本發(fā)明提供一種新型的微乳凝膠制劑及其制備方法和在醫(yī)藥中的用途。

背景技術(shù)：

活血止痛膏處方來源于清康熙七年間的“寶珍膏”，由安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司自主研制與生產(chǎn)，1965年改為橡膠膏劑型，至今已有50多年的銷售歷史。活血止痛膏于2010年收載入《中國藥典》一部，記載其具有活血止痛、舒筋通絡(luò)之功效，用于筋骨疼痛，肌肉麻痹，痰核流注，關(guān)節(jié)酸痛。由于療效確切，上市以來受到患者廣泛認(rèn)可，年單品種超億元。

活血止痛膏的處方藥材主要包括干姜、山奈、白芷、甘松、大黃、生天南星、生半夏、沒藥、乳香、冰片、薄荷腦、樟腦、陳皮、當(dāng)歸、丁香、胡椒、香加皮、細辛、荊芥、桂枝、辛夷、川芎、獨活、牡丹皮、辣椒、蒼術(shù)、顛茄流浸膏、水楊酸甲酯?，F(xiàn)有技術(shù)中，活血止痛膏的制備步驟如下：以上二十八味藥，除薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯、顛茄流浸膏、樟腦外，其余白芷等二十三味粉碎成粗粉，用90％乙醇作為溶劑，浸漬，滲漉，收集滲濾液，回收乙醇并濃縮成相對密度約為1.05(80℃)的清膏，加入上述薄荷腦等五味，攪勻，另加4.5～5倍重量由橡膠、松香等制成的基質(zhì)，制成涂料，進行涂膏，切斷，蓋襯，切片，即得。

活血止痛浸膏原料藥由兩部分組成，一部分是干姜、丁香、牡丹皮、胡椒、甘松等23味中藥材提取物及顛茄流浸膏混合所得的中藥提取物浸膏，另一部分是樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯4種易揮發(fā)的原料藥。中藥提取物浸膏中選擇有效成分丹皮酚和丁香酚作為代表性成分，4種原料藥中選擇水楊酸甲酯作為代表性成分。以這三種成分的含量作為考察指標(biāo)。

雖然活血止痛膏療效顯著，但也有不足之處：

1、不良反應(yīng)方面

目前，橡膠膏劑中存在致敏因素，其變態(tài)、刺激、剝離反應(yīng)降低了其用藥舒適性、安全性和有效性。橡膠膏劑由裱褙材料、膏料、膏面覆蓋物三部分組成，分析發(fā)現(xiàn)中藥橡膠膏劑的過敏性問題與這些物質(zhì)密切相關(guān)。其中，裱褙材料常用棉布、化纖布、彈性布，透氣性差，當(dāng)皮膚表面貼附不透氣的膏劑時，皮膚大量的排泄物堆積在皮膚表層，對皮膚產(chǎn)生刺激，從而形成局部紅腫、紅斑、紅疹、瘙癢等過敏癥狀。膏料中的橡膠基質(zhì)包括橡膠、增粘劑、軟化劑、填充劑等多種物質(zhì)，天然橡膠中的蛋白質(zhì)，增粘劑松香中的松香酸均易引起皮膚的過敏反應(yīng)，填充劑氧化鋅質(zhì)量優(yōu)劣直接影響橡膠膏劑的剝離強度，在剝離過程中易牽拉皮膚，引起皮膚潮紅、發(fā)熱、甚至過敏。

2、制備工藝方面

活血止痛膏中含有大量具有揮發(fā)性的有效成分，如水楊酸甲酯、冰片、樟腦、薄荷腦等，約占制劑最后加入藥物(干重)的50％。然而，橡膠膏劑的傳統(tǒng)制備方法主要有溶劑法和熱壓法兩種，均需要在較高的溫度下完成，必定會造成有效成分的損失，影響藥效。且溶劑法大量消耗能源資源，生產(chǎn)過程安全隱患大，汽油極易燃燒，烘干過程汽油大量揮發(fā)對環(huán)境造成污染，也不利于生產(chǎn)工人的勞動保護；熱壓法制備的橡膠膏劑具有膏面不光亮，持粘性弱，貼后皮膚有殘留物等缺點。

