本發(fā)明涉及一種桑黃顆粒菌種的制備方法，屬于食用菌栽培
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：桑黃Sanghuangporussanghuang是我國(guó)最為著名的藥用真菌之一，專(zhuān)性寄生于桑屬M(fèi)orus樹(shù)木上，分類(lèi)學(xué)上隸屬擔(dān)子菌門(mén)Basidiomycota，傘菌綱Agaricomycetes，銹革孔菌目Hymenochaetales，銹革孔菌科Hymenochaetaceae，桑黃屬Sanghuangporus。據(jù)《藥性論》記載：桑黃味微苦，性寒，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中用于治療痢疾、盜汗、血崩、血淋、臍腹?jié)?、脫肛瀉血、帶下、閉經(jīng)；《神農(nóng)本草經(jīng)》將桑黃描述為“久服輕身不老延年”，還有解毒、提高消化系統(tǒng)機(jī)能的作用。一直以來(lái)，桑黃野生資源稀缺，且有日益枯竭的危險(xiǎn)。面對(duì)巨大的市場(chǎng)需求，桑黃人工栽培具有巨大的市場(chǎng)前景和經(jīng)濟(jì)效益。菌種作為桑黃人工栽培生產(chǎn)中的重要一環(huán)，至關(guān)重要。傳統(tǒng)的原種、栽培種培養(yǎng)基材料多以木屑、棉籽殼等材料為主，采用塑料袋、大口罐頭瓶或小口鹽水瓶等進(jìn)行封裝。該類(lèi)菌種生產(chǎn)方式，通常存在接種效率低，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲后結(jié)成塊狀，使用時(shí)不易將其搗碎，轉(zhuǎn)接栽培種速度慢，搗碎后的菌種塊也常因菌絲部分受損而影響定植速度和吃料效果，以及培養(yǎng)過(guò)程中因密封不嚴(yán)或通氣過(guò)小等造成雜菌污染及菌絲缺氧、生長(zhǎng)受抑制等情況發(fā)生。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種培養(yǎng)周期短、菌種活力強(qiáng)的桑黃菌種制備方法。技術(shù)方案一種桑黃顆粒菌種的制備方法，包括以下步驟：一、準(zhǔn)備原料：帶殼/帶皮谷物、石膏粉、蔗糖和真菌激發(fā)子；其中，帶殼谷物96-98％、石膏粉1-2％、蔗糖1-2％，三者的總量為100％，所述％為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；真菌激發(fā)子的質(zhì)量為帶殼谷物、石膏粉和蔗糖總質(zhì)量的0.001-0.002％；二、帶殼谷物在水中浸泡至吸水充足，然后煮制至無(wú)白心時(shí)撈出、瀝干表面水分，得熟化谷物；三、將石膏粉、蔗糖、真菌激發(fā)子與熟化谷物混合，得培養(yǎng)基質(zhì)；四、將培養(yǎng)基質(zhì)置于培養(yǎng)容器，然后滅菌；所述培養(yǎng)基質(zhì)占培養(yǎng)容器體積的三分之二；五、將桑黃液體菌種接種于培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)基質(zhì)，于25-30℃恒溫、避光、靜置培養(yǎng)至菌絲充滿(mǎn)培養(yǎng)容器，即得桑黃顆粒菌種；所述真菌激發(fā)子，其制備方法包括以下步驟：（1）10g菌株菌絲體用200-400mL質(zhì)量濃度為70%乙醇浸泡24h后，5000r/min離心20-30min，收集殘?jiān)唬?）向步驟（1）收集的殘?jiān)屑尤?00-200mL蒸餾水，100℃提取1-2h，5000r/min離心20-30min，分別收集上清液、殘?jiān)?；?）步驟（2）收集的殘?jiān)床襟E（2）的方法重復(fù)1次；（4）合并步驟（2）和（3）收集的上清液，加入800-1600mL的質(zhì)量濃度為95%乙醇醇沉24h，5000r/min離心30min后收集沉淀；所得沉淀即為真菌激發(fā)子；所述菌株為T(mén)型異擔(dān)子菌或薄多年臥孔菌。用薄多年臥孔菌菌株制備的真菌激發(fā)子簡(jiǎn)稱(chēng)P激發(fā)子；用T型異擔(dān)子菌菌株制備的真菌激發(fā)子簡(jiǎn)稱(chēng)H激發(fā)子。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的這兩種真菌激發(fā)子對(duì)桑黃顆粒菌種CMC酶、半纖維素酶和漆酶這三種胞外酶的酶活均有激發(fā)作用，即提高酶活。所述漆酶為含銅的多酚氧化酶。本發(fā)明的制備方法，接種2-4天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料；接種10-15天，菌絲充滿(mǎn)容器，培養(yǎng)結(jié)束。所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后萌發(fā)率可達(dá)100%。對(duì)于暫時(shí)不使用的顆粒菌種或用于菌種保藏的顆粒菌種，可用透明膠帶密封瓶蓋透氣孔后，置4℃冰箱中，避光保藏1-2年，使用時(shí)取出即可，接種后萌發(fā)率仍可達(dá)100%。相對(duì)沒(méi)有添加真菌激發(fā)子的制備方法，在其他條件相同的情況下（培養(yǎng)時(shí)間相同的情況下），采用本發(fā)明的制備方法所獲得的菌種胞外酶的活性明顯提高，所得菌種的活性提高。