本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種可用于心力衰竭、心肌炎、病竇綜合征、冠心病及心肌病，還可用于心律失常的輔助治療的藥物，特別是涉及一種注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，及其質(zhì)控方法以及它們的制備方法，該注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物藥物組合物具有良好的藥學(xué)性質(zhì)。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物是一種有效的可用于心力衰竭、心肌炎、病竇綜合征、冠心病及心肌病，還可用于心律失常的輔助治療的藥物。據(jù)信本發(fā)明的注射用環(huán)磷腺苷葡胺粉針劑通?？捎糜谝韵录膊。盒难芗膊?冠心病、風(fēng)心病、心肌炎、心律失常等)；腦血管疾病(腦缺血、腦血栓及其后遺癥)；腦血管意外；腫瘤病人；手術(shù)病人(各種骨科手術(shù)、顱腦手術(shù)、器官移植、麻醉前常規(guī)用藥等)；糖尿病、腎病等各種慢性消耗性疾?。桓鞣N肝炎；哮喘，銀屑病，老年慢性支氣管炎。
環(huán)磷腺苷(adenosinecyclophosphate)的化學(xué)名為6-氨基-9-β-d-呋喃核糖基-9h-嘌呤-4’,5’-環(huán)磷酸氫酯，分子式為c10h12n5o6p，分子量為329.21，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
由于環(huán)磷腺苷微溶于水，在環(huán)磷腺苷中增加葡甲胺(meglumine，1-脫氧-1-(甲氨基)-d-山梨醇，分子式c7h17no5，分子量195.22)可以增加其溶解性，同時(shí)葡甲胺對(duì)磷酸二酯酶有一定的抑制作用，使之對(duì)環(huán)磷腺苷的分解作用降低，故環(huán)磷腺苷葡胺的正性肌力作用較相當(dāng)量的環(huán)磷腺苷更強(qiáng)，因此臨床常把環(huán)磷腺苷與葡甲胺結(jié)合成環(huán)磷腺苷葡胺使用，藥理作用環(huán)磷腺苷葡胺為非洋地黃類強(qiáng)心劑，具有正性肌力作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌泵血功能，有擴(kuò)張血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌細(xì)胞代謝，保護(hù)缺血、缺氧的心肌；能改善竇房結(jié)p細(xì)胞功能?，F(xiàn)有技術(shù)已有注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑有不溶性微粒不穩(wěn)定，遇光易降解等缺點(diǎn)，穩(wěn)定性心較差。
環(huán)磷腺苷是一種核苷酸類藥物，為非洋地黃類強(qiáng)心藥。環(huán)磷腺苷(camp)是細(xì)胞內(nèi)參與調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝和生物學(xué)功能的重要物質(zhì)，是生命信息傳遞的“第二信使”。作為一個(gè)心血管藥物，環(huán)磷腺苷具有穿透性好、藥理作用溫和、穩(wěn)定性高、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)。在體內(nèi)環(huán)磷腺苷可以促進(jìn)心肌細(xì)胞的存活，增強(qiáng)心肌細(xì)胞抗損傷、抗缺血和缺氧能力；促進(jìn)鈣離子向心肌細(xì)胞內(nèi)流動(dòng)，增強(qiáng)磷酸化作用，促進(jìn)興奮-收縮偶聯(lián)，提高心肌細(xì)胞收縮力，增加心輸出量；同時(shí)還擴(kuò)張外周血管，降低心臟射血阻抗，減輕心臟前后負(fù)荷，增加心排出量，改善心功能。從而對(duì)心臟起到營養(yǎng)心肌、正性肌力、舒張血管、抗血小板凝聚和抗心律失常的作用。在臨床上主要用于治療心功能不全、心絞痛和心肌梗死。尤其是對(duì)洋對(duì)黃類強(qiáng)心藥中毒或不敏感的患者。
進(jìn)入細(xì)胞的環(huán)磷腺苷在發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)后被磷酸二酯酶降解成5-腺苷-5′-磷酸(5-amp)失去活性，進(jìn)而被分解成腺苷和磷酸。環(huán)磷腺苷在臨床上用于心功能不全、心絞痛和心肌梗死；對(duì)洋地黃類強(qiáng)心藥中毒或不敏感的患者；治療心律失常的輔助藥物。
由于環(huán)磷腺苷的溶解性不足，人們將其制成與葡甲胺以克分子比1:1的方式混合制成注射劑以增加環(huán)磷腺苷的溶解度。盡管制備環(huán)磷腺苷葡胺制劑例如其粉針劑或水針劑時(shí)是以環(huán)磷腺苷和葡甲胺兩種物料以克分子比1:1的比例直接投料制備得到的，但是人們偶有將其稱為一種復(fù)鹽的說法，例如據(jù)說形成以下結(jié)構(gòu)的化合物：
現(xiàn)有技術(shù)中有諸多有關(guān)環(huán)磷腺苷技術(shù)例如其制劑技術(shù)例如其粉針劑或水針劑的技術(shù)報(bào)道。
