一種用液相色譜法分離測(cè)定鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬分析化學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種用液相色譜法分離檢測(cè)鹽酸維拉佐酮中2?氯?1?甲基吡啶鎓碘化物的方法，該方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的緩沖鹽溶液?有機(jī)相為流動(dòng)相，采用外標(biāo)法計(jì)算2?氯?1?甲基吡啶鎓碘化物的含量。本發(fā)明方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性良好、操作簡(jiǎn)便，可以定性或定量檢測(cè)出鹽酸維拉佐酮中的2?氯?1?甲基吡啶鎓碘化物，保證了鹽酸維拉佐酮的質(zhì)量，從而提高了臨床用藥的安全性。
【專利說明】
一種用液相色譜法分離測(cè)定鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡 啶鐺砩化物含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及液相色譜法分離測(cè)定鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸維拉佐酮是一種新型抗抑郁藥物，是第一個(gè)吲哚烷基胺類新型治療成人重度 抑郁癥的藥物。鹽酸維拉佐酮化學(xué)名為5-{4-[4-(5_氰基-3-吲哚基)丁基]-1-哌嗪基}苯并 呋喃-2-甲酰胺鹽酸鹽，分子式為C2 6H27N5〇2 · HClj-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物(CMPI)是藥物 合成過程中常用的一種催化劑，對(duì)人體眼睛、呼吸道和皮膚均有刺激作用;在藥物合成過程 中可能會(huì)由于去除不完全而影響藥物的純度和質(zhì)量，引發(fā)臨床用藥的安全性。2-氯-1-甲基 吡啶鑰碘化物分子式為C 6H7C1 IN，結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 在鹽酸維拉佐酮的合成過程中，使用2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物作為最終反應(yīng)的 催化劑。在工藝過程中可能會(huì)由于2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物去除不完全而影響藥物的純 度和質(zhì)量，從而引發(fā)臨床用藥的安全性。因此實(shí)現(xiàn)對(duì)2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的分離測(cè) 定，在保證鹽酸維拉佐酮的質(zhì)量，提高臨床用藥的安全性方面具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種分析鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量 的方法，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的控制，以保證鹽酸維拉佐 酮的純度，從而有效控制鹽酸維拉佐酮終產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0005] 本發(fā)明所述的一種測(cè)定維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量的方法，是采 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的緩沖鹽溶液-有機(jī)相為流動(dòng)相； 上述所說的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，選自Alltima、Kromasil和 Apollo等品牌的色譜柱。
[0006] 上述所說的有機(jī)相選自甲醇、乙腈、異丙醇或四氫呋喃中的一種或幾種。
[0007] 上述所說的緩沖鹽可為磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、高氯酸鹽，優(yōu)選高氯酸鹽。
[0008] 本發(fā)明所述的分離測(cè)定方法，可按照以下方法實(shí)現(xiàn)： 1) 取鹽酸維拉佐酮樣品適量，用甲醇或流動(dòng)相溶解樣品，配制成每lmL含鹽酸維拉佐酮 0.1~1.5 mg的溶液； 2) 取鹽酸維拉佐酮各有關(guān)物質(zhì)樣品適量，用甲醇或流動(dòng)相溶解樣品，配制成每lmL含 鹽酸維拉佐酮各有關(guān)物質(zhì)0.1~1.5mg的溶液； 3) 取2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物樣品適量，用甲醇或流動(dòng)相溶解樣品，配制成每lmL含 2_氯-1-甲基吡啶鑰碘化物0.1~1.5mg的溶液； 4) 取1)、2)和3)的溶液適量，配制成系統(tǒng)適用性溶液； 5) 設(shè)置流動(dòng)相流速為0.5~1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205~300nm，柱溫箱溫度10~45 °C ; 6) 流動(dòng)相A為10~75mmol/L高氯酸鈉溶液，用高氯酸調(diào)節(jié)pH至2.0~7.0;流動(dòng)相B為乙腈； 7) 取4)的系統(tǒng)適用性溶液10~50yL注入液相色譜儀，完成鹽酸維拉佐酮及其有關(guān)物質(zhì) 與2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的分離； 8 )精密量取1)和3 )的樣品溶液各10~50yL注入液相色譜儀，記錄色譜圖； 9 )米用外標(biāo)法計(jì)算2_氣-1 -甲基R比啶鐵鵬化物的含量。
[0009] 其中高效液相色譜儀的型號(hào)，無特別要求，本發(fā)明采用的色譜儀為島津高效液相 色譜儀： LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp 色譜柱：C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym) 流動(dòng)相:A:50mmol/L高氯酸鈉(pH 3.0) B:乙腈 流速：1. OmL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm 柱溫：30°C 進(jìn)樣體積：lOyL 洗脫梯度：
