專利名稱：用作抗轉(zhuǎn)移藥的低聚噻吩、其制備以及含有它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及低聚噻吩，所述低聚噻吩任選地與天然或合成氨基酸連接。
已發(fā)現(xiàn)上述化合物具有uPA-uPAR拮抗活性，并且可以用作抗腫瘤和/或抗轉(zhuǎn)移藥。
背景技術(shù)：
絲氨酸蛋白酶uPA(尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活物)催化激活纖維蛋白溶酶原，使其成為纖維蛋白溶酶，所得纖維蛋白溶酶參與多種生理和病理過程。uPA是一種具有催化性“B”鏈(氨基酸144-411)和氨基末端片段(“ATF”，aa1-143)的多結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)，該氨基末端片段含有生長因子樣結(jié)構(gòu)域(aa4-43)和Kringle結(jié)構(gòu)域(aa47-135)。uPA是一種參與組織蛋白水解、細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖和生長因子活化的多功能蛋白質(zhì)。事實上，由細(xì)胞釋放出的uPA是失活酶原，即uPA原。纖維蛋白溶酶對單鏈uPA原的活化作用(生成活性雙鏈形式)受到緊密控制機理的調(diào)節(jié)，人們對于這種機理還不完全了解。uPA的絕大多數(shù)活性僅局限在細(xì)胞表面和細(xì)胞周圍環(huán)境。它們需通過與位于細(xì)胞表面上的特異性、高親和力受體(uPAR)結(jié)合后才得以完成。兩種形式的uPA在與uPAR結(jié)合時具有相似的親和力。這種結(jié)合相互作用是由生長因子樣結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)[S.A.Rabbani等人，生物學(xué)和化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，267，14151-56，1992]。
uPA受體是一種三結(jié)構(gòu)域糖蛋白，其中每三份基序包含一個富含半胱氨酸的約90個氨基酸的契合序列[M.Plough等人，生物學(xué)和化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，268，17539-46，1993]。uPAR是通過糖基磷脂酰肌醇基團(GPI錨)錨定在細(xì)胞膜上。uPAR結(jié)合uPA的KD值為10-10-10-9M，這取決于試驗體系。uPA結(jié)合的主決定子位于N-末端結(jié)構(gòu)域1中。uPAR在uPA和纖維蛋白溶酶的作用下斷裂，釋放出水溶性結(jié)構(gòu)域1，并在磷脂酶C的作用下從細(xì)胞表面釋放出三結(jié)構(gòu)域的uPAR(1+2+3)。后一形式的uPAR也因失去了GPI錨而變得可溶于水。
對uPA依賴性現(xiàn)象的抑制主要通過兩條途徑達(dá)到，即直接抑制蛋白水解活性，或抑制uPA受體結(jié)合。后一途徑具有獲得較高特異性的效能，這歸因于所述抑制作用僅局限在細(xì)胞周圍環(huán)境中進行。
最近，已經(jīng)通過噬菌體顯示技術(shù)和蛋白質(zhì)工程發(fā)現(xiàn)了種特異性肽類uPAR拮抗劑[分別公開在Goodson等人，國際科學(xué)院學(xué)報(PNAS)，91，7129，1994；Stratton-Thomas等人，蛋白質(zhì)工程學(xué)(Prot.Eng.)，5，463-470，1995]。
本發(fā)明涉及具有有效拮抗活性的低聚噻吩。許多雙噻吩和三噻吩類衍生物似乎已顯露出令人注目的生物性質(zhì)[Kagan，J.等人，有機化學(xué)雜志(J.Org.Chem.)，48，4317-20，1983以及其中所引用的參考文獻(xiàn)]。但它們中的絕大多數(shù)對線蟲產(chǎn)生毒性，并且這種毒性作用在有紫外線存在時大大增強。在此類化合物中研究得最多的是α-三噻吩，一種在20世紀(jì)七十年代作為光毒素(phototoxin)首次被發(fā)現(xiàn)的得自于植物的天然產(chǎn)物。除生成皮膚色素以外，該化合物還可作用于線蟲、微生物、藻類、人體紅細(xì)胞、昆蟲幼蟲及其卵并且這種作用遇光增強，該化合物可作為除草劑和種子生芽抑制劑。光敏抗病毒活性和細(xì)胞毒活性也已見諸于報導(dǎo)[(a)Cooper等人，生物有機化學(xué)(Bioorg.Chem.)，13，362-374，1985及其所引用的參考文獻(xiàn)；(b)Rawls等人，化學(xué)和工程學(xué)報導(dǎo)(Chem.& Engin.News)，21-23，1986；(c)Evans等人，美國化學(xué)會會志(J.Am.Chem.Soc.)，112，2694-2701，1990；(d)Kyo等人，植物細(xì)胞報導(dǎo)(Plant Cell Rep.)，9，393-397，1990；(e)Hudson等人，Planta Med.