本發(fā)明屬于口腔正畸技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種自酸蝕正畸封閉劑及其用途。

背景技術(shù)：

正畸治療周期往往長(zhǎng)達(dá)兩年之久，托槽本身結(jié)構(gòu)復(fù)雜，容易造成食物殘?jiān)姆e累，阻礙口腔清潔；而患者尤其幼兒患者往往不夠重視口腔衛(wèi)生，刷牙不干凈不徹底，食物殘?jiān)L(zhǎng)期積累附著在牙面，導(dǎo)致牙釉質(zhì)脫礦的發(fā)生。而且傳統(tǒng)粘結(jié)正畸托槽之前，需要對(duì)牙齒表面進(jìn)行酸蝕處理，以增加托槽的粘結(jié)強(qiáng)度。但是傳統(tǒng)的酸蝕粘接方法對(duì)牙釉質(zhì)有不利影響。有研究表明，常規(guī)的37％磷酸酸蝕去除了約3～10μm的表面釉質(zhì)，另25μm表現(xiàn)出輕微組織學(xué)改變，以形成必須的機(jī)械嵌和，更深的局部區(qū)域的溶解大概產(chǎn)生深至100μm的滲透，去除托槽后的釉質(zhì)損失達(dá)到約150～160μm，甚至能引起局部的釉質(zhì)裂，經(jīng)過(guò)傳統(tǒng)磷酸酸蝕處理后的牙釉質(zhì)表面粗糙度增加，有利于菌斑的堆積，更容易導(dǎo)致牙釉質(zhì)脫礦的發(fā)生。而牙釉質(zhì)脫礦是固定矯治的危險(xiǎn)因素之一，是齲病的早期表現(xiàn)，如病變進(jìn)一步發(fā)展將會(huì)形成齲洞。因此，牙釉質(zhì)脫礦是正畸技術(shù)中不容忽視的問(wèn)題之一。

目前預(yù)防牙釉質(zhì)脫礦的方法大都以氟化物為主，然而氟化物效果有限，且局部應(yīng)用氟化物也易產(chǎn)生副作用。因此，目前針對(duì)正畸過(guò)程中牙釉質(zhì)脫礦還沒(méi)有很好的處理辦法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了一種自酸蝕正畸封閉劑及其用途，具有抗蛋白、抗菌作用，用于口腔正畸粘接中，能夠抑制牙菌斑的形成和堆積，促進(jìn)牙釉質(zhì)的再礦化，預(yù)防正畸治療中牙釉質(zhì)脫礦的發(fā)生。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之一是：

一種自酸蝕正畸封閉劑，按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，包括95～105份自酸蝕粘接劑aeo、6～9份甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿mpc、4～6份甲基丙烯酸十六烷基二甲銨dmahdm，且其中mpc添加質(zhì)量不超過(guò)aeo質(zhì)量的7.5％，dmahdm添加質(zhì)量不超過(guò)aeo質(zhì)量的5％。

一實(shí)施例中：按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，包括100份自酸蝕粘接劑aeo、7.5份甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿mpc、5份甲基丙烯酸十六烷基二甲銨dmahdm。

一實(shí)施例中：所述dmahdm通過(guò)以下方法制備得到：將dmaema、bhd及乙醇按照9～11mmol：9～11mmol：2.5～3.5g的配方比例混合，65～75℃攪拌反應(yīng)22～26h，除去乙醇，即得dmahdm。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之二是：

