專利名稱：主要用于治療骨質(zhì)疏松的吲哚衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某些新化合物，這類化合物的制備方法，含有這類化合物的藥物組合物以及這類化合物和組合物在藥物方面的應(yīng)用。
已知與骨質(zhì)損失有關(guān)的疾病是由破骨細(xì)胞的過度活動造成的。還已知某些通常與巴弗洛霉素有關(guān)的化合物能用于治療這類疾病例如公開號為WO 91/06296的國際專利申請公開了用于治療骨疾病的一些bafilomycin大環(huán)內(nèi)酯。
然而，巴弗洛霉素衍生物對于人的破骨細(xì)胞不具有選擇性。因此，這些化合物的使用由于其他必需v-ATP酶的廣泛性阻斷而伴隨著無法接受的毒性。的確，至今還未獲知有對人破骨細(xì)胞具有選擇性的治療。
對與骨質(zhì)損失有關(guān)的人類疾病的成功治療的探索變得更為復(fù)雜，因?yàn)閷χ委煱羞x擇性抑制破骨細(xì)胞的性質(zhì)有爭議。Baron等(國際專利申請公開WO 93/01280)揭示破骨細(xì)胞中的一種特定的空泡腺苷三磷酸酶(V-ATP酶)被識別為潛在的治療靶。但Baron的研究是在小雞中進(jìn)行的，Hall等(《骨骼與礦物質(zhì)》(Bone and Mineral)27,159-166，(1994))在一項(xiàng)涉及哺乳動物的研究中得出了如下結(jié)論與鳥類的破骨細(xì)胞V-ATP酶相對照，哺乳動物的破骨細(xì)胞中的V-ATP酶與其他細(xì)胞中的V-ATP酶具有類似的藥理學(xué)性質(zhì)，因此不可能是一種良好的治療靶。
我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)一組對哺乳動物破骨細(xì)胞具有選擇性的化合物，它們通過選擇性地抑制破骨細(xì)胞的骨再吸收活性起作用。因此認(rèn)為這些化合物尤其可用于治療和/或預(yù)防與骨質(zhì)損失有關(guān)的疾病，例如骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨質(zhì)減少的疾病、佩吉特氏病、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)和相關(guān)性疾病。另外認(rèn)為這些化合物具有抗腫瘤活性、抗病毒活性(例如對抗塞姆利基森林病毒、皰疹性口炎、新城病、甲型和乙型流感、HIV病毒)、抗?jié)兓钚?例如該類化合物可用于治療由幽門螺旋桿菌引發(fā)的慢性胃炎和消化性潰瘍)、免疫抑制劑活性、抗脂血癥活性、抗動脈粥樣硬化活性，可用于治療艾滋病和阿爾茨海默氏病。另一方面，還認(rèn)為這些化合物可用于抑制血管生成，即在各種類型的病癥(血管生成性疾病)中觀察到的新血管的形成，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
因此，本發(fā)明提供式(Ⅰ)化合物或者其鹽或溶劑化物 其中A表示任選取代的芳基或任選取代的雜環(huán)基；Ra表示-CO-NRsRt，其中Rs和Rt各自獨(dú)立地表示氫、烷基、取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基烷基，或者Rs和Rt與和它們相連的氮原子一起形成雜環(huán)基；R1和R2各自獨(dú)立地表示氫、羥基、氨基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的芐氧基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、烷基、羧基、烷氧羰基、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?，或者R1和R2一起表示亞甲二氧基、碳酰二氧基、碳酰二氨基；和R3表示氫、鏈烷酰基、烷基、氨基烷基、羥烷基、羧基烷基、烷氧羰基烷基、氨基甲?；蛘咄榛酋；头蓟酋；?br> A表示的芳基實(shí)例包括苯基和萘基。
A表示的雜環(huán)基的實(shí)例包括呋喃基。
適宜的是R1和R2各自獨(dú)立地表示鹵素取代基，例如氯。
R1或R2取代基的適合位置是4、5、6或7位，有益的是5或6位。
R1優(yōu)選是氯，尤其是5-氯，并且R2是氯，尤其是6-氯。
R3適合表示氫。
當(dāng)Rs或Rt表示烷基或取代的烷基時，適合的烷基是C1-6烷基，例如C1、C2、C3、C4或C5烷基，有益的是乙基、丙基或丁基。
當(dāng)Rs或Rt表示取代的烷基時，有益的基團(tuán)是2-(二烷基氨基)乙基、3-(二烷基氨基)丙基、4-(二烷基氨基)丁基、3-[4-(3-氯苯基)哌嗪-1-基]丙基、3-[4-(3-羥基苯基)哌嗪-1-基]丙基、雜環(huán)基甲基、雜環(huán)基乙基或雜環(huán)基丙基。
Rs適合表示任選取代的雜環(huán)基，和芳基。
Rs適合表示任選取代的雜環(huán)基烷基。
Rt適合表示氫。
在一個有益的方案中，Rs表示任選取代的哌啶基，尤其是4-哌啶基。
哌啶環(huán)的取代基包括烷基、稠合環(huán)烷基和羥烷基、多羥基烷基。
哌啶基的有益取代基是烷基。
當(dāng)哌啶基被取代時，優(yōu)選取代基與氮原子α位的一個或兩個碳原子相連。
取代的哌啶基的實(shí)例是1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基和2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基。
當(dāng)Rs表示雜環(huán)基烷基時，適合的雜環(huán)基是任選取代的具有5-8個，優(yōu)選5或6個環(huán)原子的飽和單環(huán)雜環(huán)，所述環(huán)原子包括1、2或3個選自O(shè)、S或N的雜原子；例如任選取代的哌嗪基；雜環(huán)基上合適的任選取代基是任選取代的芳基，例如羥基苯基或氯苯基。
形成式(Ⅰ)部分的本文中稱為結(jié)構(gòu)部分(b)的結(jié)構(gòu)部分具有下式所示的分子結(jié)構(gòu) 在一個優(yōu)選的方案中，結(jié)構(gòu)部分(b)表示式(c)的結(jié)構(gòu) 其中Ra如式(Ⅰ)中的相關(guān)定義并且R4表示氫、羥基、烷氧基、烷硫基、鹵素或基團(tuán)NRuRv，其中Ru和Rv各自獨(dú)立地表示氫、烷基或烷基羰基。
R4適合位于Ra的間位。
R4適合表示氫或烷氧基，優(yōu)選烷氧基。
R4的一個實(shí)例是氫。R4的一個實(shí)例是甲氧基。
式(Ⅰ)的特別實(shí)例是實(shí)施例2、7和8的那些化合物。
本文中采用的術(shù)語“烷基”包括具有1-12個，適合的是1-6個，優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基和異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基以及戊基，還包括形成其他基團(tuán)，例如烷氧基或鏈烷酰基部分的烷基。
本文采用的術(shù)語“芳基”包括苯基和萘基，尤其是苯基。
芳基的適合的可任選的取代基包括至多5個取代基，適合地是至多3個取代基，它們選自烷基、烷氧基、烷硫基、羥基、鹵素、三氟甲基、烷基羰基、氰基、硝基或基團(tuán)NRuRv，其中Ru和Rv各自獨(dú)立地表示氫、烷基或烷基羰基。
適合的芳烷基包括芳基-C1-3-烷基，例如苯乙基和芐基，尤其是芐基。
取代的芳烷基優(yōu)選是在芳基部分發(fā)生取代。
本文采用的術(shù)語“雜環(huán)基”包括飽和的和不飽和的單或稠合的雜環(huán)基，各環(huán)具有4-11個環(huán)原子，尤其是5-8個，優(yōu)選5、6或7個環(huán)原子，這些環(huán)原子包括1、2或3個選自O(shè)、S或N的雜原子。
任何雜環(huán)基的適合的可任選的取代基包括本文中針對芳基提及的那些。
本文中采用的術(shù)語“鹵素”或“鹵代”包括氟、氯、溴和碘，適合的是氟和氯，有益的是氟。
本文采用的“?；卑ㄍ榛驶?。
式(Ⅰ)的化合物的一些碳原子是手性碳原子，因此可得到式(Ⅰ)化合物的立體異構(gòu)體。本發(fā)明擴(kuò)大到所有式(Ⅰ)化合物的立體異構(gòu)體形式，包括其對映體和混合物，包括外消旋體。不同的立體異構(gòu)體形式可通過常規(guī)方法彼此分離或拆分，或者任何給定的異構(gòu)體可通過常規(guī)立體長性或非對稱合成獲得。