，59，447-450，1993；(f)Hudson等人，臭氧層(Chemosphere)，19，1329-1343，1989]。結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系研究表明存在14種同分異構(gòu)的未取代三噻吩類化合物[Jayasuriya等人，雜環(huán)學(xué)(Heterocycles)，24，2261-2264和2901-2904，1986]。噻吩環(huán)類化合物已廣泛應(yīng)用于不同領(lǐng)域的治療藥物中，但低聚噻吩只被作為藥理學(xué)試劑提及[Press等人，雜環(huán)化合物化學(xué)(TheChemtstry of Heterocycles Compounds)，第44卷，第4部分，第III章，由Salo Gronowitz編輯，396-502，1989]。
迄今已顯示uPA/uPAR體系涉及多種侵害性生物過程，例如腫瘤轉(zhuǎn)移、滋養(yǎng)層植入、炎癥和血管生成。所以，uPAR拮抗劑應(yīng)有能力阻斷腫瘤侵染、傳移和血管生成。含有uPAR拮抗劑的制劑象征著新的適于高侵害性和遷移性癌癥的治療方法，其中發(fā)現(xiàn)uPA和uPAR始終存在于腫瘤(例如乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌)的侵害性病灶內(nèi)[Dano等人，《蛋白水解和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換》(Proteolysis and ProteinTurnover)，Barret+Bond編輯，Portlan Press，1994，London]。從乳腺癌和非小細(xì)胞型肺癌的患者中檢測出血漿內(nèi)的uPAR水平有所增高。所以，可溶性uPAR的含量似乎反映出腫瘤內(nèi)蛋白水解的程度，并且可能與患者的預(yù)后密切相關(guān)。腫瘤組織內(nèi)的uPA和uPAR水平均是許多類型癌癥的預(yù)后因子。除了癌癥以外，uPAR拮抗劑也適用于那些由uPA細(xì)胞表面活性所介導(dǎo)的其他疾病。所以，通過受體結(jié)合型uPA起作用的纖維蛋白溶酶生成抑制劑具有機制型腫瘤靜態(tài)、抗侵害、抗遷移、抗血管生成、抗關(guān)節(jié)炎、抗炎、抗骨質(zhì)疏松癥、抗視網(wǎng)膜病和避孕活性。這些化合物優(yōu)選經(jīng)口服途徑給藥，但也可通過靜脈內(nèi)注射、肌肉內(nèi)注射、經(jīng)鼻噴霧或其他常規(guī)方式給藥。
發(fā)明描述本發(fā)明涉及通式(I)所示的低聚噻吩、其異構(gòu)體以及其與可藥用酸和堿生成的鹽
其中- A是-CH2-CO-、-CH2CH2-CO-或-CH＝CH-CO-基團；- B是2-噻吩基或苯基，它被R基團取代；或是天然或合成氨基酸，它通過其N-末端和A基團相連；或，A-B是-CH2CH2-NH-A.A.-基團，其中的A.A.基團是天然或合成氨基酸殘基，該殘基通過其羧基末端和CH2CH2-NH-基團相連；- R是氫或氯、溴、碘、氟、(C1-C4)烷基、(C1-C4)亞烷基-COOR’、(C1-C4)亞烷基-NH2、(C1-C4)亞烷基-NR’2或(C1-C4)亞烷基-NHCOR’基團；- R’是氫或(C1-C4)烷基。
所述天然氨基酸代表20種為多肽單體單元的α-氨基酸之一，例如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、半胱氨酸或蛋氨酸。
合成氨基酸是由含有氨基和連接在α-碳原子的羧基的化合物構(gòu)成的。
本發(fā)明所述化合物的可藥用鹽包括生理可接受酸的加成鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽和馬來酸鹽。也可以是與堿形成的鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽。優(yōu)選的化合物是那些其中B為氨基酸或A-B是如式-CH2CH2-NH-A.A.-所示基團的化合物。
其他優(yōu)選的化合物是那些其中B是2-噻吩基的化合物。
特別優(yōu)選的化合物是那些其中氨基酸為色氨酸(triptophane)的化合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種式(I)化合物的制備方法。
本發(fā)明的再一個目的是式(I)化合物在治療其中uPAR抑制劑有效的疾病，具體是腫瘤和腫瘤遷移或侵害中的應(yīng)用，本發(fā)明還涉及含有藥學(xué)有效量的一種或多種式(I)化合物和可藥用添加劑的摻合物的藥物組合物。本發(fā)明化合物的制備其中B是天然或合成氨基酸(此后稱作-A.A.-)的式(I)化合物可以從式(II)所示中間體開始制備
該中間體首先被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰氯衍生物，隨后在路易斯酸的存在下、通過弗瑞德-克來福特反應(yīng)(Friedel-Craft reaction)與式(III)所示中間體反應(yīng)
