本發(fā)明屬于藥物制備工藝與質(zhì)量控制領(lǐng)域，涉及華蓋散顆粒的制備方法，還涉及華蓋散顆粒質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

華蓋散出自《太平惠民和劑局方》，華蓋散具有宣肺解表，祛痰止咳的功用；主治肺感寒邪，咳嗽上氣，胸膈煩滿，項背拘急，聲重鼻塞，頭昏目眩，痰氣不利，呀呷有聲。本方集肺經(jīng)之藥于一身，諸藥相伍，使表寒解、肺氣宣，痰涎化，喘咳平，肺系諸癥皆除，故稱“華蓋散”。方中以麻黃為君，辛溫解表，宣肺平喘以祛風寒。臣以蘇子，辛香降氣化痰，杏仁辛苦溫，化痰止咳平喘，二藥共同降利肺氣，祛痰止咳。佐藥陳皮辛溫，燥濕化痰，理氣行滯，“氣順則痰消”；桑白皮甘寒，瀉肺利水平喘；茯苓健脾滲濕，杜絕生痰之源；三藥共同祛濕消痰。甘草為使調(diào)和諸藥。諸藥配伍，解表與化痰并用，痰濕得消，表寒得散，諸證自愈。

經(jīng)典名方標準顆粒仿照傳統(tǒng)中藥湯劑的煎煮模式，既保留傳統(tǒng)湯劑有效成分的特點，又避免了中成藥難以隨癥加減和傳統(tǒng)湯劑煎煮、攜帶不便的問題。該品種的開發(fā)，可形成“以經(jīng)方標準顆粒為主，單味配方顆粒為輔，隨癥加減”的臨床調(diào)劑模式，滿足現(xiàn)代臨床用藥需求。本品的開發(fā)可以解決單味配方顆粒存在的無法共煎等爭議的問題，充分發(fā)揮傳統(tǒng)方劑配伍的優(yōu)勢，達到減毒增效的效果，尤為重要。復(fù)方配方顆粒不僅傳承了中藥單味配方顆粒的優(yōu)點，同時又考慮了飲片在煎煮過程中的相互作用，符合中醫(yī)傳統(tǒng)用藥理論，具有較大的價值。

由于我國尚無適合于臨床調(diào)劑的復(fù)方顆粒，目前國際市場銷售的中藥復(fù)方顆粒均來自日本、韓國及我國臺灣地區(qū)。該品種的研究將推進中藥顆粒劑的國際市場開拓，促進中藥國際化。因此，有必要在研發(fā)并國產(chǎn)華蓋散，而研發(fā)對華蓋散的制備必須明確質(zhì)量控制方法。有研究文獻報道對同處方但不同制法的華蓋散傳統(tǒng)湯劑進行其中鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷、甘草酸、甘草苷的含量測定(靳鳳云，賀祝英，趙楊，廖薇，梁光義.hplc測定華蓋散傳統(tǒng)湯劑與顆粒湯劑中鹽酸麻黃堿、苦杏仁苷、甘草酸、甘草苷的含量，中成藥，2008年第30卷第1期)，另有研究報道測定其中的橙皮苷成分(張明昶，邵進明，彭小冰，袁雙秀，梁光義.反相高效液相色譜法測定不同制法華蓋散中橙皮苷的含量.時珍國醫(yī)國藥，2010年第21卷第1期)。目前報道的上述定量或定性的方法還不能有效地控制華蓋散顆粒的質(zhì)量。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種華蓋散顆粒的制備方法，該方法能充分發(fā)揮中藥配伍的特色及傳統(tǒng)湯劑的優(yōu)勢，最大限度的保留了有效成分；本發(fā)明的目的之二在于提供華蓋散顆粒的質(zhì)量控制方法，該方法在于克服現(xiàn)有質(zhì)量標準監(jiān)督的不足之處，針對華蓋散顆粒提供了一種系統(tǒng)的檢測手段，通過對華蓋散顆粒中多指標成分鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸的含量測定方法來達到對華蓋散顆粒的質(zhì)量控制。

