本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物及制劑和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
無(wú)花果根為?？浦参餆o(wú)花果樹(shù)ficuscaricalinn.的根。具有清熱解毒，散瘀消腫的作用。肺熱咳嗽，咽喉腫痛，痔瘡，瘰疬，筋骨疼痛。無(wú)花果中含有多種化學(xué)成分，主要為酚類(lèi)化合物、類(lèi)黃酮化合物和多糖類(lèi)化合物。目前對(duì)于無(wú)花果的研究多集中在其果實(shí)上，對(duì)于無(wú)花果根的研究鮮有報(bào)道。
免疫力是人體抵御外界致病因子和維持體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的能力，也就是人體免疫系統(tǒng)進(jìn)行自我保護(hù)的一種能力。免疫力的主要任務(wù)是抵抗細(xì)菌或病毒等的感染，維系生命的正常生長(zhǎng)發(fā)育和健康。使免疫系統(tǒng)不能正常發(fā)揮保護(hù)作用的原因多種多樣。隨著人們生活節(jié)奏的加快和工作壓力的增強(qiáng)，心理失衡、營(yíng)養(yǎng)不全、生活沒(méi)有規(guī)律、鍛煉不得法、亂用藥品等等，都會(huì)導(dǎo)致免疫力低下。免疫力低下，會(huì)直接影響人們的身體健康，導(dǎo)致發(fā)生影響日常生活、工作和學(xué)習(xí)的機(jī)體障礙免疫力低下，人體容易生病?，F(xiàn)有技術(shù)中，增強(qiáng)人體免疫力藥物存在不良反應(yīng)明顯，效果不確切的問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一在于針對(duì)以上問(wèn)題，提供增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物，解決現(xiàn)有技術(shù)中增強(qiáng)人體免疫力藥物不良反應(yīng)明顯，效果不確切的問(wèn)題，并促進(jìn)無(wú)花果資源的綜合利用。
本發(fā)明的目的之二在于提供增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物的制劑。
本發(fā)明的目的之三在于提供所述黃酮提取物在制備具有增強(qiáng)免疫作用的食品、保健食品或藥品中的用途。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物，所述黃酮提取物中黃酮含量不少92％，由無(wú)花果根經(jīng)纖維素酶酶解后，再由堿性稀乙醇提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂二次吸附分離后，再經(jīng)洗脫液酸化，濃縮干燥而得。
本發(fā)明所述的增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物的制劑，其特征在于：所述黃酮提取物加上藥學(xué)上可接受的輔料，按照常規(guī)制劑方法制備而成的制劑。
優(yōu)選地，所述制劑為口服固體制劑。
優(yōu)選地，所述口服固體制劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、散劑中的一種。
本發(fā)明所述的黃酮提取物在制備具有增強(qiáng)免疫作用的食品、保健食品或藥品中的用途。
本發(fā)明中所提到的藥學(xué)上可接受的輔料，包括《藥用賦型劑手冊(cè)》(美國(guó)藥學(xué)協(xié)會(huì)，1986年10月)、化學(xué)工業(yè)出版社出版的《藥用輔料手冊(cè)》(handbookofpharmaceuticalexcipients，原著第四版)或《藥劑輔料大全》(四川出版集團(tuán)、四川科學(xué)技術(shù)出版社出版，2006年1月)所列的輔料，但并不局限于這些輔料。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
本發(fā)明無(wú)花果根的黃酮提取物純度高，增加免疫作用確切，安全有效。
本發(fā)明采用口服固定制劑的形式給藥，制備簡(jiǎn)單，生物利用度高，不良反應(yīng)小。且所用原料來(lái)源價(jià)廉易得。
本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，條件溫和，對(duì)環(huán)境友好，能夠?qū)崿F(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明的方式包括但不僅限于以下實(shí)施例。
增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物，所述黃酮提取物中黃酮含量不少92％，由無(wú)花果根經(jīng)纖維素酶酶解后，再由堿性稀乙醇提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂二次吸附分離后，再經(jīng)洗脫液酸化，濃縮干燥而得。
本發(fā)明所述的增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物的制劑，其特征在于：所述黃酮提取物加上藥學(xué)上可接受的輔料，按照常規(guī)制劑方法制備而成的制劑。
優(yōu)選地，所述制劑為口服固體制劑。
