本發(fā)明涉及一種凍干粉針劑及其制備工藝，具體是一種基于重組枯草桿菌纖溶酶qk的凍干粉針劑及其制備工藝，屬于藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：全世界每年直接和間接死于心腦血管疾病的人數(shù)約占世界總死亡人數(shù)的1/3，已成為人類(lèi)健康的頭號(hào)殺手。而血栓是導(dǎo)致心腦血管疾病的最主要原因。因此，溶栓是治療心腦血管疾病的關(guān)鍵。目前市場(chǎng)上溶栓產(chǎn)品主要分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是應(yīng)用范圍較廣的以尿激酶、鏈激酶和t-pa(組織型纖溶酶原激活劑)為代表的間接溶栓藥物，其通過(guò)激活體內(nèi)纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶發(fā)揮溶栓功效，但這類(lèi)藥物價(jià)格昂貴，出血率高，半衰期短(以分鐘計(jì)算)；另一類(lèi)是以從蚯蚓中提取的蚓激酶和從蛇毒中提取的溶纖酶為代表的纖溶酶類(lèi)似蛋白，其可直接溶解血栓中的纖維蛋白，但無(wú)特異性，毒副作用過(guò)大，應(yīng)用范圍較小。因此，開(kāi)發(fā)具有溶栓功效、適合長(zhǎng)期口服使用、價(jià)格低廉，且安全無(wú)毒副作用的溶栓藥物將極大提高心腦血管病人的存活率和治愈率。納豆激酶是日本科學(xué)家在1987年首次從大豆發(fā)酵食物納豆中分離得到的第一個(gè)枯草桿菌纖溶酶。大量研究表明，納豆激酶與血栓中的交聯(lián)纖維蛋白具有極高的親和性，能夠直接特異性地降解纖維蛋白，還可以通過(guò)其它途徑達(dá)到間接溶栓的效果。此外，更重要的一點(diǎn)是，該酶具有非常好的安全性，基本不會(huì)引起毒副作用。然而，不管是枯草芽胞桿菌固體發(fā)酵還是液體發(fā)酵，得到的纖溶酶含量均不高，且蛋白成分復(fù)雜，純化成本極其高昂。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種基于重組枯草桿菌纖溶酶的凍干粉針劑及其制備工藝，該qk凍干粉針劑，能夠直接特異性地降解纖維蛋白，還可以通過(guò)其它途徑達(dá)到間接溶栓的效果，安全且基本不會(huì)引起毒副作用。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)上述目的：一種基于重組枯草桿菌纖溶酶的凍干粉針劑，其特征在于：所述凍干粉針劑包括重組枯草桿菌纖溶酶和賦形劑。進(jìn)一步，所述賦形劑為甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、麥芽糖或甘氨酸的一種。進(jìn)一步，所述賦形劑為甘露醇，添加濃度為0.5-2％。進(jìn)一步，所述甘露醇的添加濃度為：1％。一種基于重組枯草桿菌纖溶酶凍干粉針劑的制備工藝，所述制備工藝包為：向重組枯草桿菌纖溶酶原液中加入處方量的甘露醇，攪拌溶解后過(guò)濾，分裝，凍干。優(yōu)選地，所述凍干過(guò)程包括：先進(jìn)行預(yù)凍，在一定溫度下保持?jǐn)?shù)小時(shí)；然后，每升溫5℃，再保持一定時(shí)間；最后，升溫至預(yù)定溫度并保溫。本發(fā)明的有益效果是：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的重組枯草桿菌纖溶酶qk凍干粉針劑成品率高且外觀疏松均勻，安全穩(wěn)定；此外，本發(fā)明提供的制備工藝簡(jiǎn)單，易行，適合工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。一種基于重組枯草桿菌纖溶酶的凍干粉針劑，所述凍干粉針劑包括重組枯草桿菌纖溶酶和賦形劑。所述賦形劑為甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、麥芽糖或甘氨酸的一種。所述賦形劑為甘露醇，添加濃度為0.5-2％。優(yōu)選甘露醇的添加濃度為：1％。一種基于重組枯草桿菌纖溶酶凍干粉針劑的制備工藝，所述制備工藝包括：1)向重組枯草桿菌纖溶酶qk原液中加入處方量的甘露醇，充分?jǐn)嚢枞芙夂笥?.22μm的微孔濾膜過(guò)濾；2)溶液分裝于10ml規(guī)格的西林瓶中，每瓶的裝樣量為3ml；3)將灌裝好的產(chǎn)品進(jìn)行凍干，壓塞即得所述的重組枯草桿菌纖溶酶qk凍干粉針劑，其中，所述凍干過(guò)程如下：先將灌裝好的產(chǎn)品進(jìn)行預(yù)凍，-35℃保持3小時(shí)；然后每升溫5℃保持1.5小時(shí)；最后升溫至30℃并保溫3小時(shí)。