為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1、華蓋散顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a、按質(zhì)量比為1-3：1-3：1-3：1-3：1-3：1-3：1-3：1-3分別取麻黃、炒苦杏仁、炒紫蘇子、陳皮、炙桑白皮、茯苓和炙甘草，然后加入相當于藥材總質(zhì)量6～12倍的水進行第一次煎煮，過濾收集濾液，藥渣再加入相當于藥材總質(zhì)量4～10倍的水進行第二次煎煮，過濾收集濾液，藥渣再加入相當于藥材總質(zhì)量3-8倍的水進行第三次煎煮，過濾收集濾液；

b、合并3次煎煮濾液，濾過，濾液真空減壓濃縮至相對密度為1.12～1.18的濃縮液；

c、以糊精和乳糖的混合物作為底物，噴入步驟b所得濃縮液中，沸騰干燥質(zhì)粒，篩選粒度在16-60目的顆粒，得華蓋散顆粒。

優(yōu)選的，所述麻黃、炒苦杏仁、炒紫蘇子、陳皮、炙桑白皮、茯苓和炙甘草的質(zhì)量比為3：3：3：3：3：3：1.5。

優(yōu)選的，所述第一次煎煮時間為1～3小時，所述第二次煎煮時間為1～1.5小時，所述第三次煎煮時間為0.5～1.5小時。

本發(fā)明步驟c中，所述糊精和乳糖的質(zhì)量比為3:1.

本發(fā)明中，所述沸騰干燥條件為進風溫度：80℃、風機頻率35hz、進料速度40r·min^-1、霧化壓力0.1mpa。

本發(fā)明中，所述糊精和乳糖的混合物加入量為干膏量的1.12倍。

2、華蓋散顆粒的質(zhì)量控制方法，包括如下步驟：

(1)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量的測定：取華蓋散顆粒，研磨后加甲醇溶液，超聲溶解，冷卻，再加甲醇溶液補足失重，搖勻，過濾，收集濾液得華蓋散顆粒樣品；鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿標準品用甲醇溶液溶解，搖勻得標準品溶液，然后將華蓋散顆粒樣品和標準品溶液在如下色譜條件下檢測：色譜柱：長度和直徑為250mm×4.6mm，5μm的kromasil100-5phenyl；柱溫：27℃；進樣量：10μl；流速：1.0ml·min^-1；流動相：乙腈與磷酸質(zhì)量分數(shù)為0.1％的磷酸水體積比為1∶99；檢測波長：210nm；

(2)甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量的測定：取華蓋散顆粒研磨后用甲醇溶液，制成華蓋散顆粒樣品，然后將甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸標準品加甲醇溶解，制成標品溶液，再將華蓋散顆粒樣品和標準品溶液在如下色譜條件下檢測：色譜柱：長度和直徑250×4.6mm，5μm的thermosyncronisc18；柱溫：27℃；流動相：乙腈-0.01％磷酸水；進樣量：20μl；流速：1.0ml·min-1；流動相：乙腈與磷酸質(zhì)量分數(shù)為0.1％的磷酸水梯度洗脫，0～12min乙腈體積比為18％，12～30min乙腈體積比為20％，30～40min乙腈體積比為25％，40～55min乙腈體積比為100％；

(3)結(jié)果判斷：華蓋散顆粒樣品在鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、甘草苷、橙皮苷和迷迭香酸標品出峰處出峰符合質(zhì)量標準。

本發(fā)明步驟(1)中，華蓋散顆粒樣品制備方法為：取華蓋散顆粒，研磨后按3每克華蓋散顆粒加250ml含鹽酸的體積分數(shù)為50％的甲醇溶液，超聲溶解，冷卻，再加含鹽酸的體積分數(shù)為50％的甲醇溶液補足失重，搖勻，過濾，收集濾液得華蓋散顆粒樣品；所述甲醇溶液中鹽酸質(zhì)量分數(shù)為0.036％；

標準品溶液制備方法為：分別稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，用體積分數(shù)為50％的甲醇溶解并稀釋，配制成含鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿分別為20μg/ml、10μg/ml的溶液即可。

本發(fā)明步驟(2)中，華蓋散顆粒樣品制備方法為：取華蓋散顆粒，按每克華蓋散顆粒加100ml甲醇，在頻率40khz、功率240w條件下超聲提取30min，取出，冷卻，補足失重，在10000r·min^-1離心10min，上清液用0.45μm微孔濾膜濾過即可；

標準品溶液制備方法為：分別稱取甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸，加甲醇溶解配制成濃度分別為0.3733mg·ml^-1、0.0902mg·ml^-1和0.1911mg·ml^-1的溶液。干膏量為中藥經(jīng)水煎煮，濃縮后干燥得到的膏體。

本發(fā)明的有益效果在于：華蓋散顆粒的制備方法，該方法按照傳統(tǒng)方法煎煮制成復(fù)方顆粒，較目前單味配方顆粒服用時各藥味簡單相加，更能充分發(fā)揮中藥配伍的優(yōu)勢，體現(xiàn)了中醫(yī)藥整體的觀念，為臨床用藥提供新的選擇；制備工藝中采用沸騰制粒技術(shù)，將提取浸膏與輔料混合、制粒、干燥、整粒等多工序，在一臺制粒機中完成，改進傳統(tǒng)制粒多機聯(lián)用的工藝弊端，使物料在低溫條件下完成干燥、制粒過程，避免有效成分的破壞，保證了藥物的療效。

本發(fā)明還公開了華蓋散顆粒的質(zhì)量控制方法，通過多指標含量測定，可更為全面地對華蓋散顆粒的質(zhì)量進行評價，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性及臨床用藥的有效性與安全性。本發(fā)明具有檢測手段簡單、檢測結(jié)果準確、質(zhì)量監(jiān)督更加全面的特點，更能適合整體中藥質(zhì)量控制提高的要求。

附圖說明

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進行說明：

圖1為鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿專屬性考察圖譜(a：溶劑；b：鹽酸麻黃堿；c：鹽酸偽麻黃堿)。

圖2為甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸專屬性考察hplc圖譜(a：甘草苷；b：橙皮苷；c：迷迭香酸)。

具體實施方式

下面將結(jié)合附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。

實施例1

華蓋散顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a、取麻黃300g、炒苦杏仁300g、炒紫蘇子300g、陳皮300g、炙桑白皮300g、茯苓300g、炙甘草150g，加19.5kg的水，煎煮提取2小時，即一煎；一煎后藥渣加入15.6kg的水，煎煮提取1小時，即二煎；二煎后藥渣加入11.7kg的水，煎煮提取1.0小時，即三煎；

b、合并三次煎煮濾液，濾過，濾液真空減壓濃縮至相對密度為1.14～1.15(60℃)的濃縮液；

c、加入重量比為3:1的糊精及乳糖混勻(混合物加入量為干膏量的1.12倍)，作為底物，噴入上述濃縮液，沸騰干燥制粒，控制進風溫度：80℃、風機頻率35hz、進料速度40r·min^-1、霧化壓力0.1mpa，制得粒度在16-60目的華蓋散顆粒。

實施例2

華蓋散顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a、取麻黃300g、炒苦杏仁300g、炒紫蘇子300g、陳皮300g、炙桑白皮300g、茯苓300g、炙甘草150g，加23.4kg的水，煎煮提取2.5小時，即一煎；一煎后藥渣加入19.5kg的水，煎煮提取1.5小時，即二煎；二煎后藥渣加入15.6kg的水，煎煮提取1小時，即三煎；

b、合并三次煎煮濾液，濾過，濾液真空減壓濃縮至相對密度為1.15～1.16(60℃)的濃縮液；

c、加入重量比為3:1的糊精及乳糖混勻，作為底物，噴入上述濃縮液，沸騰干燥制粒，控制進風溫度：80℃、風機頻率35hz、進料速度40r·min^-1、霧化壓力0.1mpa，制得粒度在16-60目的華蓋散顆粒。

實施例3

華蓋散顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a、取麻黃300g、炒苦杏仁300g、炒紫蘇子300g、陳皮300g、炙桑白皮300g、茯苓300g、炙甘草150g，加15.6kg的水，煎煮提取3小時，即一煎；一煎后藥渣加入11.7kg的水，煎煮提取1小時，即二煎；二煎后藥渣加入7.8kg的水，煎煮提取0.5小時，即三煎；

b、合并三次煎煮濾液，濾過，濾液真空減壓濃縮至相對密度為1.17～1.18(60℃)的濃縮液；

c、加入重量比為3:1的糊精及乳糖混勻，作為底物，噴入上述濃縮液，沸騰干燥制粒，控制進風溫度：80℃、風機頻率35hz、進料速度40r·min^-1、霧化壓力0.1mpa，制得粒度在16-60目的華蓋散顆粒。

實施例4

華蓋散顆粒的制備方法，包括步驟如下：

a、取麻黃300g、炒苦杏仁300g、炒紫蘇子300g、陳皮300g、炙桑白皮300g、茯苓300g、炙甘草150g，加11.7kg的水，煎煮提取1小時，即一煎；一煎后藥渣加入7.8kg的水，煎煮提取1小時，即二煎；二煎后藥渣加入5.85kg的水，煎煮提取1.5小時，即三煎；

b、合并三次煎煮濾液，濾過，濾液真空減壓濃縮至相對密度為1.12～1.13(60℃)的濃縮液；

c、加入重量比為3:1的糊精及乳糖混勻，作為底物，噴入上述濃縮液，沸騰干燥制粒，控制進風溫度：80℃、風機頻率35hz、進料速度40r·min^-1、霧化壓力0.1mpa，制得粒度在16-60目的華蓋散顆粒。

實施例5、華蓋散顆粒含量測定

將實施例1～4制備的華蓋散顆粒進行含量測定，采用高效液相色譜法，具體步驟如下：

1、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法為：

(1)樣品、儀器與試劑：

華蓋散顆粒(批號：15120001、15120002、15120003、16010001、16010002、16010003、16020001、16020002、16020003、16030001)鹽酸麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110749-200714，質(zhì)量分數(shù)99.8％)，鹽酸偽麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110715-200212，質(zhì)量分數(shù)99.9％)。

agilent1100四元梯度泵(美國安捷倫公司)和自動進樣器；sartorius-bs124s型精密電子天平(德國賽多利斯天平有限公司)；kq2200e型超聲清洗機器(上海五相儀器儀表有限公司)；超聲波清洗儀(kq3200de，昆山市超聲儀器有限公司)。

甲醇、乙睛(美國fisher)、三乙胺、二正丁胺、磷酸(天津科密歐化學試劑有限公司)；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

(2)方法與結(jié)果：

檢測波長的選擇：精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品10mg、5mg，加甲醇配制鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿20μg/ml、10μg/ml。以甲醇為空白校正，于200～400nm范圍內(nèi)掃描，確定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的最大吸收波長λmax為210nm。

色譜條件的確定：

色譜柱：長度和直徑為250mm×4.6mm，5μm的kromasil100-5phenyl；柱溫：27℃；進樣量：10μl；流速：1.0ml·min^-1；流動相：乙腈-0.1(wt)％磷酸水(含0.04(wt)％三乙胺和0.02(wt)％二正丁胺)(1∶99)。

對照品溶液的制備：

精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加50％甲醇溶解并稀釋，將其配制成每ml中分別含鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿20μg、10μg混合溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：

取華蓋散標準顆粒，研細，取細粉約0.3g，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶液(0.036％鹽酸)，超聲(500w，40khz)處理30min，取出放冷，加50％甲醇溶液(0.036％鹽酸)至刻度，搖勻，離心，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

(3)專屬性研究

取華蓋散標準顆粒樣品和缺麻黃陰性樣品，制成供試品溶液、缺麻黃的供試品溶液。分別吸取三種溶液，照擬定的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1(1-鹽酸麻黃堿峰、2-鹽酸偽麻黃堿峰；a-缺麻黃的華蓋散陰性樣品，b-鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品，c-華蓋散標準顆粒)。

(4)線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對照品儲備溶液置容量瓶中加甲醇定容，形成5個濃度的混合對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標，對照品的進樣量(μg)為橫坐標，按最小二乘法原理擬合方程，繪制標準曲線，鹽酸麻黃堿方程為y＝2.157x-2.481，r＝0.9999；鹽酸偽麻黃堿方程為y＝2.230x+2.485，r＝1.0000。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿進樣量在31～993μg范圍內(nèi)，與相應(yīng)峰面積線性關(guān)系良好；鹽酸偽麻黃堿進樣量在29～933μg范圍內(nèi)，與相應(yīng)峰面積線性關(guān)系良好。

(5)回收率試驗

取本品顆粒(鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量分別為：1.61mg·g^-1、0.60mg·g^-1)適量，研細，精密稱取9份，分別置25ml量瓶中，再精密加入混合對照品(含鹽酸麻黃堿0.02643mg·ml^-1，鹽酸偽麻黃堿0.01002mg·ml^-1)適量，再加50％甲醇溶液(含0.036％鹽酸)適量，按供試品制備方法制備供試品溶液，依照擬定的色譜條件，分別吸取10μl供試品溶液、對照品溶液于液相色譜儀，記錄色譜圖，計算加樣回收率，結(jié)果如表1和表2。結(jié)果表明：本方法檢測華蓋散標準顆粒中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量回收率良好，符合分析要求。

計算公式如下(下同)：

表1、鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗

表2、鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗

(6)精密度試驗

a.重復(fù)性考察

取華蓋散標準顆粒適量，研細，稱取6份，按供試品溶液制備方法制備，測定峰面積，計算含量，考察結(jié)果表明鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿rsd分別為0.96％、0.90％，重復(fù)性良好。

b.不同人員精密度考察

取華蓋散標準顆粒，由3個不同的工作人員，按供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液2份，測定其峰面積，計算出含量，結(jié)果顯示：人員變動的精密度rsd為分別為0.64％、1.64％，表明不同人員精密度良好。

c.不同日期精密度考察

取華蓋散標準顆粒，在不同的工作日內(nèi)，按供試品溶液制備方法分別制備2份，測定峰面積，計算含量，結(jié)果不同日期精密度考察，兩者日間精密度rsd為1.89％、3.28％，表明日間精密度良好。

d.不同儀器精密度考察

取華蓋散標準顆粒，在不同的儀器上，按供試品溶液制備方法分別制備2份，測定峰面積，計算含量，結(jié)果不同儀器精密度考察，儀器變動的精密度rsd分別為0.66％、1.64％，表明精密度良好。

(7)穩(wěn)定性的考察

取華蓋散標準顆粒，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，于不同的時間間隔，分別精密吸取10μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄峰面積。結(jié)果表明：供試品溶液室溫下密閉保存，存放24h，對鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿保留時間及峰面積rsd分別為1.49、1.86％，穩(wěn)定性良好。

(8)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量限度的確定

按上述供試品配制方法配制各批次樣品供試液，以上法測定10批次華蓋散顆粒鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量。得平均含量分別為：1.43mg/g、0.54mg/g；確定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量限度分別為：1.14mg/g、0.43mg/g，結(jié)果見表3。

表3、不同批次華蓋散顆粒中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量的測定結(jié)果

2、甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量的測定。

(1)樣品、儀器與試劑

樣品：華蓋散顆粒(樣品同鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量測定方法用樣品)；甘草苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號111610-201106，質(zhì)量分數(shù)93.7％)，橙皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110796-200310，質(zhì)量分數(shù)95.3％)，迷迭香酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號111871-201404，質(zhì)量分數(shù)98.6％)。

儀器：agilent1100四元梯度泵(美國安捷倫公司)和自動進樣器；sartorius-bs124s型精密電子天平(德國賽多利斯天平有限公司)；kq2200e型超聲清洗機器(上海五相儀器儀表有限公司)；超聲波清洗儀(kq3200de，昆山市超聲儀器有限公司)。

試劑：甲醇、乙睛(美國fisher)、磷酸(天津科密歐化學試劑有限公司)；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

(2)方法與結(jié)果

色譜條件的確定：色譜柱：thermosyncronisc18(250×4.6mm，5μm)；柱溫：27℃；流動相：乙腈-0.01％磷酸水；進樣量：20μl；流速：1.0ml·min^-1；流動相：a(乙腈)-b(0.01(wt)％磷酸水)；梯度洗脫程序：0min→12min→30min→40min→55min，乙腈18％→20％→25％→100％→100％。

對照品溶液的制備：精密稱取對照品甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸適量，分別置25ml、100ml、25ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，即得對照品儲備溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ(濃度分別為0.3733mg·ml^-1、0.0902mg·ml^-1、0.1911mg·ml^-1)。

供試品溶液的制備：取適量供試品研細，精密稱取約0.25g于具塞三角錐形瓶中，加入25ml甲醇。稱重，超聲(頻率40khz，功率240w)提取30min，取出，放冷，補重，10000r·min^-1離心10min，續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試液。

檢測波長的選擇：精密稱取甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸對照品適量，加甲醇配制甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸(濃度分別為0.3733mg·ml^-1、0.0902mg·ml^-1、0.1911mg·ml^-1)。于200～400nm范圍內(nèi)掃描，確定甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸的最大吸收波長λmax為278nm。

(3)專屬性研究

取華蓋散標準顆粒樣品和同時缺甘草、陳皮、紫蘇子的陰性樣品，按擬定樣品處理方法處理，制備成華蓋散標準顆粒供試品溶液、同時缺甘草、陳皮、紫蘇子的陰性供試品溶液。取三種溶液按擬定色譜條件，分別吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2(1-甘草苷峰，2-橙皮苷峰，3-迷迭香酸峰；a-混合對照品溶液hplc圖，b-缺甘草、陳皮、紫蘇子藥材的陰性樣品，c-華蓋散標準顆粒樣品)。結(jié)果表明，同時缺甘草、陳皮、紫蘇子的陰性樣品溶液在主峰處無干擾，方法專屬性良好。

(4)線性范圍考察

分別精密吸取對照品儲備溶液置容量瓶中加甲醇定容，形成5個濃度的混合對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，按最小二乘法原理計算甘草苷的回歸方程：y＝2375.02x-18.545，相關(guān)系數(shù)r為0.99993(線性范圍0.012～0.598μg)、橙皮苷的回歸方程：y＝2032.02x-60.016，相關(guān)系數(shù)r為0.99987(線性范圍0.043～1.442μg)；迷迭香酸的回歸方程：y＝1928.39x-15.077，相關(guān)系數(shù)r為0.99997，(線性范圍0.012～0.458μg)。結(jié)果表明，三者線性關(guān)系良好。

(5)回收率試驗

取甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸混合對照品溶液(濃度分別為：0.0747mg·ml^-1、0.6045mg·ml^-1、0.0573mg·ml^-1)加入已知含量的顆粒中(已測甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量分別為：0.90mg·ml^-1、6.60mg·ml^-1、0.64mg·ml^-1)，按供試品制備方法制備供試品溶液，照供試品溶液制備方法制備，按擬定色譜條件，分別吸取20μl供試品溶液與對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并計算加樣回收率，結(jié)果如表4～6。結(jié)果表明：本方法檢測華蓋散標準顆粒中甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量回收率良好，符合分析要求。

表4、甘草苷加樣回收率試驗

表5、橙皮苷加樣回收率試驗

表6、迷迭香酸加樣回收率試驗

(6)精密度試驗

a.重復(fù)性考察：取適量樣品研細，稱取6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，分別測定其峰面積，計算出含量，結(jié)果rsd為0.62％、0.766％、0.80％，重復(fù)性良好。

b.不同人員精密度考察

取華蓋散標準顆粒樣品，由3個不同的工作人員，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液2份，分別測定其峰面積，計算含量，結(jié)果顯示：人員變動的精密度rsd均小于2％，精密度良好。

c.不同日期精密度考察

取華蓋散標準顆粒樣品，在不同的工作日內(nèi)，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液2份，分別測定其峰面積，計算含量，結(jié)果顯示：日間精密度rsd均小于2％，表明日間精密度良好。

d.不同儀器精密度考察

取華蓋散標準顆粒，在不同的儀器上，按供試品溶液制備方法分別制備2份，測定峰面積，計算甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量，結(jié)果儀器變動的精密度rsd均小于2％，表明精密度良好。

(7)穩(wěn)定性試驗

取華蓋散標準顆粒，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別于不同的時間間隔，精密吸取20μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸峰面積。結(jié)果表明：供試品溶液室溫下密閉保存，存放24h，對甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸保留時間及峰面積變異均小于2.0％，穩(wěn)定性良好。

(8)甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量限度的確定：

精密吸取甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸對照品(濃度分別為0.3733mg·ml^-1、0.0902mg·ml^-1、0.1911mg·ml^-1)及供試品溶液20μl，于上述條件下，注入液相色譜儀，測定。

按上述供試品配制方法配制各批次樣品供試液，以上法測定10批次華蓋散顆粒甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量。得平均含量分別為甘草苷0.71mg/g、橙皮苷6.71mg/g、迷迭香酸0.31mg/g；確定甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸的含量限度為：甘草苷0.57mg/g、橙皮苷5.37mg/g、迷迭香酸0.25mg/g。結(jié)果見表7。

表7、不同批次華蓋散顆粒中甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量的測定結(jié)果

最后說明的是，以上優(yōu)選實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過上述優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了詳細的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以在形式上和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。