上述自酸蝕正畸封閉劑在口腔正畸中的用途。

一實(shí)施例中：所述自酸蝕正畸封閉劑用于粘接正畸托槽之前，先用該自酸蝕正畸封閉劑對(duì)牙齒表面進(jìn)行封閉處理，然后再粘接正畸托槽。

本技術(shù)方案與背景技術(shù)相比，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1、adper^tmeasyone(aeo)是一種光固化自酸蝕粘接劑，一般用于口腔臨床中的修復(fù)充填，適用于所有類型窩洞的光固化樹(shù)脂或復(fù)合體的粘接，光固化樹(shù)脂核的粘接，光固化樹(shù)脂或復(fù)合體充填物修補(bǔ)時(shí)的粘接，根面脫敏及樹(shù)脂，烤瓷和全瓷修復(fù)體口內(nèi)修補(bǔ)的粘接等。但目前尚沒(méi)有報(bào)道將其應(yīng)用于正畸領(lǐng)域中。本發(fā)明針對(duì)牙釉質(zhì)脫礦發(fā)生的機(jī)制，將具有抗蛋白附著和細(xì)菌粘附功能的mpc，具有接觸性抗菌性能的dmahdm同時(shí)添加到自酸蝕粘接劑aeo中，通過(guò)aeo、mpc和dmahdm的協(xié)同作用，形成一種自酸蝕正畸封閉劑，并將其首次用于口腔正畸粘接中，其粘接效果與傳統(tǒng)粘接效果相同。該技術(shù)一方面可以取代傳統(tǒng)磷酸酸蝕方法，減少對(duì)牙釉質(zhì)的損害，實(shí)現(xiàn)酸蝕和粘結(jié)滲透一次同時(shí)完成，并且酸蝕的深度和粘結(jié)滲透的深度一致，簡(jiǎn)化臨床操作，大大節(jié)省操作時(shí)間，另一方面，aeo本身不具有任何的抗菌抗蛋白性能，而本發(fā)明通過(guò)aeo與mpc和dmahdm的相互配合，使得到的自酸蝕正畸封閉劑具有抗菌抗蛋白的功能的同時(shí)，能夠在牙釉質(zhì)表面形成一層具有抗蛋白、抗菌作用的保護(hù)層。因此，如果在粘接托槽之前在牙釉質(zhì)表面涂布一層本發(fā)明的具有抗菌抗蛋白功能的自酸蝕封閉劑，不僅可以取代傳統(tǒng)的磷酸酸蝕方法，減少牙釉質(zhì)的損失，而且可以有效地降低酸蝕處理后牙釉質(zhì)表面的粗糙度，并在牙釉質(zhì)表面形成一層保護(hù)層，從而抑制牙菌斑的形成和堆積，預(yù)防正畸治療中牙釉質(zhì)脫礦的發(fā)生。

2、唾液蛋白吸附于牙齒或者充填體表面形成獲得性膜，是形成菌斑的先決條件。以往的研究大多集中在如何賦予材料殺菌功能，而本發(fā)明將具有抗蛋白附著和細(xì)菌粘附功能的mpc添加到自酸蝕封閉劑中，使得材料具有抗蛋白粘附的功能，從而從源頭減少了細(xì)菌的粘附，防止了菌斑的形成，并將具有抗菌性的化學(xué)制劑dmahdm添加到自酸蝕粘結(jié)劑中，賦予自酸蝕封閉劑抗菌性能。且mpc的抗蛋白附著性能能夠使得dmahdm與細(xì)菌充分接觸從而發(fā)揮抗菌功能，而且從結(jié)果可以看出，aeo+7.5％mpc+5％dmahdm的配方比單獨(dú)的aeo+7.5％mpc或aeo+5％dmahdm具有更好的抗蛋白附著和抗菌性能，說(shuō)明aeo與mpc與dmahdm聯(lián)合應(yīng)用可以發(fā)揮協(xié)同抗菌、抗蛋白作用，進(jìn)一步抑制牙菌斑的形成，從而預(yù)防固定正畸治療中牙釉質(zhì)脫礦的發(fā)生。

3、使用改良門(mén)舒特金法(menschutkin)合成甲基丙烯酸十六烷基二甲銨(dmahdm)，由叔胺基與有機(jī)鹵化物發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物的生成物可以定量，并且?guī)缀醪恍枰峒儭?/p>

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明的msea對(duì)托槽粘接強(qiáng)度的影響結(jié)果示意圖。

圖2為本發(fā)明的msea在口腔環(huán)境中對(duì)托槽粘接強(qiáng)度的長(zhǎng)期穩(wěn)定性影響結(jié)果示意圖。

圖3為本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗蛋白能力結(jié)果示意圖。

圖4為本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗菌能力的熒光照片。

圖5為本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗菌能力的結(jié)果示意圖。

圖6為本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea對(duì)生物膜代謝活性的影響結(jié)果示意圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容：

一種自酸蝕正畸封閉劑(msea)，在自酸蝕粘接劑(adpereasyone，self-etchadhesive，3m，美國(guó)，簡(jiǎn)稱aeo)中添加甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿(mpc)、甲基丙烯酸十六烷基二甲銨(dmahdm)，混合均勻，即得。其中，按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，aeo為95～105份，mpc為6～9份，dmahdm為4～6份。

