專利名稱：破壞視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種破壞視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及類似增殖細(xì)胞的方法，以此防止在現(xiàn)行的治療視網(wǎng)膜裂口及脫離后出現(xiàn)的增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病(PVR)或牽引帶形成。本發(fā)明尤其涉及一種通過施用與毒素結(jié)合的膜結(jié)合劑以破壞在眼玻璃體腔內(nèi)的視網(wǎng)膜表面上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及類似增殖細(xì)胞的方法。
背景技術(shù)：
增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病(PVR)是視網(wǎng)膜脫離后引起失明的最主要原因。為得以接近裂口或脫離的視網(wǎng)膜，典型地要在眼的睫狀體扁平部做切口以使外科器械由此進(jìn)入眼的玻璃體腔。在視網(wǎng)膜裂口或脫離情況下，要進(jìn)行玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位，其中使用外科激光器械、燒灼術(shù)、粘合劑或填充物使視網(wǎng)膜裂口或脫離部位復(fù)位。在視網(wǎng)膜脫離或裂口后，增殖細(xì)胞例如但不限于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、類成肌細(xì)胞及類似細(xì)胞被釋入玻璃體腔中。這些增殖細(xì)胞，主要是視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞(此后統(tǒng)稱為RPE細(xì)胞)，隨后在玻璃體腔內(nèi)增殖。這些細(xì)胞在玻璃體腔及在視網(wǎng)膜上增殖，導(dǎo)致牽引帶形成并使視網(wǎng)膜再脫離由此導(dǎo)致失明。由此需要一種防止增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病的方法。用于防止增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病的組合物也是所需的。
發(fā)明描述本發(fā)明的方法通過使用基膜結(jié)合劑用于在視網(wǎng)膜裂口或脫離后，破壞眼玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞。能破壞視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的胞毒劑優(yōu)選與基膜結(jié)合劑綴合。在玻璃體切割術(shù)(如果需要)及視網(wǎng)膜復(fù)位后，可將基膜結(jié)合劑與胞毒劑綴合物導(dǎo)入眼玻璃體腔。與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑可存留在玻璃體腔內(nèi)足夠的預(yù)定時(shí)間，以使基膜結(jié)合劑與眼玻璃體腔內(nèi)基膜，尤其是內(nèi)界膜(ILM)結(jié)合。接著從玻璃體腔清除過量物質(zhì)。釋入玻璃體腔隨后位于基膜上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞由此暴露于與基膜結(jié)合劑綴合的胞毒劑，導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的破壞。
根據(jù)本發(fā)明方法的優(yōu)選用于無晶狀體眼的另一實(shí)施方案中，第一種基膜結(jié)合劑在進(jìn)行玻璃體切割術(shù)前被導(dǎo)入眼內(nèi)。第一種基膜結(jié)合劑在眼內(nèi)存留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使基膜結(jié)合劑與眼內(nèi)基膜結(jié)合。然后從眼內(nèi)清除過量的第一種基膜結(jié)合劑。接著進(jìn)行玻璃體切割術(shù)(如果需要)及視網(wǎng)膜復(fù)位，由此暴露玻璃體腔內(nèi)其它基膜。然后在眼內(nèi)導(dǎo)入第二種與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑，并使其存留足夠的預(yù)定時(shí)間以使該基膜結(jié)合劑與玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合。接著從眼內(nèi)清除過量物質(zhì)。位于玻璃體腔內(nèi)基膜上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞由此被暴露于與第二種基膜結(jié)合劑綴合的胞毒劑，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的破壞。
實(shí)施本發(fā)明的方式本發(fā)明的方法意在破壞在眼玻璃體腔的內(nèi)表面上的增殖性細(xì)胞(本文統(tǒng)稱作視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞)。通過破壞這些細(xì)胞，使這些細(xì)胞不能增殖和/或在視網(wǎng)膜表面遷移并形成代表增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病(PVR)從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離的牽引帶。本發(fā)明方法從而能防止增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病(PVR)的發(fā)生。本發(fā)明的方法可與任何視網(wǎng)膜復(fù)位步驟聯(lián)合應(yīng)用。
玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位必需經(jīng)眼表面進(jìn)行切開以提供直接進(jìn)入眼玻璃體腔內(nèi)的途徑。盡管必需的切口通常在眼睫狀體扁平部進(jìn)行，也應(yīng)知此切口的其它部位可在手術(shù)處理中謹(jǐn)慎選擇。在切口形成后，通常在經(jīng)切口將燒灼器導(dǎo)入眼玻璃體腔之前需要并進(jìn)行玻璃體切割術(shù)。該器械通常是激光經(jīng)玻璃體腔進(jìn)入，這樣激光或適當(dāng)?shù)念愃莆镏苯咏佑|眼的視網(wǎng)膜表面。經(jīng)使用激光燒灼可使視網(wǎng)膜復(fù)位?；蛘?，可使用適當(dāng)?shù)恼澈蟿┖?或填充物復(fù)位。
目前已發(fā)現(xiàn)某些制劑可與基膜，包括玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合。此類基膜結(jié)合劑，當(dāng)與玻璃體腔的基膜或LIM結(jié)合時(shí)，在PVR的進(jìn)程期間可與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞直接接觸。本發(fā)明的方法基于對(duì)此類細(xì)胞增殖的觀測(cè)。
在本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施方案中，一種含基膜結(jié)合劑的溶液在玻璃體切割術(shù)(如果進(jìn)行)及視網(wǎng)膜復(fù)位后，導(dǎo)入玻璃體腔。在本發(fā)明的此第一個(gè)實(shí)施方案中，胞毒劑與基膜結(jié)合劑綴合。如上所述，此基膜結(jié)合劑將與構(gòu)成玻璃體腔內(nèi)表面的基膜結(jié)合，從而視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞與和基膜結(jié)合劑綴合的胞毒劑直接接觸。含與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的溶液在玻璃體腔內(nèi)存留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使基膜結(jié)合劑與玻璃體腔基膜結(jié)合?；そY(jié)合劑與玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合所需時(shí)間長短，將依賴于許多因素，包括但不限于導(dǎo)入玻璃體腔內(nèi)溶液中基膜結(jié)合劑的濃度。然后從玻璃體腔中清除過量的含與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的溶液。有許多技術(shù)可用于清除此溶液，包括已知的抽吸和灌注/抽吸技術(shù)。
從眼玻璃體腔清除過量的含基膜結(jié)合劑的溶液后，可應(yīng)用或不用填充物，接著閉合眼的切口以完成程序。
需知基膜結(jié)合劑仍與玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合。這樣與基膜結(jié)合劑綴合的胞毒劑將直接接觸玻璃體腔內(nèi)表面上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞。尤其應(yīng)知由于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞試圖增殖并在玻璃體腔內(nèi)表面遷移，此細(xì)胞將與基膜結(jié)合劑接觸。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞將使胞毒劑內(nèi)在化，從而使玻璃體腔內(nèi)表面上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞被破壞，由此防止PVR及所導(dǎo)致的失明。
在無晶狀體眼中，應(yīng)注意到眼的前房暴露于玻璃體腔，并也包括基膜如角膜內(nèi)皮。由于眼角膜內(nèi)皮一旦被損傷將不再再生的事實(shí)，尤需特別小心以確保含與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的溶液不與角膜內(nèi)皮接觸。本發(fā)明的第二個(gè)實(shí)施方案意在保護(hù)角膜內(nèi)皮免于胞毒劑的作用。
在本發(fā)明方法的第二個(gè)實(shí)施方案中，在進(jìn)行玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位前，向眼內(nèi)導(dǎo)入含有未與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的第一種溶液。第一種溶液中的基膜結(jié)合劑將與眼內(nèi)暴露的基膜結(jié)合，尤其是與角膜內(nèi)皮結(jié)合。使含基膜結(jié)合劑的第一種溶液在眼內(nèi)存留足夠的預(yù)定時(shí)間，以確保第一種基膜結(jié)合劑與眼內(nèi)基膜之間產(chǎn)生合適的結(jié)合。然后用已知抽吸或灌注/抽吸方法，如本發(fā)明第一個(gè)實(shí)施方案所述，將含基膜結(jié)合劑的第一種溶液從眼中清除。接著用已知技術(shù)進(jìn)行玻璃體切割術(shù)(如果需要)及視網(wǎng)膜復(fù)位步驟。
