本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，具體是涉及菟絲子黃酮的新用途。

背景技術(shù)：

膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(kneeosteoarthritis，koa)簡稱膝骨關(guān)節(jié)炎，是在活動關(guān)節(jié)上發(fā)生的一種慢性、進行性疾病，以關(guān)節(jié)基質(zhì)崩解、軟骨細胞的明顯減少為主要特性的疾病。膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎又稱為膝關(guān)節(jié)增生性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、肥大性關(guān)節(jié)炎、退行性骨關(guān)節(jié)病等，是一種多發(fā)的慢性進行性骨關(guān)節(jié)疾病,為骨科臨床常見病。該病以膝關(guān)節(jié)軟骨的退行性變?yōu)橹饕±硖卣?。近年來隨著世界老齡化人口的日益增加,膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)都呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢。聯(lián)合國業(yè)已宣布2000～2010年是骨與關(guān)節(jié)的十年，以提請人們注意骨關(guān)節(jié)疾病對世界健康的影響?，F(xiàn)有研究表明其病理特征改變?yōu)殛P(guān)節(jié)軟骨組織發(fā)生進行性退變、消失，關(guān)節(jié)邊緣骨贅形成和軟骨下骨質(zhì)反應(yīng)性改變，并且退變的速度超過修復(fù)及再生的速度。臨床表現(xiàn)以進行性、慢性發(fā)展的關(guān)節(jié)腫痛、僵硬、活動受限為主，x線拍片提示膝關(guān)節(jié)骨刺形成。如何更好地治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎，已經(jīng)成為擺在各國骨科學(xué)界面前的重要課題。

膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎病因及發(fā)病機理尚未完全闡明?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究多認為膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病因素及機制主要與年齡、遺傳、損傷、過度負重、肥胖、環(huán)境、骨密度骨量、生物力學(xué)改變等有關(guān)。

迄今還沒有一種治療方法能完全阻斷膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎病理進展過程，因此，目前的治療主要是止痛和改善功能，比如，曲馬多、奇曼丁等對輕、中度膝關(guān)節(jié)疼痛的鎮(zhèn)痛效果較好。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種新的治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的藥物。

本發(fā)明提供了菟絲子黃酮在制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物或保健食品中的用途。

其中，所述的菟絲子是旋花科植物南方菟絲子cuscutaaustralisr.br.或菟絲子cuscutachinensislam.的干燥成熟種子。

其中，所述菟絲子黃酮按照如下方法制備：

取菟絲子粉末，乙醇提取，濾液減壓回收乙醇，濃縮，石油醚萃取，大孔樹脂吸附，乙醇洗脫，回收乙醇，冷凍干燥，即可。

優(yōu)選地，所述乙醇提取時，乙醇的濃度為85％，提取的方式是回流提?。粌?yōu)選地，乙醇提取時，提物的次數(shù)為2次，第一次提取使用8倍量的乙醇，第2次提取使用6倍量的乙醇。

優(yōu)選地，濃縮成生藥含量約為1g/ml，加等量石油醚萃取。

優(yōu)選地，大孔樹脂吸附時，使用的大孔樹脂為非極性大孔樹脂，優(yōu)選d101大孔樹脂，洗脫時的乙醇的濃度為30％-50％，用量為藥液體積的10倍量。

其中，所述藥物是治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的藥物。

本發(fā)明一種治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的藥物，它是以菟絲子黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成。

其中，所述菟絲子黃酮按照如下方法制備：

取菟絲子粉末，乙醇提取，濾液減壓回收乙醇，濃縮，石油醚萃取，大孔樹脂吸附，乙醇洗脫，回收乙醇，冷凍干燥，即可。

優(yōu)選地，所述乙醇提取時，乙醇的濃度為85％，提取的方式是回流提??；優(yōu)選地，乙醇提取時，提物的次數(shù)為2次，第一次提取使用8倍量的乙醇，第2次提取使用6倍量的乙醇；

或者，濃縮成生藥含量約為1g/ml，加等量石油醚萃??；

或者，大孔樹脂吸附時，使用的大孔樹脂為非極性大孔樹脂，優(yōu)選d101大孔樹脂，洗脫時的乙醇的濃度為30％-50％，用量為藥液體積的10倍量。

本發(fā)明菟絲子黃酮具有良好的治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎作用，為臨床提供了一種新的選擇。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

