本發(fā)明具體涉及臘梅屬植物及其提取物在制備抗皰疹病毒感染的藥物的應(yīng)用，所述的臘梅屬植物包括柳葉臘梅、浙江臘梅和山臘梅，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：1.臘梅柳葉臘梅、山臘梅和浙江臘梅同屬蠟梅科臘梅屬植物，我國(guó)特產(chǎn)，主要分布于我國(guó)亞熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候區(qū)域的鄂、湘、川、渝、貴、豫、浙、贛、皖等省。蠟梅屬柳葉蠟梅(chimonanthussalicifoliuss.y.hu)、浙江蠟梅(chimonanthuszhejiangensism.c.liu)或山臘梅(chimonanthusnitensoliv.)等為畬族民間習(xí)用藥,從北宋年間起其干燥葉就作為服用的食涼茶，近千年來(lái)用于治療和預(yù)防感冒。現(xiàn)代研究又有進(jìn)展，其中，山臘梅提取物制備的顆粒制劑，有良好治療/預(yù)防感冒功效，已在市場(chǎng)銷(xiāo)售；柳葉蠟梅和浙江臘梅已載入2005和2015年的《浙江省中藥炮制規(guī)范》，主要成分為揮發(fā)油，含有1.8-桉葉素、β-蒎烯、α-萜品烯醇、芳樟烯、欖香醇等40多種成分。傳統(tǒng)用途：性味微苦，辛，涼，歸肺、脾、胃經(jīng)，用于治療感受風(fēng)寒而引起肚脹、肚痛腹瀉，因飲食不當(dāng)引起的消化不良、腹部脹痛和小兒疳積等癥狀。浙江臘梅為臘梅科臘梅屬常綠灌木，產(chǎn)于浙江。群體遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)浙江臘梅和山臘梅相對(duì)近緣，山臘梅在湖南、福建、廣西貴州等地均有分布，而浙江臘梅未見(jiàn)分布，浙江臘梅僅分布于浙江龍泉，因此，結(jié)合形態(tài)、分子及地理分布特征，我們認(rèn)為浙江蠟梅是山蠟梅分布區(qū)的最東邊界的一個(gè)群體，可能只是山蠟梅的一種生態(tài)型(ecotype)，而不是獨(dú)立的分類(lèi)單位。山臘梅(chimonanthusnitens)為常綠灌木，又稱之為毛山茶、巖馬桑(《新華本草綱要》)、亮葉臘梅(《經(jīng)濟(jì)植物手冊(cè)》)、香風(fēng)茶(《安徽中草藥》)、野臘梅(《云南中藥資源名錄》)。產(chǎn)于安徽、浙江、江蘇、江西、福建、湖北、湖南、廣西、云南、貴州和陜西等省區(qū)。民間使用歷史悠久，具有防治感冒、痰喘、咳嗽、慢性支氣管炎、細(xì)菌感染、發(fā)熱疼痛、炎癥、蚊蟲(chóng)叮咬及高血壓、高血脂等作用，亦有抗腫瘤、防治心腦血管疾病、改善微循環(huán)和抗衰老、抗氧化等作用，另外還具有調(diào)節(jié)人體機(jī)能、增強(qiáng)體質(zhì)、提高機(jī)體免疫力、減少體脂、減肥等保健功能。該植物主產(chǎn)于江西德興大茅山區(qū)、婺源懷玉山區(qū)、安徽徽州齊云山一帶，在浙江、福建、陜西等省亦有分布，資源較豐富。山臘梅揮發(fā)油中主要成分是烯烴、醇類(lèi)和烷酸類(lèi)物質(zhì)，分別為脫氫香橙烯、△-杜松烯、e-環(huán)氧金合歡烯、石竹烯、(-)-氧化石竹烯、α-杜松醇(7.08％)、(+)-匙葉桉油烯醇、杉木醇、十六烷酸。欖香烯等倍半萜類(lèi)合物具有較好的抗腫瘤活性，黃酮類(lèi)成分具有防治心腦血管疾病、改善微循環(huán)和抗衰老等多種功效。山臘梅藥片的溫?zé)嵴舭l(fā)物可抑制病毒，山臘梅揮發(fā)油可抑制和殺滅病毒。1982年，《江西省藥品標(biāo)準(zhǔn)》就記載了“山臘梅片”和“山臘梅沖劑”，作為防治感冒和流行性感冒制劑在臨床上應(yīng)用，市售良好。與山臘梅同屬的柳葉蠟梅和浙江臘梅雖在民間使用普遍，但在市場(chǎng)上還未有適合的制劑。藥理研究中柳葉蠟梅未見(jiàn)手足口病毒的研究文獻(xiàn)報(bào)道。co2超臨界萃取技術(shù)具有低溫、快速、效率高、無(wú)污染、提取物純度高、易分離等優(yōu)點(diǎn)，適用于揮發(fā)油的提取。賀建云采用超臨界co2萃取小試設(shè)備，不加夾帶劑提取柳葉蠟梅中物質(zhì)，總收率為3.68％，但未見(jiàn)超臨界二氧化碳萃取柳葉蠟梅物質(zhì)的應(yīng)用報(bào)道。本發(fā)明在已有研究的基礎(chǔ)上，采用新的未見(jiàn)報(bào)道的提取方案，優(yōu)化已有制備柳葉臘梅提取物的工藝條件、參數(shù)以及研究柳葉臘梅新提取物的新用途；研究適合柳葉蠟梅提取物的軟膠囊、滴丸等制劑；為柳葉蠟梅提取物用于感染皰疹病毒的殺滅、治療和預(yù)防，提供有益支持。2.皰疹病毒單純皰疹病毒(herpessimplexvirus，hsv)感染是一種常見(jiàn)的傳染病，其感染部位廣泛，常發(fā)于癌癥或其他慢性病應(yīng)用各種免疫抑制劑的患者中。近年來(lái)，hsv發(fā)病率急劇增高，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)公共衛(wèi)生健康。