適合的鹽是可藥用鹽。
適合的可藥用鹽包括酸加成鹽和羧基的鹽。
適合的可藥用酸加成鹽包括與無機(jī)酸，例如氫氯酸、氫溴酸、磷酸或硫酸形成的鹽；或者與有機(jī)酸形成的鹽，例如甲磺酸、甲苯磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、琥珀酸、水楊酸、馬來酸、甘油磷酸或乙酰水楊酸。
適合的羧基的可藥用鹽包括金屬鹽，例如鋁鹽；堿金屬鹽，如鈉鹽或鉀鹽和鋰鹽；堿土金屬鹽，如鈣鹽和鎂鹽；及銨鹽或取代的銨鹽，例如那些與C1-6烷基胺(如三乙胺)、羥基-C1-6烷基胺(如2-羥基乙胺、二-(2-羥乙基)-胺、三-(2-羥乙基)-胺)、環(huán)烷基胺(如二環(huán)己基胺)形成的鹽；或者與普魯卡因、1,4-二芐基哌啶、N-芐基-b-苯乙胺、脫氫松香胺、N,N’-二脫氫松香胺、葡糖胺、N-甲基葡糖胺；或者與吡啶類型的堿，例如吡啶、三甲吡啶或喹啉形成的鹽。
式(Ⅰ)化合物的適合的溶劑化物是可藥用的溶劑化物，例如水合物。
非可藥用的式(Ⅰ)化合物的鹽和/或溶劑化物可用作制備式(Ⅰ)化合物的可藥用鹽和/或溶劑化物或者式(Ⅰ)化合物本身的中間體，這構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。
式(Ⅰ)化合物或者其鹽或溶劑化物可通過酰胺化式(Ⅱ)化合物來制備 其中A如式(Ⅰ)中所定義，R1’、R2’和R3’各自分別表示式(Ⅰ)中所定義的R1、R2和R3或者它們的被護(hù)形式；之后，按需進(jìn)行如下的一步或多步反應(yīng)(ⅰ)將一種式(Ⅰ)化合物轉(zhuǎn)化為另一種式(Ⅰ)化合物；(ⅱ)脫去保護(hù)基；(ⅲ)制備如此形成化合物的鹽或溶劑化物。
適合的酰胺化方法包括將式(Ⅱ)化合物與式(Ⅲ)化合物反應(yīng)NHRsRt(Ⅲ)其中Rs和Rt如式(Ⅰ)所定義；之后，按需從所形成的化合物上脫去任何保護(hù)基。
式(Ⅱ)與式(Ⅲ)化合物之間的反應(yīng)可在適合的常規(guī)酰胺化條件下進(jìn)行，例如在非質(zhì)子傳遞溶劑，如二甲基甲酰胺中，在提供形成所需產(chǎn)物的適合速率的任何溫度下，通常是在室溫下進(jìn)行；酰胺化反應(yīng)優(yōu)選在肽偶合試劑，如1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAT)和/或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(WSC)的存在下進(jìn)行。
式(Ⅱ)化合物可通過環(huán)合式(Ⅳ)化合物進(jìn)行制備 其中A、R1’和R2’如式(Ⅱ)中所定義并且Rp表示被護(hù)羥基或可轉(zhuǎn)化為羧基的基團(tuán)；之后，按需將基團(tuán)Rp轉(zhuǎn)化為羧基。
環(huán)合反應(yīng)適合在還原環(huán)合條件下進(jìn)行，例如使用鐵粉/乙酸混合物或者堿金屬的亞硫酸氫鹽，如亞硫酸氫鈉；在任何適合的溶劑，如四氫呋喃、乙醇、甲醇或水或者它們的混合溶劑中；在提供形成所需產(chǎn)物的適合速率的任何溫度，例如升高的溫度，通常是在溶劑的回流溫度下進(jìn)行。
當(dāng)Rp是保護(hù)基時，適合的保護(hù)基包括低級烷基，如甲基或乙基，它們可通過常規(guī)的水解方法，如使用氫氧化鉀的乙醇溶液經(jīng)堿水解除去。
當(dāng)Rp是可轉(zhuǎn)化為羧基的保護(hù)基時，適合的基團(tuán)包括氰基類使用常規(guī)方法可將這類基團(tuán)轉(zhuǎn)化為羧基，例如當(dāng)Rp是氰基時，可通過使用常規(guī)方法將氰基轉(zhuǎn)化為羧基，如使用氫氧化鉀的乙醇溶液在回流下經(jīng)堿水解進(jìn)行。Rp優(yōu)選是氰基。
式(Ⅳ)化合物通過將其中R1’和R2’如式(Ⅰ)中所定義的式(Ⅴ)化合物 與式(Ⅵ)化合物反應(yīng)制得 其中A和Rp如式(Ⅳ)中所定義并且L1是離去基團(tuán)或者原子，例如鹵原子，如氯原子。
式(Ⅴ)與式(Ⅵ)化合物之間的反應(yīng)可在惰性烴溶劑，例如環(huán)己烷中；在提供形成所需產(chǎn)物的適合速率的任何溫度下，優(yōu)選在升高的溫度，例如溶劑的回流溫度下并且優(yōu)選在叔胺，例如三乙胺的存在下進(jìn)行。
式(Ⅴ)與式(Ⅵ)化合物之間的反應(yīng)通過中間體進(jìn)行，該中間體一般不加以分離，就地加熱可得到式(Ⅳ)化合物?；蛘撸瑢⒅虚g體加以分離，由此提供了制備式(Ⅳ)化合物的另一種方法，其中將其中A、R1，和R2，如式(Ⅱ)中所定義并且Rp如式(Ⅳ)中所定義的式(Ⅶ)化合物 加熱，得到上文定義的式(Ⅳ)化合物。
式(Ⅶ)化合物向式(Ⅳ)化合物的轉(zhuǎn)化在類似于《雜環(huán)化學(xué)雜志》(J.Het.Chem.)11,219-221(1974)中描述的條件下進(jìn)行，通常在極性溶劑混合物，例如二噁烷和水的混合物中，一般是在溶劑混合物的回流溫度下進(jìn)行。
式(Ⅴ)化合物是已知化合物，或者它們可采用類似于制備已知化合物使用的方法進(jìn)行制備，例如Meervein等在Ann.Chem.6411,1(1961)和Org.Synth.Collective Ⅶ，34-41中公開的方法。
式(Ⅲ)化合物是已知的，或者它們可采用類似于制備已知化合物使用的方法進(jìn)行制備，例如J.March在《高等有機(jī)化學(xué)》(AdvancedOrganic Chemistry)，第3版(1985)，Wiley Interscience中公開的方法。
一種式(Ⅰ)化合物向另一種式(Ⅰ)化合物的適合轉(zhuǎn)化包括將其中R3是H的式(Ⅰ)化合物轉(zhuǎn)化為其中R3不是H，例如是低級烷基或羧基烷基的化合物。
可使用適合的常規(guī)方法將一種式(Ⅰ)化合物轉(zhuǎn)化為另一種式(Ⅰ)化合物；例如上述提及的轉(zhuǎn)化(ⅰ)(將R3是H的轉(zhuǎn)化為R3不是H的)可如下進(jìn)行將式(Ⅰ)化合物與強(qiáng)堿，如氫化鈉在溶劑，如二甲基甲酰胺中反應(yīng)，然后用烷基鹵化物或硫酸烷基酯進(jìn)行烷基化或者用酰鹵進(jìn)行酰化。或者，R3是H的化合物向R3不是氫的化合物的轉(zhuǎn)化可如下進(jìn)行將式(Ⅰ)化合物與細(xì)碎固體堿，如氫氧化鉀的細(xì)粉在溶劑，如丙酮中反應(yīng)，然后用烷基鹵進(jìn)行烷基化或者用酰鹵進(jìn)行?；?。
通式HNRsRt的胺可采用本領(lǐng)域制備胺的已知方法進(jìn)行制備，例如按照Houben-Weil在Methoden der Organischen Chemie,Vol.XI/1(1975)和Vol.E16d/2(1992),Georg Thieme Verlag,Stuttgart中教導(dǎo)的方法。
式(Ⅱ)化合物或其溶劑化物可按照標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)方法從上面提及的過程中分離。
式(Ⅱ)化合物的鹽和/或溶劑化物的制備可采用適合的常規(guī)方法進(jìn)行。
如果需要，本發(fā)明化合物的異構(gòu)體混合物可通過常規(guī)手段分離為單一的立體異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，例如通過使用光學(xué)活性酸作為拆分試劑?？捎米鞑鸱衷噭┑倪m合的光學(xué)活性酸記載于“Topics inStereochemistry”,Vol.6,Wiley Interscience,1971,Allinger,N.L.和Eliel,W.L.Eds。
或者，本發(fā)明化合物的對映異構(gòu)體可使用已知構(gòu)型的光學(xué)純原料通過立體定向合成獲得。
化合物的絕對構(gòu)型可通過常規(guī)方法，例如X-線晶體學(xué)圖譜技術(shù)測定。
任何反應(yīng)性基團(tuán)或原子的保護(hù)可在前述過程的任何適宜階段進(jìn)行。適合的保護(hù)基包括本領(lǐng)域常用于保護(hù)特定基團(tuán)或原子的那些。保護(hù)基可采用適合的常規(guī)方法制備和除去，例如OH基團(tuán)(包括二醇)可通過用適合的硅烷基化試劑，如二-叔丁甲硅烷基二(三氟甲磺酸酯)處理，以硅烷基化衍生物形式加以保護(hù)；甲硅烷基而后可采用常規(guī)方法，例如用氟化氫，優(yōu)選以吡啶復(fù)合物形式，任選地在鋁的存在下處理除去，或者通過用乙酰氯在甲醇中處理除去。此外，芐氧基可用于保護(hù)酚基，芐氧基可使用，例如氯化鈀(Ⅱ)或10％鈀碳作為催化劑經(jīng)催化氫解除去。