上述制備方法，真菌激發(fā)子的用量變化，會(huì)對(duì)制備方法及所制備的菌種產(chǎn)生影響。優(yōu)選的，真菌激發(fā)子的質(zhì)量為帶殼谷物、石膏粉和蔗糖總質(zhì)量的0.0015％。上述制備方法，所述谷物可以谷子、高粱、大麥、小麥、玉米等。選擇不同的谷物，所制備的菌種萌發(fā)及菌絲生長(zhǎng)速度以及菌種生長(zhǎng)狀態(tài)等均存在差異，優(yōu)選為谷子。上述制備方法，桑黃液體菌種以50mL/kg的接種量接種后第5-8天，晃動(dòng)培養(yǎng)容器，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆?；旌暇鶆?，以增加發(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度。上述制備方法，所用容器為配有通氣濾膜瓶蓋的組培瓶。組培瓶身透明，便于隨時(shí)觀察菌種生長(zhǎng)情況及有無(wú)雜菌污染，瓶蓋所帶濾膜可有效保證菌種培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)無(wú)菌空氣的需求，瓶蓋為螺旋式上緊，密封性好，相比傳統(tǒng)方式操作更加簡(jiǎn)便、防污染及通氣保障更加有效；組培瓶形狀規(guī)整，可多層摞放，有效增加空間利用率，便于運(yùn)輸及儲(chǔ)藏。有益效果與傳統(tǒng)的桑黃原種生產(chǎn)方式相比，本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)單易操作的桑黃顆粒菌種配方及制備方法，使接種效率、菌種活力及成功率均有效提高，并適宜進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。具體來(lái)說(shuō)：本發(fā)明采用帶殼或帶皮谷物作為顆粒菌種的主要材料，營(yíng)養(yǎng)豐富全面，可滿(mǎn)足桑黃菌絲生長(zhǎng)的需求，菌種活力強(qiáng)；本發(fā)明中顆粒菌種采用桑黃液體菌種進(jìn)行接種，接種后萌發(fā)點(diǎn)多，能縮短培養(yǎng)時(shí)間；本發(fā)明在帶殼或帶皮谷物中添加有真菌激發(fā)子，能激發(fā)桑黃顆粒菌種胞外酶的酶活，從而使得菌種活力強(qiáng)，可將傳統(tǒng)菌種培養(yǎng)時(shí)間從1-3個(gè)月縮短到10-15天；本發(fā)明所獲得顆粒菌種為分散顆粒狀菌種，可有效避免傳統(tǒng)菌種使用過(guò)程中，因搗碎接種塊而造成的菌絲損傷，有效保證菌種活力，另顆粒狀分散菌種發(fā)菌點(diǎn)多，用于栽培用種量少、成活快、封面早，產(chǎn)量可提高10-20％以上；本發(fā)明顆粒菌種培養(yǎng)所用容器為配有通氣濾膜瓶蓋的組培瓶，瓶身透明，便于隨時(shí)觀察菌種生長(zhǎng)情況及有無(wú)雜菌污染，瓶蓋所帶濾膜可有效保證菌種培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)無(wú)菌空氣的需求，瓶蓋為螺旋式上緊，密封性好，相比傳統(tǒng)方式操作更加簡(jiǎn)便、防污染及通氣保障更加有效；本發(fā)明顆粒菌種培養(yǎng)所用組培瓶形狀規(guī)整，可多層摞放，有效增加空間利用率，便于運(yùn)輸及儲(chǔ)藏；本發(fā)明顆粒菌種所用組培瓶可多次循環(huán)使用，整體生產(chǎn)成本低，便于推廣應(yīng)用。具體實(shí)施方式實(shí)施例1桑黃液體菌種的制備：將桑黃母種無(wú)菌操作接種于液體菌種培養(yǎng)基中進(jìn)行震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度26℃、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、避光振蕩培養(yǎng)5天，即得桑黃液體菌種；液體培養(yǎng)基組成：玉米粉40g/L、葡萄糖25g/L、酵母抽提物10g/L、麩皮20g/L、KH2PO41.25g/L、MgSO4·7H2O0.625g/L、去離子水余量。實(shí)施例2真菌激發(fā)子的制備：（1）10g菌株菌絲體用200-400mL質(zhì)量濃度為的70%乙醇浸泡24h后，5000r/min離心20-30min，收集殘?jiān)?；?）向步驟（1）收集的殘?jiān)屑尤?00-200mL蒸餾水，100℃提取1-2h，5000r/min離心20-30min，分別收集上清液、殘?jiān)?；?）步驟（2）收集的殘?jiān)床襟E（2）方法重復(fù)1次；（4）合并步驟（2）和（3）收集的上清液，加入800-1600mL的質(zhì)量濃度為95%乙醇醇沉24h，5000r/min離心30min后收集沉淀；所得沉淀即為真菌激發(fā)子；所述菌株為T(mén)型異擔(dān)子菌或薄多年臥孔菌。用薄多年臥孔菌菌株制備的真菌激發(fā)子簡(jiǎn)稱(chēng)P激發(fā)子；用T型異擔(dān)子菌菌株制備的真菌激發(fā)子簡(jiǎn)稱(chēng)H激發(fā)子。