專利名稱：用于治療眼部炎癥的含硝酮化合物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療眼部炎癥，如。更具體講，本發(fā)明涉及含硝酮化合物的藥物組合物及使用該組合物治療眼部炎癥的方法。
眼色素膜炎即眼色素膜，眼白后面中間層組織的炎癥。此疾病威脅到視力，在美國，有百分之十的致盲由其引起。眼色素膜炎的病因現(xiàn)尚不完全明確，但有許多全身性疾病與此有關(guān)。至少一種眼色素膜炎顯示其部分病因由游離基所致。
一般用類固醇，如地塞米松(dexamethasone)，治療眼色素膜炎。但長時間使用類固醇治療此種類癥會引起眼高壓及/或青光眼。因之需要有一種新的藥物組合物能有效地且安全地治療眼部炎癥，如眼色素膜炎。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)一些硝酮化合物可用于治療眼部炎癥，特別是眼外部及中部的炎癥，如眼色素膜炎?？捎糜诖四康牡南跬衔锇?，例如，α-(苯基)-N-叔丁基硝酮(PBN),5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物(DMPO)及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-叔丁基硝酮(POBN)及其衍生物。
過去曾有報告硝酮化合物是有用的治療劑。見，例如，美國專利Nos.5,025,032；5,036,097；5,527,828；5,532,277；及5,445,277；及已公開的PCT專利申請Nos.WO91/05552及WO92/22290。硝酮化合物，如PBN，也曾用作分析試劑用電子自旋共振(electron spinresonance)(ESR)來測定高反應(yīng)活性的游離基。見，例如，日本化學(xué)會志.，1994,67,165；Appl.Magn.Reson.,1992,3,1021；及Aldrichimica Acta.1979,12,23。文獻以下各參考文獻與眼色素膜炎及其治療有關(guān)1．Nussenblatt RB,Rodrigues MM,Wacker WB,Cevario SJ,andSalinas-Carmona MC.環(huán)孢菌素A抑制Lewis大鼠中試驗性自身免疫的眼色素膜炎，臨床研究雜志。67,1228-1231(1998)。
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現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)一些硝酮化合物可用以治療眼部炎癥炎，特別是眼睛外及中部的炎癥，如眼色素膜炎。本發(fā)明所用的一些硝酮化合物具有新的化學(xué)組成。
因此，一方面本發(fā)明涉及眼用藥物組合物，其含有藥用的眼用載體及治療眼睛發(fā)炎量的式Ⅰ5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物或其藥用鹽
其中每個R1獨立選自烷基，低級烷氧基，氨酰基，酰氧基，羥基及-CO2Y，其中Y是氫；R2選自氫，烷基及芳基；R3選自烷基，烯基，炔基，芳基，烷芳基，烷基環(huán)烷基，環(huán)烷基及環(huán)烯基；X是CH或N→O；及n是0至3的整數(shù)。
優(yōu)選每個R2獨立選自烷基，低級烷氧基及羥基。
優(yōu)選R2為氫或烷基。R2更優(yōu)選為氫。
優(yōu)選R3選自烷基，烷芳基，芳基及環(huán)烷基。R3更優(yōu)選為烷基或環(huán)烷基。R3尤優(yōu)選為烷基。特別優(yōu)選的烷基是叔丁基。
在上述式Ⅰ中，C優(yōu)選是CH，即芳基環(huán)是苯基或取代的苯環(huán)。優(yōu)選的取代的苯環(huán)包括，但不限于，3,5-二甲氧基-4-羥基苯基，3,5-二-叔丁基-4-羥基苯基及2-羥基苯基。
在本發(fā)明眼用藥物組合物中，眼用載體優(yōu)選是滅菌的水性載體或是油膏或膏載體。在優(yōu)選的具體實施例中，使用滅菌水性載體的眼用藥物組合物還含有一或多種選自氯芐烷銨及硫柳汞的添加劑。
在組合物的另一方面，本發(fā)明涉及眼用藥物組合物，其含有藥用的眼用載體及眼睛發(fā)炎治療量的選自下列的化合物α-(苯基)-N-叔丁基硝酮α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(3,5-二-叔丁基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(4-吡定基1-氧化物-N-叔丁基硝酮α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮，及5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物。
本發(fā)明進一步提供了選自如下的新化合物α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