氨基可使用常規(guī)的保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)，例如氨基甲酸的叔丁基酯可通過用二碳酸二叔丁基酯處理氨基形成，通過在酸性條件下，使用例如氯化氫的乙醇水溶液或三氟乙酸的二氯甲烷溶液水解酯再現(xiàn)氨基。氨基可以芐基衍生物形式加以保護(hù)，該衍生物由適合的胺和芐基鹵化物在堿性條件下進(jìn)行制備，芐基通過，例如使用鈀碳催化劑氫解除去。
吲哚NH基團(tuán)和類似基團(tuán)可使用任何常規(guī)的基團(tuán)加以保護(hù)，例如苯磺?；?、甲磺?；⒓妆交酋；?、甲酰基、乙酰基(所有這些基團(tuán)均可用堿試劑處理除去)；芐基(可在液氨中用鈉除去或在甲苯中用三氯化鋁除去)；烯丙基(可在酸性條件下用氯化銠(Ⅲ)除去)；芐氧羰基(可通過催化氫化或通過堿處理除去)；三氟乙?；?可通過堿或酸處理除去)；叔丁基二甲基甲硅烷基(可用四丁基氟化銨處理除去)；2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)(可在乙二胺的存在下用四丁基氟化銨處理除去)；甲氧基甲基(MOM)或甲氧基乙基(MEM)基團(tuán)(通過弱酸處理除去)。
羧基可以烷基酯形式(例如甲基酯)加以保護(hù)，酯可采用常規(guī)方法制備和除去，一種將甲酯基轉(zhuǎn)化為羧基的常規(guī)方法是使用氫氧化鋰水溶液。
離去基團(tuán)或原子是任何基團(tuán)或原子，它們在反應(yīng)條件下可從原料上裂解下來，由此促使在特定位置進(jìn)行反應(yīng)。除非另有說明，這類基團(tuán)的適宜實(shí)例是鹵原子、甲磺酰氧基、對硝基苯磺酰氧基和甲苯磺酰氧基。
本文提及的化合物的鹽、酯、酰胺和溶劑化物可按需通過本領(lǐng)域的常規(guī)方法生產(chǎn)例如酸加成鹽可用適宜的酸處理式(Ⅰ)化合物制備。
羧酸的酯可通過常規(guī)酯化方法制備，例如烷基酯可通過用適合的鏈烷醇，通常在酸性條件下處理所需的羧酸來制備。
酰胺可使用常規(guī)的酰胺化方法制備，例如式CONRsRt的酰胺可通過用其中Rs和Rt定義如上的式HNRsRt處理相應(yīng)的羧酸制得。或者，可用上述定義的式HNRR的胺，任選在三甲基鋁的存在下，按照《四面體通訊》(Tetrahedron Lett.48,4171-4173,(1977))處中描述的方法處理酸的C1-6烷基酯，例如甲酯來提供所需的酰胺。
上面提及的本發(fā)明化合物具有有用的治療性質(zhì)本發(fā)明因此提供一種治療和/或預(yù)防與哺乳動物中破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的方法，該方法包括施用有效、無毒量的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
本發(fā)明還提供一種治療人或非人的哺乳動物的骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨質(zhì)減少疾病的方法，該方法包括對需此治療的人或非人的哺乳動物施用有效、無毒量的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明提供用作治療活性物質(zhì)的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
特別是本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨質(zhì)減少疾病的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
特別令人感興趣的是與近絕經(jīng)或絕經(jīng)后情況有關(guān)的骨質(zhì)疏松。本發(fā)明還包括佩吉特氏病、與腫瘤有關(guān)的高鈣血以及根據(jù)其病因?qū)W劃分的各種類型的骨質(zhì)疏松疾病的治療和預(yù)防原發(fā)性骨質(zhì)疏松退化性的Ⅰ型或絕經(jīng)后的Ⅱ型或老年性的少年性的成年青年自發(fā)性的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松內(nèi)分泌異常甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)性腺機(jī)能減退卵巢發(fā)育不全或特納氏綜合征腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)或庫興氏綜合征甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)骨髓異常多發(fā)性骨髓瘤或相關(guān)性疾病全身性肥大細(xì)胞增多癥擴(kuò)散性癌高歇氏病結(jié)締組織異常成骨不全高胱氨酸尿埃-當(dāng)二氏綜合征馬方氏綜合征Menk’s綜合癥多種原因的固定術(shù)或失重祖德克氏萎縮慢性阻塞性肺病慢性酒精中毒長期肝素給藥長期攝入抗凝藥物另外，本發(fā)明包括下列疾病的治療腫瘤，尤其那些涉及腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病的腫瘤；病毒癥(例如涉及塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)、水皰性口炎病毒(VesicularStomatitis virus)、新城雞瘟病毒(Newcastle Disease virus)、甲型和乙型流感病毒、HIV病毒)；潰瘍(例如由幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)引起的慢性胃炎和消化道潰瘍)；在自體免疫疾病和移植術(shù)中用免疫抑制劑；治療和/或預(yù)防血膽固醇過多和動脈粥樣硬化性疾病的降血脂藥以及用于治療艾滋病和阿爾茨海默氏病。還認(rèn)為，這些化合物可用于治療血管生成性疾病，即那些依賴于血管生成的病理性適應(yīng)癥，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、牛皮癬和實(shí)體瘤。
式(Ⅰ)化合物、或者其可藥用鹽和/或可藥用溶劑化物可以其本身的形式給藥，但優(yōu)選以另外包含可藥用載體的藥物組合物形式給藥。
因此，本發(fā)明還提供一種藥物組合物，它包含式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物和可藥用載體。
活性化合物或者其可藥用鹽和/或可藥用溶劑化物通常以單位劑量形式給藥。
治療上述疾病的有效量取決于某些因素，例如活性化合物的效力、所選擇的可藥用鹽或可藥用溶劑化物的特定性質(zhì)、治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及哺乳動物的重量。然而，單位藥劑一般含有0.01-50毫克，例如1-25毫克的本發(fā)明化合物。單位藥劑一般每天給藥一次或一次以上，例如每天1、2、3、4、5或6次，更經(jīng)常是每天1-3次或2-4次，這樣每天的總劑量范圍對于70千克的成人一般為0.01-250毫克，更通常為1-100毫克，例如5-70毫克，即劑量范圍大約為0.0001-3.5毫克/千克/天，更通常地是為0.01-1.5毫克/千克/天，例如0.05-0.7毫克/千克/天。
本發(fā)明還提供治療人類或非人類哺乳動物的下列疾病的方法腫瘤，尤其那些涉及腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病的腫瘤；病毒癥(例如涉及塞姆利基森林病、水皰性口炎病、新城病、甲型和乙型流感、HIV病毒那些病癥)；潰瘍(例如由幽門螺旋桿菌引起的慢性胃炎和消化道潰瘍)；自體免疫疾病和移植術(shù)；治療和/或預(yù)防血膽固醇過多和動脈粥樣硬化性疾??；艾滋病和阿爾茨海默氏??；血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、牛皮癬和實(shí)體瘤，該方法包括對需此治療的人類或非人類哺乳動物施用有效的、無毒量的式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物。
