R6(當存在時)為C1-C4烷基，優(yōu)選甲基的式Ia化合物是新的并且相對于此處所述的方法具有藥學活性。因此，這些化合物包括在本申請式I化合物的定義中。
優(yōu)選的式I化合物可通過公知方法解離(當存在時)式Ia化合物的R5和R6羥基保護基而制得。眾多這種保護基的形成和解離反應見大量標準著作中所述，所述著作包括例如Protective Groups in Organic Chemist-ry，Plenum Press(London and New York，1973)；Green，T.W.，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，(New York，1981)；和The Peptides，Vol.I，Schrooder and Lubke，Academic Press(London andNew York，1965)，除去優(yōu)選的R5和/或R6羥基保護基，尤其是甲基的方法基本上與下面實施例5中所述相同。
式Ia化合物是新的且對本申請此處所述的方法來說具有藥學活性，并且包括在本申請所定義的式I中。
其它優(yōu)選的式I化合物可通過公知方法用式-O-CO(C1-C6烷基)，或-O-SO2-(C2-C6烷基)部分取代6-和/或4′-位的羥基部分(當存在時)而制得，例如參見U.S.P.4,358,593)。
例如，當想要-O-CO(C1-C6烷基)基團時，可將式I單一或二羥基的式I化合物與試劑如?；龋；?，氰化物，或疊氮化物反應，或與合適酸酐或混合酐反應。反應適宜在堿性溶劑如吡啶，盧剔啶，喹啉或異喹啉中進行，或在叔胺溶劑如三乙胺，三丁胺，甲基哌啶等溶劑中進行。反應也可以在隋性溶劑中進行，這些溶劑如乙酸乙酯，二甲基甲酰胺，二甲亞砜，二噁烷，二甲氧基乙烷，乙腈，丙酮，甲乙酮等，并且溶劑中已加有至少一當量酸清除劑(除下述化合物之外)，如三芳基胺。如果需要，可使用?；呋瘎┤?-二甲氨基吡啶或4-吡咯烷子基吡啶。例如，參見Haslam等人，Tetrahedron，362409-2433(1980)。
此反應可在-25℃至100℃的中等溫度范圍內進行，且通常是在隋性氣氛如氮氣中進行。不過，室溫通常足以使反應進行。
6-位和/或4′-位羥基的?；部梢栽谒逍杂袡C溶劑中通過合適羧酸的酸催化反應進行?？墒褂玫乃岽呋瘎槿缌蛩?，多磷酸，甲磺酸等。
下述式I化合物的R1和/或R2基團也可通過形成合適酸的活性酯而構成，如由這些已知試劑如二環(huán)己基碳化二亞胺，?；溥?，硝基苯酚，五氯苯酚，N-羥基琥珀酰亞胺，以及1-羥基苯并三唑得到的酯。例如，參見Bull.Chem.Soc.Japan，381979(1965)，和Chem.Ber.，788和2024(1970)。
上述能形成-O-CO-(C1-C6烷基)部分的方法各自在上面所討論的溶劑中進行。那些在反應過程中不產生酸產物的方法當然不需要在反應混合物中使用酸清除劑。
當需要下述式I化合物時，其中或I化合物的6-和/或4′-位羥基被轉化成式-O-SO2-(C2-C6烷基)基團，可將單-或二羥基化合物與磺酸酐或合適的磺酸衍生物如磺酰氯，磺酰溴，或磺酰銨鹽按King和Monoir在J.An.Chem.Soc.，972566-2567(1975)所教授的方法反應。二羥基化合物也可與合適的磺酸酐或混合磺酸酐反應。這類反應可在如上所討論的與酰基鹵等類似物的反應中所使用的條件下進行。
盡管在本發(fā)明的方法中可使用游離堿形式的式I化合物，但優(yōu)選制備和使用可藥用鹽形式。因此，在本發(fā)明方法中使用的化合物主要是與各種有機和無機酸形成的可藥用的酸加成鹽，且包括藥物化學中通常使用的生理上可接受的鹽。這種鹽也構成了本發(fā)明的一部分。用于形成這類鹽的典型的無機酸包括鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，連二磷酸等等。也可使用由有機酸派生得到的鹽，有機酸如脂族單和二羧酸，苯基取代的鏈烷酸，羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸，芳香酸，脂族和芳族磺酸。