本發(fā)明采用C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym)色譜柱，能夠有效地分離測(cè)定鹽酸維拉佐 酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的含量。本發(fā)明解決了鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰 碘化物的定性和定量檢測(cè)問題，實(shí)現(xiàn)了鹽酸維拉佐酮的質(zhì)量可控，提高了臨床用藥的安全 性。
【附圖說明】
[0010] 圖1為實(shí)施例1時(shí)空白溶劑的液相色譜圖； 圖2為實(shí)施例1時(shí)系統(tǒng)適用性溶液的液相色譜圖； 圖3為實(shí)施例1時(shí)2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的液相色譜圖； 圖4為實(shí)施例2時(shí)系統(tǒng)適用性溶液的液相色譜圖。
[0011]
【具體實(shí)施方式】： 以下實(shí)施例用于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不限于本實(shí)施的范圍。以下通過實(shí)例形式，對(duì)本 發(fā)明涉及的鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量檢測(cè)方法作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)例，凡基于本發(fā)明所述內(nèi)容實(shí) 現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0012] 實(shí)施例1 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津:LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色譜柱：C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym) 流動(dòng)相:A:50mmol/L高氯酸鈉(pH 3.0) B:乙腈 流速：1. OmL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm 柱溫：30°C 進(jìn)樣體積：lOyL 洗脫梯度：
實(shí)驗(yàn)步驟 取鹽酸維拉佐酮樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣品，配制成每lmL含鹽酸維拉佐酮0.5mg的 溶液;取鹽酸維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣 品，分別配制成每lmL含鹽酸維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物各0.2mg的溶 液。取上述鹽酸維拉佐酮、維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物溶液適量，配制 成系統(tǒng)適用性溶液；另取流動(dòng)相作為空白溶液。按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié) 果見附圖1~3,圖1為空白溶劑色譜圖；圖2中保留時(shí)間5.020min的色譜峰為2-氯-1-甲基吡 啶鑰碘化物，保留時(shí)間11.804min的色譜峰為鹽酸維拉佐酮，其余色譜峰為鹽酸維拉佐酮有 關(guān)物質(zhì)。圖3中保留時(shí)間4.989min的色譜峰為2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物。圖1~圖3表明：本 發(fā)明的方法可以有效地將2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物與鹽酸維拉佐酮及其有關(guān)物質(zhì)分離， 并可以準(zhǔn)確進(jìn)行定量檢測(cè)，以計(jì)算出2-氯-1 -甲基吡啶鑰碘化物的含量。
[0013] 實(shí)施例2 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津:LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色譜柱：C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym) 流動(dòng)相:A:50mmol/L高氯酸鈉(pH 3.0) B:乙腈 流速：1. OmL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm 柱溫：30°C 進(jìn)樣體積：lOyL 洗脫梯度：
[0014]~實(shí)驗(yàn)步驟
取鹽酸維拉佐酮樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣品，配制成每lmL含鹽酸維拉佐酮0.5mg的 溶液;取鹽酸維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣 品，分別配制成每lmL含鹽酸維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物各0.2mg的溶 液。取上述鹽酸維拉佐酮、維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物溶液適量，配制 成系統(tǒng)適用性溶液。按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖4,圖4中保留時(shí)間 6.729min的色譜峰為2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物，保留時(shí)間12.090min的色譜峰為鹽酸維拉 佐酮，其余色譜峰為鹽酸維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)。