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明將活血止痛橡膠膏劑改劑型為活血止痛微乳凝膠劑。一方面，巧妙利用薄荷腦、樟腦、冰片三者混合產(chǎn)生的部分液化現(xiàn)象，再用油狀水楊酸甲酯溶解制備成油相，加入其它輔料制備成微乳，將含28味中藥的復(fù)方納米化，促進藥物透皮吸收性能，另一方面，具有刺激性小，載藥量高，藥物與基質(zhì)融合性好等特點。目前，微乳粘度低，流動性強，作為經(jīng)皮給藥載體粘附性較差，而凝膠具有良好的粘附性，親水性凝膠手感好，質(zhì)地均勻細膩，易涂布，易洗除，不污染衣物，對皮膚和黏膜刺激性小，制成微乳凝膠，以起到優(yōu)勢互補的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種微乳凝膠組合物，其含有24種中藥材提取物和四種原料藥作為有效物質(zhì)和微乳凝膠基質(zhì)，所述24種中藥材提取物為干姜、山奈、白芷、甘松、大黃、生天南星、生半夏、沒藥、乳香、陳皮、當(dāng)歸、丁香、胡椒、香加皮、細辛、荊芥、桂枝、辛夷、川芎、獨活、牡丹皮、辣椒和蒼術(shù)的提取物，以及顛茄流浸膏；所述四種原料藥為水楊酸甲酯、薄荷腦、樟腦、冰片；其中所述有效物質(zhì)包載于微乳中。

角質(zhì)層細胞是由脂質(zhì)雙分子層組成，是藥物透皮吸收的限速因素，藥物透過角質(zhì)層主要有不經(jīng)細胞和經(jīng)細胞兩種途徑。而微乳同時具有親水區(qū)和親脂區(qū)，經(jīng)皮給藥的微乳一旦進入角質(zhì)層，能同時改變極性和脂性途徑，其親水區(qū)能使角質(zhì)層很大程度的發(fā)生水合作用，當(dāng)微乳的水相流入極性區(qū)，它將增加角質(zhì)層脂質(zhì)雙分子層的膜內(nèi)體積，一些脂鏈同角質(zhì)層蛋白使共價鍵疏散，導(dǎo)致界面結(jié)構(gòu)的破壞，這些蛋白質(zhì)的水化將導(dǎo)致脂質(zhì)雙層的破壞，能促進藥物的吸收；親脂區(qū)能以許多種方式同角質(zhì)層相互作用，溶解在微乳脂性區(qū)的藥物能直接分配進角質(zhì)層的脂質(zhì)中，或脂質(zhì)載體本身能插入角質(zhì)層的脂質(zhì)區(qū)，因而破壞它的雙分子層結(jié)構(gòu)，這些相互作用能導(dǎo)致增加藥物的滲透。微乳系統(tǒng)中所用的低級醇類能提高皮膚的通透性，促進載藥系統(tǒng)的整體經(jīng)皮運轉(zhuǎn)，微乳貯藏皮內(nèi)，發(fā)揮貯庫作用，使藥物緩慢釋放，發(fā)揮長效作用。微乳粒徑一般為10～100nm，粒子大小也能影響藥物滲透作用。當(dāng)粒子較小時，載體和角質(zhì)層相互作用的機會就增加，因此藥物透皮吸收增加。另外，粒子較大時，不僅相互作用的機會減少，并且載體透過皮膚比較困難。

微乳是油相、水相、表面活性劑及助表面活性劑按一定比例混合，自發(fā)形成的一種透明或半透明、低粘度、熱力學(xué)穩(wěn)定且各向同性的油水混合系統(tǒng)。

