專(zhuān)利名稱(chēng)：：RNAi介導(dǎo)的脾酪氨酸激酶相關(guān)炎性病癥的抑制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及干擾RNA組合物的領(lǐng)域，所述干擾RNA組合物用于沉默脾酪氨酸激酶(Syk)和用于治療Syk相關(guān)炎性病癥(Syk-relatedinflammatorycondition)。所述病癥例如包括變應(yīng)性結(jié)膜炎、眼部炎癥(ocularinflammation)、皮炎、鼻炎、津喘、變態(tài)反應(yīng)或肥大細(xì)胞病。
背景技術(shù)：
：變應(yīng)性結(jié)膜炎、眼部炎癥、皮炎、鼻炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)和肥大細(xì)胞病歷史上是以下述方法治療口服、鼻內(nèi)或局部施用抗組胺劑，或者口服或鼻內(nèi)施用類(lèi)固醇，或者在變態(tài)反應(yīng)情況下注射變應(yīng)原治療。全身療法通常需要施用更高濃度的藥物化合物，以提供到達(dá)所需治療位點(diǎn)的有效濃度?？菇M胺類(lèi)化合物已知具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活性；困倦和粘膜干燥通常是抗組胺劑使用的副作用。通過(guò)免疫受體例如IgE受體(FcsRI)的信號(hào)傳導(dǎo)包括募集和激活信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的多個(gè)組分，包括非受體酪氨酸激酶，S沐。Syk激活導(dǎo)致PLCY和PI3K途徑的激活并且最終導(dǎo)致肥大細(xì)胞脫顆粒作用和激活。靶向SykmRNA會(huì)降低Syk蛋白水平并且中斷FcsRI途徑。這種作用會(huì)千擾IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒作用并且釋放組胺和其他的促炎介質(zhì)。在氣道內(nèi)使用氣溶膠化反義Syk激酶來(lái)抑制過(guò)敏性炎癥由Stenton,G.R.等報(bào)道(J/mmw朋/.169:1028-1036(2002))。通過(guò)在支氣管上皮細(xì)胞系HS-24中和卯清蛋白(OA)誘導(dǎo)哮喘的大鼠模型中的短千擾RNA的方法來(lái)抑制Syk表達(dá)，據(jù)報(bào)道其抑制了所誘導(dǎo)的炎性應(yīng)答的標(biāo)志的表達(dá)(在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第WO2005007623號(hào)中公布)。使用靶向FCsRlA的短發(fā)夾RNA抑制包括在IgE產(chǎn)生中的基因表達(dá)，和治療IgE介導(dǎo)的疾病例如哮喘和過(guò)敏性鼻炎在公布的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第WO2005085443號(hào)中才艮道。這些文獻(xiàn)中沒(méi)有一個(gè)公開(kāi)了本發(fā)明的干擾RNA。22219v.l45263/P022WO2關(guān)于靶向Syk酪氨酸激酶需要額外試劑和治療方法，以此阻斷內(nèi)源性肥大細(xì)胞脫顆粒作用，并且釋放組胺和其他的促炎介質(zhì)而避免全身性抗組胺劑治療的副作用。本發(fā)明的實(shí)施方式解決了本領(lǐng)域?qū)@種試劑和治療方法的需求。
發(fā)明內(nèi)容通過(guò)提供強(qiáng)有力的和高效的治療、預(yù)防或介入Syk相關(guān)炎性病癥，本發(fā)明的實(shí)施方式克服了現(xiàn)有技術(shù)的這些和其他缺點(diǎn)。在一方面，本發(fā)明的的患者，所述方法是通過(guò)施用沉默SykmRNA表達(dá)的干擾RNA，因而干擾PLCy和PI3K的信號(hào)傳導(dǎo)途徑、并且預(yù)防與肥大細(xì)胞脫顆粒作用相關(guān)的級(jí)聯(lián)事件，而且在Syk相關(guān)炎性病癥中釋放組胺和其他的促炎介質(zhì)。本發(fā)明是直接關(guān)于靶向SykmRNA并且因此千擾SykmRNA表達(dá)的干擾RNA。本發(fā)明的干擾RNA用于治療患有Syk相關(guān)炎性病癥或具有形成Syk相關(guān)炎性病癥的危險(xiǎn)的患者。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是一種在受治療者中弱化SykmRNA表達(dá)的方法，所述方法包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的千擾RNA、以及藥學(xué)上可"^妄受的載體。SykmRNA表達(dá)由此而弱化。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是一種在需要對(duì)其治療的受治療者中治療Syk相關(guān)炎性病癥的方法。所述方法包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體。Syk相關(guān)炎性病癥由此而治療。在一個(gè)實(shí)施方式中受治療者是人并且所述人患有Syk相關(guān)炎性病癥以及，在另一個(gè)實(shí)施方式中，受治療者是人并且所述人具有形成Syk相關(guān)炎性病癥的危險(xiǎn)。對(duì)于上述引用的實(shí)施方式，所述的干擾RNA包括一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核香酸的區(qū)域，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸與mRNA3，端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性，所述mRNA相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13—40和SEQIDNO:44—47中4壬一個(gè)。上述引用方法的另外的實(shí)施方式中，所述組合物進(jìn)一步包括具有19至49個(gè)核香酸長(zhǎng)度以及包括至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域的第二種干擾RNA，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸具有與第二種mRNA3'端次末端的13個(gè)核苷酸至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性，所述第二種mRNA相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，提供一種在受治療者中弱化SykmRNA表達(dá)的方法，所述方法包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，并且所述干擾RNA包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性(contiguouscomplementarity)的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域，其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸。所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA，其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:l相應(yīng)，包括第1007、1698或1769位核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述反義鏈與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，以第1007、1698或1769位核苷酸起始，并且所述反義鏈具有19或20個(gè)核普酸長(zhǎng)度。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是在需要對(duì)其治療的受治療者中治療Syk相關(guān)炎性病癥的方法，所述方法包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域；其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸。所述Syk相關(guān)炎性病癥由此而治療。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA,其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:l相應(yīng)，包括第1007、1698或1769位核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述反義鏈與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQTDNO:1相應(yīng)，以第1007、1698或1769位核苷酸起始，并且所述反義鏈具有19或20個(gè)核香酸長(zhǎng)度。具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的第二種干擾RNA也能^皮施用到受治療者；所述第二種干擾RNA包括有義核香酸鏈，反義核普酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域，其中所述第二種干擾RNA的反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的第二個(gè)部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸。具有19至49個(gè)核香酸長(zhǎng)度的第二種干擾RNA能施用到受治療者，其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，包括第1007、1698或1769位核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述反義鏈與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，以第1007、1698或1769位核苷酸起始，并且所述反義鏈具有19或20個(gè)核香酸長(zhǎng)度。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是弱化受治療者的SykmRNA表達(dá)的方法，所述方法包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的單鏈干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述單鏈千擾RNA在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA與SEQIDNO:1相應(yīng)，包括上述鑒定的核苷酸。作為另一個(gè)實(shí)施方式本發(fā)明包括一種組合物，所述組合物包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度以及包括相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的千擾RNA;和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方式是一種組合物，所述組合物包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并且包括相應(yīng)于SEQIDNO:41-47中任一個(gè)的核香酸序列或其互補(bǔ)序列的干擾RNA;和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是一種在需要對(duì)其治療的受治療者中治療眼部炎癥或結(jié)膜炎的方法，所述方法包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括雙鏈siRNA分子，其經(jīng)由RNA千擾而下調(diào)Syk基因的表達(dá)，其中siRNA分子的每條鏈獨(dú)立具有大約19至大約27個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度；以及siRNA分子的一條鏈包括與相應(yīng)于Syk基因的mRNA大致互補(bǔ)的核苦酸序列，使得所述siRNA分子經(jīng)由RNA干擾直接切割所述mRNA。