實(shí)施例3桑黃顆粒菌種的制備：（1）材料的選擇：選擇帶殼谷子作為顆粒菌種的主要材料；（2）材料預(yù)處理：稱(chēng)取98kg帶殼谷子，在自來(lái)水中浸泡12小時(shí)，確保吸水充足；（3）沸水煮制：將浸泡后吸水充足的谷子轉(zhuǎn)入鍋內(nèi)，加水沒(méi)過(guò)料面3cm，逐漸加溫至水沸，谷子煮制熟而不爛，無(wú)白心時(shí)，即可撈出瀝水；（4）拌料：將瀝干表面水分的谷子加入1kg石膏粉、1kg蔗糖和1.5g實(shí)施例2制備的H激發(fā)子后，攪拌均勻；（5）裝瓶：選用240mL組培瓶，將拌好的料裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（6）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)；（7）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以5mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種；（8）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；（9）搖瓶：接種1天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后5天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆?；旌暇鶆颍黾影l(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；（10）培養(yǎng)結(jié)束：接種后10天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃顆粒菌種；所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)100%。實(shí)施例4桑黃顆粒菌種的制備：（1）材料的選擇：選擇帶殼谷子作為顆粒菌種的主要材料；（2）材料預(yù)處理：稱(chēng)取98kg帶殼谷子，在自來(lái)水中浸泡12小時(shí)，確保吸水充足；（3）沸水煮制：將浸泡后吸水充足的谷子轉(zhuǎn)入鍋內(nèi)，加水沒(méi)過(guò)料面3cm，逐漸加溫至水沸，谷子煮制熟而不爛，無(wú)白心時(shí)，即可撈出瀝水；（4）拌料：將瀝干表面水分的谷子加入1kg石膏粉、1kg蔗糖和1.0g實(shí)施例2制備的H激發(fā)子后，攪拌均勻；（5）裝瓶：選用240mL組培瓶，將拌好的料裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（6）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)；（7）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以5mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種；（8）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；（9）搖瓶：接種2天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后5天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆粒混合均勻，增加發(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；（10）培養(yǎng)結(jié)束：接種后11天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃顆粒菌種；所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)100%。實(shí)施例5桑黃顆粒菌種的制備：（1）材料的選擇：選擇帶殼谷子作為顆粒菌種的主要材料；（2）材料預(yù)處理：稱(chēng)取98kg帶殼谷子，在自來(lái)水中浸泡12小時(shí)，確保吸水充足；（3）沸水煮制：將浸泡后吸水充足的谷子轉(zhuǎn)入鍋內(nèi)，加水沒(méi)過(guò)料面3cm，逐漸加溫至水沸，谷子煮制熟而不爛，無(wú)白心時(shí)，即可撈出瀝水；（4）拌料：將瀝干表面水分的谷子加入1kg石膏粉、1kg蔗糖和2.0g實(shí)施例2制備的H激發(fā)子后，攪拌均勻；（5）裝瓶：選用240mL組培瓶，將拌好的料裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（6）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)；（7）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以5mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種；（8）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；（9）搖瓶：接種2天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后5天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆粒混合均勻，增加發(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；（10）培養(yǎng)結(jié)束：接種后10天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃顆粒菌種；所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)100%。