微乳凝膠劑是將微乳液加入至凝膠基質(zhì)(如天然高分子聚合物、纖維素衍生物、嵌段聚合物等高分子材料)中，形成的透明、均質(zhì)、穩(wěn)定的凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中含有微乳液滴。

在本發(fā)明的一個具體實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中所述包載有活性成分的微乳為o/w型微乳。

按照油相、水、表面活性劑和助表面活性劑的組成、比例不同將微乳分為三種基本結(jié)構(gòu)類型，即o/w、w/o和b.c型。

在本發(fā)明的另一具體實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中所述的微乳基質(zhì)由表面活性劑、助表面活性劑和油相組成。

在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中所述油相為藥物中的組分水楊酸甲酯溶解冰片、樟腦和薄荷腦所得的混合油相。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中所述表面活性劑選自吐溫、司盤、聚氧乙烯氫化蓖麻油、辛酸\癸酸聚乙二醇甘油酯的一種或兩種以上的混合物，優(yōu)選吐溫80、吐溫20、司盤80、司盤60、聚氧乙烯氫化蓖麻油(rh40)、辛酸\癸酸聚乙二醇甘油酯，更優(yōu)選吐溫80、吐溫20、聚氧乙烯氫化蓖麻油(rh40)。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中所述助表面活性劑選自無水乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇-400(peg400)的一種或兩種及以上的混合物。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中所述凝膠基質(zhì)為親水性凝膠基質(zhì)，優(yōu)選卡波姆(cp)、羧甲基纖維素鈉(cmc-na)、羥丙甲纖維素(hpmc)、聚丙烯酸鈉、海藻酸鈉、阿拉伯膠、西黃蓍膠、聚乙烯醇的一種或兩種以上的混合物。

在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，以組合物的總重量計，所述油相的重量百分比為0.1％～10％之間，優(yōu)選0.5％至5％，并且以油相的總重量計，水楊酸甲酯的重量百分比為33.1％，冰片、樟腦和薄荷腦的重量百分比分別為22.3％。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，以組合物的總重量計，所述表面活性劑的重量百分比在1％～30％之間，優(yōu)選9％至30％之間。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，以組合物的總重量計，所述助表面活性劑的重量百分比在0％～20％之間，優(yōu)選3％至15％之間。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，以組合物的總重量計，所述凝膠基質(zhì)的重量百分比在0.3％～10％之間，優(yōu)選1％～3％之間。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，以組合物的總重量計，所述中藥提取物的重量百分比在0.5％～20％之間，優(yōu)選0.8％～12％之間。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其進一步含有保濕劑、防腐劑、抗氧劑，所述保濕劑優(yōu)選甘油、山梨醇、丙二醇、聚乙二醇的一種或兩種以上的混合物，所述防腐劑優(yōu)選羥苯乙酯、山梨酸鉀、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲醇的一種或兩種及以上的混合物。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，包載有活性成分的微乳的平均粒徑在20～50nm之間，多分散系數(shù)pdi在0.3以下。

在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物，其中，微乳凝膠的平均粒徑在20～50nm之間，多分散系數(shù)pdi在0.4以下。

本發(fā)明進一步提供一種根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物的制備方法，其包括以下步驟：

1)稱取處方中薄荷腦、樟腦、冰片研磨使其部分液化，再加入水楊酸甲酯混合使溶解，作為油相備用；

2)稱取處方量的中藥材制得中藥浸膏；

3)將步驟1中制得的油相與浸膏、表面活性劑、助表面活性劑和任選的防腐劑于20～35℃攪拌，至藥物溶解完全后，緩慢加入水，攪拌均勻，即得活血止痛微乳；或者

稱取油相、表面活性劑、助表面活性劑和任選的防腐劑于20～35℃攪拌，緩慢加入水，攪拌均勻，即得空白微乳；然后將步驟2)中制得的浸膏加入至空白微乳中，攪拌均勻，即得活血止痛微乳；

4)稱取凝膠基質(zhì)和任選的抗氧劑，加適量水，于20～35℃充分溶脹，加入步驟3)中制得的活血止痛微乳攪拌均勻，調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