這種方法的另一個(gè)實(shí)施方式中，siRNA分子的每條鏈獨(dú)立具有大約19至大約25個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度，或大約19至大約21個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。如本文描述的任何實(shí)施方式在制備用于弱化本文所示SykmRNA表達(dá)的藥物的用途也是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式。圖1提供了293FT細(xì)胞的SYK蛋白質(zhì)印跡，所述293FT細(xì)胞用弁2、#5、#6和#8的SYKsiRNA,和無(wú)RISC的對(duì)照siRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染，每種以10nM、1nM和0.1nM;用10nM的非耙向?qū)φ誷iRNA(NTC2)進(jìn)行轉(zhuǎn)染；以及用緩沖液對(duì)照(-siRNA)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。箭頭指示72-kDaSYK和42-kDa肌動(dòng)蛋白條帶的位置。具體實(shí)施例方式本文引用的參考資料通過(guò)引用結(jié)合入本文，引用程度至它們提供對(duì)于本文所闡述內(nèi)容具有補(bǔ)充性的示例性程序或其他細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員在本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容的啟發(fā)下，應(yīng)理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍情況下可以對(duì)本文公開(kāi)的實(shí)施方式進(jìn)行顯而易見(jiàn)的修改。在本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容的啟發(fā)下，在無(wú)過(guò)多實(shí)驗(yàn)情況下能進(jìn)行和執(zhí)行本文公開(kāi)的所有實(shí)施方式。在公開(kāi)的內(nèi)容和其等同的實(shí)施方式中陳述了本發(fā)明的全部范圍。本說(shuō)明書(shū)不應(yīng)被解釋為不當(dāng)?shù)乜s小了本發(fā)明給予保護(hù)的全部范圍。除非另有說(shuō)明如本文使用的術(shù)語(yǔ)"一(a)"和"一個(gè)(an)"用來(lái)指"一個(gè)"，"至少一個(gè)"或"一個(gè)或更多"。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"Syk相關(guān)炎性病癥"，包括涉及組胺和其他卩足炎癥介導(dǎo)的應(yīng)答的病癥，例如變應(yīng)性結(jié)膜炎、眼部炎癥、皮炎、鼻炎、哞喘、變態(tài)反應(yīng)和肥大細(xì)胞?。徊⑶野ㄔ从赟ykmRNA表達(dá)形成的那些細(xì)胞變化，所述SykmRNA表達(dá)直接或間接導(dǎo)致Syk相關(guān)炎性病癥。本文提供的干擾RNA提供這種沉默，同時(shí)避免由非特異性試劑造成的不期望的副作用。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"變應(yīng)性結(jié)膜炎"指結(jié)膜的炎癥，所述結(jié)膜是分布在眼瞼和覆蓋鞏膜的暴露面的脆弱的膜。術(shù)語(yǔ)"變應(yīng)性結(jié)膜炎"包括例如特應(yīng)性角膜結(jié)膜炎、巨乳頭性結(jié)膜炎、枯草熱性結(jié)膜炎、常年性過(guò)敏性結(jié)膜炎、和春季角膜結(jié)膜炎。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"皮炎"指皮膚的炎癥并且包括，例如過(guò)敏性接觸性皮炎、皮脂缺乏性皮炎(小腿上的干性皮膚)、特應(yīng)性皮炎、尾蝴性皮炎、接觸性皮炎包括剌激性接觸性皮炎和漆酚誘導(dǎo)的接觸性皮炎、皰滲樣皮炎、出汗障礙性皮炎、濕疹、重力性皮炎、感染性皮炎、錢(qián)幣狀皮炎、外耳炎、口周皮炎、假單胞菌皮炎(hottubrash)和脂溢性皮炎。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"鼻炎"是指鼻粘膜的炎癥，并且包括例如，過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性鼻炎、傳染性鼻炎、刺激性鼻炎、嗜酸細(xì)胞性非變應(yīng)性鼻炎、藥物性鼻炎和嗜中性鼻竇炎(neutrophilicrhinosinusitis)。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"哮喘"指氣道的炎癥，導(dǎo)致氣道狹窄，所述氣道從鼻和口傳遞空氣到肺，所述哮喘包括例如過(guò)敏性哮喘、特應(yīng)性譯喘、特應(yīng)性支氣管IgE介導(dǎo)的哮喘、支氣管哮喘、支氣管溶解(bronchiolytis)、肺氣腫哮喘、神經(jīng)性哮喘、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)性哮喘、由環(huán)境因素引起的外源性哮喘、初期嗜喘(incipientasthma)、由病理生理擾亂引起的內(nèi)源性哞喘、非過(guò)敏性哞喘、非特應(yīng)性哮喘和嬰兒哮喘綜合征(wheezyinfantsyndrome)。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"變態(tài)反應(yīng)，，指對(duì)于通常不具有有害性的物質(zhì)的免疫系統(tǒng)的異常應(yīng)答，并且包括例如皮膚變態(tài)反應(yīng)例如特應(yīng)性皮炎、蕁麻滲和血管性水肺；呼吸性變態(tài)反應(yīng)例如過(guò)敏性鼻炎和對(duì)粉塵或霉菌的反應(yīng)；食物變態(tài)反應(yīng)例如對(duì)于牛奶、蛋清、花生、小麥、大豆、漿果、貝類(lèi)、玉米、豆類(lèi)、黃色食用色素5號(hào)(yellowfooddyeNo.5)和阿拉伯膠中的蛋白質(zhì)的反應(yīng)；藥物變態(tài)反應(yīng)例如對(duì)于青霉素、磺胺、巴比妥類(lèi)、抗驚厥藥、胰島素、局部麻醉藥和造影劑的反應(yīng)；以及昆蟲(chóng)咬傷變態(tài)反應(yīng)例如對(duì)蜜蜂、黃蜂、大胡蜂、胡蜂和火蟻螫傷的毒液的反應(yīng)。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"肥大細(xì)胞病"指系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增多癥，其特征在于肥大細(xì)胞在組織中聚集。所述聚集能影響器官例如骨髓、皮膚、胃腸道、肝臟和脾。醫(yī)師通過(guò)發(fā)現(xiàn)除皮膚之外身體其他部位的肥大細(xì)胞來(lái)診斷系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增多癥，并且通常用抗組胺劑治療。短語(yǔ)"與對(duì)應(yīng)于任何一個(gè)(序列鑒定子)的mRNA3'端次末端的13個(gè)核香酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性的至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域"允許一個(gè)核苷酸取代。兩個(gè)核香酸取代(即，11/13=85%同一性/互補(bǔ)性)不包括在該短語(yǔ)中。"雜交"指一種過(guò)程，其中單鏈核酸與互補(bǔ)性或近乎互補(bǔ)性的堿基序列相互作用形成氫鍵連接的復(fù)合體，稱(chēng)為雜化物。雜交反應(yīng)具有敏感性和選擇性。在體外，雜交的特異性(即嚴(yán)格性)例如通過(guò)預(yù)雜交和雜交液中鹽或甲酰胺濃度控制，以及通過(guò)雜交溫度控制；這種試驗(yàn)方案在本領(lǐng)域是已知的。具體而言，通過(guò)降低鹽濃度、增加甲酰胺濃度或提高雜交溫度可增加嚴(yán)格性。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"同一性百分比"描述了，第一個(gè)核酸分子中的連續(xù)核苷酸，與在第二個(gè)核酸分子中相同長(zhǎng)度的一組連續(xù)核苷酸相同的百分比。術(shù)語(yǔ)"互補(bǔ)性百分比"描述了，第一個(gè)核酸分子中的連續(xù)核苷酸，以Watson-Crick原理(sense)能與第二個(gè)核酸分子中一組連續(xù)核苷酸、》咸基配只十的百分比。裔化miM4如本文使用的術(shù)語(yǔ)"弱化mRNA的表達(dá)"指施用或表達(dá)一定量的干擾RNA(例如siRNA)以減少革巴mRNA至蛋白質(zhì)的翻譯，通過(guò)mRNA切割或通過(guò)直接抑制翻譯實(shí)現(xiàn)。耙mRNA或相應(yīng)蛋白表達(dá)的減少通常一皮稱(chēng)為"敲低(Knock-down)"，并且相對(duì)于施用或表達(dá)的非靶向RNA對(duì)照(例如非靶向siRNA對(duì)照)后存在的水平而被才艮道。本文實(shí)施方式涵蓋了包括而且處于50%和100%之間的量的表達(dá)的敲低。然而，達(dá)到這種沉默水平不是為本發(fā)明的目的所必須的。在一個(gè)實(shí)施方式中，施用單個(gè)靶向SykmRNA的千擾RNA。在其他實(shí)施方式中，施用二個(gè)或更多個(gè)輩巴向SykmRNA的干護(hù)CRNA。"雜交"指一種過(guò)程，其中單鏈核酸與互補(bǔ)性或近乎互補(bǔ)性的減基序列相互作用形成氫鍵連接的復(fù)合體稱(chēng)為雜化物。雜交反應(yīng)具有敏感性和選擇性。在體外，雜交的特異性(即嚴(yán)格性)例如通過(guò)預(yù)雜交和雜交液中鹽或甲酰胺濃度控制，以及通過(guò)雜交溫度控制；這種試驗(yàn)方案在本領(lǐng)域是已知的。具體而言，通過(guò)降低鹽濃度、增加曱酰胺濃度或提高雜交溫度可增加嚴(yán)格性。例如，高嚴(yán)格性條件能以37。C至42°C、含50%甲酰胺條件發(fā)生。降低的嚴(yán)格條件能以30。C至35°C、含35%至25%甲酰胺條件發(fā)生。用于雜交的嚴(yán)格條件的例子在Sambrook,丄，1989,Mo/ecw/wC/o"/wg:爿丄flZ)orato^她w認(rèn)/,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.中提供。嚴(yán)格雜交條件的進(jìn)一步的例子包括400mMNaCl、40mMPIPESpH6.4、和lmMEDTA,50。C或70。C維持12-16小時(shí)，然后洗滌；或者含50%甲酰胺、在1XSSC中70。C或在1XSSC中50。C雜交，然后在0.3XSSC中了0。C洗滌；或者含50%甲酰胺、在4XSSC中70。C或在4XSSC中50。C雜交，然后在1XSSC中67。C洗滌。雜交溫度比雜化物的解鏈溫度(Tm)低大約5-10°C,其中在19至49個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度的雜化物的Tm的確定是^f吏用下列計(jì)算Tm°C=81.5+16.6(logl0[Na+])+0.41(%G+C)-(600/N),其中N是雜化物中堿基數(shù)目，并且[Na+]是雜交緩沖液中鈉離子濃度。敲低通常使用定量多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)擴(kuò)增、通過(guò)測(cè)量mRNA水平來(lái)評(píng)估，或使用蛋白質(zhì)印跡或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)、通過(guò)測(cè)量蛋白水平評(píng)估。分析蛋白水平提供了mRNA切割以及翻譯抑制的評(píng)估。用于測(cè)量敲低的更多的技術(shù)包括RNA溶液雜交、核酸酶保護(hù)、Northern雜交、以微點(diǎn)陣監(jiān)控的基因表達(dá)、抗體結(jié)合、放射免疫測(cè)定和熒光激發(fā)細(xì)胞分析(fluorescenceactivatedcellanalysis)。RNA千擾(RNAi)是雙鏈RNA(dsRNA)藉以用于沉默基因表達(dá)的方法。