在這類治療中，活性化合物可通過任何適合的途徑給藥，例如口服、經(jīng)非胃腸或局部途徑。對于這種應(yīng)用，化合物通常以與人類或獸藥用藥物載體、稀釋劑和/或賦形劑混合的藥物組合物形式給藥，但組合物的具體形式通常取決于給藥方式。
組合物通過混合制成適于口服、非胃腸或局部給藥的形式，例如片劑、膠囊、口服液體制劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、軟錠劑、可重新配制的粉劑、可注射和可輸注的溶液或懸浮液、栓劑和透皮裝置?？煽诜o藥的組合物是優(yōu)選的，尤其是成型的口服組合物，因?yàn)樗鼈兏阌诜谩?br> 口服給藥的片劑和膠囊通常呈單位藥劑形式，含有常用賦形劑，例如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片助劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、芳香劑和潤濕劑。片劑可按照本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行包衣。
適用的填充劑包括纖維素、甘露醇、乳糖和其他類似的物質(zhì)。適用的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如淀粉乙醇酸鈉。適宜的潤滑劑包括例如硬脂酸鎂、適宜的可藥用潤濕劑包括月桂基硫酸鈉。
固體口服組合物可通過常規(guī)的混合、填充或壓片等方法制備。重復(fù)混合操作可用于將活性物質(zhì)均勻地分配到使用大量填充劑的那些組合物中。當(dāng)然，這類操作是本領(lǐng)域常用的。
口服液體制劑可以是例如水性或油性懸浮液、溶液、乳液、糖漿或酏劑形式的，或者可以呈在使用前用水或其他適合的載體重新配制的干粉形式。這類液體制劑可含有常用的添加劑，例如懸浮劑，如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用油；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(可包括食用油)，例如杏仁油、分餾的椰子油、油酯，例如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐劑，例如對羥基苯甲酸的甲酯或丙酯或者山梨酸；并且如果需要，可含有常用的芳香劑和著色劑。
對于非胃腸給藥，制成含有本發(fā)明化合物和無菌載體的液體單位劑型。根據(jù)賦型劑和濃度，化合物可以是懸浮或溶解的。通常通過將化合物溶于載體并在填充到適合的小瓶或安瓿中以前進(jìn)行過濾滅菌，然后密封。有益的是，還可將局麻藥、防腐劑和緩沖劑溶于載體中。為提高穩(wěn)定性，可將填充到小瓶中的組合物凍干，然后真空除去水。
除將化合物懸浮在載體中代替將其溶于載體中并在懸浮到無菌載體中之前使化合物與環(huán)氧乙烷接觸滅菌外，采用基本類似的方法制備非胃腸懸浮液。組合物中包括表面活性劑或潤濕劑有助于活性化合物的均勻分布。
對于局部施用，組合物可呈透皮的軟膏或貼劑形式用于系統(tǒng)釋放活性化合物，該組合物可采用常規(guī)方式，例如按照下述標(biāo)準(zhǔn)教科書中的描述進(jìn)行制備“Dermatological Formulations”-B.W.Barry(Drugs and the Pharmaceutical Sciences-Dekker)或HarrysCosmeticology(Leonard Hill Books)。
本發(fā)明還涉及式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物用于制備治療和/或預(yù)防哺乳動物的與破骨細(xì)胞的過度活動有關(guān)的疾病，例如治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨質(zhì)疾病的藥物的用途。
本發(fā)明還提供式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物用于制備治療下述疾病的藥物的用途腫瘤，尤其是那些涉及腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病；病毒癥(例如包括塞姆利基森林病毒、皰疹性口炎、新城病、甲型和乙型流感、HIV病毒)、潰瘍(例如由幽門螺旋桿菌引發(fā)的慢性胃炎和消化性潰瘍)、自體免疫性疾病和移植反應(yīng)；脂血癥和動脈粥樣硬化癥，艾滋病和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
當(dāng)依據(jù)本發(fā)明施用本發(fā)明的化合物時，未測到不可接受的毒副作用。正如常規(guī)的實(shí)踐那樣，該組合物通?？筛綆в杏∷⒑玫南嚓P(guān)醫(yī)學(xué)治療使用說明書。
下文中的說明例實(shí)施例以及藥理方法均用于說明本發(fā)明，而且不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例和說明例說明例1反-4,5-二氯-2-硝基-β-二甲氨基苯乙烯 將10.3g(50mmol)4,5-二氯-2-硝基甲苯(Helv.Chim.Acta1936,19,434-439)在11.9g(100mmol)N,N-二甲基甲酰胺縮二甲醇在DMF(25ml)混合液中的溶液于100℃加熱16小時。將該黑色反應(yīng)混合物真空濃縮，殘余物用二氯甲烷稀釋并用水洗滌兩次。有機(jī)溶液經(jīng)硫酸鎂干燥、真空濃縮，得到12.6g(48mmol，產(chǎn)率96.5％)暗紅色結(jié)晶粗品的標(biāo)題化合物。
說明例24-[2-(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]苯甲酸甲酯 往攪拌著的反-4,5-二氯-2-硝基-β-二甲氨基苯乙烯(3.65g,14mmol)和三乙胺(1.4g,14mmol)在環(huán)己烷(20ml)中的溶液中分次加入對甲氧甲酰苯甲酰氯(2.8g,14mmol)。將所得混合物在攪拌加熱下回流16小時。然后加入足夠量的水以溶解形成的鹽并分離有機(jī)層。水相用乙酸乙酯萃取三次；將有機(jī)相合并，用水洗滌并真空濃縮。將殘余物溶于二噁烷(30ml)和水(20ml)的混合液中，將所得溶液加熱回流14小時并濃縮。殘余物溶于二氯甲烷中，用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮?；衔锎制方?jīng)柱色譜(硅膠；二氯甲烷)純化，得到2.7g(7.3mmol，產(chǎn)率52％)標(biāo)題化合物。1HNMR(CDCl3)δ=8.32(s,1H)；8.18(d,2H)；8.06(d,2H)；7.48(s,1H)；4.72(s,2H)；3.97(s,3H)。說明例34-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸甲酯 往4-[2-[(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]苯甲酸甲酯(2.7g,7.3mmol)在THF(20ml)、乙醇(20ml)和水(15ml)的混合溶劑中的溶液中分次加入亞硫酸氫鈉(2.9g,7.9mmol)。將該化合物加熱回流15分鐘并繼續(xù)在室溫?cái)嚢?5分鐘。加入更多的亞硫酸氫鈉，5分鐘后，使該化合物溫?zé)岵⒃谑覝叵略贁嚢?5分鐘，真空蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑。過濾分離固體，用水洗滌并干燥，得到0.9g目的化合物(2.8mmol，產(chǎn)率38％)。1HNMR(DMSO-d6)δ=12.05(s,1H)；8.03(m,4H)；7.84(s,1H)；7.61(s,1H)；7.09(s,1H)；3.88(s,3H)說明例44-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸 將4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸甲酯(0.86g,2.7mmol)和KOH(0.36g,6.4mmol)在乙醇(15ml)和水(15ml)的混合溶劑中的溶液回流3小時。待乙醇濃縮后，將溶液酸化并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到0.58g(1.8mmol，產(chǎn)率70％)無需純化即可使用的酸。1HNMR(DMSO-d6)δ=12.03(s,1H)；8.02(m,4H)；7.83(s,1H)；7.61(s,1H)；7.07(s,1H)。