此外，本發(fā)明提供了藥物組合物，其含有藥用惰性載體及治療發(fā)炎量的選自如下的化合物α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
在方法的一方面，本發(fā)明涉及治療患有眼部炎癥的哺乳動物的方法，此法包括給予哺乳動物含有藥用惰性載體及治療眼部炎癥量的5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物的或式Ⅰ化合物或其藥用鹽的藥物組合物
其中每個R1獨立選自烷基，低級烷氧基，氨?；?，酰氧基，羥基及-CO2Y，其中Y是氫；R2選自氫，烷基及芳基；R3選自烷基，烯基，炔基，芳基，烷芳基，烷基環(huán)烷基，環(huán)烷基及環(huán)烯基；X是CH或N→O；及n是0至3的整數(shù)。
在方法的另一方面，本發(fā)明涉及治療患有炎癥的哺乳動物的方法，此法包括給予哺乳動物含有藥用惰性載體及治療炎癥量的選自如下化合物的藥物組合物α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。


圖1為使用N-叔丁基-α-苯基硝酮(PBN)或生理鹽水(對照)治療以內(nèi)毒素引起的眼色層炎(EIU)的鼠的眼房水蛋白質(zhì)含量的比較。同時也顯示以PBN或生理鹽水治療的對照鼠的眼房水蛋白質(zhì)含量，如前所述，本發(fā)明眼用藥物組合物含一或多個硝酮化合物作為活性成分。在進一步說明本發(fā)明前，先說明以下各術(shù)語的定義。定義“烷基”指單價烷基，有1至12個碳原子，優(yōu)選是1至8個碳原子，更優(yōu)選是1至5個碳原子。此術(shù)語實例有，如，甲基，乙基，正-丙基，異丙基，正-丁基，異丁基，叔丁基，正-己基，正-辛基，叔辛基，等?！暗图壨榛敝赣?至5個碳原子的烷基。
“亞烷基”指二價的亞烷基，優(yōu)選是有1至10個碳原子，更優(yōu)選有1至6個碳原子，可以是直鏈或支鏈的。此術(shù)語實例有如亞甲基(-CH2-)，亞乙基(-CH2CH2-)，亞丙基異構(gòu)體(例如-CH2CH2CH2-及-CH(CH3)(CH2)等。
“亞烯基”指二價的亞烯基，優(yōu)選是有2至10個碳原子，更優(yōu)選是有2至6個碳原子，可以是直鏈或支鏈的，且有至少一個，優(yōu)選是1-2個不飽和烯基。此術(shù)語實例有，如，亞乙烯基(-CH-CH-)，亞丙烯基異構(gòu)體(例如，-CH=CHCH2-及-C(CH3)=CH-及-CH=C(CH3)-)等。
“烷芳基”指亞烷基芳基，優(yōu)選是亞烷基部分有1至10個碳原子，芳基部分有6至14個碳原子。此烷芳基的實例有，如，芐基，苯乙基等。
“烷基環(huán)烷基”一詞指亞烷基-環(huán)烷基，優(yōu)選是亞烷基部分有1至10個碳原子，環(huán)烷基部分有3至8個碳原子。此烷基環(huán)烷基的例有，-CH2-環(huán)丙基，-CH2-環(huán)戊基-CH2CH2-環(huán)己基，等。
“烷氧基”指“烷基-O-”。優(yōu)選的烷氧基包括，例如，甲氧基，乙氧基，正-丙氧基，異丙氧基，正-丁氧基，叔丁氧基，仲丁氧基，正-戊氧基等?！暗图壨檠趸敝竿榛?至5個碳原子。
“烯基”指有2至10個碳原子的烯基，優(yōu)選是有2至6個碳原子，且有至少1個，優(yōu)選是1-2個不飽和烯基。優(yōu)選的烯基包括乙烯基(-CH=CH2)，正-丙烯基(-CH2CH=CH2)，異丙烯基(-C(CH3)=CH2)等。
“炔基”指有2至10個碳原子的炔基，優(yōu)選是有2至6個碳原子，且有至少1個，優(yōu)選是1-2個不飽和炔基。優(yōu)選的炔基包括乙炔基(-CH≡CH2)，丙炔基(-CH2CH≡CH2)等。
“氨酰基”指-NRC(O)R基團，其中每個R獨立是氫或烷基。
“芳基”指有6至14個碳原子的單環(huán)(例如苯基)或多縮合環(huán)的(例如萘基或蒽基)的不飽和芳香碳環(huán)基團。優(yōu)選的芳基包括苯基，萘基等。除非受個別取代基的定義所限，此類芳基可被1至3個取代基選擇性取代，取代基選自烷基，烷氧基，氮?；Ｑ趸?，羥基等。
“環(huán)烯基”指3至10個碳原子的單環(huán)或多縮合環(huán)的環(huán)狀烷基，其可被1至3個烷基選擇性取代。環(huán)烷基包括，例如，單環(huán)結(jié)構(gòu)的如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)辛基，1-甲基環(huán)丙基，2-甲基環(huán)戊基，2-甲基環(huán)辛基，等，或多環(huán)結(jié)構(gòu)如金剛烷基等。
“環(huán)烯基”指4至10個碳原子的單環(huán)及至少一內(nèi)部點不飽和的環(huán)狀烯基，其可被1至3個烷基選擇性取代。環(huán)烯基包括，例如，環(huán)戊-3-烯基，環(huán)己-2-烯基，環(huán)辛-3-烯基等。