不想受縛于理論，RNAi開(kāi)始于通過(guò)RNA酶III-類(lèi)酶(切丁酶)切割長(zhǎng)dsRNA成短干擾RNA(siRNA)。siRNA是dsRNA并且通常具有大約19至28個(gè)核苷酸、或20至25個(gè)核苷酸或者21至22個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度，并且通常含有2個(gè)核苷酸的3'突出端、以及5'磷S吏基和3'羥基末端。siRNA的一條鏈引入到核糖核蛋白復(fù)合體，其已知為RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)。RISC使用這個(gè)siRNA鏈鑒定mRNA分子，所述mRNA分子與引入的siRNA鏈具有至少部分的互補(bǔ)性，并且然后切割這些靶mRNA或者抑制它們的翻譯。因此，引入到RISC中的siRNA鏈已知為引導(dǎo)鏈或反義鏈。另一條siRNA鏈，其已知為過(guò)客鏈或有義鏈，其從siRNA中除去并且至少部分的與靶mRNA同源。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能認(rèn)識(shí)到，原則上siRNA中任一鏈均能引入到RISC中并且作為引導(dǎo)鏈行使功能。然而，siRNA設(shè)計(jì)(例如在反義鏈的5'端降低siRNA雙鏈體穩(wěn)定性)能有益于引入反義鏈到RISC中。RISC介導(dǎo)切割至少部分的與引導(dǎo)鏈具有互補(bǔ)性的mRNA,這導(dǎo)致了mRNA和這種mRNA編碼的相應(yīng)蛋白穩(wěn)態(tài)水平的下降?？蛇x擇地，RISC也可經(jīng)由不需切割靶mRNA的翻譯抑制來(lái)減少相應(yīng)蛋白的表達(dá)。其他RNA分子和RNA-類(lèi)分子也能與RISC相互作用并且沉默基因表達(dá)。能與RISC,、單鏈siRNA、樣吏小RNA(miRNA)和切丁酶-底物27-mer雙鏈體(dicer-substrate27-merduplexes)。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"s'RNA"除非另有說(shuō)明是指雙鏈干擾RNA。能與RISC相互作用的RNA-類(lèi)分子的例子包括含有一個(gè)或更多的化學(xué)修飾的核普酸、一個(gè)或更多的脫氧核糖核苷酸和/或一個(gè)或更多的磷酸二酯鍵的RNA分子。至于本發(fā)明討論的目的，能與RISC相互作用、以及參與RISC介導(dǎo)的基因表達(dá)改變的所有RNA或RNA-類(lèi)分子，被稱(chēng)為"干擾RNA"。因此，siRNA、shRNA、miRNA和切丁酶-底物27-mer雙鏈體是"干擾RNA"的亞類(lèi)。本發(fā)明實(shí)施方式的千擾RNA顯現(xiàn)出以催化方式作用來(lái)切割靶mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學(xué)計(jì)量上影響靶mRNA的抑制。當(dāng)與反義療法相比時(shí)，在這種切割條件下需要明顯較少的干擾RNA來(lái)提供療效。本發(fā)明涉及干擾RNA抑制SykmRNA表達(dá)的用途，所述SykmRNA是非受體酪氨酸激酶的mRNA。通過(guò)免疫受體例如IgE受體(FceRI)的信號(hào)傳導(dǎo)包括募集和激活信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的多個(gè)組分，包括Syk。Syk激活導(dǎo)致PLCy和P13K途徑的激活并且最終導(dǎo)致肥大細(xì)胞脫顆粒作用和激活。靶向如本文所提供的SykmRNA，會(huì)降低Syk蛋白水平并且中斷FcsRI途徑。這種作用會(huì)干擾IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒作用并且釋放組胺和其他的促炎介質(zhì)。依照本發(fā)明，外源提供或內(nèi)源表達(dá)的干擾RNA對(duì)于沉默SykmRNA特別有效。除非另有說(shuō)明，本文引用的核酸序列是以5'至3'方向書(shū)寫(xiě)。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"核酸"指DNA或RNA或其修飾形式，包括存在于DNA(腺嘌呤"A"、胞嘧啶"C"、鳥(niǎo)嘌呤"G"和胸腺嘧啶"T")或RNA(腺噪呤"A"、胞嘧啶"C"、鳥(niǎo)嘌呤"G"和尿嘧啶"U")中的噪呤或嘧咬堿基。本文提供的干擾RNA可以包括"T"堿基，特別是在3'端，盡管"T"堿基不天然存在于RNA內(nèi)。"核酸"包括術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸，，和"多核苷酸"并且能夠指單鏈分子或雙鏈分子。雙鏈分子是通過(guò)在A和T磁基之間、C和G磁基之間和A和U堿基之間的Watson-Crick堿基配對(duì)形成。雙鏈分子彼此間具有部分的、主要的或完全的互補(bǔ)性，并且會(huì)形成雙鏈體雜化物，其結(jié)合的強(qiáng)度取決于堿基序列的性質(zhì)和互補(bǔ)程度。mRNA容易從相應(yīng)的DNA序列推導(dǎo)出。例如，SEQIDNO:1提供了相應(yīng)于SykmRNA的DNA的有義鏈序列。除了"T，，堿基被"U"堿基替代，mRNA序列與DNA的有義鏈序列一致。因此，Syk的mRNA序列是從SEQIDNO:1得知。席潛慮凝浚^S:;^w/M4:GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登錄號(hào)NM—003177提供了Syk的DNA序列，在"序列表"中作為SEQIDNO:1提供。SEQIDNO:1提供了相應(yīng)于編碼Syk的mRNA的、DNA的有義鏈序列(除了"T"堿基對(duì)于"U"堿基之外)。Syk的編碼序列來(lái)自于第148-2055位核苷酸。等同于上迷引用的SykmRNA序列的是替代的剪接形式、等位形式、同工酶或其關(guān)聯(lián)物(cognate)。一種關(guān)聯(lián)物是來(lái)自于另一種哺乳動(dòng)物的脾酪氨酸激酶mRNA，其與SEQIDNO:]同源(即直向同源物)。涉及SEQIDNO:1的Syk核酸序列包括那些GenBank庫(kù)中登錄號(hào)BC001645、BC002962、L28824、X73568、BC011399和Z29630的序列。^口下述通過(guò)監(jiān)4空免疫-文擊(immunologically-challenged)的月巴大細(xì)月包中組胺的釋放，Syk的抑制也可以體外測(cè)定。單個(gè)分散的人肥大細(xì)胞制劑在免疫激活時(shí)釋放促炎介質(zhì)。通過(guò)以抗原或抗-人IgE刺激細(xì)胞后、釋放到培養(yǎng)物上清液中組胺的量來(lái)測(cè)定激活程度(參閱Miller等Ocm/w/附mwwo〃"/Zamw.4:39-49,2006)。以乾向Syk的干擾RNA轉(zhuǎn)染的肥大細(xì)胞的免疫攻擊，與觀察到的用非轉(zhuǎn)染的肥大細(xì)胞、或用非靶向千擾RNA對(duì)照轉(zhuǎn)染的肥大細(xì)胞的免疫攻擊相比，形成明顯較少的組胺釋放。Syk的抑制也可以在體外通過(guò)使用人結(jié)膜組織肥大細(xì)胞或在LAD2肥大細(xì)胞中，檢測(cè)IgE介導(dǎo)的組胺釋放來(lái)測(cè)定。人結(jié)膜組織肥大細(xì)胞例如使用美國(guó)專(zhuān)利第5,360,720號(hào)概述的方法獲得。LAD2肥大細(xì)胞由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院、變應(yīng)性疾病實(shí)驗(yàn)室，Bethesda,MD批準(zhǔn)(丄ewAi"2003年8月27(8):677-82)。簡(jiǎn)要的說(shuō)，人結(jié)膜組織肥大細(xì)胞從人結(jié)膜組織酶促釋放，并且隨后通過(guò)在PERCOLL⑧墊層上的密度梯度離心部分地富集。從產(chǎn)生的沉淀獲得單個(gè)分散的細(xì)胞混懸液，并且將這些細(xì)胞用于組胺釋^:測(cè)定。細(xì)胞用Syk千擾RNA或干擾RNA對(duì)照轉(zhuǎn)染72h后用抗-人IgE刺激，這促發(fā)了J巴大細(xì)胞脫顆粒作用并且組胺釋;^丈到上清液中。然后通過(guò)RIA(BeckmanCoulter)、EIA(BeckmanCoulter)或本領(lǐng)域才支術(shù)人員已知的其他方法測(cè)量上清液中的組胺。相對(duì)于對(duì)照轉(zhuǎn)染的細(xì)胞或非轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，Syk干擾RNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中組胺釋放的下降，指示千擾RNA在弱化Syk和阻斷FceRI信號(hào)傳導(dǎo)途徑方面有效。LAD2肥大細(xì)胞很大程度上以相同的方法使用，除了細(xì)胞被動(dòng)地以人IgE骨髓瘤致敏，然后用抗-人IgE刺激，以交聯(lián)受體結(jié)合的IgE并且促發(fā)脫顆粒作用。通過(guò)》見(jiàn)察Syk相關(guān)性病癥癥狀的改善，也可以/人人和哺乳動(dòng)物中推斷Syk的抑制，所述Syk相關(guān)性病癥癥狀的改善例如與變應(yīng)性結(jié)膜炎、眼部炎癥、皮炎、鼻炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)或肥大細(xì)胞病相關(guān)的癥狀改善。例如任何水腫、搔癢和炎癥的改善，或?qū)Νh(huán)境攻擊(environmentalchallenge)的耐受，對(duì)于Syk的抑制具有指示性。干挽7WX:在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，干擾RNA(例如siRNA)具有有義鏈和反義鏈，并且所述有義和反義鏈包括含有至少19個(gè)核苷酸、具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的區(qū)域。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，干擾RNA(例如siRNA)具有有義鏈和反義鏈，并且所述反義鏈包括含有至少19個(gè)核苷酸、具有與SykmRNA的靶序列至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的區(qū)域，并且所述有義鏈包括含有至少19個(gè)核苷酸、具有與SykmRNA的靶序列至少是近乎完全的連續(xù)同一性(contiguousidentity)的區(qū)域。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述干擾RNA包括一個(gè)至少13、14、15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述13、14、15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸分別與mRNA內(nèi)相應(yīng)靶序列的3'端次末端的13、14、15、16、17或18個(gè)核普酸，具有序列互補(bǔ)性的百分比或序列同一性的百分比。干擾RNA的每條鏈的長(zhǎng)度包括19至49個(gè)核苷酸，并且可以包括含有19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。siRNA的反義鏈?zhǔn)莝iRNA中的有活性的引導(dǎo)劑，因?yàn)榉戳x鏈被引入RISC，因而允許RISC鑒定與siRNA反義鏈至少部分的互補(bǔ)性的靶mRNA，所述互補(bǔ)性用于切割或翻譯抑制。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，使用可獲得的設(shè)計(jì)工具選擇在靶mRNA序列內(nèi)的干擾RNA靶序列(例如siRNA靶序列)。然后通過(guò)轉(zhuǎn)染表達(dá)靶mRNA的細(xì)胞而后以上文描述評(píng)估敲低，測(cè)試相應(yīng)于Syk靶序列的干擾RNA。選擇siRNA靶序列的技術(shù)在下述方面提供Tuschl,T.等，"ThesiRNAUserGuide(siRNA使用者指南),"2004年5月6日修訂,可在RockefellerUniversity網(wǎng)3占獲4尋；TechnicalBulletin#506,"siRNADesignGuidelines(siRNA設(shè)計(jì)指導(dǎo)方針)，"AmbionInc.