其中A’是-CH2-、-CH2CH2-或-CH＝CH-基團且R”是(C1-C4)烷基，優(yōu)選利用亞硫酰氯在室溫至溶劑沸點的溫度下將中間體(II)轉(zhuǎn)化為酰氯，亞硫酰氯還用作溶劑。
所述弗瑞德-克來福特反應(yīng)是優(yōu)選用SnCl4作為路易斯酸且在惰性溶劑中、于-5℃-室溫的條件下進行的。
所得中間體(IV)
被水解為式(V)的相應(yīng)的酸(V)
適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件包括使用堿，優(yōu)選堿金屬氫氧化物；反應(yīng)在水、醇或其混合物中進行；反應(yīng)溫度為0℃-室溫。
隨后，用例如羰基二咪唑活化中間體(V)的羧基，得到咪唑衍生物，進而優(yōu)選在惰性溶劑中和0℃-50℃的溫度下與式-A.A.-的氨基酸反應(yīng)，得到式(VI)的中間體
此后，優(yōu)選在酸性條件下，通過將羧酸酯-COOR”水解而將式(VI)中間體轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的式(I)化合物。
如果在上述過程中用式(III’)中間體代替式(III)中間體
可以制得其中A-B是-CH2CH2-NH-A.A.-基團的式(I)化合物。在這種情況下，應(yīng)在弗瑞德-克來福特反應(yīng)后脫去保護基-COCF3，并令所得中間體與預(yù)先通過其羧基活化的N-BOC-氨基酸縮合。脫除保護基BOC以后得到終產(chǎn)物式(I)化合物。
其中B是2-噻吩基或苯基且被具有上述含義的R基團取代的式(I)化合物可以由羧基官能度按上述方法活化的式(II)中間體、通過弗瑞德-克來福特反應(yīng)與式(VII)中間體反應(yīng)來制備
其中A具有上述含義并且B’是2-噻吩基或苯基，B’可被如上所述的R基團取代。
其中一個環(huán)被R取代基取代的雙噻吩在-50℃--20℃下與二氧化碳和強堿如丁基鋰反應(yīng)可以得到式(II)中間體。起始原料雙噻吩可以購得，或根據(jù)所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法來制備。
其中A是-CH2-CO-或-CH＝CH-CO-的式(VII)中間體
可以從可商業(yè)購得的其中A”是-CH2-或-CH＝CH-的式(VIII)中間體開始制備
方法是首先令羧基官能度轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰氯，隨后與式B-H的化合物進行弗瑞德-克來福特反應(yīng)，其中B-H是噻吩或被上述R基團取代的苯基。
從其中A為-CH＝CH-CO-的相應(yīng)中間體，在適當(dāng)催化劑如(PPh3)3RhCl的存在下將中間體的C＝C雙鍵氫化，可以得到其中A是-CH2CH2-CO-的式(VII)中間體。
類似地，由帶有C＝C的相應(yīng)中間體經(jīng)過催化氫化可以制得其中A’是-CH2CH2-的式(III)中間體。生物活性按照Rettenberger等人公開在“生物學(xué)、化學(xué)和侯普·賽勒氏試驗”(Biol.Chem.Hoppe.Seyler)376，587-94(1995)中所述的方法，測試本發(fā)明化合物是否是可以與特異性受體uPARmAk(BIO-R4)相結(jié)合的人體尿激酶(uPA)抑制劑(ELISA試驗)。
試驗采用微量滴定板(96孔)進行。所用溶液如下所示-洗滌緩沖液PBS-緩沖液(不含有Mg2+和Ca2+)+0.05％吐溫20；-培養(yǎng)緩沖液(IP)含有1％脫脂奶粉的PBS-緩沖液(不含有Mg2+和Ca2+)；-BIO-R4溶液溶于IP中的50ng/孔(0.5Tg/ml；100Tl/孔)；-uPAR溶液溶于PBS-緩沖液(不含有Mg2+和Ca2+)中的3ng/孔(30ng/ml；100Tl/孔)；-阻斷溶液含有1％脫脂奶粉的洗滌緩沖液(在37℃下溶解)；-uPA溶液溶于IP中的0.25ng/孔(5ng/ml；50Tl/孔)。檢測溶液(每個微量滴定板)(1)6ml(100mM Tris-Cl，pH 7.2+0.15％吐溫80)+1.5ml(10Tg)溶于重蒸餾水中的纖維蛋白溶酶原；(2)6ml(100mM Tris-Cl，pH 7.2+0.15％吐溫80)+1.5ml(7.5mg)溶于重蒸餾水中的染色酶PL(Chromozyme PL)。必須連續(xù)攪拌該檢測溶液。試驗物質(zhì)將試驗物質(zhì)溶解在DMSO中。采用其最高濃度100Tg/ml作為試驗體系。用PBS制備該溶液。所進行的三個對照試驗是a)陽性對照含有2％DMSO的PBS溶液；b)陰性對照檢測時無受體存在；c)抑制性對照1)用硫酸葡聚糖(MW＝500 000)進行抑制試驗(IC95為0.25mg/ml)；2)用鈍化的uPA(175Tg/ml)進行抑制試驗(IC90為1Tg/ml)培養(yǎng)采用下列方法進行將含有100TI BIO-R4(c＝0.5Tg/ml)的各孔在室溫和振搖條件下培養(yǎng)1小時。