說明例52-甲氧基-1,4-苯二甲酸單乙酯和3-甲氧基-1,4-苯二甲酸單乙酯(分別為A和B) 將2-甲氧基-1,4-苯二甲酸二甲酯(5.8g,26mmol)、KOH(1.7g,26mmol)在乙醇(120ml)中的混合物回流16小時。濃縮除去溶劑，殘余物溶于水，水相用乙酸乙酯洗滌兩次。水溶液用鹽酸酸化并用二氯甲烷萃取三次。有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物經(jīng)快速色譜(硅膠；二氯甲烷∶甲醇-9∶1)，得到50/50的2-甲氧基-1,4-苯二羧酸單乙酯和3-甲氧基-1,4-苯二羧酸單乙酯的混合物(3.5g,17.5mmol,產(chǎn)率67％)。
說明例62-甲氧基-4-乙氧甲酰苯甲酰氯和3-甲氧基-4-乙氧甲酰苯甲酰氯(分別為A和B) 將2-甲氧基-1,4-苯二甲酸單乙酯和3-甲氧基-1,4-苯二甲酸單乙酯(3.5g,17.5mmol)的混合物溶于含有一滴DMF的二氯甲烷(20ml)中。在室溫滴加草酰氯(2.7g,21mmol)并持續(xù)攪拌2小時。減壓下濃縮除去溶劑和過量試劑；將環(huán)己烷加到殘余物中，然后濃縮以帶走最后的痕量試劑。該混合物無需進(jìn)一步純化即可用于下步反應(yīng)。
說明例73-甲氧基-4-[2-[(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]苯甲酸乙酯和2-甲氧基-4-[2-[(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]苯甲酸乙酯(分別為A和B)。 將如上獲得的酰氯混合物粗品在室溫下加到攪拌著的反-4,5-二氯-2-硝基-β-二甲氨基苯乙烯(4.3g,16mmol)和三乙胺(2.3ml,16mmol)的環(huán)己烷(35ml)溶液中。該混合物加熱回流16小時后，濃縮除去溶劑。殘余物溶于二氯甲烷中，用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。
將殘余物溶于二噁烷(40ml)并加入水(24ml)。將該混合物回流24小時。濃縮除去二噁烷，加入二氯甲烷，該有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮?；衔锎制方?jīng)快速色譜(硅膠；二氯甲烷)純化，得到3.6g(8.7mmol，產(chǎn)率53％)的標(biāo)題混合物。
說明例82-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸乙酯和3-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸乙酯(分別為A和B) 將3-甲氧基-4-[2-[(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]苯甲酸乙酯和2-甲氧基-4-[2-[(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]苯甲酸乙酯的混合物(3.6g,8.7mmol)用乙酸(50ml)和鐵粉(1.5g,26mmol)處理并回流4小時。真空濃縮除去乙酸，殘余物溶于乙酸乙酯，用稀鹽酸水溶液洗滌兩次，然后用水洗滌。有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘余物經(jīng)快速色譜(150g硅膠；二氯甲烷)純化，得到1.3g(3.5mmol，產(chǎn)率40％)2-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸乙酯(A)和1g(2.7mmol，產(chǎn)率31％)3-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸乙酯(B)。A1HNMR(CDCl3)δ=8.96(寬單峰1H)；7.86(d,1H)；7.69(s,1H)；7.53(s,1H)；7.24(d,1H)；7.16(s,1H)；6.79(d,1H)；4.40(q,2H)；3.81(s,3H)；1.41(t,3H)。B1HNMR(CDCl3)δ=9.77(寬單峰1H)；7.85(d,1H)；7.73(m,3H)；7.53(s,1H)；6.91(d,1H)；4.41(q,2H)；4.10(s,3H)；1.43(t,3H)。說明例93-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 將3-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸乙酯(1g,2.7mmol)加到KOH(0.4g,7mmol)的乙醇(50ml)溶液中并將該混合物回流4小時。濃縮除去溶劑并將殘余物溶于水。該水溶液用鹽酸酸化后用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到0.89g(2.6mmol，產(chǎn)率99％)的標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ=11.60(寬單峰1H)；7.92(d,1H)；7.83(s,1H)；7.66(m,3H)；7.10(s,1H)；4.02(s,3H)。說明例102-甲氧基-4-氰基苯甲酰氯 將2-甲氧基-4-氰基苯甲酸(Tetrahedron Letters.1986,27(49),5997-6000)(1g,5.6mmol)溶于二氯甲烷(20ml)。將草酰氯(1.5ml,8.2mmol)快速加入該溶液中并加入一滴DMF。發(fā)生劇烈反應(yīng)的同時伴有大量氣體放出。將該溶液攪拌1小時后使其放置過夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，剩下1.1g灰白色固體(5.6mmol，產(chǎn)率99％)，該固體無需進(jìn)一步純化即可使用。
說明例113-甲氧基-4-[2-[(4,5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]-苯甲腈 將2-甲氧基-4-氰基苯甲酰氯(1.1g,5.6mmol)分次加到反-4,5-二氯-2-硝基-β-二甲氨基苯乙烯(1.47g,5.6mmol)和三乙胺(1.5ml,10mmol)的環(huán)己烷(20ml)溶液中。然后將該溶液回流6小時。將反應(yīng)物冷卻并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去揮發(fā)產(chǎn)物。將獲得的黑色殘余物溶于二氯甲烷(40ml)，用10％碳酸鈉溶液(20ml)洗滌一次。然后將有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。將所得的棕黑色粉末(2.42g)溶于盡可能少量的乙酸乙酯中，將己烷加到該溶液中沉淀出淺棕色粉末(1.72g，熔點(diǎn)=167-170℃)，該粉末無需純化即可用于下步反應(yīng)。