在Ambion的網(wǎng)站；以及其他基于網(wǎng)絡(luò)i殳i十工具，例i口在Invitrogen、Dharmacon、IntegratedDNATechnologies、Genscript或Proligo網(wǎng)站上的。初始搜索參數(shù)可包括在35%至55%之間的G/C含量，以及siRNA長(zhǎng)度在19至27個(gè)核苷酸之間。靶序列可以位于編碼區(qū)域或mRNA的5'或3'未翻譯區(qū)域。關(guān)于SykmRNA的19個(gè)核苷酸DNA靶序列的一個(gè)實(shí)施方式出現(xiàn)在SEQIDNO:1的第789至807位核苷酸5'-GCACTATCGCATCGACAAA-3'SEQIDNO:2。用于靶向SEQIDNO:2的相應(yīng)mRNA序列、并且具有21個(gè)核苷酸的鏈和2個(gè)核苷酸的3'突出端的本發(fā)明的siRNA是5'-GCACUAUCGCAUCGACAAA麗-3'SEQIDNO:33'-麗CGUGAUAGCGUAGCUGUUU-5'SEQIDNO:4。每個(gè)"N"殘基可以是任何的核苷酸(A、C、G、U和T)或修飾核苷酸。3'端可有許多"N"殘基，包括和在l、2、3、4、5和6個(gè)之間。任一條鏈上的"N，，殘基可以是相同的殘基(例如UU、AA、CC、GG或TT)或者它們可以是不同的(例如AC、AG、AU、CA、CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC或UG)。3'突出端可以是相同的或者它們可以是不同的。在一個(gè)實(shí)施方式中，兩條鏈均有3'UU突出端。用于耙向SEQIDNO:2的相應(yīng)mRNA序列、并且具有21個(gè)核苷酸的鏈和每條鏈上均有3'UU突出端的本發(fā)明的siRNA是5'-GCACUAUCGCAUCGACAAAUU-3'SEQIDNO:53'-UUCGUGAUAGCGUAGCUGUUU-5'SEQIDNO:6。干擾RNA也可以具有5'突出端的核苷酸或其可以具有平端。用于輩巴向SEQIDNO:2的相應(yīng)mRNA序列、并且具有19個(gè)核苷酸的鏈和平端的本發(fā)明的siRNA是5'畫(huà)GCACUAUCGCAUCGACAAA-3'SEQIDNO:73'誦CGUGAUAGCGUAGCUGUUU-5'SEQIDNO:8。雙鏈干擾RNA(例如siRNA)的鏈可以連接起來(lái)形成發(fā)夾或莖環(huán)結(jié)構(gòu)(例如shRNA)。靶向SEQIDNO:2的相應(yīng)mRNA序列、并且具有19bp雙鏈莖區(qū)和3'UU突出端的本發(fā)明的shRNA是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>N是A、T、C、G和U核苷酸或者本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的修飾形式。環(huán)中N核苷酸的數(shù)目是包括和在3至23個(gè)之間、或5至15個(gè)之間、或7至13個(gè)之間、或4至9個(gè)之間、或9至11個(gè)之間，或者N核苷酸的數(shù)目是9。環(huán)中的一些核普酸能參與與環(huán)中其他核苷酸發(fā)生磁基配對(duì)的相互作用。用于形成環(huán)的寡核苷酸序列的例子包括5'-UUCAAGAGA-3'(Brummelkamp,T.R.等(2002)S"ewce296:550)和5'-UUUGUGUAG-3'(Castanotto,D.等(2002)iM48:1454)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能識(shí)別產(chǎn)生的單鏈寡核苷酸形成莖環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，所述莖環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)包括能與RNAi結(jié)構(gòu)相互作用的雙鏈區(qū)域。上述鑒定的siRNA靶序列可以在3'端延伸，便于切丁酶-底物27-mer雙鏈體的設(shè)計(jì)。SykDNA序列中(SEQIDNO:1)中鑒定的19個(gè)核苷酸DNA靶序列(SEQIDNO:2)延伸6個(gè)核苷酸，產(chǎn)生25個(gè)核苷酸DNA靶序列，所述25個(gè)核苷酸DNA靶序列出現(xiàn)在SEQIDNO:1的第789至813位核香酸。5'-GCACTATCGCATCGACAAAGACAAG-3'SEQIDNO:10。用于靶向SEQIDNO:10的相應(yīng)mRNA序列的本發(fā)明的切丁酶-底物27-mer雙鏈體是5'-GCACUAUCGCAUCGACAAAGACAAG-3'SEQIDNO:113'-UUCGUGAUAGCGUAGCUGUUUCUGUUC-5'SEQIDNO:12。為增強(qiáng)加工，有義鏈的3'端2個(gè)核苷酸(即SEQIDNO:11的AG核苷酸)可以是脫氧核苦酸。例如本文提供的從19至21個(gè)核苦酸靶序列設(shè)計(jì)的切丁酶-底物27-mer雙鏈體，在IntegratedDNATechnologies(IDT)網(wǎng)站、以及Kim,D.-11等,(2005年2月)7Vaft^e說(shuō)0fec/2"0/0gv23:2;222-226.中有進(jìn)一步討論。當(dāng)通過(guò)化學(xué)合成的方法生產(chǎn)干擾RNA時(shí)，在一條或二條鏈(當(dāng)存在時(shí))的5'端的核苷酸的5'位置磷酸化，能加強(qiáng)siRNA的效力和所結(jié)合的RISC復(fù)合體的特異性，但這不是必需的因?yàn)榱姿峄茉诩?xì)胞內(nèi)出現(xiàn)。本文也公開(kāi)了一種在受治療者中弱化SykmRNA表達(dá)的方法，包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA(iRNA)、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括選自由下述組的區(qū)域一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44—47中任一個(gè)的mRNA3，端次末端的13個(gè)核普酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性；一個(gè)至少14個(gè)連續(xù)核香酸的區(qū)域，所述14個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13—40和SEQIDNO:44—47中任一個(gè)的mRNA3，端次末端的14個(gè)核香酸具有至少85%的序列互補(bǔ)性，或至少85%的序列同一性；以及一個(gè)至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述15、16、17或18個(gè)連續(xù)核香酸分別與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的mRNA3，端次末端的15、16、17或18個(gè)核苷酸具有至少80%的序列互補(bǔ)性，或至少80%的序列同一性，其中所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。也公開(kāi)了一種在需要對(duì)其治療的受治療者中治療Syk相關(guān)炎性病癥的方法，包4舌施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述干擾RNA包括區(qū)域選自下述組的區(qū)域一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13—40和SEQIDNO:44-47中寸壬一個(gè)的mRNA3端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性；一個(gè)至少14個(gè)連續(xù)核香酸的區(qū)域，所述14個(gè)連續(xù)核普酸與相應(yīng)于SEQIDNO:2和SEQIDNO:13-40中任一個(gè)的mRNA3'端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少85%的序列互補(bǔ)性，或至少85%的序列同一性；以及一個(gè)至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸分別與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的mRNA3'端次末端的15、16、17或18個(gè)核苷酸具有至少80%的序列互補(bǔ)性，或至少80%的序列同一性，其中所述Syk相關(guān)炎性病癥由此而治療。另外的實(shí)施方式包括一種弱化受治療者的SykmRNA表達(dá)的方法，包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域；其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA選自由下述mRNA組成的組與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苦酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苷酸，其中所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。本文也公開(kāi)了在需要對(duì)其治療的受治療者中治療Syk相關(guān)炎性病癥的方法，包4舌施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括有義核苷酸鏈，反義核普酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域；其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA選自由下述mRNA組成的組與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核香酸，其中所述Syk相關(guān)炎性病癥由此而治療。另外的實(shí)施方式包括一種弱化受治療者的SykmRNA表達(dá)的方法，包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的單鏈干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與mRNA的一部分雜交，所述mRNA選自由下述mRNA組成的組與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苷酸，并且所述干擾RNA含有與相應(yīng)于SEQIDNO:1的mRNA的雜交部分至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的區(qū)域，其中所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。也公開(kāi)了在需要對(duì)其治療的受治療者中治療眼部炎癥或結(jié)膜炎的方法，包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括雙鏈siRNA分子，其經(jīng)由RNA干擾而下調(diào)Syk基因的表達(dá)，其中siRNA分子的每條鏈獨(dú)立具有大約19至大約27個(gè)核香酸的長(zhǎng)度；以及siRNA分子的一條鏈包括與相應(yīng)于Syk基因的mRNA大致互補(bǔ)的核苷酸序列，使得所述siRNA分子經(jīng)由RNA干擾直接切割所述mRNA。也公開(kāi)了各種組合物，所述組合物包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并且包括相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的干擾RNA;和藥學(xué)上可接受的載體。也公開(kāi)了各種其他的組合物，所述組合物包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度，并且主要由相應(yīng)于SEQIDNO:41-47中任一個(gè)的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列組成的干擾RNA;和藥學(xué)上可接受的載體。雖然已顯示和描述了本發(fā)明的特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可想到各種變更和替代實(shí)施方式。