然后向玻璃體腔內(nèi)導(dǎo)入含與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的第二種溶液。優(yōu)選的是第二種溶液只與那些先前未與第一種基膜結(jié)合劑結(jié)合的眼內(nèi)基膜相結(jié)合，從而確保胞毒劑破壞玻璃體腔內(nèi)的視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞，而不損傷角膜內(nèi)皮。由此優(yōu)選第一種基膜結(jié)合劑與第二種基膜結(jié)合劑相同，這樣確保第一種與第二種基膜結(jié)合劑與基膜上相同位點(diǎn)結(jié)合。
聚賴氨酸可用作與本發(fā)明方法相關(guān)的基膜結(jié)合劑。應(yīng)知聚賴氨酸或其它高分子基膜結(jié)合劑的分子量可以變化。高分子基膜結(jié)合劑的此方面當(dāng)用于本發(fā)明的方法時(shí)尤為有益。尤其應(yīng)知高分子基膜結(jié)合劑如聚賴氨酸的結(jié)合親和性當(dāng)其分子量增加時(shí)將隨之提高，這是由于較高分子量分子上的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)量增加。這樣較高分子量的聚賴氨酸分子將傾向于置換先與基膜結(jié)合的較低分子量的聚賴氨酸分子。由上述原因，如果高分子基膜結(jié)合劑如聚賴氨酸用于本發(fā)明的方法中，優(yōu)選第一種基膜結(jié)合劑的分子量至少要等于第二種基膜結(jié)合劑的分子量，以確保第二種基膜結(jié)合劑不能置換第一種基膜結(jié)合劑。為提供第二種基膜結(jié)合劑不會(huì)置換第一種基膜結(jié)合劑的更高把握，優(yōu)選第一種基膜結(jié)合劑的分子量要高于第二種基膜結(jié)合劑。
將含與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的第二種溶液在玻璃體腔內(nèi)存留足夠的預(yù)定時(shí)間，以確保在第二種基膜結(jié)合劑與先前未與第一種基膜結(jié)合劑結(jié)合的基膜之間產(chǎn)生合適的結(jié)合。如上所述，所需時(shí)間長短依賴于許多因素。然后用已知技術(shù)如抽吸或灌注/抽吸從眼中清除過量的第二種溶液。由于本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施方案中所討論的上述原因，胞毒劑將趨于破壞玻璃體腔內(nèi)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，從而防止PVR。
在本發(fā)明的第三個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)行上述本發(fā)明第一實(shí)施方案的步驟。接著提供含第二種基膜結(jié)合劑的第二種溶液，并導(dǎo)入眼中，以置換任何也許已與角膜內(nèi)皮接觸的第一種基膜結(jié)合劑。由上述原因，優(yōu)選第二種基膜結(jié)合劑與第一種基膜結(jié)合劑是同樣物質(zhì)。另外優(yōu)選第二種基膜結(jié)合劑的分子量高于第一種基膜結(jié)合劑的分子量，從而確保第二種基膜結(jié)合劑將置換角膜內(nèi)皮上的第一種基膜結(jié)合劑。
許多基膜結(jié)合劑可用于本發(fā)明方法。在本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施方案中，聚賴氨酸用作基膜結(jié)合劑。已證明當(dāng)聚L賴氨酸用于本發(fā)明的方法時(shí)是有效的。有可能聚D賴氨酸也有效。聚賴氨酸用于本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于其可得性，相對(duì)低的成本，及其能以不同分子量配制。其它確認(rèn)可用于本發(fā)明的基膜結(jié)合劑包括但不限于纖連蛋白，成纖維細(xì)胞生長因子，核纖層蛋白，IV型膠原，基底膜蛋白聚糖，核心蛋白聚糖，血小板反應(yīng)蛋白，肌腱蛋白，玻連蛋白，肝素，硫酸乙酰肝素，聚精氨酸、葡聚糖，葡聚糖硫酸酯，硫酸軟骨素，透明質(zhì)酸，血小板因子IV，血纖蛋白及血纖蛋白原。
許多已知胞毒劑可用于本發(fā)明的方法。本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施方案中，核糖體抑制蛋白質(zhì)如皂草素或蓖麻毒蛋白被用作胞毒劑。優(yōu)選核糖體抑制蛋白是由于其與其它可用于本發(fā)明方法的胞毒劑相比每微克含有更大抑制活性。其它據(jù)信用于本發(fā)明方法中有效的胞毒劑包括但不限于抗有絲分裂藥物如氨甲蝶呤，5-氟尿嘧啶，道諾霉素、阿霉素、mitoxanthrone、長春花生物堿、長春花堿、秋水仙素，或cytochasins，當(dāng)用作胞毒劑時(shí)。另外離子載體如莫能菌素和G毒毛旋花苷也可用作本發(fā)明方法中的胞毒劑。應(yīng)知抗有絲分裂綴合物將破壞視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，而與核糖體抑制蛋白質(zhì)相比呈對(duì)虹膜及角膜較小的毒性。
許多已知方法可用于綴合胞毒劑與基膜結(jié)合劑。如可用水溶性碳二亞胺技術(shù)將胞毒劑的羧基與基膜結(jié)合劑的胺鍵合。當(dāng)用此技術(shù)綴合時(shí)，整個(gè)綴合物將被視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞內(nèi)在化，基膜結(jié)合劑接著將被細(xì)胞降解以釋放胞毒劑。
