專利名稱：具有緩激肽拮抗劑作用的肽類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有緩激肽拮抗劑作用的新肽類以及它們的制備方法。
在文獻WO86/07263中敘述了緩激肽拮抗劑肽類，其中特別描述了一種肽激素-緩激肽或其它緩激肽類似物7位上的L-脯氨酸被D-氨基酸取代，如D-Phe，D-Thi，D-Pal，CDF，D-Nal，MDY，D-Phg，D-His，D-Trp，D-Tyr，D-hphe，D-Val，D-Ala，D-Ile，D-Leu和DOMT。
本發(fā)明目的是尋找新的具有緩激肽拮抗劑作用的肽類。
通過具有通式(Ⅰ)的肽類以及它們的生理學(xué)上可耐受的鹽類，可達到此目的。
其中，A a1)表示H，(C1～C8)-烷基(C1～C8)-烷?；?C1～C8)-烷氧羰基或(C1～C8)-烷基磺酰基，其中，在所有情況下，1，2或3個氫原子可任意地被1，2或3個相同的或不同的基團取代，這些基團包括羧基，氨基，(C1～C4)-烷基，(C1～C4)-烷氨基，羥基，(C1-C4)-烷氧基，鹵素，二-(C1～C4)-烷氨基，氨甲?；被酋；?，(C1～C4)-烷氧羰基，(C6～C12)-芳基和(C6～C12)-芳基-(C1～C5)-烷基，或者在所有情況下，一個氫原子可任意地被下列基團取代，這些基團包括(C3～C8)-環(huán)烷基，(C1～C4)-烷基磺?；?C1～C4)-烷基亞磺?；?，(C6～C12)-芳基-(C1～C4)-烷基磺?；?，(C6～C12)-芳基-(C1～C4)-烷基亞磺酰基，(C6～C12)-芳氧基，(C3～C9)-雜芳基和(C3～C9)-雜芳氧基以及1或2個氫原子被1或2個相同的或不同的基團取代，這些基團包括羧基，氨基，(C1～C4)-烷氨基，羥基，(C1～C4)-烷氧基，鹵素，二-(C1～C4)-烷基氨基，氨甲?；?，氨磺?；?，(C1～C4)-烷氧羰基，(C6～C12)-芳基，和(C6～C12)-芳基-(C1～C5)-烷基，a2)表示(C3～C8)-環(huán)烷基，氨甲?；?，其氮原子上可任意地被(C1～C6)-烷基或(C6～C12)-芳基取代，(C6～C12)-芳基，(C7～C13)-芳酰基，(C6～C12)-芳基磺?；?，(C3～C9)-雜芳基，或(C3～C9)-雜芳?；?，其中，在所有情況下，由a1)和a2)定義的基團芳基，雜芳基，芳酰基，芳基磺酰基和雜芳?；扇我獾乇?，2，3或4個相同的或不同的取代基取代，這些取代基包括羧基，
氨基，硝基，(C1～C4)-烷氨基，羥基，(C1～C4)-烷基，(C1～C4)-烷氧基，鹵素，氰基，二-(C1～C4)-烷基氨基，氨甲?；?，氨磺?；?C1～C4)-烷氧羰基，或a3)代表具有下列通式Ⅱ的基團
R1的定義與A在a1)或a2)項中的定義相同，R2代表氫或甲基，R3代表氫或(C1～C6)-烷基，最好是(C1～C4)-烷基，其可任意地被下列基團進行單取代氨基，取代氨基，羥基，羧基，
氨甲?；?，胍基，取代胍基，脲基，巰基，甲基巰基，苯基，4-氯代苯基，4-氟代苯基，4-硝基苯基，4-甲氧苯基，4-羥基苯基，苯二(甲)酰亞氨基4-咪唑基，3-吲哚基，2-噻吩基，3-噻吩基，2-吡啶基，3-吡啶基或環(huán)己基，其中取代氨基代表具通式-NH-A-化合物，取代胍基代表具通式-NH-C(NH)-NH-A的化合物，其中A的定義同a1)或a2)項中的定義;
B代表L或D構(gòu)型的堿性氨基酸，其側(cè)鏈上可被取代;
C代表具通式Ⅲa或Ⅲb的化合物其中，G′本身獨立代表具通式Ⅳ的基團
其中，R4和R5與帶有它們的原子一起形成具有2至15個碳原子的單雙或三環(huán)雜環(huán)體系，以及n表示2至8;
E代表芳香氨基酸基團;
F本身獨立代表中性，酸性或堿性基團，側(cè)鏈上可被取代的脂肪或芳香氨基酸，或代表直接的鍵;
(D)-Tic表示具通式Ⅴ的基團G的定義同上述的G′，或表示直接的鍵;
F′的定義同F(xiàn)，表示基團-NH-(CH2)n-，其中n＝2～8，或者，如果G不表示直接的鍵時，F(xiàn)′可表示直接的鍵，以及I表示-OH，-NH2或-NHC2H5，K表示基團-NH-(CH2)x-CO，其中x＝1～4或代表直接的鍵，
以及M的定義同F(xiàn)，如果沒有其它說明，不帶有立體描述符的氨基酸的縮寫，均代表L-構(gòu)型的基團(參見Schroder，Lubke，ThePeptides，VolumeI，NewYork1965，PagesXXII-XXIII;Houben-Weyl，MethodendeyOrganischenChemie(MethodsofOrganicChemistry)，VolumeXV/1and2，Stuttgart1974)，例如，Aad，Abu，γAbu，ABz，2ABz，εAca，Ach，Acp，Adpd，Ahb，Aib，βAib，Ala，βAla，ΔAla，Alg，All，Ama，Amt，Ape，Apm，Apr，Arg，Asn，Asp，Asu，Aze，Azi，Bai，Bph，Can，Cit，Cys，Cyta，Daad，Dab，Dadd，Dap，Dapm，Dasu，Djen，Dpa，Dtc，F(xiàn)el，Gln，Glu，Gly，Guv，hAla，hArg，hCys，hgln，hglu，His，hIle，hLeu，hLys，hMet，hPhe，hPro，hSer，hThr，hTrp，hTyr，Hyl，Hyp，3Hyp，Ile，Ise，Iva，Kyn，Lant，Lcn，Leu，Lsg，Lys，βLys，ΔLys，Met，Mim，Min，nArg，Nle，Nva，Oly，Orn，Pan，Pec，Pen，Phe，Phg，Pic，Pro，Pro，Pse，Pya，Pyr，Pza，Qin，Ros，Sar，Sec，Sem，Ser，Thi，βThi，Thr，Thy，Thx，Tia，Tle，Tly，Trp，Trta，Tyr，Val.
具有通式Ⅳ雜環(huán)系統(tǒng)的合適基團特指下列雜環(huán)基團吡咯烷(A);哌啶(B);四氫異喹啉(C);十氫異喹啉(D);八氫吲哚(E);八氫環(huán)戊〔b〕吡咯(F);2-氮雜-二環(huán)〔2.2.2〕-辛烷(G);2-氮雜二環(huán)〔2.2.1〕庚烷(H);2-氮雜螺-〔4.5〕癸烷(I);2-氮雜螺〔4.4〕壬烷(J);螺〔(二環(huán)〔2.2.1〕庚烷)-2，3-吡咯烷〕(K);螺〔(二環(huán)〔2.2.2〕辛烷)-2，3-吡咯烷〕(L);2-氮雜三環(huán)〔4.3.0.16，9〕癸烷(M);十氫環(huán)庚〔b〕吡咯(N);八氫異吲哚(O);八氫環(huán)戊〔c〕吡咯(P);2，3，3a，4，5，7a-六氫吲哚(Q);四氫噻唑(R);2-氮雜二環(huán)〔3.1.0〕己烷(S);異噁唑烷(T);吡咯烷(U);羥脯氨酸(V);所有這些基團均可任意被取代。
基于上述基團的雜環(huán)可從下列文獻得知US-A-4，344，949，US-A-4，374，847，US-A-4，350，704，EP-A-50，800，EP-A-31，741，EP-A-51，020，EP-A-49，658，EP-A-49，605，EP-A-29，488，EP-A-46，953，EP-A-52，870，EP-A-271，865，DE-A-3，226，768，DE-A-3，151，690，DE-A-3，210，496，DE-A-3，211，397，DE-A-3，211，676，DE-A-3，227，055，DE-A-3，242，151，DE-A-3，246，503andDE-A-3，246，757.
其中的部分雜環(huán)在DE-A-3，818，850.3.中進一步被推薦。
在個別情況中，如果沒有特別說明，烷基可以是直鏈也可是支鏈的。由其衍生而來的烷氧基，芳烷基或烷酰基也是如此。
較為可取地，(C6～C12)芳基表示苯基，萘基或聯(lián)苯基。由其衍生而來的基團，如芳氧基，芳烷基或芳?；上鄳?yīng)地作闡述。
鹵素代表氟，氯，溴或碘，較好的是氯。
可能的鹽類特指堿金屬或堿土金屬鹽類，與生理學(xué)上可耐受的胺形成的鹽類及與無機或有機酸，如HCl，HBr，H2SO4，H3PO4馬來酸，富馬酸，檸檬酸，酒石酸及乙酸形成的鹽類。
較好的具通式Ⅰ的肽類如下所述，其中B代表精氨酸，賴氨酸，鳥氨酸，2，4-二氨基丁酰基或L-高精氨酸基團，在所有情況下，側(cè)鏈上的氨基或胍基基團可被A取代，A的定義與a1)或a2)項中的相同;
E代表L-或D-構(gòu)型的芳香氨基酸基團，其中的芳基片斷上含有6～14個碳原子作為環(huán)成員，如在2-，3-或4-位上被鹵素任意取代的苯丙氨酸，酪氨酸，0-甲基酪氨酸，2-噻吩基丙氨酸，2-吡啶基丙氨酸或萘基丙氨酸;
F′代表L-或D-構(gòu)型的堿性氨基酸基團，如精氨酸或賴氨酸，其中側(cè)鏈上的胍基或氨基可被A取代，A的定義與a1)或a2)項中的相同，或表示基團-NH-(CH2)n-，n＝2～8，以及K 代表基團-NH-(CH2)x-CO，x＝2～4，或代表直接的鍵。
更可取的具通式Ⅰ的肽類如下所述，其中B 表示精氨酸，鳥氨酸或賴氨酸，其中側(cè)鏈上的胍基或氨基未被取代，或可被(C1～C8)-烷酰基，(C7～C13)-芳?；?C3～C9)-雜芳?；?，(C1～C8)-烷基磺?；?C6～C12)-芳基磺?；〈?，其中的芳基，雜芳基，芳?；?，芳基磺酰基和雜芳?；鏰2)中所述，可任意地被1，2，3或4個相同的或不同的基團取代。
E表示苯丙氨酸，2-氯代苯丙氨酸，3-氯代苯丙氨酸，4-氯代苯丙氨酸，2-氟代苯丙氨酸，3-氟代苯丙氨酸，4-氟代苯丙氨酸，酪氨酸，0-甲基酪氨酸或β-(2-噻吩基)丙氨酸;
K代表直接的鍵和M代表直接的鍵。
特別可取的具有通式Ⅰ的肽類如下所述，其中，A表示氫，(D)-或(L)-H-精氨酸，(D)-或(L)-H-賴氨酸或(D)-或(L)-H-鳥氨酸，(H-表示N-末端以下同)。
B 表示精氨酸，鳥氨酸或賴氨酸，其中側(cè)鏈上的胍基或氨基可被氫，(C1～C8)-烷酰基，(C7～C13)-芳?；?，(C3～C9)-雜芳?；?C1～C8)-烷基磺?；?C6-C12)-芳基磺酰基取代，其中的芳基，雜芳基，芳?；蓟酋；碗s芳酰基，可任意地被1，2，3或4個相同的或不同的取代基取代，這些取代基包括，甲基，甲氧基和鹵素。
C表示脯氨酸-脯氨酸-甘氨酸，次甘氨酸-脯氨酸-甘氨酸或脯氨酸-次甘氨酸-甘氨酸E表示苯丙氨酸或2-噻吩基丙氨酰F表示絲氨酸，高絲氨酸，賴氨酸，亮氨酸，纈氨酸，正亮氨酸，異亮氨酸或蘇氨酸K代表直接的鍵M代表直接的鍵G代表具有通式Ⅳ的雜環(huán)系統(tǒng)的基團，其中較可取的雜環(huán)基團是吡咯烷(A);哌啶(B);四氫異喹啉(C);順-和反-十氫異喹啉(D);順-內(nèi)-八氫吲哚(E);順-外-八氫吲哚(E);反-八氫吲哚(E);順-內(nèi)-，順-外，反-八氫環(huán)戊〔b〕吡咯，(F);或羥脯氨酸(V)。
F′代表精氨酸和I代表OH
特別可取的具有通式Ⅰ肽類的實例有H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-精-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-精-脯-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OH(-OH表示C-末端。)(Oic為順-內(nèi)-八氫引哚-2-基羰基)此外，本發(fā)明還涉及具有通式Ⅰ肽類的制備方法，其包括a)使一個具有C-末端游離羧基或它的活性衍生物的片斷，與一個合適的具有N-末端游離氨基的片斷反應(yīng)，或b)逐步合成肽，任意地斷裂掉一個或多個為保護化合物(按照步驟(a)或(b)制得)中的其它功能團而暫時引入的保護基團，然后任意地將由此得到的具通式Ⅰ的化合物，轉(zhuǎn)變?yōu)樗鼈兩韺W(xué)上可耐受的鹽類。
本發(fā)明中的肽類是用肽化學(xué)中已知的方法來制備的，例如，可參見Houben-Weyl所著的MethodenderorganischenChemie(MethodsofOrganicChemistry)，Volume15/2一書，比較可取的是借助于固相合成的方法，如B.Merrifield，在J.Am.Chem.Soc.85，2149(1963)或R.C.Sheppard在Int.J.PeptideProteinRes.21，118(1983)中所述，或者采用等同的已知方法。采用尿烷保護基團作為α-氨基的保護基團，例如叔-丁氧基羰基(Boc)或9-芴基甲氧羰基(Fmoc)等。假如需要防止副反應(yīng)的發(fā)生，或者為了合成特定的肽類時，可采用合適的保護基團對氨基酸側(cè)鏈上的功能基進行另外的保護(參見T.W.Greene所著的“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”)，各種氨基酸所用的保護基主要有精(Tos)，精(Mts)，精(Mtr)，精(PMC)，門冬(芐氧基)，門冬(叔丁氧基)，半胱(4-MeBzl)，半胱(Acm)，半胱(叔丁硫基)，甘(芐氧基)，甘(叔丁氧基)，組(Tos)，組(Fmos)，組(Dnp)，組(Trt)，賴(Cl-Z)，賴(Boc)，蛋(氧)，絲(Bzl)，絲(But)，蘇(Bzl)，蘇(But)，色(Mts)，色(醛基)，酪(4-溴芐氧羰基)，酪(Bzl)或酪(But)。
隨著一個保護的氨基酸結(jié)合到合適的樹脂上，從肽的C-末端開始固相合成。將一個保護的氨基酸通過酯鍵或酰胺鍵與聚苯乙烯或聚丙烯酰胺樹脂相結(jié)合(該樹脂是被氯甲基，羥甲基，二苯甲基氨基(BHA)或甲基二苯甲基氨基(MBHA)基團修飾了的)，可得到這類型合成的起始物。用作支持物作用的樹脂在市場上可購得。如果欲使合成的肽在C-末端具有游離的酰胺基團，常使用BHA和MBHA樹脂。如果欲使合成的肽在C-末端具有二級酰胺基團，常使用氯甲基或羥甲基樹脂，并且使用相應(yīng)的胺進行斷裂。例如，如果想得到乙酰胺，即可用乙胺將肽從樹脂上斷裂下來，隨后的側(cè)鏈保護基團的斷裂，可借助于其它合適的試劑進行。如果欲保留肽側(cè)鏈上氨基酸的叔丁基保護基團，可采用下列保護方法進行合成反應(yīng)，用Fmoc保護基臨時阻斷氨基酸上的α-氨基基團(該阻斷方法可參見R.C.Sheppard在J.Chem.Soc.，Chem.Comm1982，587中的論述)，精氨酸上的胍功能基通過高氯酸吡啶鎓鹽的質(zhì)子化作用來進行保護，其它側(cè)鏈上功能化的氨基酸采用芐基保護，后者可借助于催化轉(zhuǎn)移氫化(參見A.Felix等人在J.Org.Chem.13，4194(1978)中的論述)或借助于Na/液NH3體系(參見W.Roberts在J.Am.Chem.Soc.76，6203(1954)中的論述)斷裂掉。
使用合適的試劑，將與樹脂相結(jié)合的氨基酸上的保護基斷裂下來，例如，在Boc保護基情況下，使用三氟乙酸/CH2Cl2溶液，在Fmoc保護基情況下，使用20%濃度哌啶的二甲基甲酰胺溶液，然后，使保護的氨基酸按照所需的順序逐一接上。在與隨后的氨基酸衍生物相鍵合之前，采用前述的試劑，將中間生成的產(chǎn)物N-末端保護肽的樹脂去除封閉。
所有可能的用于肽合成的活性試劑均可作為連接劑，例如，參見Houben-Weyl在MethodenderorganischenChemie(MethodsofOrganicChemistry)，Volume15/2中所述，特指碳化二亞胺類，例如，N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺，N，N′-二異丙基碳化二亞胺或N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺。在這種情況下，連接反應(yīng)可直接通過向樹脂中加入氨基酸衍生物和活化試劑來進行，如果需要的話，還可加入外消旋化抑制添加劑，如1-羥基-苯并三唑(HOBt)(參見W.Konig，R.Geiger，在Chem.Ber.103，708(1970)中的論述)或3-羥基-4-氧-3，4-二羥苯并-三嗪(HOObt)(參見W.Konig，R.Geiger在Chem.Ber.103，2054(1970)中的論述)，然而，氨基酸衍生物作為對稱酸酐或者HOBt或HOObt酯的預(yù)活化可分開進行，并將溶于適當溶劑的活化成份的溶液，加到具有結(jié)合能力的肽樹脂上。
可使用上述任何一種活化試劑，在二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷或所提及的溶劑的混合物中，對氨基酸衍生物進行連接或活化。所用活性氨基酸衍生物通常過量1.5～4倍。如果出現(xiàn)連接不完全的情況，可重復(fù)進行連接反應(yīng)，而無須預(yù)先進行肽樹脂上的α-氨基基團(前者為連接下一個氨基酸所用)的去封閉。
連接反應(yīng)的成功過程，可用茚三酮反應(yīng)來監(jiān)測，例如，像E.Kaiser等人在Anal.Biochem.34595(1970)中所述。該合成也可自動化進行，如選用AppliedBiosystems出品的型號為430A的肽合成儀，既可采用儀器制造商提供的合成程序，也可用使用者自己編制的。在采用以Fmoc為保護基的氨基酸衍生物時，后者尤為適用。
在用上述方法合成肽之后，可用試劑將肽從樹脂上解脫下來，如用液態(tài)氟化氫(用Boc法制備肽時尤為可取)，或用三氟乙酸(用Fmoc法制備肽時尤為可取)。該類溶劑不僅將肽從樹脂上脫掉，而且可切除氨基酸衍生物上其它的側(cè)鏈保護基。以此方式，可得到以游離酸形式存在的肽，用BHA及MBHA樹脂時除外。在BHA或MBHA樹脂上，用氟化氫或三氟甲磺酸解脫時，所得肽為酰胺形式。其它有關(guān)肽酰胺的制備方法步驟見德國專利申請(GermanPatentApplications)P3711866.8及P3743620.1中所述。可用肽合成中常用的中等強度的酸(如，三氟乙酸)將肽酰胺從樹脂上解脫下來，陽離子夾帶劑如苯酚甲酚，甲苯硫酚，苯甲醚，苯硫基甲烷，乙二硫醇，二甲硫醚，乙基甲基硫醚或固相合成中常用的相似的陽離子夾帶劑，可被單獨加入，或者以這些助劑的二種以上混合物的形式加入。在加入夾帶劑的情況下，所用三氟乙酸也可用適宜的溶劑，例如用二氯甲烷稀釋。
假如需要保留肽類的叔丁基或芐基側(cè)鏈保護基，那么這種在特別修飾過的載體樹脂上所合成的肽，可在1%三氟乙酸二氯甲烷溶液中進行解脫。如P.C.Sheppard在J.Chem.Soc.Chem.Comm.1982587中所述。假如個別的叔丁基或芐基側(cè)鏈保護基需要保留，則可采用適宜的合成與解脫相結(jié)合的方法。
在合成有C-末端酰胺基或ω-氨基或ω-胍烷基的肽時，同樣可采用Sheppard所述的修飾過的載體樹脂。在合成之后，將側(cè)鏈全部被保護的肽從樹脂上解脫，并即與適宜的胺或ω-氨基烷，或者ω-胍基烷胺在常規(guī)合成溶液中反應(yīng)。對用已知方法暫時加以保護的且任意存在的其它功能團來說，是有可能性的。
另一種具有ω-氨烷基肽的制備方法，見德國專利申請(GermanPatentApplication)P3635670.0中所述。
合成本發(fā)明中的肽類，最好采用固相技術(shù)，通過兩類通用保護基的手法應(yīng)用自動化肽合成儀(型號430A，AppliedBiosystem出品)，在α-氨基被Boc或Fmoc保護基團暫時封閉的情況下進行合成。
當采用Boc保護基時，可選用儀器制造商預(yù)先編制好的合成程序進行合成。
C-末端具有游離羧基的肽類合成，在AppliedBiosystems出品的4-(羥甲基)苯基乙酰氨基甲基聚苯乙烯樹脂上進行。該樹脂經(jīng)用相應(yīng)的Boc氨基酸功能化處理過(參見R.B.MerrifieldJ.Org.Chem.43，2845(1978)中所述。同一公司出品的MBHA樹脂可用于肽酰胺的制備。
N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺或N，N′-二異丙基碳化二亞胺被用作活化劑?；罨磻?yīng)以對稱酸酐進行，如同HOBt酯或HOObt酯(溶于二氯甲烷，二氯甲烷/二甲基甲酰胺混合溶液或N-甲基吡咯烷(NMP))那樣。進行連接反應(yīng)時須用2-4當量的活化氨基酸衍生物，當連接反應(yīng)進行不完全時，需重復(fù)反應(yīng)。
當用Fmoc保護基對α-氨基進行暫時保護時，采用我們自編的合成程序在AppliedBiosystems出品的430A型肽自動合成儀上進行。合成是在Bachem出品的對芐氧芐基醇樹脂上進行的(見S.Wang在J.Am.Chem.Soc.95，1328(1973)中所述)，該樹脂經(jīng)用適宜的氨基酸按已知方法酯化過(見E.Atherton等人在J.C.S.Chem.Comm1981，336中所述)。氨基酸衍生物作為HOBt或HOObt酯的活化作用，直接在廠商提供的氨基酸筒中進行，即在預(yù)先稱重加入的氨基酸衍生物與HOBt或HOObt混合物中，加入二異丙基碳化二亞胺的DMF溶液。實際上同樣可用制成的Fmoc-氨基酸-OObt酯，如在歐洲專利申請(EuropeanPatentApplication)87，107，634.5.中所述。在反應(yīng)器中用20%濃度的哌啶DMF溶液將Fmo保護基解脫。所用活化氨基酸衍生物過量1.5-2.5當量。如連接反應(yīng)進行不完全，像在Boc方法中一樣，需重復(fù)反應(yīng)。
單獨或合用時，本發(fā)明涉及的肽具有緩激肽拮抗劑作用，它可在各種不同模型中測試出來(見SpringerVerlag著HandbookofExp.Pharmacol.Vol.25，1970P53-55中所述)，如離體鼠子宮，豚鼠回腸，離體豚鼠肺動脈。
為在離體肺動脈上測試本發(fā)明涉及的肽，將重400-450g的豚鼠(DunkinHartley)，用擊頸后部的方法處死。
將胸腔打開，并小心地將肺動脈分割取出，小心地將周圍組織除去，并將肺動脈切成呈45°角螺旋狀。
將2.5cm長，3-4mm寬的脈管條固定在10ml容積的器官浴中，該浴充滿Ringer溶液。
溶液組成(mmol/l)NaCl154KCl5.6CaCl21.9NaHCO32.4葡萄糖5.0將95%O2和5%CO2氣通入溶液，溶液加溫至37℃，PH值為7.4，脈管條的預(yù)載量為1.0g。
用杠桿裝置及HFmodem(位置傳感器，HugoSachs出品)測定等滲收縮變化，并用補償記錄儀(BEC，GoerzMetrawattSE460)記錄。
平衡1小時后開始實驗。在脈管條對2×10-7mol/l緩激肽達到最大靈敏度后(緩激肽導(dǎo)致脈管條收縮)，讓劑量為5×10-8～1×10-5mol/l的肽都起10分鐘作用，之后，再加入緩激肽，緩激肽效應(yīng)的下降程度與對照組相比較。
在測定部分拮抗作用時，所用肽的劑量為1×10-5～1×10-3mol/l。
由量-效曲線計算出的本發(fā)明涉及的肽類的IC50值，見表表-1所示。
表1化合物 IC50(M)H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲- 4.6·10-6(D)-Tic-苯丙-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia- 2.1·10-6絲-(D)-Tic-Thia-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲- 1.2·10-5(D)-Tic-苯丙-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-Glo 2.4·10-5-(D)-Tic-苯丙-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲- 2.5·10-5(D)-Tic-苯丙-精(Mtr)-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲- 2.5·10-7(D)-Tic-脯-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲 1.9·10-7-(D)-Tic-脯-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲 5.6·10-8-(D)-Tic-Aoc-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲 1.7·10-6-β-丙-(D)-Tic-Aoc-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲 3.9·10-7-甘-(D)-Tic-Aoc-精-OH
化合物 IC50〔M〕H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-甘 3.2·10-7-(D)-Tic-(D.L)-Oie-精-OHH-(D)-精-(D)-精-次甘-脯-甘- 4.8·10-7Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHH-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲 1.7·10-7-(D)-Tic-Tic-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲 1.1·10-8-(D)-Tic-Aoc-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲- 4.6·10-8(D)-TicAoc-精-OHH-(D)-酪-精-脯-次甘-甘-Thia-絲 6.2·10-8-(D)-Tic-Aoc-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲 2.6·10-5-(D)-Tic-(D)-Oic-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲 5.4·10-9-(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-賴-脯-次甘-甘-苯丙-絲- 3.2·10-7(D)-Tic-Aoc-精-OHH-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲- 6.8·10-9(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-精-(NO2)-脯-次甘-甘- 6.4·10-8苯丙-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OH
H-(D)-精-精-脯-脯-甘-Thia-絲- 4.2·10-9(D)-Tic-Oic-精-OHH-(D)-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D) 3.4·10-7-Tic-Oic-精-OHH-精-(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲- 3.0·10-8(D)-Tic-Oic-精-OHH-精-(Tos)-脯-次甘-甘-Thia-絲- 1.8·10-8(D)-Tic-Oic-精-OH根據(jù)本發(fā)明，所涉及的肽類治療應(yīng)用范圍，包括所有由緩激肽或與緩激肽有關(guān)的肽類作為媒介所引起或支持的病理狀態(tài)。特別包括損傷，如創(chuàng)傷，燒傷，疹，紅斑，水腫，咽峽炎，關(guān)節(jié)炎，呼吸困難，變態(tài)性，鼻炎，休克，炎癥，低血壓，疼痛，瘙癢以及精液動力異常等。
所以，本發(fā)明還涉及具有通式Ⅰ的肽作為藥物使用，以及涉及含有這些化合物的藥物制劑。
藥物制劑包括有效劑量的具通式Ⅰ的活性成份(單獨或混合)，連同各種無機的或有機的藥學(xué)上可利用的賦形劑。
給藥途徑既可通過腸道，也可通過非腸道，例如皮下給藥，肌肉或靜脈注射給藥，舌下給藥，上表皮給藥，鼻給藥，直腸給藥，陰道給藥，頰內(nèi)給藥或通過吸入給藥。活性物質(zhì)的劑量取決于哺乳動物的種類、體重、年齡及給藥的方式。
本發(fā)明中藥物制劑的制備是采用本來就已知的溶解，混合，成粒或藥片包衣等過程。
如果口服或粘膜給藥，則將活性化合物與常用的添加劑，如賦形劑，穩(wěn)定劑或惰性潤滑劑一起混合，并用常規(guī)的方法制成適合給藥的形式(劑型)，如片劑，包衣片，硬明膠膠束，水合、醇性或油性的懸浮液，或水合、醇性或油性的溶液。可用的惰性賦形劑有阿拉伯膠，氧化鎂，碳酸鎂，磷酸鉀，乳糖，葡萄糖，硬脂酰富馬酸鎂或淀粉，最好是玉米淀粉。在這種情況下，藥物制劑既可以干粒狀也可以濕粒狀存在。合適的油性賦形劑或溶劑有植物或動物油，如葵花油和魚肝油。
用于局部給藥的制劑可以水合或油性的溶液，洗液，乳劑或凝膠，軟膏或脂性軟膏等形式存在，如果可能的話，還可以噴霧劑的形式存在，在需要時可加進聚合物來改善它的附著力。
如果用于鼻腔給藥，將化合物與常用的輔助劑，如穩(wěn)定劑或惰性潤滑劑混合，并用常規(guī)的方法制成適合給藥的形式，如水合、醇性或油性懸浮液，或水合、醇性或油性溶液等。在水合的鼻腔給藥制劑中可加進螯合劑，如乙二胺-N，N，N′，N′-四乙酸，檸檬酸，酒石酸或它們的鹽類，對于鼻腔給藥的溶液，可將其通過計量式霧化器或制成滴鼻劑(含有增加粘度的成份)，或鼻用凝膠或鼻用藥膏來給藥。對于吸入給藥，可用惰性載氣進行霧化或加壓氣化的包裝。
在經(jīng)靜脈，皮下，上表皮或真皮內(nèi)給藥時，將活性化合物或其生理學(xué)上可耐受鹽類制成溶液，懸浮液或乳濁液，如需要可加進制藥學(xué)上常用輔助劑和采取輔助手段，例如，調(diào)節(jié)滲透壓或PH值，加增溶劑，乳化劑或其它輔助劑。
由于上述一些藥物在體液中的半衰期較短，故采用可供注射的緩釋制劑是有效的?？捎玫乃幬飫┬蜑橛蜖罱Y(jié)晶型懸浮液，微膠囊，桿或植入管。后者有可能用組織兼容性的聚合物合成，尤其是生物降解性聚合物，例如，以聚乳酸/聚乙醇酸共聚物或人體白蛋白為基礎(chǔ)的聚合物。
局部應(yīng)用及吸入給藥時的合適劑量范圍是含有0.01-5mg/ml的溶液，而系統(tǒng)給藥時以0.01-10mg/kg為宜。
縮寫詞目錄相應(yīng)于肽化學(xué)中慣用的三字母代碼，用于氨基酸的縮寫詞見Europ.J.Biochem.1389(1984)中所述。另外，用到的縮寫詞如下所列Acm乙酰氨基甲基ε-Ahxε-氨基乙?；鵄oc順-內(nèi)-2-氮雜二環(huán)〔3.3.0〕辛烷-3-S-羰基Boc叔-丁氧羰基But叔-丁基Bzl芐基Cl-Z4-氯芐氧羰基DMF二甲基甲酰胺Dnp2.4-二硝基苯基Fmoc9-芴基甲氧羰基Me甲基4-Mebzl4-甲基芐基Mtr4-甲氧-2.3.6-三甲基苯基磺酰基Mts1.3.5-三甲基苯基-2-磺?；鵑MPN-甲基吡咯烷
Oic順-內(nèi)-八氫引哚-2-基羰基Opr異噁唑烷-3-基羰基Pmc2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；鵗FA三氟乙酸Tos4-甲基苯基磺?；鵗hia2-噻吩基丙氨酰Tic1，2，3，4-四氫異喹啉-3-基羰基Trt三苯甲基用下列實例進一步說明(但不局限于此)本發(fā)明涉及的肽類的固相合成法中可取的方法。
用到下列氨基酸衍生物Fmoc-精(Mtr)-OH，Boc-(D)-精-OH，F(xiàn)moc-精(Pmc)-OH，F(xiàn)moc-次甘(Hyp)-OH，F(xiàn)moc-脯-OObt，F(xiàn)moc-甘-OObt，F(xiàn)moc-苯丙-OObt，F(xiàn)moc-絲(叔丁基)-OObt，F(xiàn)moc-(D)-Tic-OH，F(xiàn)moc-谷氨酰胺-OH，F(xiàn)moc-Aoc-OH，F(xiàn)moc-Thia-OH，F(xiàn)moc-Opr-OH，F(xiàn)moc-(D)-門冬酰胺-OH，F(xiàn)moc-β-丙-OH，F(xiàn)moc-Oic-OH。
實例1H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精-OH是采用肽合成儀(型號430A，AppliedBiosystems出品)按Fmoc法分步合成的，是在用
Fmoc-精-(Mtr)-OH酯化的對芐氧基芐醇樹脂(Novabiochem出品，載量約0.5mmol/克樹脂)上進行的。取用1g樹脂而且合成是在為Fmoc方法作改良的合成程序輔助下實現(xiàn)的。
在所有情況下，將1mmol帶有一個游離羧基的氨基酸衍生物和0.95mmolHOObt一起稱重加到合成儀的藥筒中。在該藥筒中可直接進行這些氨基酸的預(yù)活化，即將其溶于4mlDMF中，并加入2ml，0.55mol二異丙基碳化二亞胺的DMF溶液。
將其它氨基酸的HOObt酯溶于6mlN-甲基吡咯烷中，然后同樣地與樹脂結(jié)合(該樹脂需預(yù)先用20%哌啶DMF溶液去除封閉)，像氨基酸一樣就地被預(yù)活化。合成完畢，用苯硫基甲烷和乙二硫醇作陽離子夾帶劑，將肽從樹脂上洗脫，同時用三氟乙酸除去側(cè)鏈保護基團。除去三氟乙酸后，得到的殘余物用乙酸乙酯反復(fù)加熱浸提并離心。剩下的殘余物用交聯(lián)葡聚糖(Sephadex)LH20進行層析，以10%濃度的乙酸做洗脫劑。合并含有純肽的組份并進行冷凍干燥。
質(zhì)譜(MS)快原子轟擊離子源(FAB)1294(M+H)下列實例2至24中肽的制備和純制類似實例1。
實例2H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-(D)-絲-(D)-Tic-苯丙-精-OHMS(FAB)1294(M+H)實例3
H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Thia-精-OHMS(FAB)1306(M+H)實例4H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精-OHMS(FAB)1294(M+H)實例5H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-谷氨酰胺-(D)-Tic-苯丙-精-OHMS(FAB)1335(M+H)實例6H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1244(M+H)實例7H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-色-(D)-Tic-苯丙-精-OHMS(FAB)1393(M+H)實例8H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1250(M+H)
實例9H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-(D)-門冬酰胺-(D)-Tic-Thia-精-OHMS(FAB)1333(M+H)實例10H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-Opr-(D)-Tic-Thia-精-OHMS(FAB)1301(M+H)實例11H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-(D)-谷氨酰胺-(D)-Tic-Thia-精-OHMS(FAB)1347(M+H)實例12H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-甘-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1307(M+H)實例13H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-苯丙-OHMS(FAB)1241(M+H)實例14H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-苯丙-精-OHMS(FAB)1397(M+H)
實例15H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-β-丙-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1321(M+H)實例16H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-甘-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1220(M+H)實例17H-(D)-精-精-Aoc-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Thia-精-OHMS(FAB)1330(M+H)實例18H-(D)-精-精-脯-Aoc-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Thia-精-OHMS(FAB)1330(M+H)實例19H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1290(M+H)實例20H-(D)-精-精-Opr-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1236(M+H)
實例21H-(D)-精-精-脯-Opr-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1236(M+H)實例22H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Opr-精-OHMS(FAB)1252(M+H)實例23H-(D)-精-(D)-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1290(M+H)實例24H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1290(M+H)實例25～27中的化合物H-(D)-精-精(Mtr)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精-OH和H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精(Mtr)-OH和
H-(D)-精-精(Mtr)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精(Mtr)-OH是按照與實例1相同的方法來制備的。在室溫下于30分鐘內(nèi)，借助三氟乙酸使側(cè)鏈上的保護基團和肽從樹脂上斷裂掉。在所選擇的條件下，只有精氨酸上的Mtr保護基團發(fā)生微不足道的斷裂。部分去除封閉的肽可用反相層析進行分離并純化。
25H-(D)-精-精(Mtr)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精-OHMS(FAB)1506(M+H)26H-(D)-精-精(Mtr)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精(Mtr)-OHMS(FAB)1718(M+H)27H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-精(Mtr)-OHMS(FAB)1506(M+H)下列實例28～31中的肽類化合物的制備和純化方法類似實例25～27。
實例28H-(D)-精-精(Mtr)-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1462(M+H)實例29H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-精(Mtr)-OHMS(FAB)1462(M+H)
實例30H-(D)-精-精(Mtr)-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-苯丙-OHMS(FAB)1453(M+H)實例31H-(D)-精-精(Mtr)-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1502(M+H)實例32H-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-NH-(CH2)4-NH2如EP-A264，802所述，使用Fmoc-氨基酸-OObt酯，采用自動化肽合成儀(型號430A，AppliedBiosystems)及合成程序(已被改良)在1g被附加基團修飾的氨甲基樹脂上進行肽合成，該附加基團的類型如下
為此目的，在所有的情況下，將1mmol合適的氨基酸衍生物稱重加入由制造商提供的藥筒中，再稱重加入Fmoc-精(Mtr)-OH，F(xiàn)moc-次甘-OH和Fmoc-(D)-Tic-OH以及0.95mmol的HOObt。向藥筒中加入4mlDMF和2ml0.55M二異丙基碳化二亞胺的DMF溶液，使這些氨基酸可就地直接進行預(yù)活化。將其它氨基酸的HOObt酯溶于6ml-N-甲基吡咯烷中，然后與樹脂結(jié)合(該樹脂需預(yù)先用20%哌啶DMF溶液去除封閉)，象氨基酸一樣就地被預(yù)活化，被就地活化的氨基酸可在兩端進行連接。合成完畢，采用含有苯硫基甲烷和m-甲(苯)酚(作為陽離子夾帶劑)的三氟乙酸，使4-氨基丁基酰胺(肽)從樹脂上斷裂下來，同時也去除了側(cè)鏈上的保護基團。除去三氟乙酸后得到的殘余物用乙酸乙酯反復(fù)加熱浸提并離心。得到的肽粗品用SephadexG25進行層析，以1N的乙酸作洗脫劑。合并含有純肽的組份并進行冷凍干燥。
實例33～35中的化合物的制備方法類似實例32實例33H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-NH-(CH2)4-NH2實例34HOOC-(CH2)2-CO-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-NH-(CH2)4-NH2實例35HOOC-(CH2)2-CO-(D)-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-苯丙-NH-(CH2)4-NH2實例36～161中的化合物按照實例1中所述的方法合成。
實例36H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-甘-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1307(M+H)
實例37H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-甘-(D)-Tic-脯-精-OHMS(FAB)1307(M+H)實例38H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-苯丙-OHMS(FAB)1241(M+H)實例39H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-β-丙-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1361(M+H)實例40H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-β-丙-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1361(M+H)實例41H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-苯丙-精-OHMS(FAB)1397(M+H)實例42H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-脯-苯丙-精-OHMS(FAB)1397(M+H)
實例43H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-甘-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1260(M+H)實例44H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-甘-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1260(M+H)實例45H-(D)-精-(D)-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1290(M+H)實例46H-(D)-精-(D)-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1290(M+H)實例47H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Tic-精-OHMS(FAB)1312(M+H)實例48H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Tic-精-OHMS(FAB)1312(M+H)
實例49H-(D)-精-精-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1274(M+H)實例50H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1203(M+H)實例51H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Aoc-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1274(M+H)實例52H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-Thia-β-丙-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1274(M+H)實例53H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-β-丙-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1274(M+H)實例54H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-門冬-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1252(M+H)
實例55H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-門冬-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1252(M+H)實例56H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-色-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1323，7(M+H)實例57H-(D)-酪-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1297，7(M+H)實例58H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-(D)-Oic-精-OHMS(FAB)1304，6(M+H)實例59H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1304，6(M+H)實例60H-(D)-精-精-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1289(M+H)
實例61H-(D)-精-賴-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1262(M+H)實例62H-(D)-精-賴-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1276(M+H)實例63H-(D)-精-賴-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1260(M+H)實例64H-(D)-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1298(M+H)實例65H-(D)-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1298(M+H)實例66H-(D)-精-精-脯-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1282(M+H)
實例67H-(D)-精-精-(NO2)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1329，7(M+H)實例68H-(D)-精-精(NO2)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1343(M+H)實例69H-(D)-精-精(NO2)-脯-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1327(M+H)實例70H-(D)-精-精(NO2)-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1333(M+H)實例71H-(D)-精-精(NO2)-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1349(M+H)實例72H-精(TOS)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1302(M+H)
實例73H-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1142(M+H)實例74H-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1233(M+H)實例75H-精(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1296(M+H)實例76H-賴(煙?；?-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1219(M+H)實例77H-精(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1282(M+H)實例78Ac-精(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1324(M+H)
實例79H-D-精-精(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1438(M+H)實例80H-精(Tos)-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1302(M+H)實例81H-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1142(M+H)實例82H-賴(-CO-NH-C6H5)-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1233(M+H)實例83H-精(Tos)-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1296(M+H)實例84H-賴(煙?；?-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1219(M+H)
實例85H-精(Tos)-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1282(M+H)實側(cè)86AC-精(Toc)-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1324(M+H)實例87H-D-精-精(Tos)-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1438(M+H)實例88H-精(Tos)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1286(M+H)實例89H-精-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1126(M+H)實例90H-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1217(M+H)
實例91H-精(Tos)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1280(M+H)實例92H-賴(煙?；?-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1203(M+H)實例93H-精(Tos)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1266(M+H)實例94AC-精(Tos)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1308(M+H)實例95H-D-精-精(Tos)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1422(M+H)實例96H-精-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1148(M+H)
實例97H-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1239(M+H)實例98H-賴(煙?；?-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1225(M+H)實例99H-精(Tos)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1288(M+H)實例100AC-精(Tos)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1330(M+H)實例101H-D-精-精(Tos)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1444(M+H)實例102H-精-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1148(M+H)
實例103H-賴(-CO-NH-C6H5)-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1239(M+H)實例104H-賴(煙?；?-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1225(M+H)實例105H-精(Tos)-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1288(M+H)實例106Ac-精(Tos)-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1330(M+H)實例107H-D-精-精(Tos)-次甘-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1440(M+H)實例108H-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1225(M+H)
實例109H-賴(煙酰基)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1209(M+H)實例110H-精(Tos)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1272(M+H)實例111Ac-精(Tos)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1314(M+H)實例112H-D-精-精(Tos)-脯-脯-甘-Thia-絲-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1428(M+H)實例113H-D-精-賴(煙?；?-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1365(M+H)實例114H-D-精-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1379(M+H)
實例115H-D-精-精(Tos)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1442(M+H)實例116H-賴-賴(煙?；?-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1337(M+H)實例117H-賴-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1351(M+H)實例118H-賴-精(Tos)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1414(M+H)實例119H-D-精-賴(煙?；?-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1381(M+H)實例120H-D-精-賴(CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1395(M+H)
實例121H-D-精-精(Tos)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1458(M+H)實例122H-賴-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1367(M+H)實例123H-賴-賴(煙?；?-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1353(M+H)實例124H-賴-精(Tos)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1430(M+H)實例125H-D-精-賴(煙?；?-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1359(M+H)實例126H-D-精-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1373(M+H)
實例127H-D-精-精(Tos)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1436(M+H)實例128H-賴-賴(煙酰基)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1331(M+H)實例129H-賴-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1345(M+H)實例130H-賴-精(Tos)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1408(M+H)實例131H-D-精-賴(煙?；?-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1375(M+H)實例132H-D-精-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1389(M+H)
實例133H-D-精-精(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1452(M+H)實例134H-賴-賴(煙?；?-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1347(M+H)實例135H-賴-賴(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1361(M+H)實例136H-賴-精(Tos)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1424(M+H)實例137H-D-精-鳥(煙?；?-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1351(M+H)實例138H-D-精-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1428(M+H)
實例139H-賴-鳥(煙?；?-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1323(M+H)實例140H-賴-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1337(M+H)實例141H-D-精-鳥(煙?；?-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1367(M+H)實例142H-D-精-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1381(M+H)實例143H-賴-鳥(煙酰基)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1339(M+H)實例144H-賴-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-Thia-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1353(M+H)
實例145H-D-精-鳥(煙?；?-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1345(M+H)實例146H-D-精-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1359(M+H)實例147H-賴-鳥(煙酰基)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1317(M+H)實例148H-賴-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1331(M+H)實例149H-D-精-鳥(煙?；?-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1361(M+H)實例150H-D-精-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1375(M+H)
實例151H-賴-鳥(煙?；?-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1333(M+H)實例152H-賴-鳥(-CO-NH-C6H5)-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1347(M+H)實例153H-賴-賴-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1218(M+H)實例154H-賴-賴-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1234(M+H)實例155H-賴-賴-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1234(M+H)實例156H-賴-賴-脯-脯-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1212(M+H)
實例157H-賴-賴-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1228(M+H)實例158H-賴-賴-脯-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Aoc-精-OHMS(FAB)1232(M+H)實例159H-賴-賴-脯-次甘-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1248(M+H)實例160H-賴-賴-次甘-脯-甘-Thia-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1226(M+H)實例161H-賴-賴-脯-次甘-甘-苯丙-絲-(D)-Tic-Oic-精-OHMS(FAB)1242(M+H)實例162～164中的化合物是使用具有下列結(jié)構(gòu)式的樹脂，按照與實例32相同的方法來合成的(詳見EP-A322，348中的敘述)。
實例162H-D-精-精-脯-次甘-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-NH2MS(FAB)1283(M+H)實例163H-D-精-精-次甘-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-NH2MS(FAB)1283(M+H)
實例164H-D-精-精-脯-脯-甘-苯丙-絲-D-Tic-Aoc-精-NH2MS(FAB)1267(M+H)
權(quán)利要求
1.具有通式Ⅰ的肽以及它們的生理學(xué)上可耐受的鹽類，其中，Aa1)代表H(C1-C8)-烷基(C1-C8)-烷?；?C1-C8)-烷氧?；?C1-C8)-烷基磺酰基，其中，在所有情況下，1，2或3個氫原子可任意地被1，2或3個相同的或不同的基團取代，這些基團包括羧基，氨基，(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷氨基，羥基，(C1-C4)-烷氧基，鹵素，二-(C1-C4)-烷基氨基，氨甲?；?，氨磺?；?C1-C4)-烷氧羰基，(C6-C12)-芳基和(C6-C12)-芳基-(C1-C5)-烷基，或者在所有情況下，一個氫原子可任意地被下列基團取代，這些基團包括(C3-C8)-環(huán)烷基，(C1-C4)-烷基磺?；?，(C1-C4)-烷基亞磺?；?C6-C12)-芳基-(C1-C4)-烷基磺?；?，(C6-C12)-芳基-(C1-C4)-烷基亞磺?；?C6-C12)-芳氧基，(C3-C9)-雜芳基和(C3-C9)-雜芳氧基，以及1或2個氫原子任意地被1或2個相同的或不同的基團取代，這些基團包括羧基，氨基，(C1-C4)-烷基氨基，羥基，(C1-C4)-烷氧基，鹵素，二-(C1-C4)-烷基氨基，氨甲?；被酋；?，(C1-C4)-烷氧羰基，(C6-C12)-芳基和(C6-C12)-芳基-(C1-C5)-烷基，a2)表示(C3-C8)-環(huán)烷基，氨甲?；涞由峡扇我獾乇?C1-C6)]-烷基或(C6-C12)-芳基取代，(C6-C12)-芳基，(C7-C13)-芳?；?，(C6-C12)-芳基磺酰基，(C3-C9)-雜芳基，或(C3-C9)-雜芳?；?，其中，在所有情況下，在a1)和a2)項內(nèi)下定義的基團中，雜芳基，芳?；蓟酋；碗s芳?；扇我獗?，2，3或4個相同的不同的基團取代，這些基團包括羧基，氨基，硝基，(C1-C4)-烷氧基，羧基，(C1-C4)-烷基，(C1-C4)-烷氧基，鹵素，氰基，二-(C1-C4)-烷基氨基，氨甲?；被酋；?C1-C4)-烷氧羰基，或a3)表示具有下列通式Ⅱ的基團
R1的定義與A在a1)或a2)項中的定義相同，R2表示氫或甲基，R3表示氫或(C1-C6)-烷基，最好是(C1-C4)-烷基，其可任意地被下列基團進行單取代氨基，取代氨基，羥基，氨甲?；?，胍基，取代胍基，脲基，巰基，甲基巰基，苯基，4-氯化苯基，4-氯化苯基，4-硝基苯基，4-甲氧苯基，4-羥基苯基，苯二(甲)酰亞氨基，4-米唑基，3-吲哚基，2-噻吩基，3-噻吩基，3-噻吩基，2-吡啶基，3-吡啶基或環(huán)已基，其中取代氨基代表具有通式-NH-A-A-化合物，取代胍基代表具通式-NH-C(NH)-NH-A的化合物，其中A的定義與a1)或a2)項中的定義相同；B代表L或D構(gòu)型的堿性氨基酸，其側(cè)鏈上可被取代；C代表具有通式Ⅲa或Ⅲb的化合物其中，G′本身獨立表示具有通式Ⅳ的基團
其中R4和R5連同攜帶它們的原子一起，形成單、雙或三環(huán)雜環(huán)體系，具有2～15個碳原子，且n表示2～8；E代表芳香氨基酸基團；F本身獨立表示中性，酸性或堿性基團，側(cè)鏈上可被取代的脂肪或芳香氨基酸，或代表直接的鏈；(D)-Tie表示具通式Ⅴ的基團
G的定義同上述G′，或表示直接的鍵；F′的定義同F(xiàn)，表示基團-NH-(CH2)n-,其中n=2～8，或者，如果G不表示的直接鍵時，其可表示直接的鍵，以及Ⅰ代表-OH，-NH2或-NHC2H5，K代表基團-NH-(CH2)X-CO，其中X=1～4，或代表直接的鍵，以及M定義同F(xiàn)。
2.如權(quán)利要求1中所述的，具有通式Ⅰ的肽，其中B 表示精氨酸，賴氨酸，鳥氨酸，2，4-二氨基丁?；騆-高精氨酸基團，在所有情況下，側(cè)鏈上的氨基或胍基基團可被A取代，A的定義與權(quán)利要求1中a1)或a2)項下的定義相同;E代表L-或D-構(gòu)型的芳香氨基酸基團，其中的芳香基片斷上含有6～14個碳原子作為環(huán)的成員，如在2-，3-或4-位上被鹵素任意取代的苯丙氨酸，酪氨酸，0-甲基酪氨酸，2-噻吩基丙氨酸，2-吡啶基丙氨酸或萘基丙氨酸;F′表示L-或D-構(gòu)型的堿性氨基酸基團，如精氨酸或賴氨酸，其中側(cè)鏈上的胍基或氨基可被A取代，A的定義與權(quán)利要求1中a1)或a2)項下的定義相同，或表示基團-NH-(CH2)n-，n＝2～8，以及K 代表基團-NH-(CH2)x-CO，x＝2～4，或表示直接的鍵。
3.如權(quán)利要求1和/或2中所述的，具有通式Ⅰ的肽，其中B 表示精氨酸，鳥氨酸或賴氨酸，其中側(cè)鏈上的胍基或氨基未被取代或被(C1-C
)-烷酰基，(C7-C13)-芳酰基，(C3-C9)-雜芳?；?，(C1-C8)-烷基磺酰基或(C6-C12)-芳基磺?；〈?，如a2)中所述，其中的芳基，雜芳基，芳?；蓟酋；碗s芳酰基可任意地被1，2，3或4個相同的或不同的基團取代。E表示苯丙氨酸，2-氯代苯丙氨酸，3-氯代苯丙氨酸，4-氯代苯丙氨酸，2-氟代苯丙氨酸，3-氟代苯丙氨酸，4-氟代苯丙氨酸，酪氨酸，0-甲基酪氨酸或β-(2-噻吩基)丙氨酸;K代表直接的鍵和M代表直接的鍵。
4.如權(quán)利要求1至3中所述的，一個或多個具有通式Ⅰ的肽，其中A表示氫，(D)-或(L)-H-精氨酸，(D)-或(L)-H-賴氨酸或(D)-或(L)-H-鳥氨酸，B 表示精氨酸，鳥氨酸或賴氨酸，其中側(cè)鏈上的胍基或氨基可被氫，(C1-C8)-烷?；?，(C7-C13)-芳?；?，(C3-C9)-雜芳?；?C1-C8)-烷基磺?；?C6-C12)-芳基磺?；〈渲械姆蓟?，雜芳基，芳?；?，芳基磺酰基和雜芳?；扇我獾乇?，2，3或4個相同的或不同的取代基取代，這些取代基包括甲基，甲氧基和鹵素。C表示脯氨酸-脯氨酸-甘氨酸，次甘氨酸-脯氨酸-甘氨酸或脯氨酸-次甘氨酸-甘氨酸。E表示苯丙氨酸或2-噻吩基丙氨酰F表示絲氨酸，高絲氨酸，賴氨酸，亮氨酸，纈氨酸，正亮氨酸，異亮氨酸或蘇氨酸。K代表直接的鍵M代表直接的鍵G代表具有通式Ⅳ的雜環(huán)系統(tǒng)的基團，其中較可取的雜環(huán)基團是吡啶烷(A);哌啶(B);四氫異喹啉(C);順和反-十氫異喹啉(D);順-內(nèi)-八氫吲哚(E);順-外-八氫吲哚(E);反-八氫吲哚(E);順-內(nèi)-，順-外，反-八氫環(huán)戊〔b〕吡咯(F);或羥脯氨酸(V)。F′表示精氨酸以及I代表OH。
5.如權(quán)利要求1～4中所述的，一個或多個具有通式Ⅰ的肽的制備方法，其中包括a)使一個具有C-末端游離羧基或它的活性衍生物的片斷，與一個合適的具有N-末端游離氨基的片斷反應(yīng)，或b)逐步合成肽，任意地斷裂掉一個或多個為保護化合物(按照步驟(a)或(b)制得)中的其它功能，而暫時引入的保護基團，然后任意地將由此得到的具通式Ⅰ的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)樗鼈兩韺W(xué)上可耐受的鹽類。
6.采用如權(quán)利要求1～4中所述的，一個或多個具通式Ⅰ的肽作為藥物。
7.采用如權(quán)利要求1～4中所述的，一個或多個具通式Ⅰ的肽來治療由緩激肽或與緩激肽有關(guān)的肽類作為媒介所引起或支持的各種病理狀態(tài)。
8.含有如權(quán)利要求1～4中所述的，一個或多個具通式Ⅰ的肽的藥物制劑。
全文摘要
具有通式I的肽類具有緩激肽拮抗劑的作用，其中A-B-C-E-F-K(D)-Tic-G-M-F′-I (I)式中各符號定義見說明書。具有通式I的肽類是用已知的肽合成方法來制備的。
文檔編號A61P43/00GK1042918SQ8910706
公開日1990年6月13日 申請日期1989年9月11日 優(yōu)先權(quán)日1988年11月24日
發(fā)明者斯蒂芬·亨克, 海里斯托·阿納諾斯托普勒斯, 格哈特·布雷波爾, 約克恩·諾爾, 詹斯·斯特爾, 伯恩沃德·斯科爾肯斯, 漢斯-沃爾夫羅姆·費爾哈伯 申請人:赫徹斯特股份公司