cn101780099a(201010108233.5，鄧學(xué)峰)涉及的環(huán)磷腺苷葡胺組合藥物或是環(huán)磷腺苷組合藥物，由如下重量份數(shù)的藥效成分制成:環(huán)磷腺苷葡胺或是環(huán)磷腺苷20-60，賴氨酸阿司匹林100-200，還原型谷胱甘肽與維生素c重量比1∶10-15混合物200-300。發(fā)明了制備方法。本發(fā)明的環(huán)磷腺苷葡胺組合藥物或是環(huán)磷腺苷組合藥物，消除了現(xiàn)有技術(shù)制備的環(huán)磷腺苷葡胺或環(huán)磷腺苷的發(fā)熱、皮疹、疼痛的不良反應(yīng)。
cn103613626a(201310619163.3，美林)涉及一種環(huán)磷腺苷化合物及其環(huán)磷腺苷葡胺藥物組合物。本發(fā)明環(huán)磷腺苷化合物為晶體，采用x-射線粉末衍射測(cè)定，其圖譜中特征峰在2θ±0.2°為5.8°、6.9°、7.6°、11.3°、16.5°、19.2°、21.7°、22.6°、24.0°、25.9°、30.1°、31.2°、33.4°顯示。本發(fā)明還提供有效成分為本發(fā)明所述的環(huán)磷腺苷化合物的注射液和環(huán)磷腺苷葡胺組合物注射液及其環(huán)磷腺苷葡胺葡萄糖組合物注射液。本發(fā)明環(huán)磷腺苷注射液相比現(xiàn)有技術(shù)穩(wěn)定性有顯著提高，處方中添加l-蘋果酸、酒石酸鈉可以進(jìn)一步提高穩(wěn)定性。
cn102988305a(201210303740.3，姚云)涉及一種含有環(huán)磷腺苷葡胺化合物的藥物組合物，特別涉及一種環(huán)磷腺苷葡胺的凍干粉針制劑及其制備方法，每1000支注射劑，由以下配比的組分制成：環(huán)磷腺苷葡胺20g；甘露醇100-200g；edta鈣1-3g；維生素c1-2g，摩爾比為1：4的檸檬酸氫二鈉和檸檬酸三鈉緩沖液2000ml。
cn1579413a(200410013546.7，江衛(wèi)世)公開了注射用環(huán)磷腺苷葡胺及其制備工藝。在環(huán)磷腺苷葡胺溶液中，隨著保存時(shí)間的延長，環(huán)磷腺苷會(huì)逐漸析出，使藥液發(fā)生變質(zhì)、渾濁，給病人應(yīng)用會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，從而影響藥品的療效和用藥的安全性。注射用環(huán)磷腺苷葡胺，其組成包括:環(huán)磷腺苷，所述的環(huán)磷腺苷與葡甲胺及賦形劑制成凍干粉針劑，其重量份數(shù)為環(huán)磷腺苷1.7～63、葡甲胺1.0～37、賦形劑0.675～90，所述的環(huán)磷腺苷與所述的葡甲胺的重量份數(shù)比為1.7∶1，ph值為3.5-9.0，性狀為白色或類白色凍干塊狀物或粉末，與三氯化鐵試液反應(yīng)初顯棕紅色沉淀，隨即溶解成棕紅色溶液。本產(chǎn)品用于治療心力衰竭、心肌炎、病竇綜合癥、冠心病及心肌病，也可用于心律失常的輔助治療。
cn1459288a(03124559.5，趙琛)涉及一種環(huán)磷腺苷葡胺大輸液制劑及其制備方法以及該大輸液制劑中環(huán)磷腺苷葡胺含量測(cè)定方法。環(huán)磷腺苷葡胺的等滲大輸液制劑，其配方為100ml制劑中含主藥環(huán)磷腺苷葡胺54-66mg，等滲介質(zhì)葡萄糖4.5-5.5g或氯化鈉0.85-0.95g。本發(fā)明確定了環(huán)磷腺苷葡胺大輸液制劑穩(wěn)定的關(guān)鍵條件ph值范圍及其大輸液制劑制備方法、并解決了環(huán)磷腺苷葡胺含量測(cè)定方法，有利于對(duì)環(huán)磷腺苷葡胺大輸液制劑生產(chǎn)質(zhì)量的控制，從而制定合適的生產(chǎn)方法，使環(huán)磷腺苷葡胺大輸液制劑得以工業(yè)化大批量生產(chǎn)成為可能。使用本制劑，可避免從小針抽取藥液注入葡萄糖或氯化鈉大輸液的中間環(huán)節(jié)，杜絕了用藥過程中的交叉感染和污染，使用藥更為安全、方便。本發(fā)明可制成多種規(guī)格，供醫(yī)護(hù)人員酌情選用。
cn101721357a(200810230677.9，華中)公開了環(huán)磷腺苷葡胺大容量注射劑的一種過濾方法。本發(fā)明將環(huán)磷腺苷葡胺大容量注射液的配制液首先經(jīng)預(yù)處理，然后再經(jīng)超濾技術(shù)處理，確保了大分子無效成分被完全去除，制成的注射劑澄明度高、有關(guān)物質(zhì)小、熱原合格、穩(wěn)定性好。
cn1923180a(200610116409.5，萬邦)及一種注射用環(huán)磷腺苷葡胺的制備工藝，屬化學(xué)制藥。一種注射用環(huán)磷腺苷葡胺的制備工藝:取6％環(huán)磷腺苷葡胺溶液并在其溶液中加入賦形劑無菌粉，攪拌溶解，加入注射用水稀釋，調(diào)ph值在5.5～7.0范圍內(nèi)，冷卻，當(dāng)品溫達(dá)到-35℃至1-2小時(shí)后，冷凝，當(dāng)冷凝器溫度降至-45℃時(shí)，抽真空至壓力為-1.5×10-2kpa，以3℃/小時(shí)速度升溫，當(dāng)品溫達(dá)室溫或30℃以上，保溫2小時(shí)，整個(gè)凍干過程需24-26小時(shí)。本發(fā)明的注射用環(huán)磷腺苷葡胺，是采用現(xiàn)代制劑技術(shù)制成的無菌凍干粉針劑，可常溫運(yùn)輸、保存，提高了該產(chǎn)品的穩(wěn)定性和安全性。本產(chǎn)品的制備工藝簡單，科學(xué)合理，容易操作。