因此這類可藥用鹽包括乙酸鹽，苯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，丙烯酸鹽，抗壞血酸鹽，苯甲酸鹽，氯代苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽，萘-2-苯甲酸鹽，溴化物，異丁酸鹽，苯丁酸鹽，β-羥基丁酸鹽，丁炔-1，4-二羧酸鹽，己炔-1，4-二羧酸鹽，癸酸鹽，辛酸鹽，氯化物，肉桂酸鹽，檸檬酸鹽，甲酸鹽，富馬酸鹽，乙醇酸鹽，庚酸鹽，馬尿酸鹽，乳酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，羥基馬來酸鹽，丙二酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，煙酸鹽，異煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，對苯二酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫二鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，丙炔酸鹽，丙酸鹽，苯丙酸鹽，水楊酸鹽，癸二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，焦硫酸鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磺酸鹽，苯磺酸鹽，對-溴苯磺酸鹽，氯苯磺酸鹽，乙磺酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，甲磺酸鹽，萘-1-碳酸鹽，萘-2-磺酸鹽，對-甲苯磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，酒石酸鹽，等等。優(yōu)選的鹽為鹽酸和草酸鹽。
可藥用酸加成鹽一般通過式I化合物與等摩爾或過量酸反應而形成。反應物一般在互溶劑如乙醚或乙酸乙酯中化合。鹽通常在1小時至10天期間從溶液中沉淀出來且通過過濾或用常規(guī)方法除去溶劑的方式分離。
可藥用鹽與由其派生出的化合物相比，一般具有增強的溶解度特性，因此它們通常更適合于制成液劑或乳劑。
下述實施例用于進一步說明本發(fā)明化合物的制備。但下述實施例并不以任何理由限制本發(fā)明的范圍。
下述實施例的NMR數據是在GE300MHz NMR儀上測定，使用無水d-6DMSO作為溶劑，但另有說明除外。
實施例1[2-(4-甲氧基苯基)]-6-甲氧基萘基-1-醇的制備
將6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3，4-二氫萘-1(2H)-酮(8.50g，30.14mmol)和1.0g對甲苯磺酸溶于50ml乙酸異丙烯酯中。加熱回流所得的混合物6小時，冷卻到室溫后，加入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)(13.70g，60.28mmol)。然后，使反應混合物回流1.5小時，冷至室溫后，用二氯甲烷(200ml)稀釋混合物。用0.2N氫氧化鈉(4×200ml)，再用水(2×200ml)洗滌有機層。干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮得到黑色固休。將乙酸酯粗產物溶于200ml 1∶1的甲醇∶四氫呋喃中，并用過量的甲醇鈉處理。通過過濾收集形成的橙色沉淀。用5N鹽酸將濾液酸化到pH＝4。進一步用200ml水稀釋濾液，然后用乙酸乙酯(3×100ml)提取。干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮得到灰白色固體。用己烷/乙酸乙酯結晶得到4.24g(50％)的[2-(4-甲氧基苯基)]-6-甲氧基萘基-1-醇，為白色固體。mp129-131℃。
1HNMR(DMSO-d6)δ8.19(d，J＝9.1Hz，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，2H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H)，7.18(dd，J＝9.1，2.8Hz)，1H)，7.13(d，J＝2.8Hz，1H)，7.07(d，J＝8.5Hz，2H)，5.76(bs，1H)，3.94(s，3H)，3.88(s，3H).FD質譜280.分析計算值.C18H16O3C，77.12；H，5.75.實測值C.76.83；H，5.90.