優(yōu)選地，所述口服固體制劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、散劑中的一種。
本發(fā)明所述的黃酮提取物在制備具有增強(qiáng)免疫作用的食品、保健食品或藥品中的用途。
實(shí)施例1
增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物的制法，包括以下步驟：
步驟1：取無(wú)花果根，粉碎成粗粉，加入無(wú)花果根質(zhì)量的5倍的纖維素酶溶液，35℃溫浸72小時(shí)，過(guò)濾，取濾渣，備用。所述纖維素酶溶液ph值為3，酶活為5萬(wàn)u/g。
步驟2：將所述濾渣中加入ph值8的50％乙醇水溶液，60℃溫浸72小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮，得濃縮液；50％乙醇水溶液用量以每克無(wú)花果根計(jì)為3ml。
步驟3：一次吸附分離：將所述濃縮液中加入d101大孔吸附樹(shù)脂，室溫?cái)嚢栉?，過(guò)濾，取吸附后的大孔吸附樹(shù)脂裝柱。大孔吸附樹(shù)脂的用量按每克無(wú)花果計(jì)為分別為0.3g。依次用水、25％堿性乙醇水溶液、48％堿性乙醇水溶液、70％堿性乙醇水溶液、92％堿性乙醇水溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，每個(gè)洗脫液的用量均為其洗脫的大孔吸附樹(shù)脂柱柱體積的6倍，收集92％堿性乙醇洗脫液。將所述92％乙醇洗脫液濃縮，得濃縮洗脫液；
步驟4：二次吸附分離：將步驟3所得濃縮洗脫液加入d101大孔吸附樹(shù)脂，室溫?cái)嚢栉?，過(guò)濾，取吸附后的大孔吸附樹(shù)脂裝柱，大孔吸附樹(shù)脂的用量按每克無(wú)花果計(jì)為分別為0.02g。大孔吸附樹(shù)脂柱依次用水、40％乙醇水溶液、58％乙醇水溶液、79％乙醇水溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，每個(gè)洗脫液的用量均為其洗脫的大孔吸附樹(shù)脂柱柱體積的6倍，收集79％乙醇洗脫液。
步驟5：將步驟4所得的79％乙醇洗脫液揮干乙醇，調(diào)節(jié)ph值為5，靜置48小時(shí)，過(guò)濾，濾液濃縮，冷凍干燥，即得。
本實(shí)施例所得無(wú)花果根的黃酮提取物中黃酮含量為93.5％。
實(shí)施例2
增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物的制法，包括以下步驟：
步驟1：取無(wú)花果根，粉碎成粗粉，加入無(wú)花果根質(zhì)量的3倍的纖維素酶溶液，50℃溫浸24小時(shí)，過(guò)濾，取濾渣，備用。所述纖維素酶溶液ph值為5，酶活為8萬(wàn)u/g。
步驟2：將所述濾渣中加入ph值14的10％乙醇水溶液，40℃溫浸24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮，得濃縮液；10％乙醇水溶液用量以每克無(wú)花果根計(jì)為5ml。
步驟3：一次吸附分離：將所述濃縮液中加入d101大孔吸附樹(shù)脂，室溫?cái)嚢栉?，過(guò)濾，取吸附后的大孔吸附樹(shù)脂裝柱。大孔吸附樹(shù)脂的用量按每克無(wú)花果計(jì)為分別為0.5g。依次用水、15％堿性乙醇水溶液、40％堿性乙醇水溶液、80％堿性乙醇水溶液、95％堿性乙醇水溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，每個(gè)洗脫液的用量均為其洗脫的大孔吸附樹(shù)脂柱柱體積的8倍，收集92％堿性乙醇洗脫液。將所述92％乙醇洗脫液濃縮，得濃縮洗脫液；
步驟4：二次吸附分離：將步驟3所得濃縮洗脫液加入d101大孔吸附樹(shù)脂，室溫?cái)嚢栉剑^(guò)濾，取吸附后的大孔吸附樹(shù)脂裝柱，大孔吸附樹(shù)脂的用量按每克無(wú)花果計(jì)為分別為0.08g。大孔吸附樹(shù)脂柱依次用水、32％乙醇水溶液、55％乙醇水溶液、76％乙醇水溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，每個(gè)洗脫液的用量均為其洗脫的大孔吸附樹(shù)脂柱柱體積的8倍，收集76％乙醇洗脫液。
步驟5：將步驟4所得的76％乙醇洗脫液揮干乙醇，調(diào)節(jié)ph值為5，靜置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液濃縮，冷凍干燥，即得。
本實(shí)施例所得無(wú)花果根的黃酮提取物中黃酮含量為94.8％。
實(shí)施例3
增強(qiáng)免疫的無(wú)花果根的黃酮提取物的膠囊劑的制法，包括以下步驟：
取實(shí)施例2所得的黃酮提取物50g，加入羧甲基纖維素鈉20g，預(yù)膠化淀粉120g，乳糖5g，混合均勻，制粒，整粒，加入硬脂酸鎂5g，裝入膠囊，即得膠囊1000粒。人口服推薦用量為每人(成人)每日3次，每次1粒。
實(shí)施例4
增強(qiáng)免疫作用試驗(yàn)，試驗(yàn)方法如下：
取實(shí)施例2制備所得樣品進(jìn)行增強(qiáng)免疫作用實(shí)驗(yàn)。人口服推薦用量為每人(成人)每日3次，每次50mg，成人體重按60kg計(jì)算，每日折合給藥劑量為2.5mg/kg。