目前，國(guó)內(nèi)外研究的抗病毒藥物接近50種，應(yīng)用到臨床治療全身性感染的僅無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷有效，但已被發(fā)現(xiàn)有耐藥株發(fā)生。因此，大力開(kāi)發(fā)研制新的低毒、高效的抗病毒藥物刻不容緩。中草藥來(lái)源廣泛，現(xiàn)已成為研究熱點(diǎn)。水痘-帶狀皰疹病毒(zvz)為一種α-皰疹病毒，它在人類(lèi)可引起水痘和帶狀皰疹兩種常見(jiàn)疾病。帶狀皰疹的臨床表現(xiàn)以沿周?chē)窠?jīng)分布的群集皰疹和以神經(jīng)痛為特征。vzv通過(guò)神經(jīng)系統(tǒng)感染人體，經(jīng)歷兩次病毒血癥后，病毒到達(dá)皮膚表層，而產(chǎn)生典型的皰疹樣皮損。隨后病毒又進(jìn)入周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)，并潛伏在脊神經(jīng)節(jié)。vzv具有高度的種屬特異性，其自然感染僅發(fā)生于人與大猩猩。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明概述本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種新的抗皰疹病毒的藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗皰疹病毒的藥物中的應(yīng)用。所述的臘梅科臘梅屬植物包括：柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的提取物為以下一種或多種：(1)水提物；(2)醇水混合提取物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳萃取。本發(fā)明第二方面提供了上述臘梅屬植物提取物的制備方法。本發(fā)明第三方面公開(kāi)含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。發(fā)明詳述本發(fā)明第一方面提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗皰疹病毒的藥物中的應(yīng)用。所述的皰疹病毒選自單純皰疹病毒，水痘-帶狀皰疹病毒。本發(fā)明中所述的藥材或原藥材是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明中所述的生藥也是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明的臘梅屬植物包括臘梅屬植物的鮮品或干品；臘梅屬植物的藥用部位選自臘梅屬植物的全株、地上部分、地下部分、莖、莖皮、花、葉、種子或任意組合；優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的地上部分、莖、莖皮、葉或任意組合；更優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的莖或葉；最優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的葉。本發(fā)明的第二方面提供了臘梅屬植物提取物的制備方法。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的臘梅屬植物提取物為以下用水提、醇提、水蒸氣蒸餾及超臨界二氧化碳提取一種或多種：(1)水提物；(2)醇提物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳提取物。為了加快提取速度，提高提取收率，可以對(duì)臘梅屬原藥材進(jìn)行粉碎，粉碎后的平均粒徑優(yōu)選10-80目，更優(yōu)先是20-65目，最優(yōu)選是30-50目。本發(fā)明提供的提取物的第一種制備方法：所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材臘梅屬植物加入溶劑提取，過(guò)濾并濃縮濾液，干燥獲得。所述的溶劑：本領(lǐng)域常用的溶劑均可以用于本發(fā)明。優(yōu)選溶劑水和c1-c5的醇類(lèi)。c1-c5的醇類(lèi)選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或其混合物。選自水、無(wú)水乙醇、乙醇水溶液；更優(yōu)選溶劑選自乙醇水溶液。乙醇或乙醇水溶液和其他溶劑相比，具有低毒，防腐，污染小，價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，更適合于本發(fā)明應(yīng)用于醫(yī)藥產(chǎn)品工業(yè)化大生產(chǎn)。乙醇水溶液的濃度(乙醇水溶液中含有的乙醇的體積百分比)：優(yōu)選30％-100％的乙醇水溶液，更優(yōu)選50％-95％的乙醇水溶液，進(jìn)一步優(yōu)選60％-80％的乙醇水溶液，最優(yōu)選75％的乙醇水溶液。溶劑的量是指提取每公斤原藥材所用的溶劑量，即提取每公斤藥材計(jì)使用溶劑的重量(單位kg)或體積(單位l)。