“藥用鹽”指衍生自本領(lǐng)域已知的各種有機或無機相對離子的藥用鹽，包括，例如，鈉，鉀，鈣，鎂，銨，四烷基銨等；當(dāng)分子含有堿性官能團時，可與有機或無機酸成鹽，如鹽酸，氫溴酸，酒石酸，甲磺酸，醋酸，馬來酸，草酸等所成的鹽?！八幱藐栯x子”指酸性官能基團的藥用陽性相對離子。陽離子的例有鈉，鉀，鈣，鎂，銨，四烷基銨，等。硝酮化合物本發(fā)明藥物組合物使用的優(yōu)選硝酮包括α-(苯基)-N-叔丁基硝酮(PBN),5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物(DMPO)及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-叔丁基硝酮(POBN)及其衍生物。此等化合物特優(yōu)選的衍生物包括羥基衍生物，如α-(2-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮；α-(3-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮及α-(4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮；二羥基及三羥基衍生物，如α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮；酯衍生物，特別是釋出2-,3-或4-羥基衍生物的酯，如α-(2-乙酰氧基苯基)-N-叔丁基硝酮，α(3-乙酰氧基苯基)--N-叔丁基硝酮，α-(4-乙酰氧基苯基)-N-叔丁基硝酮；羥基衍生物，如α-(-2羧基苯基)-N-叔丁基硝酮，α-(3-羧基苯基)-N-叔丁基硝酮及α-(4-羧基苯基)-N-叔丁基硝酮；及乙酰氨基衍生物，如α-(2-乙酰氨基苯基)-N-叔丁基硝酮，α-(3-乙酰氨基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-乙酰氨基苯基)-N-叔丁基硝酮。其他優(yōu)選的化合物包括二苯基硝酮(PPN)及相似的二苯基硝酮衍生物；α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮；α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮；及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
用于本發(fā)明的特優(yōu)選的一組硝酮化合物是式Ⅰ化合物或其藥用鹽；
其中每個R1獨立選自烷基，低級烷氧基，氨?；?，酰氧基，羥基及-CO2Y，其中Y是氫；R2選自氫，烷基及芳基；R3選自烷基，烯基，炔基，芳基，烷芳基，烷基環(huán)烷基，環(huán)烷基及環(huán)烯基；X是CH或N→O；及n是0至3的整數(shù)。
應(yīng)了解到，有些上述化合物可以鹽存在，即羧基衍生物。在此情況下，此化合物可離子化，產(chǎn)生藥用陰離子及陽離子。最普通的是，陽離子是一價物質(zhì)，如鈉，鉀或銨，但也可是與藥用一價陰離子結(jié)合的多價陽離子，如鈣與氯、溴、碘、羥基、硝酸、磺酸、醋酸、酒石酸、草酸、丁二酸、棕櫚酸等陰離子結(jié)合；鎂也可與這些陰離子結(jié)合；鋅也可與這些陰離子結(jié)合等。
如需要，本發(fā)明藥物組合物及方法中可使用二或多個硝酮化合物。一般合成步驟本發(fā)明所用硝酮化合物可由市場購得，也可用易于購得的起始物依下述一般方法及步驟制備。應(yīng)了解到，除非另有說明，一般是使用較常用的反應(yīng)條件(即反應(yīng)溫度，時間，反應(yīng)物摩爾比，溶劑，壓力等)，也可用其他反應(yīng)條件。適宜的反應(yīng)條件會因所用特定反應(yīng)物或溶劑而改變，但此等反應(yīng)條件可由本領(lǐng)域技術(shù)人員以合理的最佳步驟決定。
此外，本領(lǐng)域人員會了解到，可能需要常用的保護基以防止一些官能基團進行不需要的反應(yīng)。特定官能基團的適宜保護基的選擇以及各種官能基團的保護及去保護的適宜條件都是本領(lǐng)域已知的。例如，于T.W.Greene and G.M.Wuts所著有機合成中保護基，Second Edition,Wiley,New York,1991及其內(nèi)所列參考資料即說明多種保護基及其引入與去除。
在優(yōu)選合成方法中，本發(fā)明所用硝酮化合物在常規(guī)反應(yīng)條件下通過式Ⅱ羰基化合物
其中R1,R2,C及n的定義如上述，與式Ⅲ羥基胺偶合HO-NH-R3Ⅲ
其中R3的定義如上述來制備。
偶合反應(yīng)一般是將羰基化合物Ⅱ與至少一當(dāng)量優(yōu)選約1.1至約2當(dāng)量的羥基胺Ⅲ在惰性極性溶劑，如水，甲醇，乙醇，1,4-二噁烷，四氫呋喃，二甲基亞砜，二甲基甲酰胺中進行。此反應(yīng)優(yōu)選在約0℃至約100℃進行約1至48小時。此反應(yīng)視需要可加催化量的酸，如醋酸，對-甲苯磺酸等。在反應(yīng)完了時，式Ⅰ硝酮化合物可用常規(guī)方法收集，如沉淀，色譜，過濾，蒸餾等。