[0015]本發(fā)明對(duì)所述2-氯-卜甲基吡啶鑰碘化物含量分析方法的以下項(xiàng)目進(jìn)行了驗(yàn)證： 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 取鹽酸維拉佐酮樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣品，配制成一定濃度的溶液;取鹽酸維拉佐 酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣品，分別配制成一定濃 度的供試液。取上述鹽酸維拉佐酮、維拉佐酮有關(guān)物質(zhì)及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物溶液適 量，配制成系統(tǒng)適用性溶液。按實(shí)施例1的色譜條件進(jìn)行液相色譜分析，記錄色譜圖。由圖2 可見，在此條件下鹽酸維拉佐酮及其有關(guān)物質(zhì)與2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物之間分離度符 合要求； 進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn) 將上述系統(tǒng)適用性溶液，按實(shí)施例1的色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，考察方法的重復(fù)性。由 結(jié)果可加，該方法進(jìn)樣重復(fù)性良好；

溶液穩(wěn)定性 取上述系統(tǒng)適用性溶液，按實(shí)施例1的色譜條件，分別于〇、2、4、6、8、12小時(shí)后進(jìn)樣，考 察本品定量測(cè)定時(shí)溶液穩(wěn)定性，由結(jié)果可見，本樣品溶液于12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定；
耐用性 為了進(jìn)一步驗(yàn)證方法的穩(wěn)定性，我們將色譜柱品牌、流速、柱溫、緩沖溶液pH值這些條 件進(jìn)行相應(yīng)的微調(diào)，以考察色譜條件的耐用性。
[0016]結(jié)果表明，本方法色譜柱品牌耐用性良好，流速變化在±0.1ml/min范圍內(nèi)，色譜 峰峰型沒有變化，僅保留時(shí)間有相應(yīng)的前移和后移。柱溫變化在±5°C范圍內(nèi)，緩沖液pH變 化± 0.2范圍內(nèi)對(duì)出峰時(shí)間也無明顯改變。上述考察表明本方法耐用性良好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種液相色譜法分離檢測(cè)鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量的方法， 其特征在于:采用反相高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定 比例緩沖鹽溶液-有機(jī)相為流動(dòng)相。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離測(cè)定方法，色譜柱選自Al 11 ima、Kromas i 1和Apo 11 〇等品 牌。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離測(cè)定方法，所說的有機(jī)相選自甲醇、乙腈、異丙醇和四氫 呋喃中的一種或幾種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離測(cè)定方法，所說的緩沖鹽可為磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、高 氯酸鹽。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離測(cè)定方法，所說的緩沖鹽優(yōu)選高氯酸鹽。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離測(cè)定方法，其特征在于： 1) 取鹽酸維拉佐酮樣品適量，用甲醇或流動(dòng)相溶解樣品，配制成每ImL含鹽酸維拉佐酮 0· 1~1.5mg的溶液； 2) 取鹽酸維拉佐酮各有關(guān)物質(zhì)樣品適量，用甲醇或流動(dòng)相溶解樣品，配制成每ImL含 鹽酸維拉佐酮各有關(guān)物質(zhì)0.1~1.5mg的溶液； 3) 取2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物樣品適量，用甲醇或流動(dòng)相溶解樣品，配制成每ImL含 2_氯-1-甲基吡啶鑰碘化物0.1~1.5mg的溶液； 4) 取1)、2)和3)的溶液適量，配制成系統(tǒng)適用性溶液； 5 )設(shè)置流動(dòng)相流速為0.5~1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205~300nm，柱溫箱溫度10~45 °C ; 6)流動(dòng)相A為10~75mmol/L高氯酸鈉溶液，用高氯酸調(diào)pH至2.0~7.0;流動(dòng)相B為乙腈;流 動(dòng)相的洗脫梯度設(shè)置如下：_^_ι i ^耿兮^ H、J爾?%姐用'I土槍?儀丄U~OUμL·仕乂義/TtT巴陪'1入，兀P乂：K彡田?ΧHFJ漢丹勻穴'十幻職 與2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的分離； 8 )精密量取1)和3 )的樣品溶液各10~50yL注入液相色譜儀，記錄色譜圖； 9 )米用外標(biāo)法計(jì)算2_氣-1 -甲基[!比啶鐵鵬化物的含量。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的測(cè)定鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的方法，其特 征在于:流動(dòng)相A為50mmol/L高氯酸鈉溶液，用高氯酸調(diào)pH至3.0;流動(dòng)相B為乙腈。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的測(cè)定鹽酸維拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的方法，其特 征在于:色譜柱為C18，5μπι，250 X 4.6mm(I.D.)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm，柱溫 箱溫度為30 °C。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK106018617SQ201610510770
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】賈少華, 王宇杰, 劉秋葉
【申請(qǐng)人】北京萬全德眾醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司