溶劑用量是原藥材用量的2-30倍；更優(yōu)選5-16倍；進(jìn)一步優(yōu)選6-15倍；最優(yōu)選8-10倍。提取的溫度：優(yōu)選是室溫到溶劑回流的溫度；更優(yōu)選是40度；溶劑回流的溫度；進(jìn)一步優(yōu)選是50度；溶劑回流的溫度；最優(yōu)選是溶劑回流的溫度。提取的次數(shù)：可以是1～5次；優(yōu)選是2～3次。提取的時(shí)間：每次0.5～5小時(shí)；優(yōu)選每次0.5～3小時(shí)；更優(yōu)選每次1～3小時(shí)。濃縮的溫度：可以是55～90以；優(yōu)選62～80以；更優(yōu)選65～75以。濃縮后稠膏的相對(duì)密度為1.1～1.5，優(yōu)選1.2～1.4。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)乙醇提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的65％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無(wú)水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過(guò)濾并濃縮濾液，干燥獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無(wú)水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過(guò)濾并合并提取液，經(jīng)濃縮至相對(duì)密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的30～99％的乙醇水溶液回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過(guò)濾并合并提取液，60～90℃(包括65～75))濃縮至相對(duì)密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。本發(fā)明提供的提取物的第二種制備方法：所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)水蒸氣蒸餾并獲得的水蒸氣蒸餾揮發(fā)油。本發(fā)明提供的提取物的第三種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)超臨界二氧化碳提取并獲得。本發(fā)明的超臨界提取物，其特征在于，所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)二氧化碳超臨界提取，在分離釜中獲得提取物，提取的條件可以是一種或多種，例如：(1)不加夾帶劑的提取物；(2)加夾帶劑的提取物；(3)不加夾帶劑提取后再加夾帶劑的提取物。超臨界二氧化碳提取的條件如下：萃取釜:萃取溫度為30-70℃；優(yōu)選為35-60℃；更優(yōu)選為40-50℃；最優(yōu)選43-47℃。萃取溫度可以選自40℃，42℃，45℃，47℃，50℃。萃取壓力為10-40mpa；優(yōu)選為13-35mpa；優(yōu)選為16-24mpa；更優(yōu)選為18-22mpa。萃取壓力可以選自15mpa，20mpa，20.6mpa，29.6mpa，30mpa。萃取釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)萃取釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)。為了盡量節(jié)約原藥材的加料和卸料時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，優(yōu)選是多個(gè)萃取釜并聯(lián)。在一部分萃取釜加料或卸料的時(shí)候，另外的萃取釜同事進(jìn)行萃取。萃取劑流速：萃取劑二氧化碳的流速會(huì)對(duì)本發(fā)明的生產(chǎn)效率產(chǎn)生重大的影響。如果二氧化碳的流速過(guò)快，二氧化碳和萃取溶質(zhì)不能充分接觸，會(huì)降低每體積二氧化碳的萃取效率；如果二氧化碳的流速過(guò)慢，會(huì)降低單位時(shí)間的生產(chǎn)效率。因此，萃取劑二氧化碳的流速需要一個(gè)合適的流速。萃取劑二氧化碳的流速為每公斤藥材每小時(shí)20-150升(以每公斤藥材每小時(shí)計(jì)，單位為l/h·kg生藥)，即20-150l/h·kg；優(yōu)選的萃取劑二氧化碳的流速為23-125l/h·kg；更優(yōu)選為33-80l/h·kg；進(jìn)一步優(yōu)選為50-70l/h·kg；最優(yōu)選為55-65l/h·kg。萃取劑二氧化碳的流速可以選自23.1l/h·kg；23.8l/h·kg；28.5l/h·kg；32.3l/h·kg；32.8l/h·kg；36.2l/h·kg；38.3l/h·kg；35.3l/h·kg；44.8l/h·kg；50.7l/h·kg；55.4l/h·kg；75.6l/h·kg；82.2l/h·kg。