cn101455631a(200910060427.x，德康)涉及一種注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑及其制備工藝，它是將枸櫞酸放入磁力攪拌罐中，加配制量50％注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓賹h(huán)磷腺苷、葡甲胺加入上述溶液中，攪拌使溶解，并按體積加入0.02％針用活性炭，攪拌30分鐘，粗濾除炭，制得環(huán)磷腺苷葡胺溶液備用，補(bǔ)加注射用水至全量，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至6.0-6.5，制成無色的澄明注射液。本發(fā)明不但具有作用直接、快速等優(yōu)點(diǎn)，而且本品不良反應(yīng)少，可常溫運(yùn)輸、保存，因而提高了該產(chǎn)品的穩(wěn)定性和安全性。
cn102283804a(201010214356.7，方明)涉及一種注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑及其制備方法。其制備工藝是取適量注射用水，加入氯化鈉、環(huán)磷腺苷、葡甲胺，攪拌使完全溶解，按體積加入0.05～0.2％(w/v)針用活性炭，攪拌15～30分鐘，過濾除炭，補(bǔ)加注射用水至近全量，用磷酸鹽緩沖液調(diào)ph值至6.0～6.5之間，補(bǔ)加注射用水至全量，檢測(cè)半成品合格后，過濾，灌封(全過程充氮?dú)?，滅菌，燈檢、包裝即得。其優(yōu)點(diǎn)在于:選用了適宜的溶媒及附加劑，改善了環(huán)磷腺苷葡胺的溶解性及穩(wěn)定性，采用最終滅菌的制備方法，有效地保證了藥品的無菌保證水平。具有組方、工藝簡單，生產(chǎn)成本低，藥物穩(wěn)定性、安全性強(qiáng)等特點(diǎn)。
cn102600070a(201110435919.x，德康)涉及一種化學(xué)藥品的制備方法，具體地說是一種環(huán)磷腺苷葡胺組合物注射液及其制備。其重量份數(shù)為：環(huán)磷腺苷5-15份、葡甲胺3-10份、枸櫞酸2.0-2.2份、氫氧化鈉0.6-0.8份、氯化鈉2-4份、注射用水2-5份；制備步驟如下：取枸櫞酸，加注射用水?dāng)嚢枞芙夂螅脷溲趸c調(diào)節(jié)ph值至5.9～6.5形成緩沖溶液，再加入氯化鈉和助溶劑攪拌溶解，加入注射用水，邊攪拌邊加入環(huán)磷腺苷、葡甲胺，待完全溶解后，加入活性炭攪拌，經(jīng)過濾、回流制成無色的澄明液體。本發(fā)明注射液澄明度好，穩(wěn)定性好，用藥安全。
cn102796156a(201210314213.2，寧輝)涉及一種環(huán)磷腺苷二葡甲胺化合物及其制備方法，提供由1分子環(huán)磷腺苷與2分子的葡甲胺形成的化合物、其制備方法，以及包含它的藥物組合物。所述化合物水溶性、穩(wěn)定性均優(yōu)于現(xiàn)有化合物。
cn102258531a(201110102704.6，寧輝)提供了一種含有環(huán)磷腺苷與葡甲胺的藥物組合物及其制備方法，其包含作為活性成分的環(huán)磷腺苷、作為穩(wěn)定劑的葡甲胺和作為骨架的甘露醇，以一定配比存在。本發(fā)明組合物使環(huán)磷腺苷的降解最小化，從而保護(hù)了藥物穩(wěn)定性、有效性和安全性。
cn101455631a(200910060427.x，德康)涉及一種注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑及其制備工藝，它是將枸櫞酸放入磁力攪拌罐中，加配制量50％注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，再將環(huán)磷腺苷、葡甲胺加入上述溶液中，攪拌使溶解，并按體積加入0.02％針用活性炭，攪拌30分鐘，粗濾除炭，制得環(huán)磷腺苷葡胺溶液備用，補(bǔ)加注射用水至全量，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至6.0-6.5，制成無色的澄明注射液。本發(fā)明不但具有作用直接、快速等優(yōu)點(diǎn)，而且本品不良反應(yīng)少，可常溫運(yùn)輸、保存，因而提高了該產(chǎn)品的穩(wěn)定性和安全性。
然而，現(xiàn)有的環(huán)磷腺苷制劑例如其冷凍干燥粉劑仍然存在有待克服的技術(shù)問題。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員仍然期待有新的方法來制備具有良好藥學(xué)性能的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的在于提供一種具有良好藥學(xué)性能的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物。本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，具有本發(fā)明組合物特征的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物能夠有益地實(shí)現(xiàn)上述目的。本發(fā)明因此而得以完成。