實(shí)施例一：本實(shí)施例是基于從上千株菌種中篩選得到一株高表達(dá)纖溶酶的枯草芽胞桿菌bacillussubtilisqk，表達(dá)分泌的纖溶酶命名為枯草桿菌纖溶酶qk；通過(guò)基因工程技術(shù)進(jìn)行qk基因優(yōu)化，構(gòu)建表達(dá)載體，并在畢赤酵母中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)，再經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單、高效的分離純化工藝可得到純度高于98％的重組枯草桿菌纖溶酶qk。重組枯草桿菌纖溶酶qk原液1000ml處方一23456纖溶酶qk原液1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml甘露醇5g10g20g50g80g處方二7891011纖溶酶qk原液1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml山梨醇5g10g20g50g80g處方三1213141516纖溶酶qk原液1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml乳糖5g10g20g50g80g處方四1718192021纖溶酶qk原液1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml蔗糖5g10g20g50g80g處方五2223242526纖溶酶qk原液1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml麥芽糖5g10g20g50g80g處方六2728293031纖溶酶qk原液1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml甘氨酸5g10g20g50g80g其制備工藝如下：(1)將按照處方一至處方六中配置的混合液分別用0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾；(2)過(guò)濾后的溶液平均的分裝于1000個(gè)10ml規(guī)格的西林瓶中；(3)冷凍干燥：先將灌裝好的產(chǎn)品進(jìn)行預(yù)凍，-35℃保持3小時(shí)；然后每升溫5℃保持1.5小時(shí)；最后升溫至30℃并保溫3小時(shí)。將每個(gè)處方所得產(chǎn)品進(jìn)行酶活測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。處方一23456酶活(iu/ml)21414.6425190.8725190.8719717.7215211.42處方二7891011酶活(iu/ml)23257.619717.7219717.7218102.7416620.04處方三1213141516酶活(iu/ml)19717.7221414.6419717.7219717.7216620.04處方四1718192021酶活(iu/ml)21414.6419717.7221414.6416620.0416620.04處方五2223242526酶活(iu/ml)19717.7219717.7219717.7216620.0418102.74處方六2728293031酶活(iu/ml)21414.6423257.619717.7218102.7415211.42由上表可知，處方二、處方三和處方四所得產(chǎn)品酶活相對(duì)最高，故本發(fā)明所提供的重組枯草桿菌纖溶酶qk凍干粉針劑所添加的賦形劑優(yōu)選甘露醇，且最佳添加濃度為：0.5％-2％；在保障酶活同時(shí)，為降低成本，減少毒副作用，甘露醇的添加濃度優(yōu)選1％。以上所舉實(shí)施例為本發(fā)明的較佳實(shí)施方式，僅用來(lái)方便說(shuō)明本發(fā)明，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，任何所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
中具有通常知識(shí)者，若在不脫離本發(fā)明所提技術(shù)特征的范圍內(nèi)，利用本發(fā)明所揭示技術(shù)內(nèi)容所做出局部更動(dòng)或修飾的等效實(shí)施例，并且未脫離本發(fā)明的技術(shù)特征內(nèi)容，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)特征的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12