萃取時(shí)間分鐘(min)：30-400min，優(yōu)選120-160min，更優(yōu)選120-160min，最優(yōu)選120-160min。萃取時(shí)間可以是60-70min，70-80min，80-100min，110-120min，120-130min，140-150min，155-165min。例如萃取時(shí)間可以是62min，70min，83min，100min，120min，132min，145min，160min。夾帶劑:本發(fā)明的超臨界提取方案中，可以選擇性的使用夾帶劑或不使用夾帶劑；優(yōu)先是使用夾帶劑。本領(lǐng)域常用的溶劑均可以作為本發(fā)明的夾帶劑。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：0％-100％v/v的乙醇水溶液、甲醇，乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本文中100％v/v的乙醇水溶液表示無(wú)水乙醇；本文中0％v/v的乙醇水溶液表示沒(méi)有醇的水。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：水、無(wú)水乙醇、30％-100％v/v的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮。優(yōu)選的夾帶劑選自水、無(wú)水乙醇、30％-99％v/v的乙醇水溶液。更優(yōu)選的夾帶劑選自75％-95％v/v的乙醇水溶液。最優(yōu)選的夾帶劑選自95％v/v的乙醇水溶液。夾帶劑的量(以每公斤藥材計(jì)為l/kg，kg/kg；或以每克藥材計(jì)為ml/g，g/g)：夾帶劑的量為0.10-2.5l/kg；；優(yōu)選0.20-1.5l/kg；，更優(yōu)選0.30-0.80l/kg；最優(yōu)選0.40-0.60l/kg；分離釜：分離釜的溫度為25-70℃，優(yōu)選為30-60℃；更優(yōu)選為35-55℃，最優(yōu)選為40-50℃，。分離釜的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃，41℃，42℃，43℃，44℃，45℃，46℃，47℃，48℃，49℃，50℃，51℃，52℃，53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜的壓力為2-17mpa；優(yōu)選為3-15mpa；更優(yōu)選為4-12mpa；最優(yōu)選為4.5-10mpa。分離釜的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa，5.6mpa，5.7mpa，5.8mpa，6mpa，7mpa，8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)分離釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)，為了盡量提高提取物的回收率，優(yōu)選是多個(gè)分離釜串聯(lián)。分離釜i壓力和溫度：分離釜i的溫度為30-70℃，優(yōu)選為50-60℃；更優(yōu)選為53-57℃；最優(yōu)選為55℃。分離釜i的溫度可以選自53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜i的壓力為4-17mpa；優(yōu)選為5-15mpa；更優(yōu)選為6-12mpa；最優(yōu)選為8-10mpa。分離釜i的壓力可以選自8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜ii壓力和溫度：分離釜ii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜ii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜ii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜ii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜iii壓力和溫度：分離釜iii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜iii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜iii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜iii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜中的得到的提取物，就是本發(fā)明的臘梅屬植物提取物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對(duì)原藥材不加夾帶劑的進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，二氧化碳?xì)怏w通過(guò)萃取釜的流量為100-250kg/小時(shí)，萃取時(shí)間