為此，本發(fā)明第一方面提供了一種注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中包含：環(huán)磷腺苷、甘露醇、和酸堿調(diào)節(jié)劑。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含的物料以環(huán)磷腺苷每10重量份計(jì)，甘露醇的量為10～50重量份；例如甘露醇的量為10～25重量份。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其組合。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是磷酸和/或磷酸氫二鈉。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是磷酸和/或磷酸氫二鈉，其用量是，使得該藥物組合物在加水溶解并稀釋制成每1ml中含環(huán)磷腺苷10mg的溶液時(shí)，該溶液的ph值為5.5～7.0，例如ph值為6.0～6.5。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中還包括氯化鈉。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中還包括氯化鈉，以環(huán)磷腺苷每10重量份計(jì)，氯化鈉的量為0.5～3mg，例如1～2mg。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是冷凍干燥粉針劑。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其在冷凍干燥之前的溶液除包括環(huán)磷腺苷、甘露醇以及任選的氯化鈉和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其在冷凍干燥之前的溶液除包括環(huán)磷腺苷、甘露醇以及任選的氯化鈉和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水，所述溶液的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其用注射用水復(fù)溶到基本上與冷凍干燥前溶液相同的體積，所得溶液中的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是冷凍干燥粉針劑，其每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～100mg，例如每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～75mg，例如每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～50mg。
眾所周知，經(jīng)低溫冷凍-真空干燥而獲得的冷凍干燥粉針劑(通常簡稱為凍干粉針劑或凍干粉針)，其是首先將各物料用溶劑溶解(通常而言是用水溶解)，配制成一溶液，然后使該溶液進(jìn)行低溫冷凍，再進(jìn)行抽真空、升華、干燥而獲得的一種基本無水(通常而言水含量低于8％，特別是通常低于5％，特別是通常低于3％)的粉末狀物或塊狀物。因此，該固體凍干物的酸堿度通常通過配制過程調(diào)節(jié)溶液的ph值來控制；或者可以通過處方調(diào)整以使獲得的固體凍干物在規(guī)定的溶解/稀釋程度下控制該溶解/稀釋液的ph值來控制(此稱為控制固體凍干物的酸堿度)；后一方式通常更為普遍使用，例如藥典中所載的諸多凍干粉針劑均以此方式控制制品的酸堿度，而這種方式控制產(chǎn)品的酸堿度通常可以不具體規(guī)定酸堿調(diào)節(jié)劑的處方量，而僅規(guī)定終產(chǎn)品的酸堿度即可。同樣適用于本發(fā)明的是，根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述的藥物組合物，其中所述任選的酸堿調(diào)節(jié)劑的量是，使所述凍干粉針劑用注射用水溶解成含活性成分10mg/ml濃度的溶液時(shí)該溶液的ph值在5.5～7.0范圍內(nèi)的量，例如該溶液的ph值在6.0～6.5范圍內(nèi)的量。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其中所述氯化鈉是預(yù)先與環(huán)磷腺苷一起配制成溶液并在ph值低于4.5(例如ph值3.5～4.0)的條件下用活性炭吸附處理的。已經(jīng)出人意料的發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用適量氯化鈉預(yù)先對(duì)環(huán)磷腺苷進(jìn)行特定處理后，制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物具有優(yōu)異的性質(zhì)例如化學(xué)穩(wěn)定性。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，其是照包括如下步驟的方法制備得到的：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.05～0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.05～0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中步驟(3)所述補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，是指所得藥液中的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