偶合反應(yīng)中所用式Ⅱ羰基化合物是已知的或可常規(guī)用方法制備。優(yōu)選的羰基化合物包括，但不限于，苯甲醛，2-羥基苯甲醛，3-羥基苯甲醛，4-羥基苯甲醛，2,4,6-三羥基苯甲醛，3,5-二-叔丁基-4-羥基苯甲醛，3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲醛，4-甲?；拎?1-氧化物等。
式Ⅲ羥基胺化合物是已知的或可從已知化合物用常規(guī)方法制備。式Ⅲ羥基胺化合物一般是用適宜的催化劑，如活化鋅/乙酸催化劑或鋁/汞齊催化劑使對應(yīng)的硝基化合物(即R3-NO2，其中R3定義如上所述)還原制備。反應(yīng)一般是在水性反應(yīng)介質(zhì)，如醇/水混合物(在用鋅催化劑時)或醚/水混合物(在用鋁/汞齊催化劑時)中于約15℃至約100℃進行約0.5至12小時，優(yōu)選是約2至約6小時。脂肪族硝基化合物(以鹽的形式)也可用硼在四氫呋喃中還原成羥基胺。因為有些羥基胺不太穩(wěn)定，這些化合物一般是在與式Ⅱ羰基化合物反應(yīng)前臨時制備。
本發(fā)明所用羥基胺優(yōu)選包括，但不限于，N-甲基羥基胺，N-乙基羥基胺，N-正-丙基羥基胺，N-異丙基羥基胺，N-正-丁基羥基胺，N-異丁基羥基胺，N-仲丁基羥基胺，N--叔丁基羥基胺，N-正-戊基羥基胺，N-環(huán)戊基羥基胺，N-正-己基羥基胺，N-環(huán)己基羥基胺，N-正-辛基羥基胺，N-叔辛基羥基胺，N-苯基羥基胺等。更優(yōu)選的是N-叔丁基羥基胺。藥物組合物本發(fā)明所用硝酮化合物(包括其鹽)優(yōu)選配成適于局部給藥的眼用藥物組合物。
局部制劑可包括局部眼用液，其含有一或多種溶于或懸浮于無菌的、等張力的常規(guī)水性藥用眼用載體中的硝酮化合物。局部制劑也可制成油膏或膏的形式。此類油膏或膏一般含一或多種溶于或懸浮于滅菌的、藥用油膏或膏基質(zhì)(如無機油-白磷脂基質(zhì))中的硝酮化合物。
局部制劑可包括約0.01％重量比至約10％重量比的活性硝基酮化合物，其余為載劑及其它本領(lǐng)域已知的局部藥用成分。這些添加的成分包括緩沖劑，表面活性劑，助溶劑，防腐劑，乳化劑，等張劑，穩(wěn)定劑，pH調(diào)節(jié)劑等。
用于滅菌的等張力溶液中的優(yōu)選添加物包括，但不限于，氯芐烷銨，乙基汞硫代水楊酸鈉，氯乙醇，氯化鈉，硼酸及它們的混合物。在優(yōu)選具體實施例中，氯芐烷銨作為抗微生物防腐劑加入，加入的量約0.001至約0.02重量百分比，優(yōu)選0.01重量百分比。在另一優(yōu)選具體實施例中，乙基泵硫代水楊酸鈉作為抗微生物防腐劑加入，加入的量約為0.005至約0.02重量百分比。在油膏或膏組合物中，制劑中也可包括無水羊毛脂。乙基汞硫代水楊酸鈉或氯丁醇作為抗微生物劑也優(yōu)選被加到膏狀組合物中。
另外，硝酮化合物的全身用制劑也可用于治療眼部炎癥。此全身用制劑可通過各種途徑給予，包括口服。經(jīng)皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、及鼻內(nèi)。視給藥途徑，本發(fā)明化合物優(yōu)選調(diào)配成注射或口服組合物?？诜o藥的組合物可以是批量的液體溶液或懸浮液形式，或是批量的散劑形式。但最常用的是此組合物為單位劑量以便給予準(zhǔn)確劑量?！皢挝粍┝俊币辉~位意為物理上分散的單位，適于以單位劑量給予人或其他哺乳動物，每一單位含可產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性成分，以及適宜的藥用賦形劑。典型的單位劑型包括液體組合物的預(yù)裝的及預(yù)定量的安瓿或注射器，或如為固體組合物，則為丸。片劑、膠囊等。在這些組合物中，硝酮化合物一般是小量成分(約0.1至約50％重量比，或優(yōu)選約1至約40％重量比)，其余為載體或賦形劑及有助于制成所需劑型的加工助劑。
適于口服給藥的液體形式可包括適宜的水性或非水性的帶緩沖劑的載體，懸浮及分散劑，著色劑，矯味劑等。固體形式可包括下述任何成分，或類似性質(zhì)的化合物粘合劑如微晶縫合纖維素，黃蓍膠或明膠；賦形劑如乳糖；崩解劑如藻酸，Primogel，或玉米淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂；滑動劑如膠狀二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；或矯味劑如薄荷，水楊酸甲酯，或橘味調(diào)料。
可注射的組合物一般以可注射的滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖的生理鹽水或其它本領(lǐng)域已知的可注射的載體為基礎(chǔ)。如前所述，這些組合物中的硝酮化合物一般是少量的，一般約0.05至10％重量百分比，其余為可注射的載體等。
上述供口服給藥的或注射的組合物的成分只是代表性的。其他物料以及加工技術(shù)見Remington’s Pharmaceutical Sciences (17thedition,1985,Mack Publishing Company,Easton,Pennsylvania)第8部分所述，在此插入供參考。