本發(fā)明另一方面提供根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物在制備用于活血止痛的藥物中的用途。

本發(fā)明進一步提供根據(jù)本發(fā)明所述的微乳凝膠組合物在制備用于筋骨疼痛、肌肉麻痹、痰核流注、關(guān)節(jié)酸痛的藥物中的用途。

在本發(fā)明進一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供一種微乳凝膠組合物，其含有活性成分提取物、由油相、表面活性劑和助表面活性劑構(gòu)成的微乳、親水性凝膠基質(zhì)、保濕劑、防腐劑、抗氧劑和適量的水。以組合物的總重量計，各組分的重量百分比如下表1所示。

表1

其中，表面活性劑包括但不限于吐溫80、吐溫20、司盤80、司盤60、聚氧乙烯氫化蓖麻油(rh40)、辛酸\癸酸聚乙二醇甘油酯(labrasol)的一種或兩種及以上的混合物。助表面活性劑包括但不限于無水乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇-400(peg400)的一種或兩種及以上的混合物。親水性凝膠基質(zhì)包括但不限于卡波姆(cp)、羧甲基纖維素鈉(cmc-na)、羥丙甲纖維素(hpmc)、聚丙烯酸鈉、海藻酸鈉、阿拉伯膠、西黃蓍膠、聚乙烯醇的一種或兩種及以上的混合物。保濕劑包括但不限于甘油、山梨醇、丙二醇、聚乙二醇的一種或兩種及以上的混合物。防腐劑包括但不限于羥苯乙酯、山梨酸鉀、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲醇的一種或兩種及以上的混合物。

本發(fā)明微乳凝膠組合物的具體制備方法如下：

(1)混合油相的制備

按處方水楊酸甲酯∶樟腦：薄荷腦∶冰片(1.5∶1∶1∶1)的比例稱取藥物，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

(2)活血止痛微乳的制備

方法一：稱取處方量的混合油相、中藥提取物浸膏、表面活性劑、助表面活性劑、防腐劑于20～35℃條件下攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入水，攪拌平衡20分鐘，即得活血止痛微乳。

方法二：稱取處方量的混合油相、表面活性劑、助表面活性劑、防腐劑于20～35℃條件下攪拌10分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢加入水，攪拌平衡10分鐘，再加入處方量的中藥提取物浸膏、混合均勻，攪拌平衡30分鐘，即得活血止痛微乳。

(3)活血止痛微乳凝膠劑的制備

方法一：稱取處方量親水性凝膠基質(zhì)、抗氧劑，加適量水，于20～35℃過夜充分溶脹，加活血止痛微乳攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，調(diào)節(jié)ph至6～7，即得活血止痛微乳凝膠劑。

方法二：稱取處方量親水性凝膠基質(zhì)、抗氧劑，加活血止痛微乳，于20～35℃條件下過夜充分溶脹，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，調(diào)節(jié)ph至6～7，即得活血止痛微乳凝膠劑。

本發(fā)明的優(yōu)點：

1)本發(fā)明的活血止痛微乳凝膠劑所用的輔料均為藥物制劑中的常規(guī)輔料，在用藥安全性上具有明顯優(yōu)勢，可減少活血止痛膏基質(zhì)對皮膚的過敏反應(yīng)，且保濕效果好，能提高患者的順應(yīng)性；

2)本發(fā)明的活血止痛微乳凝膠劑可將活血止痛浸膏納米化，且載藥量膏，有利于藥物的釋放和透皮吸收，增強藥物的治療效果；

3)活血止痛浸膏使用90％醇提取，含有大量脂溶性強的有效成分，由此可將其轉(zhuǎn)化為o/w型微乳，與親水性凝膠結(jié)合，相容性好，能增加制劑的穩(wěn)定性；