進(jìn)一步的，本發(fā)明第二方面提供了制備注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物的方法，所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中包含：環(huán)磷腺苷、甘露醇、氯化鈉和酸堿調(diào)節(jié)劑，該方法包括如下步驟：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.05～0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.05～0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物為冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中包含的物料以環(huán)磷腺苷每10重量份計(jì)，甘露醇的量為10～50重量份；例如甘露醇的量為10～25重量份。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其組合。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是磷酸和/或磷酸氫二鈉。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是磷酸和/或磷酸氫二鈉，其用量是，使得該藥物組合物在加水溶解并稀釋制成每1ml中含環(huán)磷腺苷10mg的溶液時(shí)，該溶液的ph值為5.5～7.0，例如ph值為6.0～6.5。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物，以環(huán)磷腺苷每10重量份計(jì)，氯化鈉的量為0.5～3mg，例如1～2mg。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物是冷凍干燥粉針劑。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物在冷凍干燥之前的溶液除包括環(huán)磷腺苷、甘露醇以及任選的氯化鈉和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物在冷凍干燥之前的溶液除包括環(huán)磷腺苷、甘露醇以及任選的氯化鈉和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水，所述溶液的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物用注射用水復(fù)溶到基本上與冷凍干燥前溶液相同的體積，所得溶液中的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物是冷凍干燥粉針劑，其每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～100mg，例如每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～75mg，例如每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～50mg。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中步驟(3)所述補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，是指所得藥液中的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
進(jìn)一步的，本發(fā)明第三方面提供了對(duì)注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法，所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中包含：環(huán)磷腺苷、甘露醇、和酸堿調(diào)節(jié)劑，該質(zhì)量控制方法包括使用高效液相色譜法測(cè)定注射劑中的環(huán)磷腺苷含量和/或有關(guān)物質(zhì)量。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物為冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中包含的物料以環(huán)磷腺苷每10重量份計(jì)，甘露醇的量為10～50重量份；例如甘露醇的量為10～25重量份。