劑量選擇與受試物給予方式：根據(jù)人口服用推薦用量，設(shè)樣品低、中、高劑量組分別為12.5、25、50mg/kg(分別相當(dāng)于人體推薦用量的5、10、20倍)，同時(shí)設(shè)一個(gè)陰性對(duì)照組，每組10只動(dòng)物。
分別稱(chēng)取樣品，加水制成不同濃度的混懸液。分別給予相應(yīng)劑量組動(dòng)物灌胃，灌胃體積為0.2ml/10gbw(體重)，陰性對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃30天。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，雌雄各半，體重25g。
1對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響
采用抗體生成細(xì)胞檢測(cè)測(cè)試本品對(duì)小鼠體液免疫的影響。
每只小鼠腹腔注射2％壓積srbc0.2ml，將免疫5天后的小鼠頸椎脫臼處死，取出脾臟放在盛有hank’s的平皿內(nèi)，磨碎脾臟，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾，離心(1000r/min)10min，用hank’s液洗2遍，最后將細(xì)胞懸浮在5mlrpmi1640培養(yǎng)液中，臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)(應(yīng)在95％以上)，并將細(xì)胞濃度調(diào)整為5×106個(gè)/ml，制成脾細(xì)胞懸液。將瓊脂糖配制成1％水溶液，水浴煮30分鐘，與等量雙倍濃度hank’s液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加10％(用sa緩沖液配制)壓積srbc50μl，脾細(xì)胞懸液各20μl做兩個(gè)平行樣，迅速混勻后，傾倒于瓊脂糖薄層玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1.5h，然后將補(bǔ)體加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1.5h，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。補(bǔ)體制備是采集豚鼠血，分離出血清(至少5只豚鼠的混合血清)，將1ml壓積srbc加入到5ml豚鼠血清中，4℃冰箱放置30min，經(jīng)常振蕩，離心取上清液，分裝，-70℃保存。用時(shí)以sa緩沖液按1:1.5稀釋。試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。
表1對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響
由表1可見(jiàn)，連續(xù)灌胃30天后，本發(fā)明3個(gè)濃度組動(dòng)物的溶血空斑數(shù)與陰性對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均有顯著性差異(p<0.05)。
2對(duì)小鼠血清溶血素的影響
采用血清溶血素測(cè)定(血凝法)測(cè)試本發(fā)明對(duì)小鼠體液免疫的影響。
每只小鼠腹腔注射2％srbc0.2ml免疫，繼續(xù)灌胃5天后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置1小時(shí)，剝離，2000r/min離心10分鐘，收集血清，用生理鹽水將血清作倍比稀釋?zhuān)糠菹♂?2孔，將不同稀釋度的血清置于血凝板中，每孔100μl，再加入0.5％srbc懸液100μl，混勻，置濕盒37℃3小時(shí)后觀察結(jié)果，記錄每孔的凝集程度。計(jì)算抗體積數(shù)。
試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表2。
表2對(duì)小鼠血清溶血素的影響
由表2可知，連續(xù)灌胃30天后，本發(fā)明3個(gè)濃度組動(dòng)物的抗體積數(shù)與陰性對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均有顯著性差異(p<0.05)。
3結(jié)論
表1、表2的結(jié)果表明，本發(fā)明對(duì)小鼠體液免疫試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性。
將連續(xù)灌胃本發(fā)明30天后的小鼠進(jìn)行解剖，其臟器重量及外觀與陰性對(duì)照組相比，均無(wú)明顯差異。且飼喂期間，無(wú)異常行為。說(shuō)明要發(fā)明對(duì)小鼠無(wú)明顯不良反應(yīng)。
上述實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式之一，不應(yīng)當(dāng)用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，但凡在本發(fā)明的主體設(shè)計(jì)思想和精神上作出的毫無(wú)實(shí)質(zhì)意義的改動(dòng)或潤(rùn)色，其所解決的技術(shù)問(wèn)題仍然與本發(fā)明一致的，均應(yīng)當(dāng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。