4)本發(fā)明的活血止痛微乳凝膠劑制備工藝簡單易操作，無需加熱保溫等條件控制，能增加藥物中揮發(fā)性有效成分的穩(wěn)定性。

附圖說明

圖1為實施例6中得到的活血止痛微乳的粒徑分布圖。

圖2為實施例6中得到的活血止痛微乳的電鏡掃描圖。

圖3為實施例6中制得的活血止痛微乳凝膠劑的粒徑分布圖。

圖4和圖5為實施例6中制得的活血止痛微乳凝膠劑的電鏡掃描圖。

圖6為實施例6中制得的活血止痛微乳凝膠劑的流變類型曲線。

圖7為實施例6中制得的活血止痛微乳凝膠劑的累積透過曲線圖。

具體實施方式

以下通過具體實施例進一步描述本發(fā)明，但應(yīng)理解這些實施例僅是為了闡明本發(fā)明，并不以任何形式限制本發(fā)明的范圍。

實驗材料

樟腦(批號hy-029-1510004)，薄荷腦(批號zy-124-1511005)，冰片(批號zy-040-1510002)，水楊酸甲酯(批號hy-004-1511009)，顛茄流浸膏(批號zy-122-1511004)，均購自安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司。

中鏈甘油三酸酯(mct，101091109，建德市千島精細化工實業(yè)有限公司)；聚氧乙烯氫化蓖麻油(rh40，01932368eo，德國basf)；聚山梨酯80(tween80，20120501，湖南華日制藥有限公司)；聚山梨酯20(tween20，20121010，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；聚乙二醇-400(peg400，13/34，德國sasol)；甘油(20140739，浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司)；卡波姆940(美國諾譽公司)；山梨酸鉀(陜西西岳制藥有限公司)；依地酸二鈉(成都華邑藥用輔料制造有限公司)；羧甲基纖維素鈉(安徽山河藥用輔料股份有限公司)；羥苯乙酯(103620140101，湖南爾康制藥股份有限公司)；聚丙烯酸鈉(昭和電工株式會社)；山梨醇(石家莊瑞雪制藥有限公司)；對羥基苯甲酸丙酯(廣州漢普醫(yī)藥有限公司)；pva(路博潤先進材料公司)丙二醇(20140705，南京威爾)；無水乙醇(150901，四川金山制藥有限公司)；扶他林軟膏(北京諾華制藥有限公司，批號：x4407)；甲醇(色譜純，20140315001，天津賽孚瑞科技有限公司)；娃哈哈純凈水(20150703，天津娃哈哈食品有限公司)。

動物：昆明種小鼠90只，雄性，體重19-21g、6-7周齡。購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，許可證號：scxk(軍)2012-0004。

實驗儀器

antonmcr102型流變儀(奧地利安東帕公司)；bsa223s-cw型電子分析天平(德國賽多利斯公司)；磁力攪拌器(德國，ika公司)；zetasizernanozs納米粒度儀(英國馬爾文公司)；franz擴散池(上海鍇凱有限公司)；透析膜(北京京科宏達生物技術(shù)有限公司)；t6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；delta320ph計(mettlertoledo)；sb25-12d型超聲儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；hc-2518型高速離心機(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)；c-maghs4型磁力攪拌器(德國ika公司)；h-7650型透射電子顯微鏡(日本日立)；jem-2200fs型三維透射電鏡(日本電子株式會社)。

實施例1活血止痛浸膏的制備

活血止痛膏(橡膠膏)已納入藥典(2010版一部957頁、2015版一部1294頁)，其處方和浸膏制法如下：

除上述處方中薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯、顛茄流浸膏外，其余白芷等二十三味藥材粉碎成粗粉，用90％乙醇作為溶劑，浸漬，滲漉，收集滲漉液，回收乙醇并濃縮成相對密度為1.2634(25℃)的清膏，加入顛茄流浸膏，攪勻，即得中藥提取物浸膏。上述薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦備用。

實施例2本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例一

處方1(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取混合油相1.15g、rh409.30g、peg4004.63g、山梨酸鉀0.075g于20～35℃條件下攪拌10分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢加入水，攪拌平衡10分鐘，加入實施例1中制得的中藥提取物浸膏1.75g，攪拌平衡30分鐘，即得活血止痛微乳。