將中間體粗品(1.2g)溶于1,4-二噁烷(20ml)中，加入水(10ml)。將該溶液回流48小時，趁熱過濾后在冰浴中冷卻。在布氏漏斗中收集黃棕色結(jié)晶，得到0.60g(1.6mmol，產(chǎn)率30％)標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)=171-174℃。1HNMR(CDCl3)δ=8.27(s,1H)；7.81(d,1H)；7.49(s,1H)；7.35(dd,1H)；7.28(d,1H)；4.61(s,2H)；4.00(s,3H)。說明例123-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-芐腈 將3-甲氧基-4-[2-(4,5-二氯-2-硝基)苯基-1-氧代-乙基]芐腈(0.4g,1.0mmol)溶于乙醇(10ml)和乙酸(10ml)。使該溶液輕微回流，并在一個小時的時間內(nèi)，少量多次地加入鐵粉(0.5g,9mmol)?；亓?2小時后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。殘余物用THF萃取數(shù)次。除去溶劑后，得到3-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-芐腈粗產(chǎn)物(0.35g,1.0mmol，產(chǎn)率100％)，該產(chǎn)物無需純化即可用于下步反應(yīng)。熔點(diǎn)=241-244℃。1HNMR(DMSO-d6)δ=11.60(s br,1H)；7.98(d,1H)；7.85(s,1H)；7.67(s,1H)；7.65(d,1H)；7.55(dd,1H)；7.14(s,1H)；4.00(s,3H)。說明例133-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 將3-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-芐腈(0.35g,1.0mmol)懸浮在30％氫氧化鈉(20ml)和95％乙醇(20ml)中。該混合物回流12小時后，使其冷卻到室溫。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將該混合物濃縮至約一半體積后，濾過布氏漏斗，得到一黃褐色或黃色粉末。將該粉末在10％鹽酸中攪拌2小時。過濾，得到0.256g(0.76mmol，產(chǎn)率69％)標(biāo)題化合物粗品，該粗品通過色譜純化，得到150mg純凈的標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)＞270℃。1HNMR(DMSO-d6)δ=11.60(寬單峰1H)；7.92(d,1H)；7.83(s,1H)；7.66(m,3H)；7.10(s,1H)；4.02(s,3H)。說明例142-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 以反-4,5-二氯-2-硝基-β-二甲氨基苯乙烯和2-(甲氧羰基)苯甲酰氯為原料，并依次按說明例2、3和4的方法進(jìn)行，得到淺棕色固體的標(biāo)題化合物，該標(biāo)題化合物無需進(jìn)一步純化即可用于下步反應(yīng)。1H-NMR(DMSO-d6)δ=11.71(s,1H)；7.82(s,1H)；7.76(d,1H)；7.65-7.52(m,4H)；6.54(s,1H)ppm。說明例153-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 以反-4,5-二氯-2-硝基-β-二甲氨基苯乙烯和3-(甲氧羰基)苯甲酰氯為原料，并依次按說明例2、3和4的方法進(jìn)行，得到棕米色固體的標(biāo)題化合物，該標(biāo)題化合物無需進(jìn)一步純化即可用于下步反應(yīng)。1H-NMR(DMSO-d6)δ=12.06(s,1H)；8.43(s,1H)；8.12(d,1H),7.93(d,1H)；7.82(s,1H)；7.66-7.58(m,2H)；7.02(s,1H)ppm。
實(shí)施例14-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺 將4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸(0.25g,0.82mmol)、WSC(0.156g,0.82mmol)、HOAT(0.11g,0.82mmol)、4-氨基-1,2,2,6,6-五甲基哌啶(0.209g,1.2mmol)、DIEA(0.212g,1.2mmol)在DMF(3ml)中的混合物在室溫?cái)嚢?6小時。然后將該混合物傾入水中，加入NaOH N使其呈堿性并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)溶液用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，殘余物通過柱色譜純化(硅膠；氯仿/甲醇/氫氧化銨；9/1/0.1)，得到0.35g(0.76mmol，產(chǎn)率93％)的白色結(jié)晶狀標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)=325℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ=11.98(s,1H)；8.26(d,1H)；7.95(m,4H)；7.82(s,1H)；7.6(s,1H)；7.05(s,1H)；4.19(m,1H)；2.19(s,3H)；1.71(m,2H)；1.48(m,2H)；1.10(s,6H)；1.05(s,6H)。
實(shí)施例24-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺 將3-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸(0.15g,0.45mmol)、WSC(0.094g,0.5mmol)、HOAT(0.067g,0.5mmol)、4-氨基-1,2,2,6,6-五甲基哌啶(0.15g,0.9mmol)在DMF(2ml)中的混合物在50℃攪拌18小時。然后將該混合物傾入大量水中，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，殘余物通過快速色譜純化(硅膠；二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨；91.5/7.5/1)，然后在二異丙基醚中結(jié)晶，得到0.13g(0.26mmol，產(chǎn)率59％)的標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)=260℃。1HNMR(DMSO-d6)δ=11.58(s,1H)；8.26(d,1H)；7.88(d,1H)；7.82(s,1H)；7.67(s,1H)；7.57(m,2H)；7.07(s,1H)；4.22(m,1H)；4.02(s,3H)；2.20(s,3H)；1.73(m,2H)；1.46(m,2H)；1.11(s,6H)；1.06(s,6H)。
實(shí)施例34-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-2-甲氧基-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺 以相應(yīng)的2-甲氧基-4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸為原料，通過相同的方法，獲得該化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ=11.98(s,1H)；7.91(d,1H)；7.82(s,1H)；7.77(d,1H)；7.56(m,3H)；7.08(s,1H)；4.19(m,1H)；4.00(s,3H)；2.19(s,3H)；1.75(m,2H)；1.38(m,2H)；1.10(s,6H)；1.05(s,6H)。
實(shí)施例42-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(3-二甲氨基丙基)苯甲酰胺 將2-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸粗品(0.19g,0.62mmol)、WSC(0.13g,0.68mmol)、HOAT(0.093g,0.68mmol)、二甲氨基丙基胺(0.13g,1.3mmol)在DMF(2ml)中的混合物在50℃加熱16小時。然后傾入水中，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌兩次，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，殘余物通過柱色譜純化(硅膠；二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨；9/1/0.1)，得到油狀的標(biāo)題化合物，該油狀物通過在二異丙基醚中研制結(jié)晶，過濾后，得到0.072g(0.18mmol，產(chǎn)率30％)的白色結(jié)晶狀標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)=169℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ=11.63(s,1H)；8.32(t,1H)；7.79(s,1H)；7.69(d,1H)；7.61(s,1H)；7.59-7.35(m,3H)；6.62(s,1H)；3.18(m,2H)；2.08(t,2H):2.00(s,6H)；1.49(m,2H)。