用洗滌緩沖液洗滌3次后，在各孔中加入200Tl/孔阻斷溶液并在37℃下保溫1小時。洗滌3次后，將各孔在室溫下和振搖的同時與100Tl/孔uPAR(c＝30ng/ml)一起培養(yǎng)l小時，隨后再用洗滌緩沖液洗滌3次。分別加入含有試驗物質(zhì)的溶液和對照溶液(50Tl/孔)并在室溫和振搖的條件下培養(yǎng)30分鐘。再加入50Tl uPA溶液(c＝2.5ng/ml)。在室溫下保溫1小時后洗滌3次。按照以下方法進行檢測在室溫下用各50Tl的檢測溶液(1)和(2)培養(yǎng)。20分鐘后，生成黃色(陽性對照試驗在45-60分鐘后讀取的消光度(extinction)為1)。用Dynatech MR 7000ELISA讀數(shù)器在405nm下進行檢測。按照下列公式計算出抑制百分率％抑制＝100-100×[E試驗-E陰性-對照/E陽性-對照-E陰性-對照]本發(fā)明某些代表性化合物的數(shù)據(jù)列在表I中。表I-BI0-R4檢測試驗-用IC50(mM)表示的結(jié)合特異性uPAR受體的uPA(BIO-R4)的抑制作用
本發(fā)明涉及含有一種或多種式(I)化合物的藥劑。
為了制備藥劑，以已知方式將式(I)化合物與適當(dāng)?shù)目伤幱幂d體物質(zhì)、芳香劑、矯味劑和染料混合并制成例如片劑或包衣片劑，或?qū)⑺鼈兣c加入的適當(dāng)輔料一起懸浮或溶解在水或油如橄欖油中。
通式(I)所示的物質(zhì)可以以液體或固體形式經(jīng)口服或非腸道給藥。優(yōu)選用水作為含有注射溶液常用的穩(wěn)定劑、增溶劑和/或緩沖劑的介質(zhì)。所述添加劑可例如是酒石酸鹽或硼酸鹽緩沖液、乙醇、二甲基亞砜、絡(luò)合劑(例如乙二胺四乙酸)、調(diào)節(jié)粘度的高分子聚合物(如液態(tài)聚氧化乙烯)或山梨醇酐的聚乙烯衍生物。
固體載體物質(zhì)例如是淀粉、乳糖、甘露糖醇、甲基纖維素、滑石、高分散的硅酸、高分子脂肪酸(例如硬脂酸)、明膠、瓊脂、磷酸鈣、硬脂酸鎂、動物和植物脂肪或固體高分子聚合物(例如聚乙二醇)。適合于口服途徑給藥的制劑可根據(jù)需要含有矯味劑和甜味劑。
給藥劑量取決于患者的年齡、健康狀況和體重，疾病的嚴(yán)重程度，可能同時進行的治療的類型，治療的頻率以及所要達(dá)到的效果種類。活性化合物的日劑量通常是0.1-50mg/kg體重。為了獲得預(yù)期的療效，通常0.5-40mg/kg/天且優(yōu)選1-20mg/kg/天，每天可給藥1次或幾次是有效的。
本發(fā)明將通過下列實施例進一步說明。制備例1雙-噻吩-2-甲酸的合成將15g雙噻吩溶解在300ml四氫呋喃(THF)中并在氮氣下將該溶液冷卻至-40℃。小心滴加10.8ml溶于己烷中的10M丁基鋰，隨后將該紅色溶液在-10℃下保持1小時并將其傾入裝有500g干冰(固體二氧化碳)的燒瓶中。黃色懸浮液在1小時內(nèi)溶解，此后將所得溶液傾入1000ml 2N氫氧化鈉中。30分鐘后，分離出有機相并濃縮溶劑至小體積。向殘余物中加入2N氫氧化鈉和水并用己烷洗滌，進而用37％鹽酸將水相酸化至pH 2，在室溫下保持1小時，過濾出固體并用50ml水洗滌。在70℃的烘箱內(nèi)干燥后，得到17.8g產(chǎn)物，熔點171-174℃。制備例22-[3-(2-噻吩基)丙烯?；鵠噻吩的合成將溶于30ml亞硫酰氯中的5g 3-(2-噻吩基)丙烯酸溶液在50℃下加熱1小時30分鐘，隨后于減壓下除去未反應(yīng)的亞硫酰氯。向殘余物中加入20ml庚烷并干燥兩次，再將其溶解在50ml二氯甲烷中，在0℃下冷卻并滴加溶于5ml二氯甲烷中的2.43g噻吩溶液。在保持溫度為0℃的條件下，再滴加6.74ml SnCl4在12ml二氯甲烷中的溶液。令反應(yīng)混合物在室溫下保持2小時，隨后將其傾入200ml 2N鹽酸中。分離水相并用100ml二氯甲烷萃取。有機相用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干，殘余物經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯5∶1)純化，從己烷中重結(jié)晶后，得到4.79g產(chǎn)物。熔點105-107℃。制備例32-[3-(2-噻吩基)丙?；鵠噻吩的合成在室溫下，將溶于50ml無水二氯甲烷中的4.64g 2-[3-(2-噻吩基)丙烯酰基]噻吩溶液和0.97g三(三苯基膦)氯化銠氫化過夜。隨后將反應(yīng)混合物濃縮至干且經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯20∶1)純化，得到4.3g產(chǎn)物，該產(chǎn)物為油狀物。制備例42-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酸乙酯的合成將溶于20ml亞硫酰氯中的雙噻吩-2-甲酸(3g；制備例1)溶液在50℃下加熱1小時30分鐘，隨后蒸發(fā)掉未反應(yīng)的亞硫酰氯，殘余物用10ml庚烷處理3次并蒸發(fā)。將殘余物溶解在二氯甲烷中并在0℃下冷卻，然后滴加溶于5ml二氯甲烷中的2-(噻吩-2-基)乙酸乙酯(2.19g)溶液。