再稱取卡波姆1.00g、依地酸二鈉0.05g，加適量水，于20～35℃過夜充分溶脹，加入如上制得的活血止痛微乳、丙二醇2.50g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例3本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例二

處方2(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取實施例1中制得的中藥提取物浸膏3.50g、混合油相2.30g、吐溫8013.88g、無水乙醇4.62g，于20～35℃攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入適量水，攪拌平衡20分鐘，得活血止痛微乳。

再稱取cmc-na2.50g、依地酸二鈉0.10g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹，加入丙二醇5.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例4本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例三

處方3(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取實施例1制得的中藥提取物浸膏5.57g、混合油相3.68g、rh4018.5g、丙二醇9.25g、山梨酸鉀0.10g，于20～35℃攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入適量水，攪拌平衡20分鐘，得活血止痛微乳。

再稱取聚丙烯酸鈉2.00g，加適量水，于20～35℃過夜充分溶脹，加入如上制得的活血止痛微乳攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例5本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例四

處方4(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取實施例1制得的中藥提取物浸膏5.57g、混合油相3.68g、吐溫2013.88g、丙二醇6.94g、對羥基苯甲酸丙酯0.5g，于20～35℃攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入適量水，攪拌平衡20分鐘，得活血止痛微乳。

再稱取聚丙烯酸鈉0.5g，依地酸二鈉0.2g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹，加入山梨醇2.50g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例6本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例五

處方5(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取實施例1制得的中藥提取物浸膏3.50g、混合油相2.30g、rh409.30g、丙二醇4.63g、對羥基苯甲酸丙酯0.075g，于20～35℃攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入適量水，攪拌平衡20分鐘，得活血止痛微乳。

稱取cmc-na2.50g、依地酸二鈉0.05g，加適量水，于20～35℃過夜充分溶脹，加入如上制得的活血止痛微乳、甘油5.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例7本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例六

處方6(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取混合油相0.58g、吐溫806.48g、無水乙醇3.24g、羥苯乙酯0.4g，于20～35℃攪拌10分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢加入水，攪拌平衡10分鐘。加入實施例1制得的中藥提取物浸膏0.87g，攪拌平衡30分鐘，即得活血止痛微乳。

再稱取卡波姆1.00g、依地酸二鈉0.5g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹，加入山梨醇7.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例8本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例七

處方7(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取實施例1制得的中藥提取物浸膏2.79g、混合油相1.84g、rh4018.5g、peg4009.25g、山梨酸鉀0.05g，于20～35℃攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入適量水，攪拌平衡20分鐘，得活血止痛微乳。

再稱取cmc-na3.00g、依地酸二鈉0.05g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹。另取pva5.00g于適量水中加熱溶脹，冷卻后，與如上制得的cmc-na凝膠混合，加入甘油1.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例9本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例八

處方8(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取實施例1制得的中藥提取物浸膏11.13g、mct7.37g、rh4027.75g、peg40013.88g、對羥基苯甲酸丙酯0.15g，于20～35℃攪拌40分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，至藥物溶解完全后，緩慢加入適量水，攪拌平衡20分鐘，得活血止痛微乳。

再稱取卡波姆1.20g、依地酸二鈉0.10g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹，加入山梨醇1.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例10本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例九

處方9(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取混合油相1.15g、rh4011.10g、丙二醇2.78g、羥苯乙酯0.075g，于20～35℃攪拌10分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢加入水，攪拌平衡10分鐘，加入實施例1制得的中藥提取物浸膏1.75g，攪拌平衡30分鐘，即得活血止痛微乳。

再稱取卡波姆0.80g、依地酸二鈉0.05g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹，加入甘油5.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

實施例11本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的制備例十

處方10(按100克計)

按照實施例1的處方稱取薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯，先取樟腦、薄荷腦和冰片混合研至部分液化，再加入水楊酸甲酯攪拌使完全溶解，作為混合油相。