本發(fā)明所用硝酮化合物也可以持續(xù)釋放形式，或由持續(xù)釋放藥物轉(zhuǎn)運系統(tǒng)給予。有關(guān)代表性的持續(xù)釋放物料也可見所附Remington’s Pharmaceutical Sciences。
下述制劑實施例說明適于全身給予本發(fā)明硝酮化合物的藥物組合物。但本發(fā)明并不限于以下舉例的藥物組合物。
制劑1-眼用滴劑將硝酮化合物，如PBN(0.5克)，硼酸(1.8克)，氯芐烷銨(0.005克)混合并溶于純化的無菌水內(nèi)，用1N的氫氧化鈉將溶液pH調(diào)整至約7.3。然后加純化無菌水至總?cè)莘e為100毫升，將此溶液以過濾滅菌。
制劑2-眼用油膏將硝酮化合物，如PBN，與無機油及白礦脂混合，形成含活性硝酮化合物為0.05重量百分比的油膏。
制劑3-口服片劑將硝酮化合物，如PBN，以1∶10重量比與無水明膠粘合劑混合成干粉。加少量硬脂酸鎂作為潤滑劑。將此混合物于壓片機上制成240-270毫克的片劑(每片含20-30毫克活性硝酮化合物)。
制劑4-口服膠囊將硝酮化合物，如PBN，以1∶4重量比與淀粉稀釋劑混合成干粉。將此混合物裝入250毫克的膠囊內(nèi)(每個膠囊含50毫克活性硝酮化合物)。
制劑5-液體溶液將硝酮化合物，如DMPO(50毫克)，蔗糖(1.75克)及黃蓍膠(4毫克)混合，用美國No10目篩篩過，再與預(yù)制好的微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉(11∶89,50毫克)的水溶液混合。將苯甲酸鈉(10毫克)，矯味劑及著色劑用水稀釋，在攪拌下加入前面混合物內(nèi)。然后加足量的水使總?cè)莘e為5毫升。
制劑6-注射液將硝酮化合物，如PBN，溶于緩沖的無菌的可注射生理鹽水內(nèi)，使?jié)舛燃s為5毫克/毫升。
應(yīng)了解到，此處所述的任何硝酮化合物，考慮其溶解度、分散性等性質(zhì)后，都可用于這些代表制劑物中。且任一這些制劑都可以前述任一方式給予以治療眼部炎癥。
治療的疾病及治療方案以本發(fā)明眼用藥物組合物治療的疾病一般包括眼部炎癥及屬于眼部炎癥定義內(nèi)的各種癥狀。這些疾病包括，例如，色素層炎。給予本發(fā)明提供的含硝酮的制劑可使眼睛的炎癥減輕。要達到此效果，可將局部制劑通過滴注適宜的局部溶液或油膏直接給予眼睛以減輕眼睛的炎癥。一般適宜的劑量是約0.001毫克/公斤至約10毫克/公斤。這樣的劑量可以是單一劑量，但一般是在患病期間每天給予2至5個劑量。藥物組合物的全身給予可為約0.001至約100毫克/公斤/劑量，每天給予1至5個劑量，使總劑量為約0.001毫克/公斤/小時至約10毫克/公斤/小時，此總劑量作用1至約120小時，特別是1至96小時。
在任何治療方案中，應(yīng)由醫(yī)生評估病人的疾病以決定病人是否能由使用硝酮治療取得利益。有時需常規(guī)的調(diào)整劑量以達到適宜投藥量。
本發(fā)明化合物可作為唯一活性成份給予，也可與其它藥物，包括其他活性硝酮化合物，聯(lián)合給予。
應(yīng)了解到，本發(fā)明所提供的新硝酮化合物，包括α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮，因具有抗炎性質(zhì)，在全身給予時也有其他醫(yī)藥用途，全身給予時優(yōu)選口服或非腸道給予，劑量為約0.001至約100毫克/公斤/劑量，每天給予1至5個劑量，使總劑量為約0.001毫克/公斤/小時至約10毫克/公斤/小時，此總劑量作用1至約120小時，特別是1至96小時。
實施例下述合成及生物學(xué)實施例用以說明本發(fā)明，但不能從任何方面理解為對本發(fā)明的限制。
實施例1α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮的合成將注射器醛(5.47克，0.030摩爾)溶于回流中的苯(100毫升)內(nèi)，滴加N-叔丁基羥基胺(2.67克，0.030摩爾)于50亳升苯內(nèi)之溶液。將此反應(yīng)物于室溫靜置過液，然后過濾，汽提去溶劑，殘余物用乙酸乙酯洗，得灰綠色粉(1.54克，產(chǎn)率20.3％)。此產(chǎn)物熔點為163-1 64℃于二氧化硅凝膠薄層色譜(TLC)(100℃乙酸乙酯)比移值(Rf)為0.27(注射器醛Rf=0.75)。
色譜數(shù)據(jù)如下1H NMR(CDCl3):δ=7.703ppm(s,2H，芳基，2,6-H’s)，7.454ppm(s,1H，硝酮基-H),5.290ppm(s,1H，苯氧基-H),3.933(s,6H,CH3O-),1.611pp,m(s,9H，叔丁基-CH3)。
13C NMR(CDCl3):δ=146.80ppm(芳基，3,5-C),137.16ppm(芳基4-C),129.93ppm(硝酮基-C),122.83ppm(芳基1-C),106.95ppm(芳基2,6-C),70.42ppm(C(CH3)3),56.50(CH30-),28.41ppm(C(CH3)3)。