相應(yīng)地，本發(fā)明預(yù)期僅通過(guò)所附權(quán)利要求來(lái)限定。在不偏離本發(fā)明的精神和必要特征下，本發(fā)明可以其他特定形式實(shí)因此本發(fā)明的范圍不是由上述描述內(nèi)容而是由所附權(quán)利要求指示。在等同于權(quán)利要求意義和范圍內(nèi)的、對(duì)于權(quán)利要求的任何改變均包括在其范圍內(nèi)。此外，本文提及的所有公開(kāi)的文獻(xiàn)、專(zhuān)利和申請(qǐng)，在此通過(guò)引用結(jié)合入本文，如同以其整體"l是出。實(shí)施例表1列出了SEQIDNO:1的SykDNA靶序列的實(shí)施例，從其中以上文闡述的方式設(shè)計(jì)本發(fā)明的siRNA。如上述記錄Syk編碼脾酪氨酸激酶。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>或刪除與SEQIDNO:1具有互補(bǔ)性或近乎互補(bǔ)性的核苷酸，本領(lǐng)域技術(shù)人員能使用表1提供的靶序列信息來(lái)設(shè)計(jì)千擾RNA,所述干擾RNA具有短于或長(zhǎng)于表1提供序列的長(zhǎng)度。由siRNA和其他形式的干擾RNA指導(dǎo)的靶RNA切割反應(yīng)具有高度序列特異性。通常，siRNA是抑制本文所引用mRNA的siRNA實(shí)施方式，所述siRNA含有與耙mRNA的一部分在序列相同的有義核苷酸鏈，以及恰好與輩巴mRNA的一部分互補(bǔ)的反義核香酸鏈。然而，在反義siRNA鏈和靶mRNA之間，或在反義siRNA鏈和有義siRNA鏈之間的100%序列互補(bǔ)性，并不是實(shí)踐本發(fā)明所必需的。因此，例如，本發(fā)明允許有序列變異，所述序列變異可能由于基因突變、林多態(tài)性(strainpolymorphism)或進(jìn)化趨異造成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，siRNA的反義鏈具有與乾mRNA至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸。如本文使用的"近乎完全的"指siRNA的反義鏈與耙mRNA的至少一部分"大致互補(bǔ)"，并且siRNA的有義鏈與輩巴mRNA的至少一部分"大致同一"。"同一性"如本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的，是通過(guò)匹配序列之間的核苷酸順序和同一性而確定的核苷酸序列之間的序列親緣關(guān)系程度。在一個(gè)實(shí)施方式中，具有與靶mRNA序列80%和在80%至100%之間的互補(bǔ)性(例如85%、90%或95%的互補(bǔ)性)的siRNA反義鏈被認(rèn)為具有近乎完全的互補(bǔ)性，并且可以用于本發(fā)明中。"完全的"連續(xù)互補(bǔ)性是連續(xù)堿基對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)Watson-Crick堿基配對(duì)。"至少是近乎完全的"連續(xù)互補(bǔ)性包括如本文使用的"完全的"互補(bǔ)性。用于測(cè)定同一性或互補(bǔ)性的計(jì)算機(jī)方法例如BLASTN(Altschul,S.F.,等(1990)丄JUfo/.說(shuō)o/.215:403-410)，被設(shè)計(jì)用于鑒定核苷酸序列匹配的最大程度。靶mRNA(有義鏈)與siRNA的一條鏈(有義鏈)之間的關(guān)系是同一性關(guān)系。如果出現(xiàn)的話，siRNA的有義鏈也稱(chēng)作過(guò)客鏈。靶mRNA(有義鏈)和siRNA的另一條鏈(反義鏈)之間的關(guān)系是互補(bǔ)性關(guān)系。siRNA的反義鏈也稱(chēng)作引導(dǎo)鏈。以5'至3'方向書(shū)寫(xiě)的核酸序列中的次末端減基是，緊靠著最后的堿基的，即緊靠3'堿基的堿基。以5'至3'方向書(shū)寫(xiě)的核酸序列中的次末端13個(gè)堿基，是緊靠3'堿基的序列中的最后13個(gè)tt并且不包括3'堿基。相似地，以5'至3'方向書(shū)寫(xiě)的核苷酸序列中的次末端14、15、16、17或18個(gè)石威基，分別是緊靠3'減羞的序列中的最后14、15、16、17或18個(gè)威基并且不包括3'堿基。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，連續(xù)核苷酸區(qū)域是，與mRNA3'端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少85%的序列互補(bǔ)性、或至少85%的序列同一性的14個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述mRNA相應(yīng)于由每個(gè)序列鑒定子(sequenceidentifier)鑒定的序列。兩個(gè)核香酸的置換(即12/14=86%同一性/互補(bǔ)性)包括在該短語(yǔ)中。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方式中，連續(xù)核苷酸區(qū)域是與mRNA3'端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少80%的序列互補(bǔ)性、或至少80%的序列同一性的至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述mRNA相應(yīng)于由每個(gè)序列鑒定子的序列。三個(gè)核香酸的置換包括在該短語(yǔ)中。相應(yīng)于SEQIDNO:1的mRNA中的靶序列，可以在mRNA5'或3'未翻譯區(qū)域中，以及在mRNA的編碼區(qū)域中。雙鏈干擾RNA的一條或兩條鏈可以含有1至6個(gè)核苷酸的3'突出端，其可以是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或其混合物。突出端的核苷酸不是堿基配對(duì)的。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式中，干擾RNA包括TT或UU的3'突出端。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，干擾RNA包括至少一個(gè)平端。末端通常具有5'磷酸基或3'羥基。在其他的實(shí)施方式中，反義鏈具有5'磷酸基并且有義鏈具有5'羥基。仍然在其他的實(shí)施方式中，通過(guò)共價(jià)加入其他分子或官能團(tuán)進(jìn)一步》務(wù)飾末端。雙鏈siRNA的有義和反義鏈可以是如上文描述的兩條單鏈的雙鏈體結(jié)構(gòu)，或可以是單分子，其中互補(bǔ)性區(qū)域是堿基配對(duì)的并且通過(guò)發(fā)夾環(huán)共價(jià)連接以形成單鏈。據(jù)信發(fā)夾通過(guò)稱(chēng)為切丁酶的蛋白在細(xì)胞內(nèi)切割，形成兩個(gè)單獨(dú)堿基配對(duì)RNA分子的干擾RNA。通過(guò)添加、刪除、置換或修飾一個(gè)或更多的核普酸，干擾RNA可不同于天然存在的RNA。非核苷酸物質(zhì)可以結(jié)合到干擾RNA的5'端、3'端或中間。所述修飾通常設(shè)計(jì)用于增加千擾RNA的核酸酶抵抗性、改善細(xì)胞吸收、增強(qiáng)細(xì)胞靶向、協(xié)助追蹤干擾RNA、進(jìn)一步改善穩(wěn)定性或降低千擾素途徑激活的可能性。例如，在突出端的末端千擾RNA可以包括嘌呤核苦酸。例如通過(guò)吡咯烷連接體連接膽固醇到siRNA有義鏈3'端，對(duì)于siRNA也提供了穩(wěn)定性。另外的修飾例如包括3'端生物素分子、已知具有細(xì)胞滲透性質(zhì)的肽、納米粒子、擬肽(peptidomimetic)、熒光染料或樹(shù)狀聚體。核苷酸可以在分子的堿基部分、在糖基部分或在磷酸部分上修飾并且在本發(fā)明的實(shí)施方式中行使功能。修飾例如包括用烷基、烷氧基、氨基、脫氮物(deaza)、卣素、羥基、巰基或其組合來(lái)置換。例如，核苷酸可以被具有更高穩(wěn)定性的類(lèi)似物來(lái)置換、例如用脫氧核糖核香酸替代核糖核苷酸，或可以被具有糖基修飾的類(lèi)似物置換、例如用2'氨基、2'甲氧基、2'甲氧乙基或2'-0,4'-C亞甲基橋替代2'OH。核苷酸的噤呤或嘧啶類(lèi)似物例子包括黃嘌呤、次黃嘌呤、氮雜嘌呤(azapurine)、甲^i腺嘌呤、7-脫氮-腺香以及O-和N-修飾核苷酸。通過(guò)用氮或用硫(磷硫酰)置換磷酸基團(tuán)的一個(gè)或更多氧，可以修飾核苷酸的磷酸基團(tuán)。例如對(duì)于增強(qiáng)功能、對(duì)于提高穩(wěn)定性或滲透性或者對(duì)于直接定位或靶向，修飾具有有用性?？梢杂信cSEQIDNO:1的部分不具有互補(bǔ)性的反義干擾RNA鏈的區(qū)域。非互補(bǔ)性區(qū)域可以在互補(bǔ)性區(qū)域的3'端、5'端或兩端，或者在兩個(gè)互補(bǔ)性區(qū)域之間。通過(guò)化學(xué)合成、通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄、或者通過(guò)用切丁酶或具有相似活性的另一種適當(dāng)?shù)暮怂崦盖懈钶^長(zhǎng)的雙鏈RNA，可以外源性產(chǎn)生干擾RNA。使用傳統(tǒng)的DNA/RNA合成儀，從受保護(hù)的核糖核普亞磷酰胺生產(chǎn)的化學(xué)合成的干擾RNA，可以從商業(yè)供應(yīng)廠商例如AmbionInc.(Austin,TX)、Invitrogen(Carlsbad,CA)或Dharmacon(Lafayette,CO)獲4尋。通過(guò)例如用溶劑或樹(shù)脂、沉淀作用、電泳、層析或它們的聯(lián)合進(jìn)行提取，純化干擾RNA?？蛇x擇地，可以使用具有很少(如果有)純化的干擾RNA以避免由于樣品加工帶來(lái)的損失。31從質(zhì)粒或病毒表達(dá)載體、或從最小表達(dá)盒也可以內(nèi)源性表達(dá)千擾RNA，所述最小表達(dá)盒例如PCR產(chǎn)生的片段，其包括一個(gè)或更多的啟動(dòng)子和千擾RNA的適當(dāng)模板。用于shRNA的商業(yè)上可獲得的基于質(zhì)粒的表達(dá)載體的例子包括，pSilencer系列的成員(Ambion,Austin,TX)和pCpG-siRNA(InvivoGen,SanDiego，CA)。用于表達(dá)干擾RNA的病毒載體可以得自多種病毒，所述病毒包括腺病毒、腺伴隨病毒、慢病毒屬(例如HIV、FIV、和EIAV)和皰療病毒。用于shRNA表達(dá)的商業(yè)上可獲得的病毒載體的例子包4舌pSilenceradeno(Ambion,Austin,TX)和pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(Invitrogen,Carlsbad,CA)。病毒載體的選擇、從載體表達(dá)干擾RNA的方法以及遞送病毒載體的方法，是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。試劑盒的例子包括SilencerExpress(Ambion,Austin,TX)和siXpress(Minis,Madison,WI),所述試劑盒用于產(chǎn)生、PCR產(chǎn)生的shRNA表達(dá)盒。經(jīng)由能夠表達(dá)第一個(gè)千擾RNA的、第一個(gè)表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)，可以施用第一個(gè)干擾RNA;并且經(jīng)由能夠表達(dá)第二個(gè)干擾RNA的、第二個(gè)表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)，可以施用第二個(gè)干擾RNA;或者經(jīng)由能夠表達(dá)二種干擾RNA的、單個(gè)表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)，可以施用二種干擾RNA。千擾RNA可以從多種本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的真核細(xì)胞的啟動(dòng)子表達(dá)，包括polIII啟動(dòng)子(例如U6或HI啟動(dòng)子)或polII啟動(dòng)子(例如巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到這些啟動(dòng)子也能適應(yīng)于允許干擾RNA的誘導(dǎo)性表達(dá)。