優(yōu)選地，按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，aeo為100份，mpc為7.5份，dmahdm為5份，即優(yōu)選的msea配方為：aeo+7.5％mpc+5％dmahdm。

其中，aeo及在aeo內(nèi)添加的mpc、dmahdm的配比是有嚴(yán)格要求的，若mac添加量超過(guò)7.5％，或dmahdm添加量超過(guò)5％，均會(huì)影響托槽的粘接強(qiáng)度。

其中，所述自酸蝕粘接劑aeo和甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿mpc為市面上購(gòu)買(mǎi)得到，所述dmahdm通過(guò)以下方法制備得到：

將2-二甲氨基甲基丙烯酸乙酯(2-(dimethylamino)ethylmethacrylate，dmaema)作為叔胺，1-溴十六烷(1-bromohexadecane，bhd)作為有機(jī)鹵化物。將10mmol的dmaema(tokyochemicalindustry，日本)、10mmol的bhd(monomer-polymeranddajaclabs，美國(guó))以及3g乙醇加入20ml的試劑瓶中，試劑瓶封口，70℃攪拌反應(yīng)24h；反應(yīng)完全后蒸發(fā)乙醇溶劑，最終得到清澈、無(wú)色的粘性液態(tài)dmahdm。利用這種改良門(mén)舒特金法(menschutkin)合成dmahdm，由叔胺基與有機(jī)鹵化物發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物的生成物可以定量，并且?guī)缀醪恍枰峒儭?/p>

本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea用在粘接正畸托槽之前，先用msea對(duì)牙齒表面進(jìn)行封閉處理，在牙釉質(zhì)表面形成一層具有抗蛋白、抗菌作用的保護(hù)層，然后在此保護(hù)層上粘接托槽。

實(shí)驗(yàn)例1：本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea對(duì)托槽剪切粘接強(qiáng)度的影響

本實(shí)驗(yàn)例通過(guò)對(duì)離體前磨牙進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，以判斷本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea是否會(huì)對(duì)托槽的粘接強(qiáng)度造成影響。

試件：選擇因正畸拔除的完整前磨牙100顆，隨機(jī)分為5組，每組20顆。

選擇金屬前磨牙托槽(opk-a，tomy，日本)，托槽底板面積為9.94mm²。

分組：

1.傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組：37％磷酸(phosphoricacid)；

2.自酸蝕對(duì)照組：aeocontrol；

3.抗蛋白粘附組：aeo+7.5％mpc，簡(jiǎn)稱：7.5％mpc；

4.抗菌組：aeo+5％dmahdm，簡(jiǎn)稱：5％dmahdm；

5.混合組(即msea組)：aeo+7.5％mpc+5％dmahdm。

方法：

傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組：常規(guī)沖洗牙面，吹干。用37％磷酸酸蝕30s，水氣沖洗15s，壓縮空氣吹干20s。在托槽底面上涂布樹(shù)脂加強(qiáng)型玻璃離子粘結(jié)劑(gcortholc，fuji，日本)后將托槽粘接于牙冠頰面中心。為保證粘接托槽所用的壓力和粘接劑厚度均勻一致，托槽定位后，使用測(cè)力計(jì)以300g的力量垂直輕壓托槽5s，然后刮去托槽周圍多余的粘接劑。分別從近中、遠(yuǎn)中、齦向及牙合向用可見(jiàn)光固化燈近距離各照射10s。

2～5組：常規(guī)沖洗牙面，吹干。將毛刷沾滿aeo，加壓均勻的涂抹在牙面上，反復(fù)涂抹20秒后用氣槍輕輕吹干牙面5s，然后用可見(jiàn)光固化燈光固化10s。在托槽底面上涂布樹(shù)脂加強(qiáng)型玻璃離子粘結(jié)劑(gcortholc，fuji，日本)后將托槽粘接于牙冠頰面中心。為保證粘接托槽所用的壓力和粘接劑厚度均勻一致，托槽定位后，使用測(cè)力計(jì)以300g的力量垂直輕壓托槽5s，然后刮去托槽周圍多余的粘接劑。分別從近中、遠(yuǎn)中、齦向及牙合向用可見(jiàn)光固化燈近距離各照射10s。