實施例2α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮的合成將2,4,6-三羥基苯甲醛(17.69克，0.115摩爾)加到N-叔丁基羥基胺(14.32克，0.161摩爾)于苯(250毫升)內(nèi)的溶液中。加對-甲苯磺酸(15毫克)，反應(yīng)器上裝Dean Stark。此反應(yīng)物于氮氣下回流加熱88小時，然后用500毫升乙酸乙酯稀釋。溶液用水、鹽水洗，于硫酸鈉上干燥。用乙醇/水重結(jié)晶產(chǎn)物，然后于35℃真空干燥2小時，制得16.95克(產(chǎn)率65.5％)標(biāo)題化合物。此產(chǎn)物熔點為189.9-190.3℃，于二氧化硅凝膠薄層色譜(TLC)(50％己烷，45％乙酸乙酯，5％甲醇)比移值(Rf)為0.31(2,4,6-三羥基苯甲醛Rf=0.47)。
色譜分析數(shù)據(jù)如下1H NMR(DMSO-d6):δ=11.88ppm(s,0.2H，苯氧基-H),9.801ppm(s,0.8H，苯氧基-H),7.948ppm(s,1H,硝酮基-H),5.746ppm(s,2H，芳基，3,5-H’s),1.497ppm(s,9H，叔丁基-CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)；δ=164.48ppm(芳基4-C),161.93ppm(芳基，2,6-C),133.91ppm(硝酮基-C),99.15ppm(芳基1-C),95.46ppm(芳基3,5-C),68.61ppm(C(CH3)3),27.82ppm(C(CH3)3)。
FTIR(KBr Pellet:3465cm-1)(O-H伸縮)，2983cm-1(C-H脂肪族伸縮)，1626cm-1(C=N伸縮)，1173cm-1(N-O伸縮)。
實施例3α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮的合成將于40毫升甲醇內(nèi)的N-正-丙基羥基胺(1.62克，0.021摩爾)加到甲醇(40毫升)內(nèi)的吡啶-4-羧醛1-N-氧化物(2.21克，0.018摩爾)內(nèi)。加入Hcl，將混合物回流加熱16小時，汽提去溶劑，殘余物用己烷滌滌，得3.20克標(biāo)題化合物(產(chǎn)率98％)。此產(chǎn)物熔點為113.1-115.5℃。
色譜數(shù)據(jù)如下1H NMR(CDCl3):δ=8.142ppm(s,4H，芳基-H),7.384ppm(s,1H，硝酮基-H)(),3.915ppm(t,J=7.0Hz,2H,丙基H’s),2.017ppm(q,J=7.3Hz,2H，丙基H’s),1.005ppm(t,J=7.3Hz,3H，丙基H’s)。
實施例4內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎的治療給予試驗實物次致死量的脂多糖(LPS)，使其眼睛前部產(chǎn)生特征性炎癥。此一稱作內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎(EIU)的暫時的但強列的反應(yīng)用作眼色素膜炎癥模型。此炎癥反應(yīng)通過測定動物眼房水內(nèi)的蛋白質(zhì)檢測。在此實施例中，顯示了α-(苯基)-N-叔丁基硝酮(PBN)有效地治療由內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎的能力。PBN一般可從Aldrich,Milwaukee,Wisconsin,USA，購得。
將雌性Lewis鼠，8-10周齡，重170-200克，置于12小時亮/暗循環(huán)的環(huán)境內(nèi)，任其自由飲食。所有動物試驗都遵從NIH的動物飼養(yǎng)與使用原則。皮下注射于生理鹽水中的750克/公斤L(fēng)PS(由大腸菌(Escherichia coli))制得的內(nèi)毒素，血清型055；B5,Lot 34H4133,Sigma Chemical Co)使Lewis鼠發(fā)展成內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎(EIU)，然后立即腹腔內(nèi)注射(PBN)或生理鹽水安慰劑。6小時后注射第二等量的PBN或安慰劑。制備LPS溶液，給鼠注射，每公斤1毫升(對于在750微克/公斤試驗中，LPS溶液內(nèi)含750微克/毫升)。以PBN的生理鹽水溶液(20毫克/毫升)給予PBN，劑量為100毫克/公斤體重。注射LPS24小時后通過吸入CO2將動物處死。處死后立即用吸量管抽取眼房水并分析其蛋白質(zhì)含量。
以Smith法[PK Smith等，Anal Biochem,150,76(1975)]使用BCA-1蛋白測定盒(Sigma Chemicai Co)進行眼房水取樣的蛋白質(zhì)測定。各眼房水樣品都編號以排除分析偏差。由每一眼房水樣品容器內(nèi)抽取5微升，與試管內(nèi)的95微升水混合。然后每一管內(nèi)加2毫升蛋白質(zhì)測定試劑。將每一試管渦旋，然后于37℃水浴內(nèi)培養(yǎng)30分鐘。將試管冷至室溫。使用Carry分光光度劑(用水使儀器掃零)于562nm處測定吸光率。由相伴測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程式計算眼房水樣品的蛋白質(zhì)含量。