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa，分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對(duì)原藥材加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa,加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過(guò)萃取釜的流量為23-125l/h·kg生藥，萃取時(shí)間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無(wú)水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對(duì)原藥材先不加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取后再加夾帶劑的進(jìn)行提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；二氧化碳?xì)怏w通過(guò)萃取釜的流量為23-125l/h·kg生藥，萃取時(shí)間為90-300分鐘；放出分離釜中的提取物；再加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過(guò)萃取釜的保持流量為23-125l/h·kg生藥，再萃取90-300分鐘；分離釜中再次得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無(wú)水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本領(lǐng)域常用的干燥均可以用于本發(fā)明，例如：減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、熱風(fēng)干燥、遠(yuǎn)紅外線干燥或微波干燥。或聯(lián)合使用上述一種或多種干燥方式。本發(fā)明提供的提取物的第四種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)二氧化碳超臨界提取后，其剩余的藥材再加入溶劑提取，過(guò)濾并濃縮濾液，干燥獲得。具體的提取方法可以第一種方式相同。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“提取”可以是常溫下的浸漬，或者超臨界狀態(tài)下的提取，或者在升高的溫度下的提取(例如煎煮和/或回流)，或者這些操作方式的結(jié)合。還可以進(jìn)一步包括對(duì)提取物進(jìn)行進(jìn)一步處理，例如進(jìn)一步純化，例如除溶劑、沉淀除雜質(zhì)、溶劑萃取、樹(shù)脂吸附分離等。如本文所述的，術(shù)語(yǔ)“提取物”將包括可用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明任何目的的任何純度的提取物，提取物的提取純度可以在較大的范圍內(nèi)變化。本發(fā)明第三方面公開(kāi)含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑為柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑的組合物還包含一種或多種無(wú)毒生理學(xué)可接受的載體。所述的可接受的載體包括本領(lǐng)域公知的任何輔料及起控釋作用的輔料。常用的輔料包括稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、致孔劑、增塑劑、填充劑、增溶劑和乳化劑。稀釋劑可以是但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤(rùn)劑可以是但不限于水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹(shù)脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是但不限于干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤(rùn)滑劑和助流劑可以是但不限于滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇；增溶劑和乳化劑可以是但不限于乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(lèi)(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及它們的混合物。起緩控釋作用的輔料可以選自親水性凝膠材料、蠟脂類(lèi)材料和不溶性材料的一種或多種。所述的親水性凝膠材料可以選自羥丙基甲基纖維素、卡波普、羧甲基纖維素鈉和海藻酸鹽，所述的蠟脂類(lèi)材料可以選自十六醇、十八醇、蜂蠟、山崳酸甘油酯、硬脂酸和巴西棕櫚蠟，所述的不溶性材料可以選自乙基纖維素、丙烯酸樹(shù)脂、聚氧乙烯和聚乙烯。