稱取混合油相0.58g、吐溫8010.0g、丙二醇5.00g、羥苯乙酯0.075g，于20～35℃攪拌10分鐘，攪拌速度300-500轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢加入水，攪拌平衡10分鐘，加入實施例1制得的中藥提取物浸膏0.87g攪拌平衡30分鐘，即得活血止痛微乳。

再稱取卡波姆0.60g、依地酸二鈉0.05g，加入如上制得的活血止痛微乳，于20～35℃過夜充分溶脹，加入甘油2.00g，攪拌均勻，攪拌速度150～350轉(zhuǎn)/分鐘，用三乙醇胺調(diào)節(jié)ph至6～7，即得本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑。

試驗例1本發(fā)明制得的活血止痛微乳和微乳凝膠劑的表征

(1)本發(fā)明制得的活血止痛微乳的表征

a、平均粒徑和pdi測定

取1ml各實施例中制得的活血止痛微乳，加入到dts0012樣品池中，分別將樣品池放置于zetasizernanozs納米粒度儀內(nèi)測定平均粒徑和pdi。

結(jié)果：實施例6中得到的處方5的活血止痛微乳的平均粒徑和pdi分別為：29.16±0.2627nm和0.163±0.010(見圖1)，同時測定處方1～4和6～10的活血止痛微乳的平均粒徑均在20～50nm之間，pdi在0.3以下。

b、電鏡掃描

將實施例6中處方5的活血止痛微乳稀釋5倍，取一滴稀釋的微乳液滴在銅網(wǎng)上，自然晾干10分鐘，滴加2％磷鎢酸一滴，自然晾干，置于h-7650型透射電子顯微鏡下觀察微乳的形態(tài)，如圖2所示。

結(jié)果：活血止痛微乳的液滴呈球形或類球形。

(2)本發(fā)明制得的活血止痛微乳凝膠的表征

a、平均粒徑和pdi測定

取各實施例中制得的活血止痛微乳凝膠適量，加水稀釋100倍，磁力攪拌至完全溶解，取1ml活血止痛微乳凝膠劑稀釋液加入到dts0012樣品池，分別將樣品池放置于zetasizernanozs納米粒度儀內(nèi)測定平均粒徑和pdi。

結(jié)果：實施例6中制得的處方5的活血止痛微乳凝膠劑的平均粒徑和pdi分別為：29.91±0.0100nm和0.251±0.006(見圖3)，同時測定處方1～4和6～10的活血止痛微乳凝膠劑的平均粒徑均在20～50nm之間，pdi在0.4以下。

b、電鏡掃描

將實施例6制得的處方5的活血止痛微乳凝膠劑用水稀釋50倍，取一滴稀釋的微乳凝膠液滴在銅網(wǎng)上，自然晾干10分鐘，滴加2％磷鎢酸一滴，自然晾干30分鐘，置于jem-2200fs型透射電子顯微鏡下觀察微乳凝膠的形態(tài)。

結(jié)果：在透射電鏡下觀察到稀釋的微乳凝膠劑中微乳液滴呈球形或類球形(如圖4)，凝膠的層狀結(jié)構(gòu)被打散呈小片狀結(jié)構(gòu)(如圖5)。

c、流變類型的判斷

采用，測量系統(tǒng)型號為pp50，取適量實施例6制得的活血止痛微乳凝膠劑于平板上，設(shè)定剪切速率為0.01～1001/s，測量溫度為25℃，繪制剪切速率與粘度曲線，判斷流體類型，如圖6。

結(jié)果：本發(fā)明制得的活血止痛微乳凝膠劑在測量范圍內(nèi)粘度隨著剪切速率的增大而減小，體現(xiàn)出非牛頓流體的剪切變稀特性，屬于假塑性流體類型，說明本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑易于涂抹，涂抹過程中不會出現(xiàn)打團的現(xiàn)象。