此實驗結(jié)果見下表1及圖1。用Student’s t-Test分析所得數(shù)據(jù)，表明LPS+生理鹽水水明顯地不同于空白組(生理鹽水+生理鹽水)，陰性對照組(生理鹽水+PBN)，及樣品組(LPS+PBN),p＜0.05(見下表1)。
表1眼房水中蛋白質(zhì)含量
表1數(shù)據(jù)表明，由眼房水中蛋白質(zhì)含量測定可知LPS產(chǎn)生明顯的炎癥，PBN能有效地治療由內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎。
實施例5內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎的治療此實施例表明各種硝酮化合物治療內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎的能力。此實施例所用硝酮可由市場購得或可用本領(lǐng)域已知的方法制得。
此實施例使用的Lewis雄鼠(Harlan Spragus Dawley,Inc.,Indianapolis,IN,USA)，體重200至250克，因為這種鼠及此性別易產(chǎn)生內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎(EIU)。研究期間把鼠關(guān)在籠內(nèi)，每籠1-3只。動物接受Purina實驗室食物(Purina RodentDiet 50-02,PMI Feeds,Inc.,St.Louis,MO.USA)及去離子水(18.2兆歐姆，使用Milli Q水純化系統(tǒng)，Millipore Corporation,Bedford,MA,USA，純化)，任其自由飲食。
為引起EIU，于0時間給鼠作足底注射用生理鹽水稀釋至250微克/毫升的脂多糖(由血清型055:B5大腸菌(E.coli)制得的LPS,L-2880,Sigma Chemical Co.,St,Louis,MO,USA)。足底注射LPS后，立即給鼠腹腔內(nèi)注射或經(jīng)口給予硝酮化合物或?qū)φ蛰d體。6小時后再給予硝酮化合物或載體(下示者例外)。硝酮給予的標(biāo)準(zhǔn)濃度為100毫克/公斤，劑量容積為1毫升/公斤。也分別腹腔內(nèi)給予1毫克/公斤或經(jīng)口給予75毫克/公斤消炎痛(dexamethasone)及環(huán)孢菌素(cyclosporin)作為比較。
24小時后吸入CO2將動物處死，用26號針(Hamilton,Co.Reno,NV)由每一眼抽取10微升眼房水。將由單一動物取得的二份眼房水樣品與50微升生理鹽水放在微離心管內(nèi)合并，冰上保存。使用小等份的稀釋樣品立即用血球計數(shù)器(Hausser Scientific,Horsahm,PA,USA)及Nikon Diaphot 300光顯微鏡作細(xì)胞計數(shù)。只計數(shù)活細(xì)胞。
剩余的眼房水樣品以3500轉(zhuǎn)/分鐘在微離心管中離心(FisherScientific,Pittsburgh,PA,USA)10分鐘。用Bicinchoninic AcidProtein kit(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO,USA)在樣品收取后6小時測定上清液的蛋白質(zhì)含量。
以Student’s t-test比較治療的和未治療的動物的蛋白質(zhì)濃度及細(xì)胞計數(shù)。以試驗化合物與未治療的對照組比較所得的保護百分比見下表2。
表2試驗化合物所得保護百分比
1此化合物只于0時間給予一次。
表1中的數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明藥物組合物中所用的硝酮化合物有效地防止內(nèi)毒素引起的眼色素膜炎。
由前述說明中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可作各種修改及變化。所有這些修改都包括在所附權(quán)利要求書內(nèi)。
權(quán)利要求
1．眼用藥物組合物，其含有藥用的眼用載體及眼睛發(fā)炎治療的5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物或式Ⅰ化合物或其藥用鹽
其中每個R1獨立選自烷基，低級烷氧基，氨?；?，酰氧基，羥基及-CO2Y，其中Y是氫；R2選自氫，烷基及芳基；R3選自烷基，烯基，炔基，芳基，烷芳基，烷基環(huán)烷基，環(huán)烷基及環(huán)烯基；X是CH或N→O；及n是0至3的整數(shù)。
2．權(quán)利要求1的眼用藥物組合物，其中每一R1獨立選自烷基，低級烷氧基及羥基。
3．權(quán)利要求1的眼用藥物組合物，其中R2是氫。