將每組20顆粘接托槽后的離體牙隨機(jī)分為2組，每組10顆，一組在托槽粘結(jié)15min后進(jìn)行托槽粘結(jié)剪切實(shí)驗(yàn)；另一組置于37℃人工唾液浸泡30天，然后取出，冷熱循環(huán)(zlr，森日達(dá)，中國(guó))1000次。應(yīng)用萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)(mts，美國(guó))測(cè)試托槽的剪切粘接強(qiáng)度，從而明確本發(fā)明的msea對(duì)托槽粘接強(qiáng)度的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖1所示，采用本發(fā)明的msea后，與傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組相比，msea組粘接15min和浸泡30天后的剪切粘接強(qiáng)度都有一定的降低，但處于正畸治療可接受范圍，不影響使用。

實(shí)驗(yàn)例2：本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea在口腔環(huán)境中使用后對(duì)托槽剪切粘接強(qiáng)度的長(zhǎng)期穩(wěn)定性影響

固定矯正器一般要在患者口內(nèi)戴用2年左右的時(shí)間，而口腔環(huán)境十分復(fù)雜，包括溫度，濕度的變化都會(huì)影響粘接劑的粘接強(qiáng)度，從而導(dǎo)致托槽脫落，影響治療效果。因此理想的正畸粘接劑應(yīng)當(dāng)在口腔環(huán)境的影響下仍然具備持久的粘接強(qiáng)度，從而滿足臨床要求。本實(shí)驗(yàn)例通過(guò)人工唾液浸泡和冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)?zāi)M口腔環(huán)境對(duì)托槽粘接強(qiáng)度的影響，從而判斷先用本發(fā)明的msea對(duì)托槽粘接強(qiáng)度長(zhǎng)期穩(wěn)定性的影響，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

試件：選擇因正畸拔除的完整前磨牙100顆，隨機(jī)分為5組，每組10顆。

選擇金屬前磨牙托槽(victoryseries，3m，美國(guó))，托槽底板面積為9.79mm²。

人工唾液含有氯化鉀，1.3g/l；氯化鈉，0.1g/l；氯化鎂，0.05g/l；氟化鈉，0.000025g/l；氯化鈣，0.1g/l；磷酸二氫鉀，0.027g/l；磷酸氫二鉀，0.035g/l；細(xì)菌蛋白胨，0.5g/l，材料均購(gòu)自美國(guó)sigma-aldrich公司，ph值調(diào)整為7。

分組：

1.傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組：37％磷酸(phosphoricacid)；

2.自酸蝕對(duì)照組：aeocontrol；

3.抗蛋白粘附組：aeo+7.5％mpc，簡(jiǎn)稱：7.5％mpc；

4.抗菌組：aeo+5％dmahdm，簡(jiǎn)稱：5％dmahdm；

5.混合組(即msea組)：aeo+7.5％mpc+5％dmahdm。

方法：參照實(shí)驗(yàn)例1的方法粘接托槽，然后參照文獻(xiàn)及iso/ts11405:2003標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行人工唾液浸泡及冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)，將每組10顆粘接托槽后的離體牙隨機(jī)分為5組，每組10顆，置于37℃恒溫水浴箱中，分別在人工唾液中浸泡30、180天，在每一時(shí)間點(diǎn)取出，應(yīng)用自動(dòng)冷熱浴循環(huán)儀(zlr，森日達(dá)，中國(guó))進(jìn)行冷熱溫差(5℃30s、55℃30s)循環(huán)1000次。

經(jīng)過(guò)人工唾液浸泡和冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)用萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)(mts，美國(guó))測(cè)試托槽的剪切粘接強(qiáng)度，從而明確本發(fā)明的msea在口腔環(huán)境中對(duì)托槽粘接強(qiáng)度的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖2所示，采用本發(fā)明的msea后，與傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組相比，msea組托槽剪切粘接強(qiáng)度的長(zhǎng)期穩(wěn)定性有一定的降低，但處于正畸治療可接受范圍，不影響使用。尤其本發(fā)明的msea組在180天時(shí)還能有很好的剪切粘接強(qiáng)度，說(shuō)明本發(fā)明的msea尤其適合長(zhǎng)期的正畸治療使用。