異基雙功能交聯(lián)劑如SPDP也可用于綴合胞毒劑與基膜結(jié)合劑，從而在胞毒劑與基膜結(jié)合劑之間產(chǎn)生二硫鍵。一旦所得雜合分子被視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞內(nèi)在化，則二硫鍵水解釋放胞毒劑，從而使細(xì)胞被破壞。
據(jù)信重組DNA技術(shù)也可用于構(gòu)建摻有基膜結(jié)合蛋白序列的毒素基因，該基因可在宿主細(xì)胞中表達(dá)并從培養(yǎng)基中純化產(chǎn)物。
舉例并非限制性地，聚賴氨酸與皂草素的綴合物可經(jīng)參考SPDP生產(chǎn)者的指導(dǎo)將聚賴氨酸與SPDP偶聯(lián)來制備。然后將游離的SPDP用過濾方法，或通過使用瓊脂糖凝膠肝素柱加以清除。所得聚賴氨酸-SPDP然后用二硫蘇糖醇還原。以相同方法將皂草素與SPDP相偶聯(lián)，并加入聚賴氨酸-SPDP溶液中。過濾所得溶液以去除未偶聯(lián)的試劑，從而產(chǎn)生綴合的聚賴氨酸-皂草素溶液。
含基膜結(jié)合劑的溶液可以包括許多已知生物相容性試劑。在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，基膜結(jié)合劑包含于平衡鹽溶液中。含粘彈物如甲基纖維素的溶液也可用于本發(fā)明。應(yīng)知其它已知生物相容性溶液也可用于本發(fā)明的方法中。
盡管本文借助一些優(yōu)選實(shí)施方案闡述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知在不超出本發(fā)明范圍及旨要內(nèi)，可對(duì)本發(fā)明做一定修改。
權(quán)利要求
1.一種在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，所述方法包括提供含與胞毒劑綴合的第一種基膜結(jié)合劑的第一種溶液；將所述第一種溶液導(dǎo)入所述玻璃體腔；將所述第一種溶液在所述玻璃體腔內(nèi)保留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使所述第一種基膜結(jié)合劑與所述玻璃體腔內(nèi)的基膜結(jié)合；以及從所述玻璃體腔中除去所述第一種溶液，其中所述玻璃體腔內(nèi)基膜上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞暴露于與胞毒劑綴合的第一種基膜結(jié)合劑，所述視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞使與胞毒劑綴合的第一種基膜結(jié)合劑內(nèi)在化，從而所述視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞被所述胞毒劑破壞。
2.如權(quán)利要求1的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第一種基膜結(jié)合劑選自聚賴氨酸、纖連蛋白、核纖層蛋白、IV型膠原、基底膜蛋白聚糖、核心蛋白聚糖、血小板反應(yīng)蛋白、肌腱蛋白、玻連蛋白、肝素、硫酸乙酰肝素、聚精氨酸、葡聚糖、葡聚糖硫酸酯、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、血小板因子IV、血纖蛋白及血纖蛋白原。
3.如權(quán)利要求2所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第一種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸。
4.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述的胞毒劑選自皂草素、蓖麻毒蛋白、氨甲蝶呤、5-氟尿嘧啶，道諾霉素、阿霉素、mitoxanthrone、長春花生物堿、長春花堿、秋水仙素、cytochasins、莫能菌素及G毒毛旋花苷。
5.如權(quán)利要求4所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述的胞毒劑選自皂草素及蓖麻毒蛋白。
6.如權(quán)利要求4所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述的胞毒劑是皂草素。
7.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第一種溶液包括一平衡鹽溶液。
8.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第一種溶液包括一粘彈物質(zhì)。
9.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑用水溶性碳二亞胺技術(shù)與所述第一種基膜結(jié)合劑綴合。
10.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑用異基雙功能交聯(lián)劑與所述第一種基膜結(jié)合劑綴合。
11.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸，而其中所述胞毒劑是皂草素。