^^理務(wù)伊7"染艾在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，在體內(nèi)千擾RNA的反義鏈與mRNA雜交而作為RISC復(fù)合體的部分。上文描述的在體外的雜交測(cè)定，提供了預(yù)測(cè)候選siRNA和乾之間的結(jié)合是否具有特異性的方法。然而，在RISC復(fù)合體情況下，特異性靶切割也能發(fā)生在反義鏈，其在體外沒(méi)有證明雜交的高嚴(yán)格性。卓鏈f挽^A^:如上文引用，干擾RNA最終以單鏈行使功能。單鏈(ss)干擾RNA已發(fā)現(xiàn)影響mRNA沉默，雖然與雙鏈千擾RNA相比具有較少的有效性。因此本發(fā)明的實(shí)施方式也提供單鏈干擾RNA的施用，所述單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與SEQIDNO:1的一部分雜交，并且與SEQIDNO:1的雜交部分具有至少近乎完全互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸。如上文引用的雙鏈干擾RNA，表1的單鏈干擾RNA具有19至49個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。單鏈干擾RNA具有5'磷酸或在5'位置原位或在體內(nèi)磷酸化。術(shù)語(yǔ)"5'磷酸化"用于描述例如具有磷酸基的多核苷酸或寡核苷酸，所述磷酸基經(jīng)由酯鍵連接到多核苷酸或寡核苷酸5'端糖基(例如核糖、脫氧核糖或同樣的類(lèi)似物)的C5羥基上。單鏈干擾RNA通過(guò)化學(xué)合成，或者通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄、或者從關(guān)于雙鏈干擾RNA的載體或表達(dá)盒內(nèi)源性表達(dá)。5'磷酸基可以經(jīng)由激酶加入，或者5'磷酸可以是核酸酶切割RNA的結(jié)果。遞送如同雙鏈干擾RNA。在一個(gè)實(shí)施方式中，施用具有保護(hù)性末端和核酸酶抵抗性修飾的單鏈干擾RNA用于沉默。單鏈干擾RNA可千燥用于儲(chǔ)存或溶解在水溶液中。所述溶液可以含有緩沖液或鹽以抑制退火或用于穩(wěn)定作用。發(fā)關(guān)于說(shuō)WVy4:發(fā)夾干擾RNA是單個(gè)分子(例如單個(gè)寡核香酸鏈)，其包括莖環(huán)和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的干擾RNA(例如shRNA)的有義和反義鏈。例如，shRNA可從DNA載體表達(dá)，其中編碼有義干擾RNA鏈的DNA寡核香酸通過(guò)短的間隔區(qū)連接到，編碼相反的互補(bǔ)性反義干擾RNA鏈的DNA寡核苷酸。如果選擇表達(dá)載體需要，可以加入3'末端T的(T's)和核苷酸形成限制位點(diǎn)。產(chǎn)生的RNA轉(zhuǎn)錄物回折到自身上形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。干擾RNA可以經(jīng)由，例如氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、眼、口、耳、胃腸外、貼片(patch)、皮下、舌下、局部或透皮(transdermal)施用遞送。可以通過(guò)如下方式直接施用到眼通過(guò)眼部組織施用，例如眼周的、結(jié)膜的、嚢下(subtenon)、前眼房?jī)?nèi)的(intracameral)、玻璃體內(nèi)的、眼內(nèi)的、視網(wǎng)膜下的、結(jié)膜下的、眼球后的、小管內(nèi)的或脈絡(luò)膜上的施用；通過(guò)注射，通過(guò)使用導(dǎo)管或其他敷設(shè)裝置(placementdevice)直接應(yīng)用到眼，所述導(dǎo)管或其他敷設(shè)裝置例如視黃醛片(retinalpellet)、眼內(nèi)插入物(intraocularinsert)、栓劑或植入物，所述才直入物包括多孔的、無(wú)孔的或膠_狀的物質(zhì)；通過(guò)局部的眼的滴劑或軟膏劑；或者通過(guò)在結(jié)膜常窿中的緩釋裝置，或者鄰近鞏膜(透鞏膜的)植入的或者眼內(nèi)的緩釋裝置。前眼房?jī)?nèi)注射可以通過(guò)角膜進(jìn)入前房，以允許試劑到達(dá)小梁網(wǎng)。小管內(nèi)注射可以到達(dá)靜月永集合管引；充施累姆管(venouscollectorchannelsdrainingSchlemm'scanal)或到達(dá)施累姆管。進(jìn)一步的施用模式包括片劑、丸劑和膠嚢劑。經(jīng)由例如局部耳的滴劑或軟膏劑、在耳內(nèi)或植入到鄰近耳的緩釋裝置，施用可以直接到達(dá)耳。局部施用包括耳肌內(nèi)的、鼓室內(nèi)的(intratympaniccavity)和耳蝸內(nèi)的注射途徑施用。此外，試劑可以施用到內(nèi)耳，其通過(guò)敷設(shè)明膠海綿或相似的吸收劑和附著物并用干擾RNA浸潤(rùn)，所述干擾RNA對(duì)抗中耳/內(nèi)耳或鄰近結(jié)構(gòu)的窗膜(windowmembrane)。經(jīng)由例如氣霧劑(aerosolizedpreparation)，以及例如通過(guò)經(jīng)由吸入器或霧化器的吸入，施用可以直接到達(dá)肺。f治《,需要治療Syk相關(guān)炎性病癥或具有形成Syk相關(guān)炎性病癥的危險(xiǎn)的受治療者是，患有Syk相關(guān)炎性病癥或具有形成Syk相關(guān)炎性病癥的危險(xiǎn)的人或其他哺乳動(dòng)物，所述Syk相關(guān)炎性病癥例如變應(yīng)性結(jié)膜炎、眼部炎癥、皮炎、鼻炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)或肥大細(xì)胞病，例如其與本文引用的Syk的所不希望的或不適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)或活性有關(guān)。與這種疾病相關(guān)的眼的結(jié)構(gòu)例如可以包括眼、視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、晶狀體、角膜、小梁網(wǎng)、虹膜、視神經(jīng)、視神經(jīng)乳頭、鞏膜、眼房、玻璃體房、睫狀體或后段。與這種疾病相關(guān)的耳的結(jié)構(gòu)例如可以包括內(nèi)耳、中耳、外耳、鼓室或鼓膜、耳蝸或歐氏管。與這種疾病相關(guān)的肺結(jié)構(gòu)例如可以包括鼻、口、咽、喉、小支氣管、氣管、隆凸(分開(kāi)右和左主支氣管的洞的脊)和肺，尤其是下肺例如細(xì)支氣管和肺泡。受治療者也可以是耳細(xì)胞、肺細(xì)胞、目艮細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物、器官或者活體外器官或組織。藥物制劑包括本發(fā)明的干擾RNA或其鹽，其以高達(dá)99%的重量比例與生理學(xué)上可接受的載體介質(zhì)混合，所述生理學(xué)上可接受的載體介質(zhì)例如水、緩沖液、生理鹽水、甘氨酸、透明質(zhì)酸、甘露醇及類(lèi)似物。本發(fā)明的干擾RNA可作為固體、溶液、混懸液和乳劑施用。下面內(nèi)容是本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的可能的制劑的實(shí)例。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>通常，本發(fā)明實(shí)施方式的有效量的干擾RNA，在靶細(xì)胞表面形成的細(xì)胞外濃度是從100pM至100nM、或從1nM至50nM、或從5nM至大約10nM、或者大約25nM。獲得這種局部濃度的所需劑量會(huì)取決于許多因素而變化，所述因素包括遞送方法、遞送的位點(diǎn)、在遞送位點(diǎn)和靶細(xì)胞或組織之間的細(xì)胞層的數(shù)目，遞送是局部性的還是全身性，等。遞送位點(diǎn)的濃度可以相當(dāng)大地高于在靶細(xì)胞或組織表面的濃度。每天一至四次遞送局部的組合物到靶器官表面，或者以延長(zhǎng)的遞送時(shí)間表例如每天、每周、每?jī)芍堋⒚吭禄蚋L(zhǎng)的時(shí)間表，這根據(jù)臨床醫(yī)師的常規(guī)判斷。制劑的pH值是大約pH4-9、或者pH4.5至pH7.4。用siRNA的患者的治療性治療，其通過(guò)增加作用的持續(xù)時(shí)間、而預(yù)期具有超過(guò)小分子治療的有益性，所述siRNA直接對(duì)抗SykmRNA，因而允許較低頻率的給藥和較高的患者依從性。制劑的有效量可以取決于下列因素，例如受治療者的年齡、種族和性別，例如Syk相關(guān)炎性病癥的嚴(yán)重度、耙基因轉(zhuǎn)錄/蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)的速率、干擾RNA的效力和干擾RNA的穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方式中，干擾RNA被局部遞送到靶器官，并且以治療的劑量到達(dá)含有脾酪氨酸激酶的組織，因而改善了Syk相關(guān)性病變。T凝f戎謬可接受載體指那些載體，所述那些載體最多導(dǎo)致幾乎沒(méi)有至沒(méi)有眼部刺激、而且如果需要的話提供適合的保護(hù)，并且遞送均勻劑量的本發(fā)明的一個(gè)或更多的干擾RNA。本發(fā)明實(shí)施方式的、用于施用干擾RNA的可接受載體包括基于陽(yáng)離子脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑TmnsIT-TKO(MinisCorporation,Madison,WI)、LIPOFECTIN、Lipofectamine、OLIGOFECTAMINE(Invitrogen,Carlsbad,CA)或DHARMAFECT(Dharmacon,Lafayette,CO);多聚陽(yáng)離子例如聚乙烯亞胺；陽(yáng)離子肽例如Tat、多聚精氨酸或者Penetratin(Antp肽)；或者脂質(zhì)體。脂質(zhì)體是從標(biāo)準(zhǔn)的形成泡嚢(vesicle)的脂質(zhì)或固醇(例如膽固醇)形成，并且可以包括靶向分子例如單克隆抗體，例如所述耙分子具有對(duì)于上皮細(xì)胞表面抗原的親合力。此外，脂質(zhì)體可以是聚乙二醇化脂質(zhì)體。干護(hù)ORNA可以以溶液、混懸液、生物蝕解性或非生物蝕解性的遞送裝置遞送。千擾RNA可以單獨(dú)遞送或者作為確定的共價(jià)的共軛物的組分遞送。干擾RNA也可以與陽(yáng)離子脂質(zhì)、陽(yáng)離子肽或者陽(yáng)離子聚合物絡(luò)合；與蛋白質(zhì)、融合蛋白或者具有核酸結(jié)合性質(zhì)的蛋白質(zhì)區(qū)域(例如魚(yú)精蛋白)絡(luò)合；或者包裹在納米粒子中。通過(guò)包括適當(dāng)?shù)陌蚁虿糠掷缈贵w或抗體片段，能完成組織特異性或細(xì)胞特異性遞送。關(guān)于眼、耳或肺的遞送，千擾RNA可以與下述物質(zhì)結(jié)合眼科、光學(xué)或肺可接受的防腐劑，共溶劑，表面活性劑，粘性增強(qiáng)劑，滲透促進(jìn)劑，纟爰沖液，氯化鈉，或者水，以形成水溶液，滅菌混懸液或'溶液。通過(guò)用生理學(xué)上可接受的等滲水性緩沖液(isotonicaqueousbuffer)溶解干擾RNA，可以制備溶液制劑。此外，所述溶液可以包括可接受的表面活性劑以協(xié)助溶解抑制劑。粘性建立試劑(Viscositybuildingagent)例如羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、曱基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或者類(lèi)似物可以加入到本發(fā)明的組合物中以改善化合物的滯留(retention)。為了制備無(wú)菌軟膏制劑，可將干擾RNA在適當(dāng)?shù)妮d體中與防腐劑結(jié)合，所述防腐劑例如礦物油、液體羊毛脂或白凡士林。通過(guò)在親水性堿中懸浮干擾RNA，可以制備無(wú)菌凝膠制劑，所述親水性堿依照本領(lǐng)域已知的方法，例如由CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)或類(lèi)似物的聯(lián)合體制備。例如VISCOAT(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可以用于眼內(nèi)注射。