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其組合。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是磷酸和/或磷酸氫二鈉。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是磷酸和/或磷酸氫二鈉，其用量是，使得該藥物組合物在加水溶解并稀釋制成每1ml中含環(huán)磷腺苷10mg的溶液時(shí)，該溶液的ph值為5.5～7.0，例如ph值為6.0～6.5。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中還包括氯化鈉。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中還包括氯化鈉，以環(huán)磷腺苷每10重量份計(jì)，氯化鈉的量為0.5～3mg，例如1～2mg。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物是冷凍干燥粉針劑。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物在冷凍干燥之前的溶液除包括環(huán)磷腺苷、甘露醇以及任選的氯化鈉和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物在冷凍干燥之前的溶液除包括環(huán)磷腺苷、甘露醇以及任選的氯化鈉和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水，所述溶液的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物用注射用水復(fù)溶到基本上與冷凍干燥前溶液相同的體積，所得溶液中的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物是冷凍干燥粉針劑，其每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～100mg，例如每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～75mg，例如每瓶中包括的環(huán)磷腺苷重量為10～50mg。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物中所述氯化鈉是預(yù)先與環(huán)磷腺苷一起配制成溶液并在ph值低于4.5(例如ph值3.5～4.0)的條件下用活性炭吸附處理的。已經(jīng)出人意料的發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用適量氯化鈉預(yù)先對(duì)環(huán)磷腺苷進(jìn)行特定處理后，制得的注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物具有優(yōu)異的性質(zhì)例如化學(xué)穩(wěn)定性。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物是照包括如下步驟的方法制備得到的：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.05～0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.05～0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22μm微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中步驟(3)所述補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，是指所得藥液中的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述高效液相色譜法對(duì)環(huán)磷腺苷進(jìn)行含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的步驟包括如下操作：
(1)中國藥典2015年版四部第59所第0512節(jié)所載的高效液相色譜法中的規(guī)范進(jìn)行測(cè)定；
(2)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(例如，色譜柱的規(guī)格為250mm×4.6mm，5μm)，以0.01磷酸溶液-乙腈以體積比95：5的混合液為流動(dòng)相，流速1ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長為259nm；取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液測(cè)定，理論板數(shù)按環(huán)磷腺苷峰計(jì)應(yīng)不低于5000，環(huán)磷腺苷與腺苷之間的分離度應(yīng)大于2；
(3)溶液制備：
取注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物適量，加流動(dòng)相稀釋，制成每1ml溶液中含有環(huán)磷腺苷1mg的溶液，過濾，作為有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液(即，1000μg/ml)；