實(shí)驗(yàn)例3：本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗蛋白附著性能

本實(shí)施例檢測(cè)了本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗蛋白能力。

分組：

1.自酸蝕對(duì)照組：aeocontrol；

2.抗蛋白粘附組：aeo+7.5％mpc，簡(jiǎn)稱：7.5％mpc；

3.抗菌組：aeo+5％dmahdm，簡(jiǎn)稱：5％dmahdm；

4.混合組(即msea組)：aeo+7.5％mpc+5％dmahdm。

試件及分組：應(yīng)用96孔板的封蓋，1-4組分別涂抹于封蓋凹槽的底部，用賽璐珞條按壓形成光滑表面，然后用可見(jiàn)光固化燈光固化20秒，最終形成直徑8mm、厚度0.5mm的圓形試件。將試件浸入蒸餾水，攪拌1h，以除去任何未固化的單體。所有試件干燥并用環(huán)氧乙烷消毒。

方法：應(yīng)用雙辛丁酸法(bicinchoninicacid，bca)測(cè)試試件表面蛋白的附著量。每個(gè)試件在磷酸鹽緩沖鹽水(phosphatebufferedsaline，pbs)中浸泡2小時(shí)，然后再將試件浸泡在濃度為4.5g/l的牛血清蛋白溶液中(bovineserumalbumin，bsa)(sigma-aldrich，美國(guó))，在37℃條件下浸泡2小時(shí)。將試件在pbs中漂洗5分鐘，然后將試件放入含有1％十二烷基硫酸鈉(sodiumdodecylsulfate，sds)的pbs溶液中，超聲振蕩20分鐘。應(yīng)用蛋白質(zhì)分析試劑盒(microbcaproteinassaykit，fisherscientific，美國(guó))測(cè)試pbs溶液中的蛋白質(zhì)濃度，從而計(jì)算附著在試件表面的蛋白質(zhì)的量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖3所示，采用本發(fā)明的msea后，與傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組相比，msea組的蛋白附著量有顯著降低，且與單獨(dú)添加mpc的抗蛋白粘附組相比也有一定程度的降低。說(shuō)明本發(fā)明的msea通過(guò)各組分的協(xié)同作用，發(fā)揮了更好的抗蛋白附著功能，通過(guò)減少牙釉質(zhì)表面蛋白質(zhì)的附著，從而減少細(xì)菌的粘附，從源頭抑制菌斑的形成。

實(shí)驗(yàn)例4：本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗菌性能

本實(shí)施例檢測(cè)了本發(fā)明的自酸蝕正畸封閉劑msea的抗菌能力。

試件及分組：

1.自酸蝕對(duì)照組：aeocontrol；

2.抗蛋白粘附組：aeo+7.5％mpc，簡(jiǎn)稱：7.5％mpc；

3.抗菌組：aeo+5％dmahdm，簡(jiǎn)稱：5％dmahdm；

4.混合組(即msea組)：aeo+7.5％mpc+5％dmahdm。

1)人唾液的收集

人唾液被證明是體外培養(yǎng)菌斑生物膜的理想來(lái)源，它能保持體內(nèi)牙菌斑的復(fù)雜性和異質(zhì)性。選擇10名擁有天然牙列，無(wú)活動(dòng)性齲病或牙周病的健康成年人作為唾液的捐贈(zèng)者。捐贈(zèng)人在過(guò)去的3個(gè)月內(nèi)沒(méi)有使用過(guò)抗生素，捐贈(zèng)唾液前24小時(shí)不刷牙，并在捐贈(zèng)唾液前至少2小時(shí)禁飲食。捐贈(zèng)者在咀嚼封口膜的過(guò)程中收集分泌的刺激性唾液，并置于冰上。從每位捐贈(zèng)者的唾液樣本中取出等量的唾液混合，混合的唾液在無(wú)菌甘油中稀釋至終濃度為70％，并儲(chǔ)存在-80℃下用于體外培養(yǎng)人全菌菌斑生物膜。

2)牙菌斑全菌生物膜模型的建立

將上述混合唾液以1:50的比例稀釋于mcbain培養(yǎng)基中作為人全菌生物膜的接種液。mcbain培養(yǎng)基中含有粘蛋白，2.5g/l；細(xì)菌蛋白胨，2.0g/l；胰蛋白胨，2.0g/l；酵母提取物，1.0g/l；氯化鈉，0.35g/l；氯化鉀，0.2g/l；氯化鈣，0.2g/l；鹽酸半胱氨酸，0.1g/l；血紅素，0.001g/l；維生素k1，0.0002g/l，材料均購(gòu)自美國(guó)sigma-aldrich公司，ph值調(diào)整為7。將接種液在37℃下，含5％co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。24孔培養(yǎng)板每個(gè)孔放入一個(gè)試件，各孔中加入1.5ml接種液，在37℃含5％co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8小時(shí)。然后將試件轉(zhuǎn)移至新的24孔板中，用新鮮mcbain培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。16小時(shí)后，將試件轉(zhuǎn)移至新的24孔板中用新鮮mcbain培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)過(guò)2天的培養(yǎng)，最終在試件表面形成人全菌生物膜。