12.如權(quán)利要求1所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，所述方法進(jìn)一步還包括提供含第二種基膜結(jié)合劑的第二種溶液，所述第二種基膜結(jié)合劑的分子量比第一種基膜結(jié)合劑的分子量大；在從眼中除去所述第一種溶液后，向眼玻璃體腔內(nèi)的角膜內(nèi)皮基膜上導(dǎo)入所述第二種溶液，從而所述第二種基膜結(jié)合劑置換已與角膜內(nèi)皮基膜結(jié)合的第一種基膜結(jié)合劑，從而防止損傷所述角膜內(nèi)皮基膜；從眼中除去所述第二種溶液。
13.如權(quán)利要求12所述的在玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第一種和第二種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸。
14.一種破壞眼玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，所述方法包括提供含第一種基膜結(jié)合劑的第一種溶液，所述第一種基膜結(jié)合劑有分子量；在進(jìn)行玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位前將所述第一種溶液導(dǎo)入眼內(nèi)；將所述第一種溶液在眼內(nèi)保留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使第一種基膜結(jié)合劑與眼玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合；從眼中除去所述第一種溶液；進(jìn)行玻璃體切割術(shù)及視網(wǎng)膜復(fù)位；提供含與胞毒劑綴合的第二種基膜結(jié)合劑的第二種溶液，所述第二種基膜結(jié)合劑有分子量；將所述第二種溶液導(dǎo)入所述玻璃體腔；將第二種溶液在所述玻璃體腔內(nèi)保留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使所述第二種基膜結(jié)合劑與所述玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合；從所述玻璃體腔除去所述第二種溶液，其中所述玻璃體腔內(nèi)基膜上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞暴露于與胞毒劑綴合的所述第二種基膜結(jié)合劑，所述視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞使與胞毒劑綴合的所述第二種基膜結(jié)合劑內(nèi)在化，從而所述視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞被所述胞毒劑破壞。
15.如權(quán)利要求14所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第一種及第二種基膜結(jié)合劑都選自；聚賴氨酸、纖連蛋白、核纖層蛋白、IV型膠原、基底膜蛋白聚糖、核心蛋白聚糖，血小板反應(yīng)蛋白，肌腱蛋白、玻連蛋白、肝素、硫酸乙酰肝素、聚精氨酸、葡聚糖、葡聚糖硫酸酯、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、血小板因子IV、血纖蛋白及血纖蛋白原。
16.如權(quán)利要求15所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述的第一種及第二種基膜結(jié)合劑均是聚賴氨酸。
17.如權(quán)利要求16所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中第一種基膜結(jié)合劑的分子量比第二種的基膜結(jié)合劑的分子量大。
18.如權(quán)利要求14所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑選自皂草素、蓖麻毒蛋白、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、道諾霉素、阿霉素、mitoxathrone、長春花生物堿、長春花堿、秋水仙素、cytochasins、莫能菌素及G毒毛旋花苷。
19.如權(quán)利要求18所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中胞毒劑選自皂草素及蓖麻毒蛋白。
20.如權(quán)利要求18所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑是皂草素。
22.如權(quán)利要求14所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述的第一種及第二種溶液包括平衡鹽溶液。
23.如權(quán)利要求14所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑與所述第二種基膜結(jié)合劑的綴合通過水溶性碳二亞胺技術(shù)完成。
24.如權(quán)利要求14所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑與所述第二種基膜結(jié)合劑的綴合使用異基雙功能交聯(lián)劑進(jìn)行。
25.如權(quán)利要求14所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的方法，其中所述第二種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸，而其中所述胞毒劑是皂草素。
26.一種破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的組合物，包括一種與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑。