在干擾RNA較少滲透進(jìn)所感興趣的器官或組織的情況下，本發(fā)明的其他組合物可以含有滲透增強(qiáng)劑例如Cremephor和TWEEN80(聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯，SigmaAldrich,St.Louis,MO)。試教J^:本發(fā)明的實(shí)施方式提供了一種試劑盒，其包括如本文所引用的在細(xì)胞中用于弱化mRNA表達(dá)的試劑。試劑盒含有siRNA或shRNA表達(dá)載體。對(duì)于siRNA和非病毒shRNA表達(dá)載體，試劑盒也可以含有轉(zhuǎn)染試劑和其他適合的遞送載體。對(duì)于病毒shRNA表達(dá)載體，試劑盒可以含有病毒載體和/或病毒載體產(chǎn)生的必要元件(例如包裝細(xì)胞系以及一種載體，所迷載體包括病毒載體才莫板和用于包裝的額外輔助性載體)。試劑盒也可以含有siRNA或shRNA表達(dá)載體的陽(yáng)性和陰性對(duì)照(例如非靶向siRNA對(duì)照或者靶向不相關(guān)mRNA的siRNA)。試劑盒也可以含有用于評(píng)估預(yù)期靶基因敲低的試劑(例如引物和探針，其用于定量PCR以檢測(cè)靶mRNA和/或抗體，所述靶mRNA和/或抗體對(duì)抗用于蛋白質(zhì)印跡的相關(guān)蛋白)?？蛇x擇地，試劑盒可以包括siRNA序列或shRNA序列，以及用于通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生siRNA、或者用于構(gòu)建shRNA表達(dá)載體所必需的說(shuō)明書(shū)和材料。進(jìn)一步提供了在試劑盒形式中的藥物聯(lián)合體，所述藥物聯(lián)合體包括在包裝的聯(lián)合體中的載體工具和第一容器工具，所述載體工具適應(yīng)于以與其緊密限制的方式接受容器工具，所述第一容器工具包括干擾RNA組合物和可接受的載體。如果需要這種試劑盒能進(jìn)一步包括，例如一個(gè)或更多的不同的傳統(tǒng)的藥物試劑盒組分，例如含有一個(gè)或更多的藥學(xué)上可接受載體的容器以及另外的容器等，這些對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該容易理解。印刷的技術(shù)說(shuō)明書(shū)也能包括在試劑盒中，所述技術(shù)說(shuō)明書(shū)作為插件或作為標(biāo)簽，指示施用組分的量、施用的指導(dǎo)方針、和/或混合組分的指導(dǎo)方針。如下述在體外評(píng)估了Syk千擾RNA的能力，所述能力是Syk干擾RNA敲低例如在人角膜上皮細(xì)胞中內(nèi)源性Syk表達(dá)的水平。轉(zhuǎn)化的人角膜上皮細(xì)胞，例如CEPI-17細(xì)胞系(Offord等(1999)/"ve^(9//^/w/mo/Pfe40:1091-1101)，平板培養(yǎng)24h后在KGM角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基中(Cambrex,EastRutherford,NJ)轉(zhuǎn)染。依照制造商的技術(shù)說(shuō)明書(shū)使用DharmaFECTTM1(Dharmacon,Lafayette,CO)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，Syk干擾RNA的濃度范圍處于O.lnM-lOOnM之間。非靶向干擾RNA對(duì)照和核纖層蛋白A/C千擾RNA(Dharmacon)用作對(duì)照。靶mRNA水平轉(zhuǎn)染后24h通過(guò)qPCR評(píng)估，使用例如TAQMAN⑧正向和反向引物和包括耙位點(diǎn)的^笨針組合(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)進(jìn)行。大約轉(zhuǎn)染后72h(準(zhǔn)確時(shí)間取決于蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)率)例如通過(guò)蛋白質(zhì)印跡可以評(píng)估靶蛋白水平。從所培養(yǎng)的細(xì)胞中分離RNA和/或蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是廣泛知曉的。為減少非特異性和脫靶效應(yīng)(off-targeteffect)的可能性，使用Syk干擾RNA的最低可行濃度以產(chǎn)生靶基因表達(dá)中期望水平的敲低。本文引用的參考資料通過(guò)引用結(jié)合入本文，引用程度至它們提供對(duì)于本文所闡述內(nèi)容具有補(bǔ)充性的示例性程序或其他細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員在本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容的啟發(fā)下，應(yīng)理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍情況下可以對(duì)本文公開(kāi)的實(shí)施方式進(jìn)行顯而易見(jiàn)的修改。在本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容的啟發(fā)下，在無(wú)過(guò)多實(shí)驗(yàn)情況下能進(jìn)行和執(zhí)行本文公開(kāi)的所有實(shí)施方式。在公開(kāi)的內(nèi)容和其等同的實(shí)施方式中陳述了本發(fā)明的全部范圍。本說(shuō)明書(shū)不應(yīng)被解釋為不當(dāng)?shù)乜s小了本發(fā)明給予保護(hù)的全部范圍。在293FT細(xì)胞中特異性沉默SYK的干擾RNA本研究檢測(cè)了SYK干擾RNA的能力，所述能力是在所培養(yǎng)的293FT細(xì)胞中沉默內(nèi)源性SYK蛋白表達(dá)的水平。使用SYKsiRNA、無(wú)RISCsiRNA#1si對(duì)照、或者非耙向siRNA弁2(NTC2)si對(duì)照和DHARMAFECT⑧#1轉(zhuǎn)染試劑(Dharmacon,Lafayette,CO)的標(biāo)準(zhǔn)體外濃度(0.1-10nM)，完成293FT細(xì)胞(Invitrogen,Carlsbad,CA)轉(zhuǎn)染。所有的siRNA溶解在IXsiRNA緩沖液中，所述緩沖液是20mMKC1、6mMHEPES(pH7.5)和0.2mMMgCl2的水溶液。對(duì)照樣品包括緩沖液對(duì)照，其中siRNA的體積被同等體積的IXsiRNA緩沖液(-siRNA)替代。使用抗-SYK抗體(SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡以評(píng)估SYK蛋白表達(dá)。SYKsiRNA是雙鏈干擾RNA,其具有對(duì)于下述靶序列的特異性siSYK#2靶向序列AAUGCCUUGGUUCCAUGGAIDNO:45);siSYK#6耙向序列GAACUGGGCUCUGGUAAUU(SEQIDNO:46);siSYK#8靶向序列GAACAGACAUGUCAAGGAU(SEQIDNO:47)。如圖1中數(shù)據(jù)顯示，相對(duì)于siRNA對(duì)照，siSYK#5、siSYK#6和siSYK#8在10nM和1nM濃度時(shí)明顯降低了SYK蛋白表達(dá)，但在O.lnM時(shí)顯示降低的效力。siSYK#6和siSYK#8siRNA尤其有效。在所有三種濃度時(shí)siSYK#2siRNA是無(wú)效的。權(quán)利要求1.一種弱化受治療者的SykmRNA表達(dá)的方法，其包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA(iRNA)、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括選自下述組的區(qū)域一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO2、SEQIDNO13-40和SEQIDNO44-47中任一個(gè)的mRNA3’端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90％的序列互補(bǔ)性，或至少90％的序列同一性；一個(gè)至少14個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述14個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO2、SEQIDNO13-40和SEQIDNO44-47中任一個(gè)的mRNA3’端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少85％的序列互補(bǔ)性，或至少85％的序列同一性；以及一個(gè)至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸分別與相應(yīng)于SEQIDNO2、SEQIDNO13-40和SEQIDNO44-47中任一個(gè)的mRNA3’端次末端的15、16、17或18個(gè)核苷酸具有至少80％的序列互補(bǔ)性，或至少80％的序列同一性，其中所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并包括一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域的第二種干擾RNA，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸具有與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的第二種mRNA3'端次末端的13個(gè)核苷酸至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述干擾RNA是shRNA。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的組合物經(jīng)由氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、眼、口、耳、胃腸外、貼片、皮下、舌下、局部或透皮途徑施用。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述干擾RNA通過(guò)能夠表達(dá)所述干擾RNA的表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)而被施用。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述干擾RNA是miRNA或siRNA中的至少一種。7.—種在需要對(duì)其治療的受治療者中治療Syk相關(guān)炎性病癥的方法，其包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述千擾RNA包括選自下述組的區(qū)域一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44—47中任一個(gè)的mRNA3，端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性；一個(gè)至少14個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述14個(gè)連續(xù)核苷酸與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44—47中任一個(gè)的mRNA3，端次末端的14個(gè)核普酸具有至少85%的序列互補(bǔ)性，或至少85%的序列同一性；以及一個(gè)至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述15、16、17或18個(gè)連續(xù)核普酸分別與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的mRNA3，端次末端的15、16、17或18個(gè)核苷酸具有至少80%的序列互補(bǔ)性，或至少80%的序列同一性，其中所述Syk相關(guān)炎性病癥由此而治療。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并且包括一個(gè)至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域的第二種干擾RNA，所述13個(gè)連續(xù)核苷酸具有與相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的第二種mRNA3'端次末端的13個(gè)核苷酸至少90%的序列互補(bǔ)性，或至少90%的序列同一性。