具體實施方式

附圖說明

圖1給藥結(jié)束后各組大鼠x片(紅色方塊遮擋為左后肢)；

圖2實驗二關(guān)節(jié)標本大體相；

圖3實驗二光鏡下對關(guān)節(jié)軟骨組織he染色病理圖(標尺100μm)。

具體實施方式

實驗例1菟絲子黃酮膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的作用

1材料與儀器

實驗器械及耗材

手術(shù)刀片、眼科剪、無齒鑷、手術(shù)剪、血管鉗、無菌手套、口罩、紗布、濾紙、一次性手術(shù)巾、棉球、碘伏、1ml無菌注射器、5ml無菌注射器、電子分析天平(德國satorious公司)、包埋盒、切片盒、載玻片、蓋玻片、

藥品及試劑

木瓜蛋白酶(papain)：批號：lot9909，規(guī)格：25g/瓶，活力≥800u/mg，美國sigma公司生產(chǎn)。

菟絲子總黃酮(scf)：菟絲子碎粗粉，85％乙醇回流提取2次，第一次8倍量提取1.5小時，濾過，第二次6倍量提取1小時，濾過，合并兩次濾液，減壓濃縮，回收乙醇，濃縮成生藥含量約為1g/ml。加相同體積石油醚萃取脫脂，除去石油醚液，脫脂后，使藥液生藥含量為0.5g/ml。d101大孔樹脂吸附，用10倍量藥液體積的30％-50％乙醇洗脫，回收乙醇后濃縮藥液，冷凍干燥，每1g生藥可以制得0.0122-0.0150g菟絲子總黃酮。

鹽酸氨基葡萄糖膠囊(glucosaminehydrochloridecapsules，ghc)：中文商品名：奧泰靈；批號：1509213，規(guī)格0.75g/粒，香港奧美制藥廠生產(chǎn)。

余略。

主要設(shè)備及儀器

buckydiagnostfs飛利浦(中國)投資有限公司；轉(zhuǎn)輪式切片機(徠卡-2016，德國)；tsj-ⅱ型全自動封閉式組織脫水機(常州市中威電子儀器有限公司)；bmj-ⅲ型包埋機(常州郊區(qū)中威電子儀器廠)；phy-ⅲ型病理組織漂烘儀(常州市中威電子儀器有限公司)；yh-200dhultrasoniccleaning超聲波震蕩器(上海予皓科學(xué)儀器有限公司)；s400sevenexcellenceph/mv測量儀(瑞士mettler-toledo公司)；數(shù)碼三目攝像顯微鏡(ba400digital，麥克奧迪實業(yè)集團有限公司)；圖像分析軟件moticimagesadvanced。

主要試劑的配制：

木瓜蛋白酶溶液配制

精密稱取2.0gnaci，0.05gnaoh，0.179gna2hpo4和0.12gkh2po4溶解在40ml雙蒸水中，加入naoh調(diào)節(jié)ph至8.0，加入37.2mgedta2na，震蕩溶解，再加入木瓜蛋白酶2g溶解，測量液體ph值后，加入hci調(diào)整ph值到6.5，以雙蒸水定容至50ml，0.22um過濾除菌，10ml/瓶分裝，保存于4℃冰箱備用。一次性配制。

陽性藥的配制

取鹽酸氨基葡糖糖膠囊8粒，用0.9％生理鹽水配置成320ml溶液即得。

scf溶液的配制

精密稱取scf0.4472g置入燒杯中，加入450ml的生理鹽水，邊加邊攪拌，使其充分溶解，渦旋振蕩儀振蕩混勻，定容至500ml，制備成0.89mg/ml的scf溶液。7天配制一次。

飼養(yǎng)動物及飼養(yǎng)條件

健康雄性6周齡sd大鼠，由成都達碩生物科技有限公司提供，動物許可證號：scxk(川)2015-030。大鼠飼養(yǎng)于國家中醫(yī)藥管理局成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理三級實驗室(編號：tcm2032043)。大鼠均在室溫22～24℃，明暗周期12h/12h條件下飼養(yǎng)，飼料為普通標準大鼠配方飼料，由成都達碩生物科技有限公司提供，飲用水為純凈飲用水，大鼠均自由飲水攝食。