精密量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋刻度，搖勻，制成含環(huán)磷腺苷濃度為10μg/ml的溶液，作為有關(guān)物質(zhì)檢查用對(duì)照溶液(即，10μg/ml)；
精密量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液1ml置于20ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋刻度，搖勻，制成含環(huán)磷腺苷濃度為50μg/ml的溶液，作為含量測(cè)定用供試品溶液(即，50μg/ml)；
精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成濃度為50μg/ml的溶液，作為環(huán)磷腺苷含量測(cè)定用對(duì)照品溶液(即，50μg/ml)；
精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品、腺苷對(duì)照品各適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成每1ml溶液中含有環(huán)磷腺苷1000μg、腺苷10μg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液(即，1000μg/ml+10μg/ml)；
(4)測(cè)定：
精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算理論板數(shù)和環(huán)磷腺苷與腺苷之間的分離度峰之間的分離度，并確定環(huán)磷腺苷與腺苷二者的保留時(shí)間；
分別精密量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液和有關(guān)物質(zhì)檢查用對(duì)照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至環(huán)磷腺苷保留時(shí)間的3倍，讀取供試品溶液色譜圖中主成峰峰面積和各雜質(zhì)的峰面積，當(dāng)檢測(cè)到存在雜技時(shí)，以有關(guān)物質(zhì)檢查用對(duì)照溶液色譜圖中主成份峰面積為1.0％，計(jì)算供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)相對(duì)于環(huán)磷腺苷的百分含量，即得到供試品中的單一雜質(zhì)的含量(即，例如，如果對(duì)照溶液主峰面積為100，供試品溶液色譜圖中某雜質(zhì)的峰面積為115，則該雜質(zhì)相對(duì)于環(huán)磷腺苷的百分含量，簡稱該雜質(zhì)含量為1.15％；供試品溶液色譜圖中某雜質(zhì)的峰面積為87，則該雜質(zhì)含量為0.87％)；
分別精密量取含量測(cè)定用供試品溶液和含量測(cè)定用對(duì)照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至環(huán)磷腺苷保留時(shí)間的2倍，得到兩個(gè)色譜圖，分別讀取兩色譜圖中主成峰峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中環(huán)磷腺苷的含量。
上述方法與何曉艷等的文獻(xiàn)(何曉艷，等，hplc法測(cè)定注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑中環(huán)磷腺苷的含量，中國藥師，2011，14(5):682)公開的一種測(cè)定環(huán)磷腺苷制劑中活性成分含量的方法基本相同，本發(fā)明經(jīng)用上述方法測(cè)定，環(huán)磷腺苷理論板數(shù)75000，環(huán)磷腺苷與腺苷的分離度約2.73，環(huán)磷腺苷拖尾因子1.008，環(huán)磷腺苷保留時(shí)間約6.69，腺苷相對(duì)于環(huán)磷腺苷的相對(duì)保留時(shí)間rrt＝0.88，這些結(jié)果與何曉艷文獻(xiàn)結(jié)果基本一致。然而，在環(huán)磷腺苷制劑中，使用上述方法測(cè)定，在相對(duì)保留時(shí)間約rrt＝1.08處存在一個(gè)明顯的未知雜質(zhì)，此雜質(zhì)與環(huán)磷腺苷峰之間的分離度約為1.34，分離度不滿意，影響到環(huán)磷腺苷和該未知雜質(zhì)峰面積的計(jì)算。因此，上述hplc法仍然是存在不足的。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述高效液相色譜法的流動(dòng)相中還添加0.2～0.5w/v％的甲酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述流動(dòng)相中還添加0.3w/v％的甲酸。