此外，如需要，可向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑包含柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑?？赏ㄟ^(guò)將組合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。該制劑可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑優(yōu)選口服制劑、噴霧劑、外用劑、口含片。有益技術(shù)效果：柳葉蠟梅、浙江臘梅、山臘梅三種臘梅品種的水提、揮發(fā)油和超臨界提取物均有不同程度的抗皰疹病毒的作用。具體數(shù)據(jù)如下：對(duì)單純皰疹病毒hsv-i：lys有效濃度(抑制率)為50ug/ml(25％)；sys有效濃度(抑制率)為200ug/ml(25％)；zys有效濃度(抑制率)為200ug/ml(50％)、100ug/ml(25％)；zyy有效濃度(抑制率)為200ug/ml(50％)、100ug/ml(25％)；syy有效濃度(抑制率)為100ug/ml(50％)、50ug/ml(25％)；lylj-2-y(2-6)有效濃度(抑制率)為50μg/ml(50％)、25μg/ml(25％)；lylj-1-y(2-3)有效濃度(抑制率)為12.5μg/ml(25％)；lylj-1-b(2-4)有效濃度(抑制率)為100μg/ml(25％)、50μg/ml(25％)；lylwj-1-b(2-3)有效濃度(抑制率)為50μg/ml(25％)；lylw-(2-2)有效濃度(抑制率)為50μg/ml(25％)；對(duì)單純皰疹病毒hsv-ii：lylj-2-y(2-6)有效濃度(抑制率)為50μg/ml(75％)、25μg/ml(50％)；lylj-1-b(2-4)有效濃度(抑制率)為100μg/ml(50％)、50μg/ml(25％)；lylj-1-y(2-3)有效濃度(抑制率)為12.5μg/ml(25％)；lylwj-1-b(2-3)有效濃度(抑制率)為50μg/ml(25％)；lylw-(2-2)有效濃度(抑制率)為50μg/ml(25％)。具體實(shí)施方式提取物制備實(shí)施例實(shí)施例1-4(三個(gè)種的水提物)取粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加水回流提取。第一次加10-16倍水，提取1小時(shí)后過(guò)濾，第二次加水8-12倍，提取1小時(shí)，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮或水浴鍋上濃縮，水浴75℃、轉(zhuǎn)速80rpm,濃縮至比重為1.18－1.22時(shí)，傾倒入不銹鋼盤(pán)中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。柳葉蠟梅的水提物編號(hào)lys，浙江臘梅的水提物編號(hào)zys，山臘梅的水提物編號(hào)sys。序號(hào)方法品名藥材重(g)一次二次浸膏(g)收率(％)樣品編號(hào)實(shí)施例1水提柳葉蠟梅60013倍水10倍水14023lys實(shí)施例2水提柳葉蠟梅100016倍水16倍水20620lys實(shí)施例3水提山臘梅33010倍水8倍水89.627.15sys實(shí)施例4水提浙江臘梅37010倍水8倍水11731.6zys實(shí)施例5-7(三個(gè)種的醇提物)醇提：取柳葉臘梅干燥老葉粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加乙醇回流提取。第一次加10倍乙醇，提取1小時(shí)后過(guò)濾，第二次加乙醇8倍，提取1小時(shí)，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，水浴65℃、轉(zhuǎn)速80rpm，濃縮至比重為1.18－1.22時(shí)，傾倒入不銹鋼盤(pán)中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。實(shí)施例8-11(三個(gè)種的水蒸氣蒸餾揮發(fā)油)稱取適量已粉碎的藥材，裝入5-20倍水提時(shí)，裝好揮發(fā)油提取器，待油產(chǎn)生后收集。實(shí)施例12(超臨界不加夾帶劑)稱取6.5kgly，置于24l萃取釜中。壓力穩(wěn)定后，萃取開(kāi)始。萃取釜ii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20mpa、8mpa、5mpa、5mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.5r/min，二氧化碳流速為210-230l/h。分離釜ii放出300ml黃色膏狀泡沫，半個(gè)小時(shí)后放出少許產(chǎn)品，停止實(shí)驗(yàn)，耗時(shí)103min；后處理：分液漏斗分出上層紅褐色油狀物101kg【lylw(2-2)】，收率2.05％。實(shí)施例13(超臨界加夾帶劑樣品)稱取5.8kgly，置于24l萃取釜中。