隨后加入溶于10ml二氯甲烷中的SnCl4(3ml)溶液。反應(yīng)混合物在室溫下保持2小時，隨后將其傾入200ml 2N鹽酸中。用二氯甲烷(3×150ml)萃取水相并收集有機萃取液，用硫酸鈉干燥并濃縮至干。殘余物(8g)經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯8∶1)純化，得到3.62g產(chǎn)物。制備例52-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酸的合成將懸浮在60ml乙醇和5ml水中的3.62g 2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)-羰基)噻吩-5-基]乙酸乙酯懸浮液在0℃下冷卻并加入11.35ml 2N氫氧化鈉。混合物在室溫下保持過夜，然后將其濃縮至小體積。酸化后，產(chǎn)物結(jié)晶，然后將其過濾分離且在40℃下真空干燥，回收2.4g產(chǎn)物。制備例64-[3-(2-噻吩基)丙酰基]-1-氟代苯將5g 2-(2-亞噻吩基)-4-氟代苯乙酮溶解在50ml無水二氯甲烷中并加入0.97g三(三苯基膦)氯化銠。令反應(yīng)氫化8小時(約有470ml氫氣反應(yīng))，隨后將其濃縮至干且經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯20∶1)純化，得到4.85g產(chǎn)物。制備例72-[2-(三氟乙酰氨基)-1-乙基]噻吩將溶于100ml四氫呋喃中的2-(2-噻吩基)乙胺(10g)溶液冷卻至0℃，隨后滴加9.05ml三氟乙酸乙酯。在室溫下攪拌4小時后，將反應(yīng)混合物濃縮至干，得到18g油狀物，該油狀物用18ml乙醚處理并用90ml己烷飽和。冷卻2小時后，過濾收集得到12.15g產(chǎn)物，熔點45-47℃。制備例82-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]-N-三氟乙?；野穼⑷苡?5ml亞硫酰氯中的雙噻吩-2-甲酸(3.4g；制備例1)溶液在50℃下加熱2小時。將反應(yīng)混合物濃縮至干，隨后將其再溶解在庚烷中并再濃縮至干。重復(fù)上述操作，再將殘余物溶解在二氯甲烷中，在0℃下冷卻并滴加溶于20ml二氯甲烷中的3.3g 2-[2-(三氟乙酰氨基)-1-乙基]噻吩(制備例7)溶液，隨后滴加SnCl4(3.8ml)在3.8ml二氯甲烷中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下保持?jǐn)嚢?小時，隨后將其傾入200ml 2N鹽酸中并用四氫呋喃(4×100ml)萃取。合并有機萃取液，用硫酸鈉干燥且在減壓下蒸發(fā)溶劑。得到18g黑色油狀物，經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/四氫呋喃2∶1)純化。從己烷(100ml)重結(jié)晶并在50℃下真空干燥，得到4.3g產(chǎn)物。熔點168-170℃。制備例92-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙胺在攪拌下，向在0℃下冷卻的溶于800ml甲醇中的2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]-N-三氟乙?；野?10g；制備例8)溶液中加入60.17ml的2N氫氧化鈉，將反應(yīng)混合物在50℃下加熱過夜。隨后將混合物濃縮至小體積，再加入水(500ml)，用氯仿(4×200ml)萃取。合并有機萃取液，用硫酸鈉干燥并濃縮至干。從乙酸乙酯(16ml)/己烷(16ml)混合物中結(jié)晶，得到5.1g產(chǎn)物，熔點102-104℃。實施例1N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5 ’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠色氨酸(triptophane)乙酯的合成將懸浮在150ml無水THF中的2.34g2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酸(制備例5)和1.74g羰基二咪唑的懸浮液在40℃下保持1小時。將混合物冷卻至20℃并滴加溶于10ml無水THF中的2.45g色氨酸乙酯溶液。2小時后，將反應(yīng)混合物濃縮至干，隨后將其溶解在乙酸乙酯中，用水洗滌并用200ml氯仿萃取。將有機相濃縮至干，得到7g殘余物，將其經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯4∶1-2∶1)純化，得到2.79g產(chǎn)物。實施例2N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠色氨酸的合成將溶于320ml乙醇和10ml水中的2.2g N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酰基]色氨酸乙酯(實施例1)溶液在0℃下冷卻，隨后滴加4.43ml 2N氫氧化鈉。