試驗例2本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的透皮吸收特性研究

采用改良的franz擴散池，擴散池容積為18ml，有效擴散面積為3.14cm²，水浴溫度設(shè)置為(32.5±0.2)℃，接收液為peg400-95％乙醇-生理鹽水(1:3:6)，將接收室內(nèi)加入攪拌子，并將處理好的透析膜固定在擴散室與接收室之間。稱取0.35g實施例6制備的活血止痛微乳凝膠均勻涂布于擴散室內(nèi)的透析膜上，平行5份，在接收室中注滿接收液，排除氣泡，磁力攪拌器設(shè)置轉(zhuǎn)速為350r·min^-1，分別于時間點為0.5、1、2、4、6、8、12和24h將接收液全部倒出，同時補加同體積的新鮮接收液。將收集的各接受液過0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

將供試品溶液進樣于超高效液相色譜儀：acquitybehc18色譜柱(2.1mm×50mm，1.7μm)，流動相乙腈(a)-0.1％甲酸水(b)梯度洗脫(0～4min，10％～90％a)，檢測波長280nm，柱溫30℃，流速0.6ml·min^-1，進樣量1μl。測定供試品溶液中丹皮酚、丁香酚和水楊酸甲酯的峰面積，計算3種待測成分的累積釋放量，計算累計釋放率q，以累積釋放率q對時間t作圖，繪制累積透過曲線，見圖7。

累計釋放率q通過以下公式計算：

其中，cn為第n次取樣時接收液中各待測成分的質(zhì)量濃度，v為每次取樣的體積，w為所取凝膠中各待測成分的含量。

結(jié)果：本發(fā)明制得的活血止痛微乳凝膠劑中丹皮酚、丁香酚和水楊酸甲酯24h的累積釋放率分別為76.64％、78.44％和62.94％，說明本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑具有良好的透皮性能。

試驗例3本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑的藥效學(xué)研究

實驗分組及給藥：將昆明種小鼠，雄性，體重19-21g，隨機分為5組，每組11只。對照組：涂抹等量空白基質(zhì)；陽性藥組，涂抹扶他林軟膏0.1g/20g體重；本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑大、中、小劑量組，按0.092、0.046、0.023g/20g體重涂抹實施例6制得的活血止痛微乳凝膠劑。每日1次，給藥4-6h去除藥膏，清潔皮膚，連續(xù)3天。

觀察指標(biāo)：

a.20分鐘內(nèi)各鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)及藥物對扭體反應(yīng)的抑制率。

抑制率＝(對照組扭體均數(shù)-受試藥組扭體均數(shù))/對照組扭體均數(shù)×100％

b.腹腔液吸光度值(od)

實驗方法：實驗各組給藥3天，每天1次。第3天于給藥后40分鐘，動物腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g體重，觀察20分鐘內(nèi)各組出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)，以腹腔內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高為陽性指標(biāo)。

于給藥后1小時，各鼠靜脈注射0.5％伊文思藍生理鹽水溶液0.1ml/10g體重，20分鐘后脫頸椎處死，剪開腹部皮膚肌肉，5ml生理鹽水分?jǐn)?shù)次洗滌腹腔，吸管吸出洗滌液合并，3000rpm離心15分鐘，取上清液于590nm比色測定od值。

應(yīng)用spss19.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以表示，多組間比較使用單因素方差分析，考察活血止痛微乳凝膠劑對小鼠的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。實驗結(jié)果見下表2。

表2活血止痛微乳凝膠劑鎮(zhèn)痛抗炎作用考察(x±sd)

注：與對照組比較，***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05

結(jié)論：由上表可見，與對照組比較，本發(fā)明微乳凝膠劑各劑量組吸光度及扭體次數(shù)均明顯低于對照組，扭體抑制率均在50％以上。如上可知，本發(fā)明活血止痛微乳凝膠劑各劑量均能減輕由化學(xué)刺激引起的模型動物的腹部疼痛，減少腹腔內(nèi)毛細血管的炎性滲出，降低毛細血管通透性。