27.一種破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的組合物，包括與胞毒劑綴合的聚賴氨酸。
28.如權(quán)利要求26或27所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的組合物，其中胞毒劑選自皂草素及蓖麻毒蛋白。
29.如權(quán)利要求26或27所述的破壞玻璃體腔內(nèi)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的組合物，其中胞毒劑是皂草素。
30.一種在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，所述方法包括提供含與胞毒劑綴合的第一種基膜結(jié)合劑的第一種溶液；將所述第一種溶液導(dǎo)入玻璃體腔；將第一種溶液在玻璃體腔內(nèi)保留足夠的預(yù)定時(shí)間，使第一種基膜結(jié)合劑與玻璃腔內(nèi)基膜結(jié)合；從所述玻璃體腔內(nèi)除去所述第一種溶液，其中所述玻璃體腔內(nèi)基膜上的增殖性細(xì)胞暴露于與胞毒劑綴合的所述第一種基膜結(jié)合劑，所述增殖性細(xì)胞使與胞毒劑綴合的所述第一種基膜結(jié)合劑內(nèi)在化，從而所述增殖性細(xì)胞被所述胞毒劑破壞。
31.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中第一種基膜結(jié)合劑選自聚賴氨酸、纖連蛋白、核纖層蛋白、IV型膠原、基底膜蛋白聚糖、核心蛋白聚糖，血小板反應(yīng)蛋白，肌腱蛋白、玻連蛋白、肝素、硫酸乙酰肝素、聚精氨酸、葡聚糖、葡聚糖硫酸酯、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、血小板因子IV、血纖蛋白及血纖蛋白原。
32.如權(quán)利要求31所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第一種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸。
33.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑選自皂草素、蓖麻毒蛋白、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、道諾霉素、阿霉素、mitoxanthrone、長春花生物堿、長春花堿、秋水仙素、cytochasins、莫能菌素及G毒毛旋花苷。
34.如權(quán)利要求33所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑選自皂草素及蓖麻毒蛋白。
35.如權(quán)利要求33所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑是皂草素。
36.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第一種溶液包括平衡鹽溶液。
37.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第一種溶液包括粘彈物質(zhì)。
38.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中用水溶性碳二亞胺技術(shù)綴合胞毒劑與第一種基膜結(jié)合劑。
39.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中用異基雙功能交聯(lián)劑綴合胞毒劑與第一種基膜結(jié)合劑。
40.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中與胞毒劑綴合的第一種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸，胞毒劑是皂草素。
41.如權(quán)利要求30所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述的方法進(jìn)一步包括提供含第二種基膜結(jié)合劑的第二種溶液，所述第二種基膜結(jié)合劑比第一種基膜結(jié)合劑的分子量高；從眼中除去所述第一種溶液后，向所述眼玻璃體腔內(nèi)角膜內(nèi)皮基膜上導(dǎo)入第二種溶液，從而所述第二種基膜結(jié)合劑置換已與角膜內(nèi)皮基膜結(jié)合的第一種基膜結(jié)合劑，從而防止損傷角膜內(nèi)皮基膜；從眼中除去所述第二種溶液。
42.如權(quán)利要求41所述的在視網(wǎng)膜復(fù)位后破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第一種及第二種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸。