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在流動(dòng)相中添加0.3w/v％的甲酸時(shí)，相對(duì)于未添加甲酸的情形，理論板數(shù)、環(huán)磷腺苷與腺苷的分離度、環(huán)磷腺苷拖尾因子、環(huán)磷腺苷保留時(shí)間、腺苷rrt這些參數(shù)基本上未變化，但是未知雜質(zhì)保留時(shí)間后延至rrt約為1.17(其在本發(fā)明中可稱為雜質(zhì)rrt1.17)且與環(huán)磷腺苷之間的分離度達(dá)到2.42，完全滿足測(cè)定主成分和該未知雜質(zhì)的要求。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將甲酸替換為乙酸這種類似的有機(jī)酸時(shí)，卻完全達(dá)不到上述分離效果，即未知雜質(zhì)rrt約為1.08且與環(huán)磷腺苷之間的分離度為1.39，其余參數(shù)基本相同。
另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷腺苷制劑中上述雜質(zhì)rrt1.17在原料藥和初始制成的制劑中基本不存在(或者含量極低)，而是在長期貯藏過程中漸漸增加的。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在制備本發(fā)明環(huán)磷腺苷制劑時(shí)向制劑中添加少量的氯化鈉并使該氯化鈉以特殊的操作方式處理來制備該制劑時(shí)，所得制劑在長期貯藏過程中雜質(zhì)rrt1.17的增加速度極低，這是現(xiàn)有技術(shù)根本無法預(yù)期的。
在本發(fā)明上述制備方法的步驟中，雖然其描述的具體步驟在某些細(xì)節(jié)上或者語言描述上與下文具體實(shí)施方式部分的制備例中所描述的步驟有所區(qū)別，然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明全文的詳細(xì)公開完全可以概括出以上所述方法步驟。
本發(fā)明的任一方面的任一實(shí)施方案，可以與其它實(shí)施方案進(jìn)行組合，只要它們不會(huì)出現(xiàn)矛盾。此外，在本發(fā)明任一方面的任一實(shí)施方案中，任一技術(shù)特征可以適用于其它實(shí)施方案中的該技術(shù)特征，只要它們不會(huì)出現(xiàn)矛盾。下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn)，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文，并且如果這些文獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí)，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對(duì)這些術(shù)語和短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。
環(huán)磷腺苷為非洋地黃類強(qiáng)心劑，具有正改正肌力作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌泵血功能，有擴(kuò)張血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌細(xì)胞代謝，保護(hù)缺血、缺氧的心肌；能夠改善竇房結(jié)p細(xì)胞功能。環(huán)磷腺苷進(jìn)入人體，在血液中的半衰期為60～150min，由于其有較好的親水性，尤其是脂溶性較強(qiáng)，較易透過脂溶性細(xì)胞膜進(jìn)入心肌細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，經(jīng)磷酸二酯本科分解形成5-amp，再經(jīng)5-amp本科降解為腺苷和磷酸，環(huán)磷腺苷在用藥后10～20min后開始作用，顯效高峰時(shí)間在1～2小時(shí)，藥效消失時(shí)間在6～8小時(shí)。
本發(fā)明環(huán)磷腺苷制劑的主要成份為環(huán)磷腺苷，是非洋地黃類強(qiáng)心劑，具有正性肌力作用，增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌泵血功能，有擴(kuò)張血管作用，可降低心肌耗氧量，改善心肌細(xì)胞代謝，保護(hù)缺血、缺氧的心肌細(xì)胞，能改善竇房結(jié)的p細(xì)胞功能，臨床上已用于治療心力衰竭、冠心病、腦梗死及其它疾病。
本發(fā)明環(huán)磷腺苷制劑可用于治療心血管疾病。
對(duì)充血性心力衰竭的治療作用方面。充血性心力衰竭常見于冠心病、擴(kuò)張型心肌病、風(fēng)濕性心臟病等，應(yīng)用環(huán)磷腺苷注射制劑治療充血性心力衰竭48例。治療組48例中男性28例，女性20例，心功能ⅱ—ⅲ級(jí)30例，ⅳ級(jí)18例，對(duì)照組40例，男性24例，女性16例，心功能ⅱ—ⅲ級(jí)28例，ⅳ級(jí)16例。性別年齡及心功能分級(jí)比較為無顯著性意義(p>0.05)。治療組用環(huán)磷腺苷注射制劑90毫克加入3％葡萄糖或0.9％生理鹽水250毫升中，靜脈滴入，兩周為一療程，使用兩個(gè)療程。對(duì)照組僅給予強(qiáng)心利尿和腎素血管緊張轉(zhuