本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種具有抗抑郁功效的藥物組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

抑郁癥屬于情感性精神障礙的范疇，是一種以顯著而持久的心境低落為主要特征的綜合癥，主要表現(xiàn)有情緒低落、言語減少、精神運(yùn)動(dòng)遲緩、常自責(zé)自罪、企圖自殺等。隨著多種應(yīng)激因素的加劇，抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)的常見病、高發(fā)病，其發(fā)病率正在快速攀升，嚴(yán)重影響患者及家人的生活質(zhì)量，甚至危及患者的生命安全。目前，常規(guī)抗抑郁藥以下幾類：

1、單胺氧化酶抑制劑(maois)和可逆性選擇性單胺氧化酶抑制藥(rima)：單胺氧化酶抑制劑異丙煙肼是第一個(gè)用于治療抑郁癥的藥物，其主要機(jī)理是通過抑制mao活性，減少中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的氧化降解，提高神經(jīng)元突觸間隙遞質(zhì)濃度，從而產(chǎn)生抗抑郁作用。此后相繼有很多類似的化合物用于臨床治療，主要有苯乙肼、異丙肼等。經(jīng)長期臨床觀察，這類藥物易于引起肝臟損害、高血壓危象、急性黃色肝萎縮等嚴(yán)重的不良反應(yīng)，是心血管病人和老年患者的禁藥，所以國內(nèi)逐漸停用。

2、三環(huán)類抗抑郁藥(tcas)：自20世紀(jì)50年代末至今，tcas抗抑郁作用經(jīng)受了考驗(yàn)，即使與新型抗抑郁藥相比，它的療效也是值得肯定的。但由于tcas對神經(jīng)遞質(zhì)的選擇性差，所以不良反應(yīng)多，使得tcas的使用受到了一些限制。經(jīng)典的tcas有丙咪嗪、氯丙咪嗪、阿米替林、多慮平等，其作用是通過抑制5-ht和ne再攝取來實(shí)現(xiàn)的，尤其是抑制ne的再攝取。其中丙咪嗪有較強(qiáng)的振奮作用，可用于遲滯的抑郁癥；阿米替林和多慮平具有鎮(zhèn)靜和抗焦慮作用，用于激越和焦慮狀的抑郁癥；氯丙咪嗪用于具有強(qiáng)迫癥的抑郁癥。

3、四環(huán)類抗抑郁藥(hcas)：該類藥多為ne再攝取抑制藥，抗抑郁作用與三環(huán)類相當(dāng)，但有起效快、耐受性好，抗膽堿作用弱、心臟毒性小、還有抗焦慮作用等特點(diǎn)，適用于老年人和心血管患者。目前，投入臨床應(yīng)用的有馬普替林、米安色林，瑞波西丁。

4、選擇性5-ht再攝取抑制藥(ssris)：ssris是目前新藥開發(fā)中最多的一類，對5-ht再攝取有高選擇性抑制作用，幾乎不影響其他神經(jīng)受體，作用位點(diǎn)相對“單一”，不良反應(yīng)少，目前已成為全球廣為應(yīng)用的抗抑郁一線藥物。ssris的缺點(diǎn)是起效慢，用藥后4～6周才產(chǎn)生明顯效果。目前常用的藥物有氟西汀、舍曲林、帕羅西汀、西酞普蘭和氟伏沙明。

5、選擇性5-ht及ne再攝取抑制劑(snri)：文拉法辛是一類新的苯乙胺衍生物，主要藥理機(jī)制為通過抑制突觸前膜對5-ht及ne的再攝取的雙重作用，增強(qiáng)中樞5-ht及ne神經(jīng)遞質(zhì)的功能，發(fā)揮抗抑郁作用。研究顯示文拉法辛治療的第2周起效，而ssris起效時(shí)間為3～4周，提示其抗抑郁起效快。

6、腎上腺素能和特異性5-ht能抗抑郁藥(nassa)：米氮平主要作用機(jī)制為增強(qiáng)ne能，5-ht能的神經(jīng)功能及特異性阻滯5-ht2及5-ht3受體，拮抗中樞腎上腺素能神經(jīng)突觸前α2自身受體及異質(zhì)受體，增加5-ht及ne水平。另外其對組胺h1受體也有一定程度的拮抗作用，增強(qiáng)鎮(zhèn)靜作用，故有利于改善抑郁癥患者的睡眠障礙。推薦的起始劑量為15mg·d^-1，1次睡前服用，有效劑量為15～45mg·d^-1。對于肝病，腎病和老年患者應(yīng)減少用量。

7、抗抑郁天然藥物：天然植物藥中具有抗抑郁活性的為數(shù)不少。路優(yōu)泰(neuroston)，貫葉連翹的提取物，是國際上第一個(gè)用于抗抑郁的天然植物藥，對輕、中度抑郁癥有顯著效果，并可改善失眠和焦慮，不良反應(yīng)輕，患者能耐受。其浸膏制劑已在德國上市，在德國抗輕、中度抑郁癥藥物市場約占50％。另外柴胡，石莒蒲，銀杏葉，刺五加通過強(qiáng)迫游泳模型或絕望動(dòng)物抑郁模型也證明有明顯抗抑郁作用。

現(xiàn)代化學(xué)藥物抗抑郁藥物費(fèi)用昂貴，且毒副作用很大，因此從中藥、天然藥物中尋找毒性低、療效高的抗抑郁藥物，尤其是復(fù)方抗抑郁藥物是十分必要的。對于新型抗抑郁藥的研究，目前主要希望在以下方面有所創(chuàng)新：(1)療效方面：療效更高，作用譜更廣，包括能快速緩解自殺企圖，對焦慮癥狀與焦慮譜系障礙有效，對難治性抑郁及精神病性抑郁有效，改善睡眠障礙。起效時(shí)間提前，達(dá)到快速起效。(2)不良反應(yīng)方面：減少抗膽堿作用、心臟毒性、性功能障礙、癲癇發(fā)作、過量中毒、5-ht綜合征、誘發(fā)躁狂和快速循環(huán)、突然停藥的“撤藥綜合征”。(3)藥物相互作用方面：減少藥物相互作用，注意療效與不良反應(yīng)的疊加和抵消作用。(4)增加在特殊人群中應(yīng)用的安全性，如老年、兒童、軀體疾病患者等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種具有抗抑郁功效的藥物組合物。

本發(fā)明的另一目的是提供該具有抗抑郁功效的藥物組合物的制備方法。

本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的：

一種具有抗抑郁功效的藥物組合物，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1～3重量份、白頭翁1～3重量份、金蓮花1～3重量份。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物，優(yōu)選由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物與藥學(xué)上可接受的輔料制成藥物制劑，優(yōu)選為片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑。

一種具有抗抑郁功效的藥物組合物的制備方法，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1～3重量份、白頭翁1～3重量份、金蓮花1～3重量份，該制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為25～35mpa，萃取溫度30～45℃，co2流量20～35l·h^-1，萃取時(shí)間1～2h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用5～10倍量60％～70％的乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用5～10倍量水回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度30～37℃，超聲波頻率40～60khz，按1g:16ml～25ml的料液比，加入濃度為90％～100％的乙醇作為提取液，每次提取31～40min，提取1～3次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：3～5，上樣體積：5～7bv，水洗7～9bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑10～12bv洗脫，流速為2～4bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物的制備方法，優(yōu)選該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份，其制備方法的步驟優(yōu)選如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆颍稍?，粉碎，即得。

一種具有抗抑郁功效的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1～3重量份、白頭翁1～3重量份、金蓮花1～3重量份，其制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為25～35mpa，萃取溫度30～45℃，co2流量20～35l·h^-1，萃取時(shí)間1～2h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用5～10倍量60％～70％的乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用5～10倍量水回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度30～37℃，超聲波頻率40～60khz，按1g:16ml～25ml的料液比，加入濃度為90％～100％的乙醇作為提取液，每次提取31～40min，提取1～3次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：3～5，上樣體積：5～7bv，水洗7～9bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑10～12bv洗脫，流速為2～4bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進(jìn)行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為10～30：90～70；流速：0.5～2.0ml·min^-1；柱溫：30～40℃；elsd參數(shù)：漂移管溫度：120～140℃，載氣流速：3.5～4.0ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序?yàn)椋簭?min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：270～290nm；流速：0.5～2.0ml·min^-1；柱溫：25～35℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加60％～80％甲醇溶液制成長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷溶液，即得對照品溶液?。?/p>

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加90～100％甲醇制成含豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品3.0～5.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60％～80％甲醇溶液，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為300～400w，超聲頻率為50～70khz，時(shí)間為15～25min，放冷，再稱定重量，用60％～80％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用乙酸乙酯提取1～4次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯提取液，用0.5～2％鹽酸水溶液充分洗滌1～4次，每次20～40ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘?jiān)?0％～80％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至量瓶中，加60％～80％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液??；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品3.0～5.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入90～100％甲醇，密塞，稱定重量，加熱回流0.5～2h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇洗脫1～3次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各5～20μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份，制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏ⅲ混合均勻，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進(jìn)行含量測定，優(yōu)選的測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數(shù)：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序?yàn)椋簭?min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液??；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時(shí)間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液??；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定。

一種藥物組合物在制備治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份；其制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進(jìn)行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數(shù)：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序?yàn)椋簭?min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液?。?/p>

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時(shí)間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液?。?/p>

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定。

一種藥物組合物在制備治療精神分裂癥藥物中的應(yīng)用，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份；其制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進(jìn)行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數(shù)：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序?yàn)椋簭?min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液ⅰ；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時(shí)間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液?。?/p>

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定。

本發(fā)明所用原料：

白頭翁：毛莨科植物白頭翁屬植物白頭翁(pulsatillachinensis(bunge)regel)的干燥根，又名老翁花，白頭草等，廣泛分布于我國東北、華北、西北和華東等地，另外在朝鮮和俄羅斯西伯利亞也被廣泛應(yīng)用。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為常用中藥，性寒、味苦，具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲的功效。白頭翁的主要成分三萜皂苷具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗病原蟲、提高機(jī)體免疫力、抑制巨噬細(xì)胞分泌l-6、抗癌、抗炎、止瀉、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、殺精、保肝、抑制腸運(yùn)動(dòng)、抗內(nèi)毒素血癥等作用，白頭翁對消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及造血系統(tǒng)等多種疾病均有治療作用。

月見草：柳葉菜科植物onagraceae月見草屬草本植物(oenotherabiennisl.)，又叫待霄草、山芝麻、野芝麻。性溫、味甘，可治療多種疾病，調(diào)節(jié)血液中類脂物質(zhì)，對高膽固醇、高血脂引起的冠狀動(dòng)脈梗塞、粥樣硬化及腦血栓等癥有顯著療效。月見草富含γ-亞麻酸，具有很強(qiáng)的生物活性，月見草油具有明顯的抗炎、抗氧化、抗血栓、降血糖、降血脂、減肥等作用，對糖尿病、高血脂癥、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等具有顯著療效。月見草中含有可以轉(zhuǎn)化為類似荷爾蒙的物質(zhì)，調(diào)節(jié)激素平衡，消除緊張焦慮、易怒失眠、情緒低落、頭昏目眩，乳房腫痛、下腹痛、粉刺暗瘡等癥。有效改善經(jīng)前、經(jīng)期綜合癥及更年期綜合癥。延緩性機(jī)能減退，調(diào)節(jié)血脂。維持和控制細(xì)胞的生長和再生，保證其活力、防止皺紋的產(chǎn)生。

金蓮花：本發(fā)明選用的短瓣金蓮花trolliusledebourireichb.為毛莨科金蓮花屬trolliusl.植物的干燥花，屬野生的多年生草本植物，主要分布于黑龍江及內(nèi)蒙古東北部等地區(qū)。主要含有黃酮類、揮發(fā)油、生物堿、鞣質(zhì)、黃色素及有機(jī)酸等化學(xué)成分，具有抗菌、抗病毒、抗氧化及抗癌等活性，其中黃酮及有機(jī)酸為主要有效成分。

以下實(shí)驗(yàn)或試驗(yàn)用于說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容與技術(shù)效果，但并不限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍。

實(shí)驗(yàn)一：對治療抑郁癥的處方與活性的藥效學(xué)藥物篩選實(shí)驗(yàn)研究

1材料

1.1藥物

1.1.1受試藥物a：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.2受試藥物b：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.3受試藥物c：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆颍稍?，粉碎，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.4受試藥物d：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(2)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(3)將步驟(1)所得的浸膏ⅰ、步驟(2)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.5受試藥物e：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量無水乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(4)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(3)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.6陽性對照藥：鹽酸氟西汀膠囊，上海中西制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字h19980114，批號：2015082302。

1.2動(dòng)物

icr雄性小鼠，體重18～22g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評價(jià)中心提供，合格證號為p00102013。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，溫度為(23±3)℃，12h光照，濕度40％，自由進(jìn)食，單籠飼養(yǎng)，排除飲食及環(huán)境等所有可能對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的影響。

1.3儀器

medlab生物信號采集系統(tǒng)，由上?？禐獒t(yī)療科技發(fā)展有限公司制造；jz100型100g張力換能器，由上?？禐獒t(yī)療科技發(fā)展有限公司制造；sonydsc2p8數(shù)碼攝像機(jī)，由上海索廣電子有限公司生產(chǎn)；mc-145電子體溫計(jì)，由歐姆龍大連有限公司制造。

2方法

2.1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)

正常小鼠隨機(jī)區(qū)組法分為7組，即空白對照組、陽性藥鹽酸氟西汀組：灌胃給藥劑量為3.0mg·kg^-1，受試藥物a組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物b組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物c組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物d組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物e組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1。

各組均按0.25ml·(10g)^-1體重灌胃給藥。每日1次，連續(xù)給藥10d，空白對照組灌胃給予純凈水。于末次給藥后1h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將小鼠尾端(在距尾尖2cm處)用膠布固定在100g張力換能器的連線上，使其呈倒懸狀態(tài)，頭部離實(shí)驗(yàn)臺約15cm，換能器連接到medlab生物信號采集系統(tǒng)，適應(yīng)2min后，記錄4min之內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間(s)。

2.2小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物分組及給藥方式、劑量、時(shí)間同2.1，于末次給藥后1h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將小鼠單個(gè)放入高25cm，直徑20cm，水深15cm，水溫(22±3)℃的水缸中，觀察8min，適應(yīng)3min，記錄后5min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(s)。

2.3小鼠利血平拮抗實(shí)驗(yàn)

體溫下降的觀測正常小鼠隨機(jī)區(qū)組法分為8組，即空白對照組、模型組、鹽酸氟西汀組、受試藥物a組、受試藥物b組、受試藥物c組、受試藥物d組、受試藥物e組，給藥方式、劑量、時(shí)間同2.1。組均按0.25ml·(10g)^-1體重灌胃給藥。每日1次，連續(xù)給藥7d，空白對照組灌胃給予純凈水。于末次給藥后1h，按1.2mg·kg^-1劑量腹腔注射利血平，2h后測小鼠肛溫(將電子體溫計(jì)探頭插入小鼠肛門內(nèi)約1.5cm處)。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用spss15.0軟件中的方差分析(anova)進(jìn)行檢驗(yàn)，p<0.05表示差異有顯著性。

3結(jié)果

3.1對小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸氟西汀組、受試藥物c組能明顯縮短小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間，與空白組比較差異顯著(p<0.05)。見表1。

表1對小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n＝20)

注：與空白組比較*p<0.05。

3.2對小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸氟西汀組、受試藥物c組能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，與空白組比較差異顯著(p<0.05)。見表2。

表2對小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n＝20)

注：與空白組比較*p<0.05。

3.3對利血平所致小鼠體溫下降的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸氟西汀組、受試藥物c組能顯著對抗利血平所致小鼠體溫下降，與模型組比較差異顯著(p<0.05)。見表3。

表3對利血平所致小鼠體溫下降的影響(n＝20)

注：與空白組比較*p<0.05。

4討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，受試藥物c可顯著縮短小鼠懸尾試驗(yàn)和小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間，顯示其具有抗抑郁作用。受試藥物c具有明顯的抗抑郁作用，而受試藥物a、受試藥物b、受試藥物d和受試藥物e的療效則不明顯，說明在特定劑量的藥物組合物在特定的制備方法下制成的藥物產(chǎn)生了協(xié)同增效作用，具有預(yù)料不到的有益效果。

實(shí)驗(yàn)二：hplc法測定本發(fā)明藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量

現(xiàn)有研究表明，白頭翁中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、月見草中的豆蔻酸、金蓮花中的藜蘆酸甲酯是抗抑郁的有效活性成分，所以本發(fā)明采用hplc法測定本發(fā)明藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯這3中有效活性成分的含量。

1實(shí)驗(yàn)儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器

lc-2010a型高效液相色譜儀，由日本島津公司制造；十萬分之一電子分析天平，由上海丙林電子科技有限公司制造，kq-500b型超聲儀，由北京天秤物華醫(yī)療儀器有限責(zé)任公司制造。

1.2試藥

長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品，由北京譜析科技有限公司生產(chǎn)，批號：130226-201505；豆蔻酸對照品，由江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)，批號：140625-201503；藜蘆酸甲酯對照品，由武漢斯坦德化工科技有限公司生產(chǎn)，批號：110823-201511；中性氧化鋁，由深圳市恒豐萬達(dá)化工有限公司生產(chǎn)，批號：20150623-8。

乙腈、磷酸為色譜純，甲醇、正丁醇、氨水為分析純，娃哈哈純凈水。

本發(fā)明藥物：在本發(fā)明中成為本品，處方及制備方法如下：

處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；

制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

2.1.1長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件

色譜柱shimadzuc18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液(22：78)；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數(shù)：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1。

2.1.2豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件

色譜柱kromasil100ac18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序?yàn)椋簭?min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液ⅰ。

取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時(shí)間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅰ。

取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ。

2.2.3陰性樣品溶液的制備

取處方中除去白頭翁的其他藥味，按處方比例制成缺白頭翁陰性對照樣品，照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液ⅰ的制備方法制得陰性對照溶液，即得陰性樣品溶液ⅰ。

取處方中除去月見草與金蓮花的其他藥味，按處方比例制成缺月見草與金蓮花陰性對照樣品，照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液ⅱ的制備方法制得陰性對照溶液，即得陰性樣品溶液ⅱ。

2.3系統(tǒng)專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ及陰性樣品溶液ⅰ各10μl，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，供試品中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷保留時(shí)間與對照品一致；而陰性對照溶液ⅰ色譜中在相同保留時(shí)間處無相應(yīng)色譜峰，表明處方中其他藥味對測定結(jié)果無干擾，該方法對本發(fā)明藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷的測定具有專屬性。

再分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ及陰性樣品溶液ⅱ各10μl，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，供試品中豆蔻酸與藜蘆酸甲酯譜峰能達(dá)到分離且保留時(shí)間與相應(yīng)對照品一致；而陰性對照溶液色譜中在相同保留時(shí)間處無相應(yīng)色譜峰，表明處方中其他藥味對測定結(jié)果無干擾，該方法對本發(fā)明藥物中豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的測定具有專屬性。見附圖1至附圖6。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液ⅰ、ⅱ各1、2、5、10、15、20μl，注入液相色譜儀，分別按“2.1.1”“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測定。分別以長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品進(jìn)樣量對數(shù)(lgx)為橫坐標(biāo)x，以峰面積對數(shù)(lgy)為縱坐標(biāo)y，以豆蔻酸、藜蘆酸甲酯對照品的進(jìn)樣量x(μg)為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積積分值y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算得長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯的回歸方程分別為：

長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷回歸方程：y＝3.4587x+6.4941(r＝0.9997)

豆蔻酸回歸方程：y＝5.2486x+7.2385(r＝0.9998)

藜蘆酸甲酯回歸方程：y＝4.3653x+4.2365(r＝0.9999)

試驗(yàn)結(jié)果表明，長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯分別在0.4550～10.350μg、0.0500～1.110μg、0.0550～1.020μg范圍內(nèi)線性良好。

2.4.2精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液ⅰ、ⅱ，分別按“2.1.1”“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測定，重復(fù)測定6次，進(jìn)樣量10μl，測定峰面積積分值。試驗(yàn)結(jié)果長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯峰面積的rsd值分別為0.79％、0.86％、0.77％，結(jié)果顯示儀器精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品適量(批號：20160621-2)，照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成供試品溶液ⅰ、ⅱ，在0、5、10、15、20h分別精密吸取10μl，再分別按“2.1.1”“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，計(jì)算長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯峰面積的rsd值分別為0.86％、0.78％、0.82％。表明供試品溶液ⅰ、ⅱ在20h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測定需要。

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)

取本品適量(批號：20160621-2)，照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液ⅰ、ⅱ的制備方法分別制成供試品溶液，平行制備6份。分別按“2.1.1”“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測定，進(jìn)樣量10μl。試驗(yàn)結(jié)果為制劑中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.7532mg·g^-1、0.4213mg·g^-1、0.4452mg·g^-1，rsd分別為1.34％、0.97％、1.26％，表明含量測定方法的重復(fù)性良好。

2.4.5加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已測知含量的本品0.45g(批號：20160621-2)，分別精密加入長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品溶液、豆蔻酸對照品溶液和藜蘆酸甲酯對照品溶液各25ml，照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液ⅰ、ⅱ的制備方法分別平行制備6份。分別按“2.1.1”“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測定，進(jìn)樣量10μl，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表4。

表43種成分加樣回收率試驗(yàn)(n＝6)

2.5樣品含量測定

取3批本發(fā)明藥物樣品(批號20160621-2、20160625-1、20160630-1)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試樣品溶液ⅰ、ⅱ，分別按“2.1.1”“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測定，每批樣品測定3份，結(jié)果見表5。

表53種成分的樣品含量測定(mg·g^-1，n＝3)

3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)測定了制劑中的3種有效成分，確保了制劑療效，實(shí)驗(yàn)方法簡便可行，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于本發(fā)明藥物的檢測。

實(shí)驗(yàn)三：不同藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量測定

1待測樣品

1.1.1待測藥物a：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得。

1.1.2待測藥物b：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得。

1.1.3待測藥物c：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得。

1.1.4待測藥物d：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(2)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(3)將步驟(1)所得的浸膏ⅰ、步驟(2)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得。

1.1.5待測藥物e：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量無水乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(4)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(3)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得。

2測定方法

采用本發(fā)明實(shí)驗(yàn)二提供的高效液相色譜法測定各個(gè)藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量。

3測定結(jié)果

測定結(jié)果見表6。

表6待測藥物含量測定結(jié)果(單位：mg·g^-1)

4討論

從上表中可以看出，待測藥物c中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量明顯高于其他待測藥物，這可能也是待測藥物c在治療抑郁癥方面的效果優(yōu)于其他待測藥物的原因。

附圖說明：

圖1為對照品溶液ⅰ的hplc色譜圖，圖中1號峰為長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜峰；

圖2為供試品溶液ⅰ的hplc色譜圖，圖中1號峰為長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜峰；

圖3為白頭翁陰性對照品的hplc色譜圖

圖4為對照品溶液ⅱ的hplc色譜圖，圖中2號峰為豆蔻酸色譜峰，3號峰為藜蘆酸甲酯色譜峰；

圖5為供試品溶液ⅱ的hplc色譜圖，圖中2號峰為豆蔻酸色譜峰，3號峰為藜蘆酸甲酯色譜峰；

圖6為月見草與金蓮花陰性對照品的hplc色譜圖

具體實(shí)施方式

以下通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明：

實(shí)施例1：

處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；

制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏ⅲ混合均勻，干燥，粉碎，即得。

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進(jìn)行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數(shù)：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規(guī)格為：5μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序?yàn)椋簭?min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液?。?/p>

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時(shí)間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅰ；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定；

(5)測定結(jié)果：本品中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷含量為0.742mg·g^-1、豆蔻酸含量為0.411mg·g^-1、藜蘆酸甲酯含量為0.420mg·g^-1。

實(shí)施例2：

處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；

制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時(shí)間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環(huán)糊精包合，得到β-環(huán)糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進(jìn)行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進(jìn)行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環(huán)糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏ⅲ混合均勻，干燥，粉碎，加入淀粉、糊精，混勻，壓片，制成片劑900片。