43.一種破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，包括提供含有第一種基膜結(jié)合劑的第一種溶液，所述第一種基膜結(jié)合劑有分子量；在進(jìn)行視網(wǎng)膜復(fù)位前向眼內(nèi)導(dǎo)入所述第一種溶液；將所述第一種溶液在眼內(nèi)保留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使所述第一種基膜結(jié)合劑與所述眼玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合；從眼中除去所述第一種溶液；進(jìn)行視網(wǎng)膜復(fù)位；提供含與胞毒劑綴合的第二種基膜結(jié)合劑的第二種溶液，所述第二種基膜結(jié)合劑有分子量；向所述玻璃體腔內(nèi)導(dǎo)入所述第二種溶液；將所述第二種溶液在所述玻璃體腔內(nèi)保留足夠的預(yù)定時(shí)間，以使所述第二種基膜結(jié)合劑與所述玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合從所述玻璃體腔除去所述第二種溶液，其中所述玻璃體腔內(nèi)基膜上增殖性細(xì)胞暴露于胞毒劑綴合的第二種基膜結(jié)合劑，如此增殖性細(xì)胞使與胞毒劑綴合的第二種基膜結(jié)合劑內(nèi)在化，因而所述增殖性細(xì)胞被所述胞毒劑破壞。
44.如權(quán)利要求43所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第一種及第二種基膜結(jié)合劑均選自聚賴氨酸，纖連蛋白、核纖層蛋白、IV型膠原、基底膜蛋白聚糖、核心蛋白聚糖，血小板反應(yīng)蛋白，肌腱蛋白、玻連蛋白、肝素、硫酸乙酰肝素、聚精氨酸、葡聚糖、葡聚糖硫酸酯、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、血小板因子IV、血纖蛋白及血纖蛋白原。
45.如權(quán)利要求44所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述的第一種和第二種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸。
46.如權(quán)利要求45所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中第一種基膜結(jié)合劑比第二種基膜結(jié)合劑的分子量高。
47.如權(quán)利要求43所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑選自皂草素、蓖麻毒蛋白、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、道諾霉素、阿霉素、mitoxanthrone、長春花生物堿、長春花堿、秋水仙素、cytochasins、莫能菌素及G毒毛旋花苷。
48.如權(quán)利要求47所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑選自皂草素和蓖麻毒蛋白。
49.如權(quán)利要求47所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述胞毒劑是皂草素。
50.如權(quán)利要求43所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第一種及第二種溶液包括平衡鹽溶液。
51.如權(quán)利要求43所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中用水溶性堿二亞胺技術(shù)綴合所述胞毒劑與所述第二種基膜結(jié)合劑。
52.如權(quán)利要求43所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中用異基雙功能交聯(lián)劑綴合所述的胞毒劑與所述的第二種基膜結(jié)合劑。
53.如權(quán)利要求43所述的破壞眼玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的方法，其中所述第二種基膜結(jié)合劑是聚賴氨酸，所述胞毒劑是皂草素。
54.一種破壞玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的組合物，包括一種與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑。
55.一種破壞玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的組合物，包括與胞毒劑綴合的聚賴氨酸。
56.如權(quán)利要求54或55的破壞玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的組合物，其中所述胞毒劑選自皂草素和蓖麻毒蛋白。
57.如權(quán)利要求54或55的破壞玻璃體腔內(nèi)增殖性細(xì)胞的組合物，其中所述胞毒劑是皂草素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種破壞眼中視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞以防止發(fā)生增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病的方法。將含有與胞毒劑綴合的基膜結(jié)合劑的溶液導(dǎo)入玻璃體腔,將所述溶液在玻璃體腔內(nèi)保留足夠的時(shí)間,以使基膜結(jié)合劑與分布在玻璃體腔內(nèi)的基膜結(jié)合,然后從玻璃體腔中除去所述溶液,其中一部分基膜結(jié)合劑與玻璃體腔內(nèi)基膜結(jié)合,從而使位于基膜上的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞暴露于胞毒劑。
文檔編號(hào)A61K31/715GK1252001SQ9880406
公開日2000年5月3日 申請(qǐng)日期1998年1月28日 優(yōu)先權(quán)日1997年2月13日
發(fā)明者倫道夫·H·布雷頓 申請(qǐng)人:博士倫外科公司