4．權(quán)利要求1的眼用藥物組合物，其中R3選自烷基及環(huán)烷基。
5．權(quán)利要求1的眼用藥物組合物，其中R3是叔丁基。
6．權(quán)利要求1的眼用藥物組合物，其中眼用載體是無菌的水性栽體。
7．權(quán)利要求6的眼用藥物組合物，其中此組合物還含有一或多個選自氯芐烷銨及乙基汞硫代水楊酸鈉的添加劑。
8．權(quán)利要求1的眼用藥物組合物，其中眼用載體是油膏或軟膏載體。
9．一種眼用藥物組合物，其含有藥用的眼用載體及眼睛發(fā)炎治療量的選自下列的化合物α-(苯基)-N-叔丁基硝酮α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(3,5-二-叔丁基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(4-吡定基1-氧化物-N-叔丁基硝酮α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮，及5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物。
10．權(quán)利要求9的眼用藥物組合物，其中化合物是α-(苯基)-N-叔丁基硝酮。
11．權(quán)利要求9的眼用藥物組合物，其中化合物是α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮。
12．一種治療哺乳動物眼睛發(fā)炎的方法，此方法包括給予哺乳動物含藥用惰性載體及眼睛發(fā)炎治療量的式Ⅰ之5,5-二甲基吡咯啉-N-氧化物的藥物組合物或其藥用鹽
其中每一R1獨立選自烷基，低級烷氧基，氨?；Ｑ趸?，羥基及-CO2Y，其中Y是氫；R2選自氫，烷基及芳基；R3選自烷基，烯基，炔基，芳基，烷芳基，烷基環(huán)烷基，環(huán)烷基及環(huán)烯基；X是CH或N→O；及n是0至3的整數(shù)。
13．權(quán)利要求12的方法，其中該藥物組合物是局部給藥。
14．權(quán)利要求13的方法，其中該藥物組合物是以眼滴劑給藥的。
15．權(quán)利要求13的方法，其中該藥物組合物是以眼用油膏或軟膏給藥的。
16．權(quán)利要求12的方法，其中該藥物組合物是全身給藥的。
17．權(quán)利要求16的方法，其中該藥物組合物是口服給藥的。
18．權(quán)利要求16的方法，其中該藥物組合物是以非腸道給藥的。
19．權(quán)利要求18的方法，其中該藥物組合物是注射給藥的。
20．權(quán)利要求12的方法，其中該化合物是選自α-(苯基)-N-叔丁基硝酮α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(3,5-二-叔丁基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(4-吡定基1-氧化物-N-叔丁基硝酮α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
21．權(quán)利要求20的方法，其中化合物是α-(苯基)-N-叔丁基硝酮。
22．權(quán)利要求20的方法，其中化合物是α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮。
23．選自下面的化合物α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
24．α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮。
25．α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮。
26．α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
27．一種藥物組合物，其含有藥用惰性載體及發(fā)炎治療量的選自下列的化合物α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
28．一種治療發(fā)炎的哺乳動物的方法，此方法包括給予哺乳動物藥物組合物，其含有藥用惰性載體及發(fā)炎治療量的選自下列的化合物α-(3,5-二甲氧基-4-羥基苯基)-N-叔丁基硝酮α-(2,4,6-三羥基苯基)-N-叔丁基硝酮，及α-(4-吡啶基1-氧化物)-N-正-丙基硝酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有藥用的眼用載體及治療炎癥量的硝酮化合物的眼用藥物組合物,也涉及使用此藥物組合物治療眼部炎癥疾病,如眼色素膜炎的方法。
文檔編號A61K31/00GK1219130SQ97194855
公開日1999年6月9日 申請日期1997年4月23日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月23日
發(fā)明者K·W·納杜希, E·杜茨曼, J·M·卡內(nèi), A·L·維爾科克斯 申請人:桑道藥品有限會司