3)生物膜活/死細(xì)菌染色

將上述表面覆蓋培養(yǎng)2天的全菌生物膜的試件在pbs中輕柔漂洗三次，用活/死細(xì)菌生存力試劑盒(molecularprobes，美國(guó))進(jìn)行染色。syto9將活細(xì)菌染色，產(chǎn)生綠色熒光；細(xì)胞膜受損的細(xì)菌會(huì)被碘化丙啶染色，產(chǎn)生紅色熒光；接近或重疊的死/活細(xì)菌會(huì)顯示出橙黃色。使用熒光顯微鏡(te2000-s，nikon，日本)觀察染色的生物膜。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖4和圖5所示，傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組基本顯示綠色熒光，說(shuō)明傳統(tǒng)磷酸幾乎沒(méi)有殺菌作用。mpc組基本顯示綠色熒光，但數(shù)量及強(qiáng)度均低于傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組。dmahdm抗菌組基本顯示橙黃色熒光，顯示一定的抗菌作用。本發(fā)明的msea組中，僅顯示少量的紅色熒光，其細(xì)菌的總數(shù)量本身即遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他組，而且存在的細(xì)菌也基本為死細(xì)菌。說(shuō)明采用本發(fā)明的msea后，與傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組相比，msea組托槽活細(xì)菌數(shù)顯著下降，且與mpc組和dmahdm組相比也均有相當(dāng)程度的降低。說(shuō)明本發(fā)明的msea通過(guò)aeo、mpc和dmahdm各組分的協(xié)同作用，發(fā)揮了更好的抗菌功能。

4)生物膜代謝活性的檢測(cè)

3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,mtt)法是一種比色分析法，測(cè)量黃色的四唑mtt被酶催化還原為紫色的甲臜。將上述表面覆蓋培養(yǎng)2天的全菌生物膜的試件轉(zhuǎn)移到新的24孔板里，然后將1ml的mtt染料(mtt溶于pbs溶液中，0.5mg/ml)加入到每個(gè)孔中，并在37℃下，5％co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)。在此過(guò)程中，具有代謝活性的細(xì)菌將黃色的mtt還原為紫色的甲臜。然后將試件轉(zhuǎn)移到新的24孔板中，加入1ml二甲亞砜(dimethylsulfoxide,dmso)中，以溶解甲臜晶體，并在室溫下避光溫和攪拌，培養(yǎng)20分鐘?；旌暇鶆蚝螅瑥拿總€(gè)孔中吸取200μl的dmso溶液轉(zhuǎn)移到96孔板中，用酶標(biāo)儀(spectramaxm5,美國(guó))在540nm處測(cè)量吸光度。吸光度越高，表明甲臜濃度越高，意味著試件表面的生物膜代謝活性越高。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖6所示，采用本發(fā)明的msea后，與傳統(tǒng)磷酸對(duì)照組相比，msea組生物膜代謝活性顯著下降，且與單獨(dú)添加mpc的抗蛋白附著組和單獨(dú)添加dmahdm的抗菌組相比都有一定程度的降低。說(shuō)明本發(fā)明的msea通過(guò)各組分的協(xié)同作用，發(fā)揮了更好的抗菌功能。

唾液蛋白吸附于牙齒或者充填體表面形成獲得性膜，是形成菌斑的先決條件。上述結(jié)果表明，本發(fā)明的msea具有抗蛋白附著功能，通過(guò)減少牙釉質(zhì)表面蛋白質(zhì)的附著，從而減少細(xì)菌的粘附，從源頭抑制菌斑的形成。同時(shí)通過(guò)接觸性殺菌性能，進(jìn)一步降低牙釉質(zhì)表面的細(xì)菌含量，最終抑制牙菌斑的形成。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說(shuō)明書(shū)內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。