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述千擾RNA是shRNA。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的組合物經(jīng)由氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、眼、口、耳、胃腸外、貼片、皮下、舌下、局部或透皮途徑施用。11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述干擾RNA通過(guò)能夠表達(dá)所述干擾RNA的表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)而被施用。12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述千擾RNA是miRNA或siRNA中的至少一種。13.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述受治療者是人并且所述人14.一種弱化受治療者的SykmRNA表達(dá)的方法，其包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核普酸的區(qū)域；其中所述反義鏈在生理?xiàng)l件下與選自下述組的mRNA的一部分雜交與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核香酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苷酸，其中所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。15.根據(jù)權(quán)利要求14所迷的方法，其中所述受治療者是人并且所述人患有Syk相關(guān)炎性病癥或具有形成Syk相關(guān)炎性病癥的危險(xiǎn)。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中受治療者是人并且所迷人患17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其進(jìn)一步包括向受治療者施用第二種干擾RNA,所述干擾RNA具有19至49個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度并且包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域；其中所述第二種干擾RNA的反義鏈在生理?xiàng)l件下與選自下述組的mRNA的第二個(gè)部分雜交與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第1007、1698或1769位核苦酸。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的有義核苷酸鏈和所述反義核普酸鏈通過(guò)環(huán)狀核苦酸鏈連接。19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的組合物經(jīng)由氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、眼、口、耳、胃腸外、貼片、皮下、舌下、局部或透皮途徑施用。20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述干擾RNA通過(guò)能夠表達(dá)所述千擾RNA的表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)而被施用。21.—種在需要對(duì)其治療的受治療者中治療Syk相關(guān)炎性病癥的方法，其包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，所述干擾RNA包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域；其中所述反義4連在生理?xiàng)l件下與選自下述組的mRNA的一部分雜交與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>位核苷酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核苷酸，其中所述Syk相關(guān)炎性病癥由此而治療。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述受治療者是人并且所述23.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其進(jìn)一步包括向受治療者施用第二種干擾RNA，所述第二種干擾RNA具有19至49個(gè)核普酸的長(zhǎng)度并且包括有義核苷酸鏈，反義核苷酸鏈，和具有至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)性的至少19個(gè)核苷酸的區(qū)域；其中所述第二種千擾RNA的反義鏈在生理?xiàng)l件下與選自下述組的mRNA的第二個(gè)部分雜交與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核苷酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核香酸。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的有義核苷酸鏈和所述反義核普酸鏈通過(guò)環(huán)狀核苷酸鏈連接。25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的組合物經(jīng)由氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、眼、口、耳、胃腸外、貼片、皮下、舌下、局部或透皮途徑施用。26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述干擾RNA通過(guò)能夠表達(dá)所述干擾RNA的表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)而被施用。27.—種弱化受治療者的SykmRNA表達(dá)的方法，其包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括有效量的具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的單鏈干擾RNA、以及藥學(xué)上可接受的載體，分雜交""'與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA,其包括第642、789、791、860、861、862、867、868、1009、1273、1394、1436、1471、1472、1533、1535、1547、1680、1738、1739、1766、1880、1947、2022、2036、2328、2329、2473、2509、2520、2524、2558、或2613位核香酸，以及，與SEQIDNO:1相應(yīng)的mRNA，其包括第1007、1698或1769位核苷酸，并且所述干擾RNA含有與相應(yīng)于SEQIDNO:1的mRNA的雜交部分至少是近乎完全的連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域，其中所述SykmRNA的表達(dá)由此而弱化。28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述的組合物經(jīng)由氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、目艮、口、耳、胃腸外、貼片、皮下、舌下、局部或透皮途徑施用。29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述千擾RNA通過(guò)能夠表達(dá)所述干擾RNA的表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)施用所述干擾RNA。30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述干擾RNA是miRNA或siRNA中的至少一種。31.—種在需要對(duì)其治療的受治療者中治療眼部炎癥或結(jié)膜炎的方法，其包括施用一種組合物到受治療者，所述組合物包括雙鏈siRNA分子，其經(jīng)由RNA干擾而下調(diào)Syk基因的表達(dá)，其中所述siRNA分子的每條鏈獨(dú)立具有大約19至大約27個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度；以及所述siRNA分子的一條鏈包括與相應(yīng)于Syk基因的mRNA大致互補(bǔ)的核苷酸序列，使得所述siRNA分子經(jīng)由RNA千擾直接切割所述mRNA。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述的組合物經(jīng)由氣霧劑、含服、皮膚、皮內(nèi)、吸入、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮內(nèi)、肺內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、眼、口、耳、胃腸外、貼片、皮下、舌下、局部或透皮途徑施用。33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述干擾RNA通過(guò)能夠表達(dá)所述干擾RNA的表達(dá)載體的體內(nèi)表達(dá)而被施用。34.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述干擾RNA是miRNA。35.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中siRNA分子的每條鏈獨(dú)立具有大約19至大約25個(gè)核普酸的長(zhǎng)度，或獨(dú)立具有大約19至大約21個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。36.—種組合物，其包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并且包括相應(yīng)于SEQIDNO:2、SEQIDNO:13-40和SEQIDNO:44-47中任一個(gè)的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的千擾RNA;和藥學(xué)上可接受的載體。37.—種組合物，其包括具有19至49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度并且主要由相應(yīng)于SEQIDNO:41-47中任一個(gè)的核香酸序列或其互補(bǔ)序列組成的干擾RNA;和藥學(xué)上可4妻受的載體。38.根據(jù)權(quán)利要求36所迷的組合物，其中所述干擾RNA是shRNA、siRNA或miRNA中的至少一種。39.根據(jù)權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述干擾RNA是shRNA、siRNA或miRNA中的至少一種。全文摘要提供用于抑制脾酪氨酸激酶(Syk)mRNA表達(dá)的RNA干擾，具體而言，用于治療患有Syk相關(guān)炎性病癥(Syk-relatedinflammatorycondition)或具有形成Syk相關(guān)炎性病癥的危險(xiǎn)的患者，所述Syk相關(guān)炎性病癥例如變應(yīng)性結(jié)膜炎、眼部炎癥(ocularinflammation)、皮炎、鼻炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)或肥大細(xì)胞病。文檔編號(hào)C07H21/04GK101443020SQ200780013188公開(kāi)日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年4月13日優(yōu)先權(quán)日2006年4月13日發(fā)明者丹尼爾·A·葛瑪奇,喬恩·E·查特頓,史蒂文·T·米勒,約翰·M·雅尼申請(qǐng)人:愛(ài)爾康研究有限公司