壓力穩(wěn)定開(kāi)始循環(huán)，并開(kāi)啟副泵(10.5r/min)，泵入2.9kg95％乙醇，85min內(nèi)加入夾帶劑。萃取釜iii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.7mpa、8.5mpa、4.9mpa、4.9mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30r/min，二氧化碳流速為250-260l/h。從分離釜i和分離釜ii出料口收集產(chǎn)物，基本無(wú)產(chǎn)物時(shí)停止實(shí)驗(yàn)，用時(shí)170min。后處理：分離ii的收集液中，有一瓶明顯油水分離，用分液漏斗分出油層，70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到45g油狀物【lylj-2-y(2-3)】，下層水層，80℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得1.4g紅色油狀物。分ii的液體抽濾，收集到淡黃色膏狀物11.1g【lylj-2-b(2-3)】，濾液70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得黑褐色油狀物46.2g【lylj-2-y(2-3)】。分i收集的樣品抽濾，得青黑色膏狀物26.3g【lylj-1-b(2-3)】，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得黑色膏狀物20.6g【lylj-1-y(2-3)】，總收率2.6％。實(shí)施例14(超臨界加夾帶劑樣品)開(kāi)啟電熱控制系統(tǒng)和制冷系統(tǒng)。稱取6.4kg柳葉蠟梅葉子，置于24l萃取釜中。稱取3.2kg95％乙醇，放置于副泵的儲(chǔ)箱中，開(kāi)啟副泵(r＝9.1r/min),60min內(nèi)加夾帶劑結(jié)束。萃取釜ii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.7mpa、8.5mpa、5mpa、5mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.5r/min，二氧化碳流速為220-240l/h。從分離釜i和分離釜ii出料口收集產(chǎn)物，基本無(wú)產(chǎn)物時(shí)停止實(shí)驗(yàn)，用時(shí)135min。后處理：分離i得到固體1.3g，編號(hào)lylj-1(2-6)；抽濾分離ii收集產(chǎn)品，抽濾得膏狀物13g，編號(hào)lylj-2-b(2-6)；濾液70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得187.4g黑色油狀物，編號(hào)lylj-2-y(2-6)，總收率3.15％。實(shí)施例15(超臨界加夾帶劑樣品)稱取5.65kgly，置于24l萃取釜中。打開(kāi)電熱系統(tǒng)和冷卻系統(tǒng)。壓力穩(wěn)定開(kāi)始循環(huán)，并開(kāi)啟副泵(9.1r/min)，泵入2.75kg95％乙醇，90min內(nèi)加入夾帶劑結(jié)束。萃取釜ii、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.5mpa、8.5mpa、4.8mpa、4.8mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝27.6r/min，二氧化碳流速為210-245l/h。從分離釜i和分離釜ii出料口收集產(chǎn)物，基本無(wú)產(chǎn)物時(shí)停止實(shí)驗(yàn)，用時(shí)150min。后處理：抽濾分i樣品，收集到青黑色膏狀物42.2g【lylj-1-b(2-4)】，濾液70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得黑褐色膏狀物79.2g【lylj-1-y(2-4)】。分離釜ii，70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得黑褐色膏狀112.2g【lylj-2(2-4)】，總收率4.13％。實(shí)施例16(超臨界補(bǔ)加夾帶劑)在超臨界不加夾帶劑的基礎(chǔ)上，開(kāi)啟副泵(r＝15.5r/min)，15min加入1.55kg95％乙醇。從分離釜i放出300ml黑色液體，分離釜ii放出1100ml黃色液體，停止實(shí)驗(yàn)，耗時(shí)110min。后處理：分離ii直接70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得黑色油狀物25.1g【lylwj-2-y(2-3)】油狀物；分離釜i抽濾，濾餅86.6g【lylwj-1-b(2-3)】膏狀物，濾液減壓蒸餾得27g【lylwj-1-y(2-3)】青黑色膏狀物，收率2.29％。藥理實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)例1：臘梅樣品抗皰疹病毒活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)1.