室溫下4小時后，將混合物濃縮至小體積，加入水，用乙酸乙酯洗滌并酸化至pH＝2。用乙酸乙酯萃取水相，有機萃取液用硫酸鈉干燥，濃縮至干，殘余物經(jīng)硅膠層析(洗脫劑氯仿/甲醇/乙酸9∶1∶0.25)純化，得到1.16g產(chǎn)物，熔點166-168℃。實施例32-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠噻吩的合成將溶于5ml亞硫酰氯中的1g雙噻吩-2-甲酸(制備例1)溶液在50℃下加熱1小時30分鐘，隨后蒸發(fā)掉未反應(yīng)的亞硫酰氯，向殘余物中加入庚烷并再次蒸發(fā)。將殘余物溶解在二氯甲烷中，在0℃下冷卻，滴加溶于3ml無水二氯甲烷中的2-[3-(2-噻吩基)丙?；鵠噻吩(1g；制備例3)溶液。然后在保持0℃的條件下，滴加1.05ml SnCl4在3ml無水二氯甲烷中的溶液。隨后將反應(yīng)混合物在室溫下保持1小時，再將其傾入100ml 2N鹽酸中，用乙酸乙酯(3×100ml)萃取，用硫酸鈉干燥并濃縮至干。殘余物(3g)經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯5∶1)純化，得到1.02g產(chǎn)物，熔點124-126℃。實施例42-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠噻吩的合成將溶于3ml亞硫酰氯中的0.24g雙噻吩-2-甲酸(制備例1)溶液在50℃下加熱1小時30分鐘，隨后蒸發(fā)掉未反應(yīng)的亞硫酰氯，向殘余物中加入庚烷并再次蒸發(fā)。將殘余物溶解在二氯甲烷中，在0℃下冷卻，滴加溶于3ml無水二氯甲烷中的2-[3-(2-噻吩基)丙烯?；鵠噻吩(0.3g；制備例2)溶液。在保持0℃的條件下，再滴加0.31mlSnCl4在3ml無水二氯甲烷中的溶液。隨后將反應(yīng)混合物在室溫下保持4小時，再向混合物中加入0.3ml SnCl4并將混合物在室溫下保持過夜。將反應(yīng)混合物傾入200ml 2N鹽酸中，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取，用硫酸鈉干燥并濃縮至干。殘余物(1.3g)經(jīng)硅膠層析(洗脫劑己烷/乙酸乙酯5∶1，進而用純乙酸乙酯洗脫)純化，得到0.37g產(chǎn)物。實施例52-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-氟代苯的合成將溶于10ml亞硫酰氯中的1.06g雙噻吩-2-甲酸(制備例1)溶液在50℃下加熱1小時30分鐘，隨后將混合物濃縮至干。殘余物用20ml庚烷處理2次，最后加入30ml二氯甲烷，冷卻至0℃且滴加溶于5ml二氯甲烷中的4-[3-(2-噻吩基)丙?；鵠-1-氟代苯(1.08g；制備例6)溶液。保持在約0℃的溫度下，滴加溶于5ml二氯甲烷中的SnCl4(1.07ml)溶液，隨后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時。將反應(yīng)混合物傾入150ml 2N鹽酸中，再用乙酸乙酯萃取且將有機相濃縮至干。殘余物經(jīng)硅膠層析(洗脫劑二氯甲烷)純化，從乙酸乙酯/己烷混合物中結(jié)晶后，得到1g產(chǎn)物，熔點138-140℃。實施例6按照上述制備例和實施例中所述的方法，制得下列低聚噻吩衍生物-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩--5-基]乙?；鵠甘氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠丙氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠苯基丙氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠酪氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酰基]亮氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酰基]賴氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酰基]絲氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠異亮氨酸；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-氟代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙酰基]-4-氯代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-2-溴代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-(羧甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙酰基]-4-(氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-3-(二甲基氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-2-(叔丁基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-4-氟代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-4-氯代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-2-溴代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯酰基]-4-(羧甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-4-(氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-3-(二甲基氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯酰基]-2-(叔丁基)苯；實施例74-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基羰基]-2-(叔-丁氧基羰基氨基)丁酸將谷氨酸N-BOC(0.88g)和1，1’-羰基二咪唑(0.63g)在40ml四氫呋喃中的混合物在室溫下保持?jǐn)嚢?小時，隨后滴加溶于40ml四氫呋喃中的2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙胺(1.11g；制備例9)溶液且將反應(yīng)混合物在50℃下加熱過夜。減壓下蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶解在乙酸乙酯中并用飽和硫酸氫鉀水溶液洗滌。過濾分離出的固體(起始反應(yīng)物)，將有機相濃縮至干。殘余物(2.5g)經(jīng)硅膠層析(洗脫劑1)氯仿/甲醇15∶2；2)氯仿/甲醇9∶1)純化，得到0.42g產(chǎn)物。實施例84-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基羰基]-2-氨基丁酸向懸浮在28ml二氯甲烷中的4-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基羰基]-2-(叔-丁氧基羰基氨基)丁酸(0.28g；實施例7)懸浮液中加入0.39ml三氟乙酸。將所得暗色溶液在室溫下攪拌過夜，隨后濃縮至干。將殘余物再溶解在無水乙醇(15ml)中，然后將其再濃縮至干且將此操作重復(fù)1次。將殘余物(0.3g)懸浮在20ml己烷中，在室溫下攪拌1小時，過濾并在30℃的真空下干燥，得到0.2g產(chǎn)物。1H-NMR(在d6-DMSO+D2O中)1.9ppm(m，2H)；2.18ppm(m，2H)；3.05ppm(m，2H)；3.36ppm(br m，2H)；3.7ppm(t，1H)；7.1ppm(m，2H)；7.5ppm(m，3H)；7.9ppm(m，2H)；8.61ppm(br t，1H)。實施例9按照實施例7和8所述方法以適當(dāng)?shù)陌被衢_始，可以得到下列低聚噻吩-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]亮氨酰胺；-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]苯基丙氨酰胺；-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]絲氨酰胺；-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]賴氨酰胺；-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]異亮氨酰胺；-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]組氨酰胺；-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙氨基]酪氨酰胺；
權(quán)利要求
1.通式(I)的低聚噻吩、其異構(gòu)體及其與可藥用酸和堿所成的鹽
其中- A是-CH2-CO-、-CH2CH2-CO-或-CH＝CH-CO-基團；- B是2-噻吩基或苯基，它被R基團取代；或是天然或合成氨基酸，它通過其N-末端和A基團相連；或，A-B是-CH2CH2-NH-A.A.-基團，其中的A.A.基團是天然或合成氨基酸殘基，該殘基經(jīng)其羧基末端和CH2CH2-NH-基團相連；- R是氫或氯、溴、碘、氟、(C1-C4)烷基、(C1-C4)亞烷基-COOR’、(C1-C4)亞烷基-NH2、(C1-C4)亞烷基-NR’2或(C1-C4)亞烷基-NHCOR’基團；- R’是氫或(C1-C4)烷基。