實施例21-(4-甲酰基)苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘的制備
在室溫下氮氣氣氛中，分小批量向[2-(4-甲氧基苯基)]-6-甲氧基萘基-1-醇(3.57g，12.75mmol)的180ml無水N，N-二甲基甲酰胺溶液中加入氫化鈉(535mg，13.38mmol，60％的礦物油分散液)，攪拌10分鐘后，加入4-氟苯甲醛(3.20g，25.50mmol)。在70℃加熱所得的混合物36小時。冷至室溫后，真空除去溶劑。使殘留物在乙酸乙酯/水之間分配。分離各層并用水洗滌有機層數次。最后干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮得到油狀物。色譜純化(90∶10己烷/乙酸乙酯)，得到2.06(48％)的1-(4-甲酰基)苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘，為白色固體，再用甲醇結晶。1-(4-甲?；?苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘的數據mp120-121℃。
1HNMR(CDCl3)δ9.80(s，1H)，7.78(d，J＝9.2Hz，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.67(d，J＝8.8Hz，2H)，7.56(d，J＝8.8Hz，1H)，7.46(d，J＝8.8Hz，2H)，7.21(d，J＝2.6Hz，1H)，7.12(dd，J＝9.2，2.6Hz，1H)，6.84(d，J＝8.8Hz，2H)，6.81(d，J＝8.8Hz，2H)，3.95(s，3H)，3.78(s，3H)，F(xiàn)D質譜384.分析計算值.C25H20O4C，78.11；H，5.24.實測值C，78.32；H，5.24。
實施例31-(4-羥基)苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘的制備
向1-(4-甲?；?苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘(2.07g，7.03mmol)的50ml甲醇懸浮液中加入過氧化氫(1.5ml，14.1mmol，30％溶液)，然后加入濃硫酸(0.5ml)。微微加熱反應混合物以助溶解，再在室溫攪拌36小時。加入固體碳酸氫鈉以中和酸，然后使混合物在乙酸乙酯/水(各100ml)之間分配。分離各層，干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮得到褐色固體。通過色譜純化(二氧化硅，10-30％乙酸乙酯/己烷)得到2.08g(80％)的1-(4-羥基)苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘，為白色固體。mp159-164℃。
1HNMR(DMSO-d6)δ8.91(s，1H).7.76(d，J＝8.5Hz，1H)，7.69(d，J＝9.2Hz，1H)，7.54(d，J＝8.5Hz，1H)，7.48(d，J＝8.7Hz，2H)，7.37(d，J＝2.4Hz，1H)，7.09(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，6.89(d，J＝8.7Hz，2H)，6.47(q，JAB＝9.0Hz，4H)，3.84(s，3H)，3.70(s，3H).FD質譜372.分析.計算值C24H20O4C，77.40；H，5.41.實測值C，77.19；H，5.70。
實施例41-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘鹽酸鹽的制備
在氮氣氣氛中，向1-(4-羥基)苯氧基-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘(865mg，2.32mmol)的15ml無水N，N-二甲基甲酰胺溶液中加入碳酸銫(3.0g，9.2mmol)。攪拌15分鐘后，加入鹽酸2-氯乙基哌啶(540mg，2.90mmol)，劇烈攪拌所得的混合物24小時，然后使其在乙酸乙酯/水(各200ml)之間分配。分離各層，用水洗滌有機層數次，然后干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮得到白色固體。將游離堿粗產物溶于20ml乙酸乙酯中并用乙醚氫氯酸處理。通過過濾收集形成的沉淀并真空干燥得到1.06g(88％)的1-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘鹽酸鹽，為白色固體，mp184-188℃。
1HNMR(DMSO-d6)δ9.91(bs，1H)，7.84(d，J＝8.5Hz，1H)，7.71(d，J＝9.2Hz，1H)，7.61(d，J＝8.5Hz，1H)，7.54(d，J＝8.8Hz，2H)，7.45(d，J＝2.2Hz，1H)，7.15(dd，J＝9.2，2.2Hz，1H)，6.93(d，J＝8.8Hz，2H)，6.82(d，J＝9.1Hz，2H)，6.61(d，J＝8.8Hz，2H)，4.21(m，2H)，3.89(s，3H)，3.75(s，3H)，3.45-3.33(m，4H)，2.92(m，2H)，1.80-1.63(m，5H)，1.35(m，1H).FD質譜483.分析.計算值.C31H33NO4·1.0HClC，71.60；H，6.59；N，2.69.實測值C，71.77；H，6.66；N，2.79.
實施例51-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-羥基苯基)-6-羥基萘鹽酸鹽的制備
在0℃氮氣氣氛中，向鹽酸1-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基萘(1.00g，1.92mmol)的20ml無水二氯甲烷溶液中，加入三溴化硼(0.74ml，7.71mmol)。使得到的混合物溫熱到8℃并攪拌2小時，然后將反應混合物傾入攪拌下的冷碳酸氫鈉飽和溶液(200ml)中。當氣體釋放停止后，用5％的甲醇/氯仿(3×100ml)提取水層。合并有機層，干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮得到油。將游離堿粗產物溶于20ml乙酸乙酯中并用乙醚，氫氯酸處理。通過過濾收集形成的沉淀并真空干燥得到798mg(83％)1-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-羥基苯基)-6-羥基萘鹽酸鹽，為白色固體。 mp130-136℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ9.89(s，1H)，9.80(bs，1H)，9.46(s，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，1H)，7.64(d，J＝9.2Hz，1H)，7.50(d，J＝8.5Hz，1H)，7.40(d，J＝8.8Hz，2H)7.20(d，J＝2.2Hz，1H)，7.04(dd，J＝9.2，2.2Hz，1H)，6.82(d，J＝9.1Hz，2H)，6.76(d，J＝8.8Hz，2H)，6.61(d，J＝9.1Hz，2H)，4.21(m，2H)，3.45-3.33(m，4H)，2.92(m，2H)，1.80-1.63(m，5H)，1.35(m，1H).FD質譜456.分析.計算值C29H29NO4·1.0HClC，70.80；H，6.15；N，2.85.實測值C，70.52；H，6.19；N，2.55.