實(shí)施例6（1）材料的選擇：選擇帶殼高粱作為顆粒菌種的主要材料；（2）材料預(yù)處理：稱(chēng)取97kg帶殼高粱，在自來(lái)水中浸泡18小時(shí)，確保吸水充足；（3）沸水煮制：將浸泡后吸水充足的高粱轉(zhuǎn)入鍋內(nèi)，加水沒(méi)過(guò)料面3cm，逐漸加溫至水沸，高粱煮制熟而不爛，無(wú)白心時(shí)，即可撈出瀝水；（4）拌料：將瀝干表面水分的高粱加入1.5kg石膏粉、1.5kg蔗糖和1.5g實(shí)施例2制備的H激發(fā)子后，攪拌均勻；（5）裝瓶：選用240mL組培瓶，將拌好的料裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（6）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2.5小時(shí)；（7）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以4mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種；（8）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；（9）搖瓶：接種3天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后7天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆?；旌暇鶆颍黾影l(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；（10）培養(yǎng)結(jié)束：接種后14天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃顆粒菌種；所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)100%。實(shí)施例7（1）材料的選擇：選擇帶殼谷子作為顆粒菌種的主要材料；（2）材料預(yù)處理：稱(chēng)取96kg帶殼谷子，在自來(lái)水中浸泡18小時(shí)，確保吸水充足；（3）沸水煮制：將浸泡后吸水充足的谷子轉(zhuǎn)入鍋內(nèi)，加水沒(méi)過(guò)料面3cm，逐漸加溫至水沸，谷子煮制熟而不爛，無(wú)白心時(shí)，即可撈出瀝水；（4）拌料：將瀝干表面水分的谷子加入2kg石膏粉、2kg蔗糖和1.5g實(shí)施例2制備的H激發(fā)子后，攪拌均勻；（5）裝瓶：選用240mL組培瓶，將拌好的料裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（6）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2.5小時(shí)；（7）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以4mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種；（8）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；（9）搖瓶：接種2天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后6天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆粒混合均勻，增加發(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；（10）培養(yǎng)結(jié)束：接種后12天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃顆粒菌種；所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)100%。對(duì)比例1桑黃顆粒菌種的制備：（1）材料的選擇：選擇帶殼谷子作為顆粒菌種的主要材料；（2）材料預(yù)處理：稱(chēng)取98kg帶殼谷子，在自來(lái)水中浸泡12小時(shí)，確保吸水充足；（3）沸水煮制：將浸泡后吸水充足的谷子轉(zhuǎn)入鍋內(nèi)，加水沒(méi)過(guò)料面3cm，逐漸加溫至水沸，谷子煮制熟而不爛，無(wú)白心時(shí)，即可撈出瀝水；（4）拌料：將瀝干表面水分的谷子加入1kg石膏粉和1kg蔗糖后，攪拌均勻；（5）裝瓶：選用240mL組培瓶，將拌好的料裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（6）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)；（7）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以5mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種；（8）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；（9）搖瓶：接種2天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后6天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆?；旌暇鶆?，增加發(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；（10）培養(yǎng)結(jié)束：接種后13天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃顆粒菌種；所得顆粒菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)100%。對(duì)比例2（1）取木屑85g、麩皮10.5g、玉米粉2g、石膏粉1g、磷酸二氫鉀0.5g和蔗糖1g混合均勻，得拌料；拌料與水按照1：1.2的質(zhì)量比混合均勻，得培養(yǎng)基；（2）裝瓶：選用240mL組培瓶，將培養(yǎng)基裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（3）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)；（4）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以5mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種（5）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；；（6）搖瓶：接種5天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后9天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆粒混合均勻，增加發(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；；（7）培養(yǎng)結(jié)束：接種后18天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃菌種；所得菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)99%。對(duì)比例3（1）取木屑45g、棉籽殼40g、麩皮10g、玉米粉2g、石膏粉1g、磷酸二氫鉀1g和蔗糖1g混合均勻，得拌料；拌料與水按照1：1.2的質(zhì)量比混合均勻，得培養(yǎng)基；（2）裝瓶：選用240mL組培瓶，將培養(yǎng)基裝至總體積的三分之二后，擰上帶有通氣濾膜的瓶蓋；（3）滅菌：將裝料完成后的組培瓶轉(zhuǎn)至高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)；（4）接種：待料溫降至30℃以下時(shí)，無(wú)菌操作，以5mL/瓶的接種量，接入實(shí)施例1制備的桑黃液體菌種（5）培養(yǎng)：接種后的組培瓶轉(zhuǎn)入27℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光靜置培養(yǎng)；；（6）搖瓶：接種6天后，菌種萌發(fā)并開(kāi)始吃料，接種后11天時(shí)，晃動(dòng)組培瓶，使已長(zhǎng)及未長(zhǎng)菌絲的谷物顆?；旌暇鶆颍黾影l(fā)菌點(diǎn)，促進(jìn)培養(yǎng)速度；；（7）培養(yǎng)結(jié)束：接種后21天，菌絲滿(mǎn)瓶，培養(yǎng)結(jié)束，即得桑黃菌種；所得二級(jí)菌種可用于轉(zhuǎn)接栽培種或栽培袋，接種后成活率可達(dá)98%。效果實(shí)驗(yàn)：分別觀察實(shí)施例3-7、對(duì)比例1接種10天后組培瓶中菌絲的分布狀態(tài)；分別取實(shí)施例3-7、對(duì)比例1-3接種10天后的培養(yǎng)產(chǎn)物，檢測(cè)其胞外酶酶活（采用常規(guī)方法檢測(cè)酶活即可，單位為U/g，即每g培養(yǎng)產(chǎn)物的酶活）；結(jié)果如表1所示；表1CMC酶酶活半纖維素酶酶活漆酶酶活實(shí)施例319.97U/g11.76U/g5.31U/g實(shí)施例418.79U/g10.35U/g5.09U/g實(shí)施例519.54U/g11.29U/g5.27U/g實(shí)施例619.05U/g11.31U/g5.18U/g實(shí)施例718.93U/g10.52U/g5.07U/g對(duì)比例111.4U/g8.49U/g2.07U/g對(duì)比例23.77U/g4.34U/g0.99U/g對(duì)比例32.95U/g1.99U/g2.55U/g另外，本發(fā)明采用實(shí)施例1制備的P激發(fā)子代替實(shí)施例3-7中的H激發(fā)子；所獲得的培養(yǎng)產(chǎn)物的酶活與實(shí)施例3-7的相當(dāng)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3