實(shí)施例53-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(3-二甲氨基丙基)苯甲酰胺 以3-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸為原料，然后按照上述方法獲得白色固體狀的標(biāo)題化合物(熔點(diǎn)=204℃)。1H-NMR(DMSO-d6)δ=12.00(s,1H)；8.63(t,1H)；8.31(s,1H)；7.99(d,1H)；7.83(s,1H)；7.78(d,1H)；7.60(s,1H)；7.57(t,1H)；7.00(s,1H)；3.28(t,2H)；2.27(t,2H)；2.14(s,6H)；1.68(m,2H)。按照實(shí)施例1的方法制備下列化合物
生物學(xué)試驗(yàn)背景已知通過與骨連接生電的H+-腺苷三磷酸酶(ATPase)能使破骨細(xì)胞-骨界面發(fā)生極化。泵轉(zhuǎn)運(yùn)大量的質(zhì)子進(jìn)入吸收微環(huán)境影響骨礦物質(zhì)的代謝并產(chǎn)生膠原酶降解骨質(zhì)所需的酸性pH。
破骨細(xì)胞質(zhì)子泵的空泡特性最初被Blair[H.C.Blair等，Science,245,855(1989)]所認(rèn)識，而后被Bekker[P.J.Bekker等，J.Bone Min.Res.,5,569(1990)]和Vaananen[H.K.Vaananen etal.,J.Cell.Biol.,111,1305(1990)]證實(shí)。證據(jù)是在鳥破骨細(xì)胞的褶皺的膜碎片(由禁攝鈣的孵化期雌禽的髓骨得到)的基礎(chǔ)上得到。在與ATP的反應(yīng)中，得到的膜囊泡發(fā)生酸化，這很容易通過測定吖啶橙熒光的猝滅來估測，吖啶橙熒光是一種積聚進(jìn)入酸性隔室的弱堿。
生物化學(xué)模型表明破骨細(xì)胞質(zhì)子泵屬于空泡類ATP酶，因?yàn)橘|(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)被N-乙基馬來酰亞胺(NFM)(一種sulphydryl試劑)抑制；以及被巴弗洛霉素A1(一種選擇性空泡H+-ATP酶抑制劑)抑制[J.E.Bowman等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85,7972(1988)]，但它不被哇巴因(一種Na+/K+-ATP酶抑制劑)、正釩酸鈉(P-ATP酶抑制劑)或者奧美拉唑或SCH 28080(兩種都是胃H+/K+-ATP酶抑制劑)抑制[J.P.Mattsson等，Acta Physiol.Scand.,146,253(1992)]。
已知空泡ATP酶的特異性抑制劑，例如巴弗洛霉素A1能夠抑制破骨細(xì)胞培養(yǎng)基中骨的吸收[K.Sundquist等，Biochem.Biophys.Res.Commun.168,309-313(1990)]。
膜囊泡中質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)和v-ATP酶活性的抑制由禁攝鈣的孵化期雌禽制備骨微粒粗品由從禁攝鈣至少15天的孵化期雌禽的脛骨和股骨得到的髓骨制備空泡。簡要地說，用24號解剖刀刀片刮制骨的碎片，將其懸浮在40毫升分離培養(yǎng)基(0.2M蔗糖、50mM氯化鉀、10mM Hepes、1mM EGTA、2mM二硫赤蘚糖醇，pH7.4)中并濾過100微米孔徑的尼龍篩。整個操作是在4℃進(jìn)行的。在一波特振蕩器(potter)(20沖程)中在40毫升培養(yǎng)基中勻化后，進(jìn)行初始離心(6,500xg最大×20分鐘)以除去線粒體和溶酶體。將上清液在100,000xg最大離心1小時并使沉淀聚集在1毫升分離培養(yǎng)基中，分成200微升的等份，立即在液氮中冷凍并貯藏在-80℃下。按照Bradford的方法[M.Bradford,Anal.Biochem.,72,248(1976)]，用Biorad比色儀測定蛋白含量。用5-10微升的膜進(jìn)行質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)。
破骨細(xì)胞膜制品的純化將如上制備的1毫升囊泡微粒體粗品加到組成為3.5ml的15％、30％和45％(w/w)蔗糖的分離培養(yǎng)基的蔗糖梯度管的頂部(每管大約0.2ml)并在280,000g最大離心2小時(SW41Ti離心機(jī))。離心后，收集30-45％蔗糖界面并用分離培養(yǎng)基稀釋大于20倍后，在100,000g最大下離心1小時(SW28離心機(jī))。將沉淀懸浮在1毫升分離培養(yǎng)基中，分成等份并在液氮中冷凍，然后-80℃貯藏備用。
人腎臟膜制品按照有關(guān)牛腎臟文獻(xiàn)中報(bào)道的方法(S.Gluck,J.Biol.Chem.,265,21957(1990))，由人體腎臟的皮質(zhì)得到，術(shù)后立即冷凍。
人破骨細(xì)胞微粒體囊泡的制備將從破骨細(xì)胞瘤分離的破骨細(xì)胞樣巨細(xì)胞用玻璃-聚四氟乙烯勻化器勻化(1000rpm×20沖程)，然后在6000xg最大下離心20分鐘。將所得沉淀再在100000xg最大下離心60分鐘使微粒體部分沉淀出來。再將其懸浮于1毫升分離的培養(yǎng)基(pH7.4)，用液氮浸漬冷凍并在-80℃冷藏至使用。
膜囊泡中的質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)將5-20微升膜囊泡加到1毫升緩沖液中后，通過測定吖啶橙熒光猝滅(激發(fā)490nm；發(fā)射530nm)的初始斜率半定量地評價膜囊泡中的質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)，所述緩沖液中含0.2M蔗糖、50mM氯化鉀、10mM HepespH 7.4、1mM ATP.Na2,1mM CDTA,5μM纈氨霉素和4μM吖啶橙。通過加入5mM硫酸鎂使反應(yīng)開始。結(jié)果以兩組對照平均值的百分?jǐn)?shù)表示。
對巴弗洛霉素敏感的ATP酶活性的抑制通過測定在有或沒有巴弗洛霉素的存在下，在96孔平板中于37℃培養(yǎng)30分鐘期間的無機(jī)磷酸鹽(Pi)的釋放評價純化的膜囊泡中對巴弗洛霉素A1敏感的ATP酶活性的抑制。該反應(yīng)介質(zhì)含有1mM ATP、10mM HEPES-Tris pH8、50mM KCl、5μM纈氨霉素、5μM尼日利亞菌素、1mM CDTA-Tris,100μM鉬酸銨、0.2M蔗糖和膜制品(20μg蛋白/ml)。按照Chan的方法[Anal.Biochem.157,375(1986)]，反應(yīng)通過加入硫酸鎂(8-臂移液管)引發(fā)，并在30分鐘后通過加入4倍體積的孔雀綠(96-臂移液管)終止。2分鐘后用微滴板讀數(shù)器測定650nm處的吸收。結(jié)果以微摩爾(Pi)×毫克蛋白-1×分鐘-1，對于每次實(shí)驗(yàn)，以三次的平均值±sem表示。
藥理學(xué)數(shù)據(jù)本發(fā)明所述化合物在50nM~2μM范圍內(nèi)能夠抑制對巴弗洛霉素敏感的小雞破骨細(xì)胞的ATP酶，在30nM~5μM的范圍內(nèi)能夠抑制對巴弗洛霉素敏感的人破骨細(xì)胞的ATP酶。這些結(jié)果的一個實(shí)例表示如下
對巴弗洛霉素敏感的人破骨細(xì)胞和人腎臟膜中ATP酶的抑制實(shí)施例號 IC50人破骨細(xì)胞IC50人腎臟1 0.25 1.252 0.1260.權(quán)利要求