試驗方法一般準備步驟在說明方法的實施例中，采用絕經后模型，測定類脂循環(huán)中不同的治療產生的效果。
從Charles River實驗室(Portage，MI)得到75日齡的雌性Sprague Dawley鼠(重量范圍200-225g)。在Charles River實驗室將動物兩側卵巢(OVX)切除，或者接受Sham外科手術，并于1周后運出。到達后，將動物以每籠每組3或4只放在金屬籠中，并允許其自由接近食物(鈣含量約0.5％)和水1周。室溫保持在22.2±1.7℃，最小相對濕度40％。屋中的日照12小時，黑暗12小時。
投藥制度及組織的收集一周時間的適應后(即卵巢切除2周后)，開始給予試驗化合物的日劑量。除非另有說明，17α-乙炔基雌二醇或試驗化合物是以1％羧甲基纖維素的懸浮液或20％環(huán)糊精溶液的形式口服給予的。每天按計量喂養(yǎng)動物4天。按照此投藥制度，動物增加體重并用氯胺酮∶甲苯噻嗪(2∶1，V∶V)混合物麻醉，通過心臟穿刺得到血液樣品。然后，通過二氧化碳窒息使動物死亡，在中間切口取出子宮，并測定子宮的濕重。
膽固醇的分析在室溫下使血樣凝集2小時，再于3000rpm離心10分鐘后得到血清。采用Boehringer MannheimDiagnostics高性能膽固醇試驗測定血清膽固醇。簡言之，膽固醇被氧化成膽甾基-4-烯-3-酮和過氧化氫。在過氧化物酶的存在下，過氧化氫隨之與苯酚和4-氨基非那宗反應，得到對喹喏酮亞胺染料，利用分光光度計該染料可在500nm處辨認。然后，根據標準曲線計算膽固醇的濃度。整個試驗是采用Biomek自動操作裝置自動進行的。
子宮的嗜酸性細胞過氧化酶(EPO)試驗在4℃保存子宮直到酶催分析，然后在含0.005％Triton X-100的50體積的50mM三羥甲氨基甲烷緩沖液(pH-8.0)中均化。加入溶于三羥甲氨基甲烷緩沖液中的0.01％過氧化氫和10mM鄰亞苯基二胺(最終濃度)，在450nm測量吸收度的增值1分鐘。在子宮中嗜酸性細胞的存在是化合物具有雌激素活性的標志，在最初反應曲線的線性部分上可得到每15秒間隔的最大速度。
化合物來源17α-乙炔基雌二醇可由Sigma Chemi-cal Co.，St.Louis，MO.得到。
骨質疏松試驗步驟根據一般的準備步驟，下面，每天處理鼠，連續(xù)35天(每處理組6只鼠)并在第36天時通過二氧化碳窒息使動物死亡。 35天的時間足以產生最大的骨質密度的減少，如下文所述測定。動物死亡后，移出子宮，剝離凈外面的組織，為了證實與完全的卵巢切除相關的雌激素的減少，在測定濕重之前排出液體內容物。由于卵巢切除，子宮重量通常減少約75％。然后，將子宮放在10％中性福爾馬林緩沖液中以待進行下一步的組織結構分析。
切開右股骨，通過影象分析程序(NIH影象)在遠端干骺端(distal metaphysis)上產生數字化X-射線并分析。這些動物脛骨的最大切面也可通過定量自動化的層析X射線攝影法掃描。
根據上述步驟，給試驗動物口服溶于20％羥丙基β-環(huán)糊精中的本發(fā)明化合物和乙炔基雌二醇(EE2)。
MCF-7增生試驗將MCF-7乳腺癌細胞(ATCC HTB22)保存在加有10％牛胎盤血清(FBS)(v/v)，L-谷胺酰胺(2mM)，丙酮酸鈉(1mM)，HEPES{[N-[2-羥基乙基]哌嗪-N′-[2-乙磺酸]10mM}，非必需氨基酸和牛胰島素(1ug/ml)的MEM(必須的最少的介質，無酚紅，Sigma，St.Louis，MO)(維持介質)中。在試驗前10天，將MCF-7細胞轉移到補加有取代10％FBS的10％剝離了牛胎盤血清的糊精涂復炭(DCC-FBS)的維持介質中(試驗介質)，以耗盡內在膽固醇。采用細胞分離介質(Ca++/Mg++，無HBSS(無酚紅))加有10mMHEPES和2mMEDTA)從維持介質燒瓶中移出MCF-7細胞。用試驗介質洗滌細胞兩次并調節(jié)至80,000個細胞/ml。將約100μl(8,000細胞)加到平底微培養(yǎng)孔(Coster 3596)中，并在37℃和5％CO2濕化的孵育器中孵育48小時使得在轉移后細胞附著和平衡。由試驗介質制備系列稀釋的藥物或以DMSO作為稀釋劑對照，并將50μl轉移到3倍的微培養(yǎng)介質中，再加入50μl試驗介質得到最后體積200μl。并在37℃和5％CO2濕化的孵育器中再孵育48小時后，用氚化胸苷二磷酸(1uCi/孔)使微培養(yǎng)物脈動4小時。通過在-70℃冷凍24小時使培養(yǎng)停止，接著溫熱，再通過Skatron半自動細胞采集器(Harvester)采集細胞微培養(yǎng)物。采用WallacBetaplaceβ計數器通過液體閃爍對樣品計數。在這些試驗中，證實本發(fā)明化合物具有潛在的治療激素-依賴性癌癥，特別是乳腺癌的活性。
對DMBA誘導的乳腺癌的抑制使購自Harlan Industries，Indianapolis，Indiana的Sprague-Dawley雌鼠產生雌激素-依賴性的乳腺癌。在約55天齡時，使這些鼠接受20mg7，12二甲基苯并[a]蒽(DMBA)的單一口服喂養(yǎng)。服用DMBA6周后，每隔一周摸診乳腺診斷腫瘤的出現(xiàn)。一旦一個或多個腫瘤出現(xiàn)，用度量卡尺測量每個腫瘤的最長直徑和最短直徑，記錄測量結果，并選擇動物進行試驗。使各種直徑大小的腫瘤在試驗組和對照組進行統(tǒng)一分布，使得在試驗組間平均直徑大小的腫瘤平衡分布。每個試驗中，試驗組和對照組都含有5-9只動物。
式I化合物或者通過2％阿拉伯樹膠的注射液腹膜內注射，或者口服?？诜┯脮r可將化合物溶于或懸浮于0.2ml植物油中。每種治療方式，包括阿拉伯樹膠和植物油對照治療，都是對每只試驗動物每天施用1次。在最初測量腫瘤大小和選擇試驗動物后，采用上述方法每周測量腫瘤大小一次。對動物的治療和測量持續(xù)3-5周后，測量腫瘤的最終的面積。對于每個化合物和對照治療，都需測量腫瘤平均直徑的變化。
子宮纖維變性試驗步驟試驗1給3-20個患子宮纖維變性的婦女施用本發(fā)明化合物?；衔锸┯玫牧?.1-1000mg/天，施用的期限是3個月。
在服藥期限內直到3個月停止服藥后，觀察這些婦女子宮纖維變性的治療效果。
試驗2重復試驗1同樣的步驟，只是施用期限改為6個月。
試驗3重復試驗1同樣的步驟，只是施用期限改為一年。
試驗4A 豚鼠中纖維瘤的誘導作用對性成熟的雌性豚鼠使用長期雌激素刺激以誘導平滑肌瘤。通過注射給予動物雌二醇每周3-5次持續(xù)2-4個月，或直到腫瘤產生。連續(xù)3-16周每天施用包括本發(fā)明化合物或載體的治療物，然后將動物殺死并收集子宮和分析腫瘤消退。
B 人子宮平滑肌瘤組織向裸鼠體內的移植將人體平滑肌瘤的組織移植入性成熟的、閹割的、雌性裸鼠的腹膜內空隙和/或子宮的子宮肌層。提供外源雌激素以誘導移植組織的生長，在某些情況下，收集的腫瘤細胞在移植前先在體外培養(yǎng)。包括本發(fā)明化合物或載體的治療物通過每天洗胃持續(xù)3-16周提供，并且移出植入物和測量腫瘤的生長或消退。在殺死動物時，采集子宮以評估器官的狀態(tài)。
試驗5A 采集人體子宮纖維瘤的組織并在體外保存，將它們作為初級非運送的培養(yǎng)物。使這一外科樣品通過無菌網或篩擠壓，或者從周圍的組織梳理開得到單細胞的懸浮液。將細胞置于含有10％血清和抗菌素的培養(yǎng)基中。在有或沒有雌激素存在下測定生長率，評估細胞產生補體成分C3的能力和它們對生長因子和生長激素反應的能力。在體外培養(yǎng)物中，測定用黃體制劑，GnRH，本發(fā)明化合物和載體治療后細胞的增生反應。每周測量膽固醇激素受體的水平，以決定在體外是否保持了細胞的重要特征。應用從5-25個病人得到的組織。
在上述至少一個試驗中的活性標志著本發(fā)明化合物具有治療子宮纖維變性的潛在能力。
子宮內膜異位試驗步驟在試驗1和2中，檢查本發(fā)明化合物施用14-天和21-天后對于移出的內原組織生長的作用。
試驗1采用12-30只成年CD系雌鼠作為試驗動物，并分成等數量的3組。監(jiān)測所有動物的動情期循環(huán)。在動情期開始時給每只雌鼠動手術。在每組中移去雌鼠的左子宮角，將其分成小塊，并將這些小塊松散地縫在臨近腸系膜血流的各個位點上。此外，除去第二組雌鼠的卵巢。
在手術后當天，給第一組和第二組動物腹膜內注射水連續(xù)14天，在同樣期間內，給第三組動物腹膜內注射1.0mg/千克體重的本發(fā)明化合物。經過14天的治療，處死各個雌鼠，如果需要，轉移出子宮內膜移出物、腎上腺、殘余的子宮和卵巢并準備用于組織學檢查。給卵巢和腎上腺稱重。
試驗2采用12-30只成年CD系雌鼠作為試驗動物，并分成等數量的2組。監(jiān)測所有動物的動情期周期。在動情期開始時給每只雌鼠動手術。在每組中移去雌鼠的左子宮角，將其分成小塊，并將這些小塊松散地縫在臨近腸系膜血管流的各個位點上。
在手術后50天，給分配為第一組的動物腹膜內注射水21天，在同樣期間，給第二組動物腹膜內注射1.0mg/千克體重的本發(fā)明化合物。經過21天的治療，殺死各個雌鼠，轉移出子宮內膜移出物和腎上腺并稱重。測量作為生長標志的移出物。監(jiān)測動情周期。
試驗3A 子宮內膜異位的手術誘導采用子宮內膜組織的劃皮來誘導大鼠和/或兔的子宮內膜異位。對生殖成熟的雌性動物進行兩側卵巢切除并提供外源性雌激素，因此得到特定的和固定的激素水平。向5-150只動物的腹膜內移入劃皮的子宮內膜組織，并提供雌激素以刺激移植的組織的生長。包括本發(fā)明化合物的治療物通過每天洗胃持續(xù)3-16周提供，并且移出植入物和測量腫瘤的生長或消退。在殺死動物時，采集子宮的完整的角以評估子宮內膜的狀態(tài)。
B 在裸鼠中移入人體子宮內膜組織將從人體子宮內膜損傷處得到組織移植入性成熟的、閹割的、雌性裸鼠的腹膜內。提供外源性雌激素以誘導移植組織的生長。在某些情況下，收集的腫瘤細胞在移植前先在體外培養(yǎng)。包括本發(fā)明化合物或載體的治療物通過每天洗胃持續(xù)3-16周提供，并且移出植入物和測量腫瘤的生長或消退。在殺死動物時，采集子宮以評估整個子宮內膜的狀態(tài)。
試驗4A 將從人體子宮內膜損傷處采集的組織體外保存作為初級非運送培養(yǎng)物。使這一外科樣品通過無菌網或篩，或者從周圍的組織梳理開得到單細胞的懸浮液。將細胞置于含有10％血清和抗菌素的培養(yǎng)基中。在有或沒有雌激素存在下測定生長率，評估細胞產生補體成分C3的能力和它們對生長因子和生長激素反應的能力。在體外培養(yǎng)物中，測定用黃體制劑，GnRH，本發(fā)明化合物和載體治療后細胞的增生反應。每周測量膽固醇激素受體的水平，以決定在體外是否保持了細胞的重要特征。應用從5-25個病人得到的組織。
在上述至少一個試驗中的活性標志著本發(fā)明化合物具有治療子宮內膜損傷的潛在能力。
抑制主動脈平滑肌細胞的增生/再狹窄試驗步驟本發(fā)明化合物具有抑制主動脈平滑肌細胞增生的能力。這可采用兔平滑肌的培養(yǎng)細胞證明，增生是通過對DNA合成的測量而測定的。通過移植方法得到細胞，如下文所述Ross，J.of Cell Bio.50172(1971).將細胞置于96孔微滴度盤中5天。培養(yǎng)物匯合并且生長停止了。然后，將細胞轉移到含有0.5-2％貧血小板血漿、2mM L-谷胺酰胺、100U/ml盤尼西林、100mg/ml鏈霉素、1mC/ml3H-胸苷、20ng/ml血小板源生長因子和各種濃度本發(fā)明化合物的Dulbecoc′s Modified Eagle介質(DMEM)中。在二甲亞砜中制備本發(fā)明化合物的儲液，然后在上述試驗介質稀釋到適當的濃度(0.01-30mM)。再在37℃5％二氧化碳/95％空氣氣氛中培育細胞24小時。在這24小時末，使細胞固定在甲醇上，然后，通過閃爍計數測定3H-胸苷與DNA的合并，如Bonin，et al.，Exp.Cell Res.181475-482(1989)所述。
本發(fā)明化合物對主動脈平滑肌細胞增生的抑制，可通過測定它們對于指數增長的細胞的作用進一步證明。將兔主動脈平滑肌細胞種于含10％牛胎盤血清、2mML-谷胺酰胺、100U/ml盤尼西林、100mg/ml鏈霉素的DMEM的12孔組織培養(yǎng)盤中24小時后，細胞附著了，且介質被含10％血清、2mM L-谷胺酰胺、100U/ml盤尼西林、100mg/ml鏈霉素和所需濃度本發(fā)明化合物的DMEM取代。允許細胞生長4天。用胰蛋白酶處理細胞，并通過ZM-Coulter計數器計數測定每種培養(yǎng)物中細胞的數目。
上述試驗中本發(fā)明化合物的活性標志著其治療再狹窄的潛在能力。
本發(fā)明也提供了減輕婦女絕經綜合癥的方法，該方法包括采用式I化合物的下述方法，和進一步包括向婦女施用有效量的雌激素或孕激素。這些治療物對于骨質疏松和降低血清膽固醇是特別有用的，因為患者會得到各種治療劑的益處同時本發(fā)明化合物可抑制雌激素和孕激素的不需要的副反應。下面，在任一絕經后試驗中，聯(lián)合治療活性意味著聯(lián)合治療可用于減輕婦女的絕經綜合癥。
可得到各種形式的雌激素和孕激素。以雌激素為基礎的治療劑包括，例如乙炔基雌激素(0.01-0.03mg/天)、炔雌醇(0.05-0.15mg/天)和結合雌激素如馬雄激素(Wyeth-Ayerst；0.3-2.5mg/天)。以孕激素為基礎的治療劑包括，例如，6α-甲-17-羥孕酮如Provera(Upjohn；2.5-10mg/天)、異炔諾酮(1.0-10.0mg/天)和炔諾酮(0.5-2.0mg/天)。優(yōu)選的以雌激素為基礎的化合物是馬雄激素，以孕激素為基礎的化合物是異炔諾酮和炔諾酮。
以雌激素和孕激素為基礎的各種制劑的施用方法是與本領域已知的方法一致的。本發(fā)明的大多數方法是使式I化合物持續(xù)施用1-3次每天。但是，在對子宮內膜異位的治療中周期療法是特別有用的，或者可用于快速治療疾病的疼痛發(fā)作。對再狹窄的治療限于短時間(1-6個月)間隔，再采用諸如血管成形術的醫(yī)療手段進行治療。
這里所用的術語“有效量”是指可以減輕所述的各種病理情況癥狀的本發(fā)明化合物的量。本發(fā)明化合物的特定的施用劑量當然是由圍繞病例的特定環(huán)境決定的，例如施用化合物，施用途徑，病人的狀態(tài)和欲處理的病理情況。每日的典型劑量為無毒劑量水平約5mg/天-約600mg/天的本發(fā)明化合物。通常優(yōu)選的劑量是約15mg/天-約80mg/天。
本發(fā)明化合物可通過多種途徑施用，包括口服、直腸施用、皮下施用、腹腔、靜脈、肌內和鼻內施用。這些化合物在施用前最好先配制，而制劑狀類的選擇由主治醫(yī)生決定。因此，另一方面本發(fā)明提供了含有效量的式I化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，其中，還可任選地含有有效量的雌激素和孕激素，以及可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑。
在這樣的制劑中，活性成分的總量為制劑重量的0.1％-99.9％。“可藥用”是指載體、稀釋劑、賦形劑和鹽必須和配方中的其它成分相容，并且對于受者無害。
本發(fā)明的藥物制劑可采用本領域熟知的和容易得到的成分通過已知的方法制備，例如使式I化合物和或不和雌激素或孕激素化合物，與常規(guī)的賦形劑、稀釋劑或載體一起制成片劑、膠囊、懸浮液、粉劑等。適于在這樣的制劑中使用的賦形劑、稀釋劑和載體的實例如下填料和增量劑如淀粉、蔗糖、山梨糖醇和硅衍生物；結合劑如羧甲基纖維和其他纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；延遲溶解的試劑如石蠟；吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇、硬脂酸單甘油酯；吸收載體如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及聚乙二醇固體。
本發(fā)明化合物也可被制成酏劑或適合口服或非腸道施用的溶液形式，非腸道的施用形式如肌內、皮下或靜脈給藥途徑。而且，將化合物制成緩釋劑量等形式也是非常適合的。制劑的組成使得活性成分份僅僅可以緩慢釋放或者優(yōu)選在特定的生理位點釋放，可能是在一段時間內釋放?？捎美缇酆衔锘蚴炛苽渫繉印⑼獍b和保護性材料。
通常本發(fā)明化合物可單獨或與藥劑結合在常規(guī)制劑中應用，下述制劑的實例只是說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明的范圍。
制劑在下述制劑中，“活性成份”是指式I化合物或其鹽或其溶劑化物。
制劑1明膠膠囊根據下述方法制備硬明膠膠囊
上述制劑可在合理的范圍內變化。
片劑可采用下述組分制備制劑2片劑
將組分混合并壓制成片劑。
或者各含2.5-1000mg活性成份的片劑的制備如下制劑3片劑
使活性成份、淀粉和纖維素通過No.45目U.S.篩并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得的粉末混合并使之通過No.14目U.S.篩。這樣得到的顆粒在50℃-60℃干燥并通過No.18目U.S.篩。羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石預先通過No.60目U.S.篩后，再加到上述得到的顆粒中，經過混合和在壓片機上壓片后得到片劑。
每5ml劑量中含有0.1-1000mg活性成份的懸浮液的制備如下制劑4懸浮液
使活性成分通過No.45目U.S.篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合得到光滑漿料。用水稀釋苯甲酸溶液、調味劑和著色劑并在攪拌下加到所得的漿料中。然后加入足夠的水至預定的體積。
氣溶膠溶液含有下述成分制劑5氣溶膠
使活性成份與乙醇混合并將混合物加到推進劑22的一部分中，冷卻到30℃并轉移到填充裝置中。然后，在不銹鋼容器中填充所需的量，并用剩余的推進劑稀釋。再在容器上安裝閥門。
栓劑的制備如下所述制劑6栓劑
使活性成份通過No.60目U.S.篩并懸浮在預先用最低所需熱量融化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物傾入公稱容量2g的栓劑模中，并使之冷卻。
靜脈注射液的制備如下所述制劑7靜脈注射液
上述組分的溶液在給病人靜脈注射時是以約1ml/分鐘的速度施用的。
權利要求
1.藥物組合物，含有作為活性成分的式I化合物或其可藥用鹽，并任選含有雌激素或孕激素，以及一種或多種藥用載體、賦形劑或稀釋劑，
其中R1為-H、-OH、-O(C1-C4烷基)、-OCOC6H5、-OCO(C1-C6烷基)或-OSO2(C2-C6烷基)；R2為-H、-OH、-O(C1-C4烷基)、-OCOC6H5、-OCO(C1-C6烷基)、-OSO2(C2-C6烷基礎)或鹵素；R3為1-哌啶基、1-吡咯烷基、甲基-1-吡咯烷基、二甲基-1-吡咯烷基、4-嗎啉基、二甲氨基、二乙氨基、二異丙基氨基或1-六亞甲基亞氨基；以及n為2或3。
2.根據權利要求1的藥物組合物，其中R1為-OH；R2為-OH；R3為1-哌啶基；以及n為2。
3.根據權利要求2的藥物組合物，其中式I化合物的鹽為鹽酸鹽。
全文摘要
含右式的萘基化合物及其可藥用鹽的藥物組合物,可用于治療與絕經后綜合癥和子宮纖維性病癥、子宮內膜異位以及主動脈平滑肌細胞增生有關的各種醫(yī)學病癥。其中各符號的定義如說明書所述。
文檔編號A61K31/24GK1261534SQ9912357
公開日2000年8月2日 申請日期1999年11月5日 優(yōu)先權日1995年2月28日
發(fā)明者A·D·帕爾考維茨 申請人:伊萊利利公司