2方法

2.1動物分組、造模和給藥方法

標準體重的健康雄性sd大鼠60只，稱重后隨機分為4組，即空白對照組(c組)、模型對照組(m組)、鹽酸氨基葡萄糖膠囊組(ghc組)、scf組、。每組10只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后稱重，統(tǒng)計后調(diào)平各組之間體重差異后正式造模。除空白對照組外注射等體積生理鹽水外，其余各組按照實驗一方法造模。根據(jù)實驗一結(jié)果，造模3w后koa模型穩(wěn)定。故第4w開始進行相應(yīng)藥物干預(yù)，每天1次，連續(xù)4w。菟絲子藥典規(guī)定人日用量為6-12g。臨床人用量按照12g原生藥計算。分組及給藥信息如下表：

2.2觀察指標

2.2.1體重

第1d、第3d、第1w、第2w、第3w、第4w、第5w、第6w、第7w.測量每只存活動物的體重，記錄并調(diào)整灌胃量，觀察體重變化趨勢用于判斷大鼠健康狀態(tài)。

2.2.2關(guān)節(jié)活動度

第3d、第1w、第2w、第3w、第4w、第5w、第6w、第7w分別量角器測量測定患側(cè)的關(guān)節(jié)活動度，測量過程在麻醉狀態(tài)下進行，末次測量在動物處死后進行。具體方法如下：使用棉簽定位與工作臺邊相平行，固定麻醉狀態(tài)下大鼠的股骨端與之對齊，以同樣的力牽拉下肢做外展、內(nèi)收，遇到輕微抵抗時停止。以脛骨平臺中央與踝關(guān)節(jié)中心連線，測量兩種動作時的夾角，即為大鼠膝關(guān)節(jié)活動度。兩名與本課題不相關(guān)的實驗人員分別讀出角度并記錄。

2.2.3影像學(xué)檢測

第7w末次給藥后1h，每組隨機取3只，麻醉狀態(tài)下x光檢查膝關(guān)節(jié)形態(tài)變化。

2.2.4大體形態(tài)及病理學(xué)檢測(本部分隨機取6只進行)

2.2.4.1膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腔大體形態(tài)學(xué)觀察

末次給藥后1h，各組大鼠處死后，切開右側(cè)膝關(guān)節(jié)，進行關(guān)節(jié)腔大體形態(tài)學(xué)觀察，并進行大體形態(tài)學(xué)肉眼評分。評分標準見附表1：

表1大體形態(tài)學(xué)肉眼評分標準

2.2.4.2膝關(guān)節(jié)組織病理切片觀察

大體形態(tài)學(xué)觀察后，每組隨機取6只大鼠患側(cè)膝關(guān)節(jié)標本進行病理切片的制作和觀察。

2.3標本留存

剩余每組4只大鼠，取膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨，關(guān)節(jié)編號后液氮保存,干冰運輸,用于后續(xù)rt-pcr和wb實驗。

2.4數(shù)據(jù)分析

采用spss22.0軟件進行統(tǒng)計分析，定量資料用均數(shù)±標準差(x±s)表示，樣本之間兩兩比較采用t檢驗，p＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。

結(jié)果

3.1實驗過程中動物行為及表現(xiàn)的變化情況

3.1.1實驗前

所有大鼠在實驗前右后膝關(guān)節(jié)活動能力正常、無腫脹、無畸形，反應(yīng)靈敏，飲食可，全身狀態(tài)良好。

3.1.2實驗中

實驗造模順利。但在第3w測量關(guān)節(jié)活動度后大鼠死亡3只，考慮原因：過于頻繁的全身麻醉使大鼠對難以耐受，麻醉后核心體溫的恢復(fù)不能達到滿意水平。麻醉當天成都地區(qū)氣溫急劇下降，在大鼠麻醉復(fù)蘇進入恒溫動物房之前缺乏必要的保溫措施，大鼠受寒誘發(fā)肺部感染死亡。大部分存活大鼠均有肺部感染癥狀，因此對所有大鼠行10mg慶大霉素肌注，每日一次，連續(xù)三天。修改實驗方案，取消第4w的原定麻醉。觀察大鼠恢復(fù)后進行了剩余實驗。實驗過程中見空白組大鼠精神狀態(tài)佳，反應(yīng)較靈敏，施行造模的各組大鼠精神狀態(tài)良好，出現(xiàn)程度相差不大的右后膝關(guān)節(jié)膨大腫脹、活動靈敏性差，少數(shù)大鼠跛行等。

3.1.3給藥后

實驗結(jié)束對大鼠處死當天的右后膝局部形態(tài)、活動靈敏性等變化情況觀察如下：

空白對照組：該組大鼠精神狀態(tài)良好、飲食可，右后膝關(guān)節(jié)活動正常、無腫脹、無畸形、下肢肌肉未見明顯萎縮，下肢活動反應(yīng)靈敏，與造模前比較無明顯差異；

模型組：該組大鼠均出現(xiàn)右后膝骨性膨大，程度較第3w時加重，關(guān)節(jié)有明顯軟性腫脹，下肢肌肉較健側(cè)明顯萎縮，右下肢活動不靈活，跛行。

ghc組：該組大鼠部分出現(xiàn)右后膝骨性膨大，關(guān)節(jié)未見明顯軟性腫脹，下肢肌肉較健側(cè)有萎縮，右下肢活動稍欠靈活，少數(shù)大鼠見跛行。

scf組：該組大鼠大部分出現(xiàn)右后膝骨性膨大，關(guān)節(jié)未見明顯軟性腫脹，下肢肌肉較健側(cè)有萎縮，右下肢活動不靈活，多數(shù)大鼠見跛行。

3.2關(guān)節(jié)活動度差值結(jié)果

與空白組相比，所有造模組在造模成功后的關(guān)節(jié)活動度差值增加有明顯差異(p＜0.05)，此結(jié)果符合造模成功的前期研究，見表2。給藥結(jié)束后，與模型組相比較，ghc組、scf組的關(guān)節(jié)活動度差值有明顯差異(p＜0.05)，詳見表3。

表2造模成功后關(guān)節(jié)活動度差值比較

表3給藥結(jié)束后關(guān)節(jié)活動度差值比較

注：與空白組相比，*p＜0.05，**p＜0.01；與模型組相比，△p＜0.05，^△△p＜0.013.3關(guān)節(jié)x片觀察結(jié)果

影像學(xué)顯示：空白組在7w后均顯示右膝關(guān)節(jié)間隙正常，無骨硬化和骨質(zhì)增生形成(見圖1-a)；模型組在7w后可見股骨髁及脛骨平臺關(guān)節(jié)面有明顯病變，出現(xiàn)關(guān)節(jié)間隙明顯降低，關(guān)節(jié)變形，似有骨贅形成(見圖1-b)；ghc組在7w后可見股骨髁及脛骨平臺關(guān)節(jié)面不光整，軟骨下骨區(qū)密度增高，關(guān)節(jié)間隙變窄，有明顯退變(見圖1-c)；scf組在7w后可見股骨髁及脛骨平臺關(guān)節(jié)面欠光整，軟骨下骨區(qū)密度增高，關(guān)節(jié)間隙變窄，退變程度強于ghc組(見圖1-e)。

3.4關(guān)節(jié)標本大體觀察及評分

3.4.1關(guān)節(jié)標本大體觀察及描述

大鼠處死后以膝前正中切口切開，完整取出膝關(guān)節(jié)，股骨及脛骨兩端保留2cm。肉眼所見如下：

空白對照組：關(guān)節(jié)滑囊完整無增生，關(guān)節(jié)液無色、透明，關(guān)節(jié)腔無積液，股骨髁和脛骨平臺軟骨表面光滑完整，軟骨色澤明亮、呈淡黃色、有彈性、表面未見裂紋及軟化灶，關(guān)節(jié)邊緣無骨贅形成。(見圖2-a)

模型組：關(guān)節(jié)滑囊增生粘連，關(guān)節(jié)液呈深黃色且渾濁，關(guān)節(jié)腔明顯積液，關(guān)節(jié)軟骨呈暗灰黃色欠光澤，彈性降低，軟骨表面有蟲蝕樣改變，股骨負重區(qū)可見大小不一的圓形軟化灶及較細的裂紋，關(guān)節(jié)邊緣未見明顯骨贅形成，未見軟骨下骨裸露。(見圖2-b)

ghc組：關(guān)節(jié)滑囊粘連不嚴重，關(guān)節(jié)液呈深黃色，關(guān)節(jié)腔無明顯積液，關(guān)節(jié)軟骨呈暗灰黃色欠光澤，彈性降低，軟骨表面有蟲蝕樣改變，股骨負重區(qū)偶見較細的裂紋、未觀察到軟化灶，關(guān)節(jié)邊緣未見明顯骨贅形成，未見軟骨下骨裸露。(見圖2-c)

scf組：關(guān)節(jié)滑囊粘連明顯，關(guān)節(jié)液呈深黃色且渾濁，部分關(guān)節(jié)腔可見積液，關(guān)節(jié)軟骨呈暗黃色欠光澤，彈性降低，軟骨表面可見較細的裂紋及蟲蝕樣改變，股骨髁部磨損較ghc組較。關(guān)節(jié)邊緣未見明顯骨贅形成，未見軟骨下骨裸露。(見圖2-e)

3.4.2關(guān)節(jié)標本大體評分

關(guān)節(jié)標本大體評分參照文獻標準進行，三名經(jīng)過培訓(xùn)的人員嚴格遵循雙盲原則進行觀察并評分，統(tǒng)計分析結(jié)果顯示：與空白對照組相比較，模型對照組、ghc組及各實驗組大鼠關(guān)節(jié)大體評分均增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)；與模型對照組相比，ghc組及各實驗組大鼠關(guān)節(jié)大體評分均降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。詳見表4。

表4關(guān)節(jié)標本大體評分

注：與空白組相比，*p＜0.05，**p＜0.01；與模型組相比，△p＜0.05，^△△p＜0.01

3.5光鏡下對軟骨組織病理切片的觀察及改良mankin’s評分結(jié)果

3.5.1光鏡下對軟骨組織病理切片的觀察

空白對照組：著色均勻,軟骨基質(zhì)染色呈淺粉紅色，結(jié)構(gòu)分層清楚，軟骨表層光滑平整，軟骨細胞分布均勻且飽滿，呈近水平樣排列，絕大多數(shù)潮線清晰完整(圖3-a)。

模型組：軟骨組織基質(zhì)染色淺，軟骨表層明顯變薄甚或消失，局部可見多個軟骨細胞聚集，細胞核濃縮，表面廣泛碎裂，軟骨細胞缺失，大部分可見裂隙深達軟骨下骨，潮線破壞，鈣化層可見增厚(圖3b)。

ghc組：著色欠均勻，關(guān)節(jié)軟骨表層變薄且不規(guī)則，部分可見軟骨細胞缺失，部分表面可見裂隙存在，局部可見多個軟骨細胞聚集，潮線個別完整(圖3-c)。

scf組：軟骨基質(zhì)染色淺，關(guān)節(jié)軟骨表層明顯變薄，局部可見多個軟骨細胞聚集，細胞核濃縮，表面廣泛碎裂，部分可見裂隙深達軟骨下骨。潮線破壞(圖3-e)。

3.5.2光鏡下對軟骨組織病理切片行改良mankin’s評分結(jié)果

光鏡下對軟骨組織病理切片行改良mankin’s評分，結(jié)果顯示：與空白對照組相比，模型組及各治療組改良mankin’s評分均增高，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)；與模型組相比，ghc組評分降低但無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)，scf組評分增加但無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。詳見表5

表5光鏡下對軟骨組織病理切片行改良mankin’s評分結(jié)果

注：*與空白對照組相比p＜0.05；^※與模型組相比p＜0.05；

3.6討論實驗結(jié)果討論

通過觀察記錄各組大鼠造模前、造模成功時和實驗過程中關(guān)節(jié)大體形態(tài)、活動能力發(fā)現(xiàn)：空白對照組大鼠右后膝關(guān)節(jié)活動及外形正常，右后肢活動反應(yīng)靈敏；模型組大鼠均出現(xiàn)右后膝骨性膨大、右后肢活動不靈活、跛行等koa典型改變，且隨著時間增加程度加重。ghc組、scps組、scps+scf組大鼠在給藥結(jié)束后關(guān)節(jié)膨大、后肢靈活性、跛行等koa典型表現(xiàn)較造模成功時加重不明顯。scf組大鼠在給藥結(jié)束后右后膝koa樣變較造模成功時加重。

通過對各組大鼠造模前、造模成功時和實驗過程中關(guān)節(jié)活動度變化值統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)：與空白組相比，模型組造模后的關(guān)節(jié)活動度降低且差值有統(tǒng)計學(xué)差異，此結(jié)果符合造模成功的前期判斷。給藥結(jié)束后，與模型組相比較，各治療組的關(guān)節(jié)活動度差值均上升且有統(tǒng)計學(xué)意義，代表各治療組在改善koa關(guān)節(jié)活動度均有一定作用。

通過對各組大鼠給藥結(jié)束后患膝x片評價發(fā)現(xiàn)：空白對照組關(guān)節(jié)間隙正常，無骨硬化和骨質(zhì)增生形成；模型組可見關(guān)節(jié)間隙明顯降低、關(guān)節(jié)變形、軟骨下骨密度增加等koa典型影像學(xué)改變；治療組均有明顯關(guān)節(jié)退變表現(xiàn)，其中g(shù)hc組可見股骨髁及脛骨平臺關(guān)節(jié)面不光整，軟骨下骨區(qū)密度增高，關(guān)節(jié)間隙變窄，有明顯退變；scf組退變程度重于ghc組，關(guān)節(jié)面欠光滑，軟骨下骨區(qū)密度增高，關(guān)節(jié)間隙變窄。

通過肉眼觀察大鼠解剖后關(guān)節(jié)軟骨大體形態(tài)后發(fā)現(xiàn)：空白對照組大鼠關(guān)節(jié)滑囊完整無增生，關(guān)節(jié)液無色、透明，關(guān)節(jié)腔無積液，股骨髁和脛骨平臺軟骨表面光滑完整，軟骨色澤明亮、呈淡黃色、有彈性、表面未見裂紋及軟化灶，關(guān)節(jié)邊緣無骨贅形成；模型組大鼠關(guān)節(jié)滑囊增生粘連，關(guān)節(jié)液呈深黃色且渾濁，關(guān)節(jié)腔明顯積液，關(guān)節(jié)軟骨呈暗灰黃色欠光澤，彈性降低，軟骨表面有蟲蝕樣改變，股骨負重區(qū)可見大小不一的圓形軟化灶及較細的裂紋，關(guān)節(jié)邊緣未見明顯骨贅形成，未見軟骨下骨裸露；各治療組在軟骨色澤改變，軟骨表面破壞等koa早期大體改變上均有不同程度的減輕，但所有組別肉眼均未看到明確骨贅及軟骨下骨裸露，這驗證了實驗一對造模病理分期的判斷。

通過對關(guān)節(jié)軟骨大體評分統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)：模型對照組較空白對照組評分增高且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，證明造模是成功的；各治療組較較模型組評分降低且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明各治療組對大體修復(fù)均有一定作用；各治療組較空白對照組評分增高且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明各治療組對大體修復(fù)均未達到造模前正常水平。

通過在光鏡下對各組大鼠軟骨組織he染色病理切片觀察后發(fā)現(xiàn)：空白對照組染色清楚均勻，結(jié)構(gòu)分層清楚，軟骨表層光滑平整，軟骨細胞分布均勻且飽滿，絕大多數(shù)潮線清晰完整；模型組染色淺，軟骨表層明顯變薄甚或消失，表面廣泛碎裂，軟骨細胞缺失，大部分可見裂隙深達軟骨下骨，潮線破壞等koa典型病理改變。各治療組在染色丟失、軟骨細胞減少、裂隙、潮線不完整等koa改變均較模型組減輕。

通過對各組大鼠軟骨組織病理切片改良mankin’s評分進行統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)：模型組評分較空白對照組增高且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明在病理層面證實了本次實驗造模方式的成功，scf組評分較模型組降低且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明在本次實驗中病理結(jié)果證實菟絲子黃酮有修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨作用。

本發(fā)明菟絲子黃酮可以治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎，為臨床提供了一種新的選擇，且制備方法簡單，成本低廉，工業(yè)應(yīng)用前景良好。