1.式(Ⅰ)化合物或者其鹽或溶劑化物 其中A表示任選取代的芳基或任選取代的雜環(huán)基；Ra表示-CO-NRsRt，其中Rs和Rt各自獨(dú)立地表示氫、烷基、取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的芳基、任選取代芳烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基烷基，或者Rs和Rt與和它們相連的氮原子一起形成雜環(huán)基；R1和R2各自獨(dú)立地表示氫、羥基、氨基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的芐氧基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、烷基、羧基、烷氧羰基、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；蛘逺1和R2一起表示亞甲二氧基、碳酰二氧基、或碳酰二氨基；和R3表示氫、鏈烷?；?、烷基、氨基烷基、羥烷基、羧基烷基、烷氧羰基烷基、氨基甲酰基或者烷基磺?；头蓟酋；?。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2各自獨(dú)立地是鹵素，例如氯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1是5-氯并且R2是6-氯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的化合物，其中R3是氫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中Rs和Rt各自獨(dú)立地表示C1-6烷基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其中Rs表示任選取代的雜環(huán)基或芳基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的化合物，其中Rs表示任選取代的哌啶基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的化合物，其中Rs表示1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基或2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其中Rs表示任選取代的雜環(huán)基烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中Rs表示任選取代的哌嗪基-C1-6烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10的化合物，其中雜環(huán)基的任選取代基選自羥基苯基和氯苯基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的化合物，其中Rt表示氫。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，選自4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-2-甲氧基-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；2-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(3-二甲氨基丙基)苯甲酰胺；3-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(3-二甲氨基丙基)苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(3-二乙氨基丙基)苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-[3-[4-(3-氯苯基)哌嗪基]丙基]苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-[3-[4-(3-羥基苯基)哌嗪基]丙基]苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5,6-二氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(1,2,2,6,6-五甲基哌啶-4-基)-N-甲基苯甲酰胺；和4-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)-N-甲基苯甲酰胺；或者其鹽或溶劑化物。
14.一種式(Ⅰ)化合物或者其鹽或溶劑化物的制備方法，該方法包括酰胺化式(Ⅱ)化合物 其中A如式(Ⅰ)中所定義，R1’、R2’和R3’各自分別表示式(Ⅰ)中所定義的R1、R2和R3或者它們的被護(hù)形式；之后，按需進(jìn)行如下的一步或多步反應(yīng)(ⅰ)將一種式(Ⅰ)化合物轉(zhuǎn)化為另一種式(Ⅰ)化合物；(ⅱ)脫去任何保護(hù)基；(ⅲ)制備所形成化合物的鹽或溶劑化物。
15.一種式(Ⅳ)化合物的制備方法，該方法包括加熱式(Ⅶ)化合物 (Ⅶ)其中A、R1，和R2，如式(Ⅱ)中所定義并且Rp如式(Ⅳ)中所定義。
16.一種藥物組合物，其含有根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物，以及可藥用載體。
17.一種治療和/或預(yù)防與哺乳動物中破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的方法，該方法包括施用有效、無毒量的權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
18.一種治療人類或非人類哺乳動物的骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨質(zhì)減少的疾病的方法，該方法包括對需此治療的人類或非人類的哺乳動物施用有效、無毒量的權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
19.用作治療活性物質(zhì)的權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
20.用于治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨質(zhì)減少疾病的權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽和/或其可藥用溶劑化物。
21.一種治療人類或非人類哺乳動物的腫瘤、病毒癥、潰瘍、自體免疫疾病和移植反應(yīng)，治療和/或預(yù)防血膽固醇過多癥和動脈粥樣硬化性疾病、艾滋病和阿爾茨海默氏病以及血管生成性疾病的方法，該方法包括對需此治療的人類或非人類的哺乳動物施用有效、無毒量的權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物，或其可藥用溶劑化物。
22.根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物、或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物用于制備治療和/或預(yù)防與哺乳動物的破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病，例如治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松和相關(guān)性骨質(zhì)減少疾病的藥物的用途。
23.根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物、或者其可藥用鹽或可藥用溶劑化物用于制備治療腫瘤、病毒癥、潰瘍、自體免疫疾病和移植反應(yīng)，治療和/或預(yù)防血膽固醇過多和動脈粥樣硬化性疾病、艾滋病和阿爾茨海默氏病以及血管生成性疾病的藥物的用途。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物或者其鹽或溶劑化物:其中:A表示任選取代的芳基或任選取代的雜環(huán)基;R
文檔編號A61P25/28GK1299357SQ98813791
公開日2001年6月13日 申請日期1998年12月17日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月24日
發(fā)明者S·加格利爾蒂, G·M·M·G·納德勒, P·諾韋拉 申請人:史密斯克萊恩比徹姆藥物實(shí)驗(yàn)室, 史密絲克萊恩比徹姆股份公司