材料1.1.實(shí)驗(yàn)病毒株病毒：?jiǎn)渭儼捳畈《緃sv-i和hsv-ii，為復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院抗病毒藥物研究室保存，臨用時(shí)新鮮制備。細(xì)胞：非洲綠猴腎細(xì)胞(vero)。1.2.樣品：為制備實(shí)施例1、3、4、10、11、12、13、14、15所得5個(gè)樣品：lys(140601)、sys(161217)、zys(161218)、zyy(161030)、syy(161030)、lylw(2-2)、lylj-1-y(2-3)、lylj-2-y(2-6)、lylj-1-b(2-4)、lylwj-1-b(2-3)。1.3.主要儀器：co2細(xì)胞培養(yǎng)箱：mco-15ac型，日本三洋(sanyo)公司；電子天平：sartorius1700型，德國(guó)w-germany；超凈工作臺(tái)：sw-cj-1f型，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；離心機(jī)：ld5-2a型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；酸度計(jì)：orionstara211，thermo公司；酶標(biāo)儀：bio-rad680型，美國(guó)伯樂(lè)bio-rad公司；生物倒置顯微鏡：xds-1b型，重慶光學(xué)儀器廠；電熱恒溫水浴鍋：dk-s26型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；微量振蕩儀：mh-1型，江蘇海門(mén)其林貝爾儀器制造有限公司；漩渦混合器：wh-861型，江蘇太倉(cāng)華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。1.4.試劑：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(mtt)、dmem培養(yǎng)基購(gòu)自sigma公司；二甲基亞砜(dmso)購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；0.25％胰酶購(gòu)自吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；胎牛血清購(gòu)自gibco公司；完全培養(yǎng)液(含10％胎牛血清以及雙抗的dmem培養(yǎng)液)；細(xì)胞維持液(含2％胎牛血清的dmem培養(yǎng)液)；磷酸緩沖液(pbs，ph7.4)，本實(shí)驗(yàn)室自制。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1.樣品配制方法測(cè)試樣品溶解于dmso中，預(yù)先配置成40mg/ml濃度，然后用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋?zhuān)凑粘Ｒ?guī)測(cè)試濃度，以200ug/ml開(kāi)始倍比稀釋。2.2.樣品細(xì)胞毒性試驗(yàn)vero細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24小時(shí)，形成細(xì)胞單層后，加入不同濃度的樣品稀釋液，繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)后，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化并用mtt法測(cè)定細(xì)胞活性，確定樣品對(duì)細(xì)胞的毒性濃度。2.3.體外抗病毒試驗(yàn)細(xì)胞活性大于90％以上的最大藥物濃度作為藥效測(cè)試的最大起始濃度，倍比稀釋5個(gè)濃度進(jìn)行藥效活性檢測(cè)。vero細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24小時(shí)，形成細(xì)胞單層后，加入相應(yīng)病毒液感染細(xì)胞，然后換入對(duì)細(xì)胞最大無(wú)毒濃度及以下的5個(gè)樣品稀釋液，再經(jīng)72小時(shí)培養(yǎng)后，顯微鏡下觀察細(xì)胞病變(cpe)，確定樣品對(duì)病毒的抑制作用。2.4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法mtt法測(cè)定樣品對(duì)細(xì)胞的毒性，觀察細(xì)胞病變作用cpe(cytopathiceffect)確定樣品對(duì)病毒的抑制作用。tc50和ic50值按照reed-muench法原理進(jìn)行計(jì)算。3抗單純皰疹病毒病毒篩選結(jié)果3.1樣品對(duì)vero細(xì)胞的毒性3.2)樣品體外抗單純皰疹病毒hsv-i作用3.3)樣品體外抗單純皰疹病毒hsv-ii作用當(dāng)前第1頁(yè)12