2.權(quán)利要求1所述的低聚噻吩，其中B是氨基酸。
3.權(quán)利要求2所述的低聚噻吩，其中A-B是如式-CH2CH2-NH-A.A.-所示基團。
4.權(quán)利要求1-3所述的低聚噻吩，其中所述氨基酸為色氨酸(triptophane)。
5.權(quán)利要求1所述的低聚噻吩，其中B是2-噻吩基。
6.權(quán)利要求1所述的低聚噻吩，其選自-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠色氨酸；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠噻吩；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯酰基]噻吩；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-氟代苯；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠甘氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠丙氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠苯基丙氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠酪氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酰基]亮氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠賴氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙?；鵠絲氨酸；-N-[2-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]乙酰基]異亮氨酸；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙酰基]-4-氟代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-氯代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙酰基]-2-溴代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-(羧甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙?；鵠-4-(氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙酰基]-3-(二甲基氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙酰基]-2-(叔丁基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-4-氟代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-4-氯代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯酰基]-2-溴代苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-4-(羧甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯酰基]-4-(氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯酰基]-3-(二甲基氨基甲基)苯；-2-[3-[2-((2，2’-雙噻吩-5’-基)羰基)噻吩-5-基]丙烯?；鵠-2-(叔丁基)苯；
7.藥物組合物，其中含有藥學(xué)有效量的一種或多種如權(quán)利要求1-6所述的化合物以及摻合的可藥用賦形劑(eccipient)。
8.權(quán)利要求1-6所述化合物在制備具有抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移活性藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1-6所述化合物用作結(jié)合特異性uPAR受體的uPA的抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明化開了式(Ⅰ)所示的低聚噻吩、其異構(gòu)體及其與可藥用酸和堿所成的鹽,其中:A是－CH
文檔編號A61K31/38GK1269797SQ98807766
公開日2000年10月11日 申請日期1998年7月28日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月31日
發(fā)明者R·迪多梅尼科, G·德西利斯, B·科尼格, G·茲默曼 申請人:羅赫診斷器材股份有限公司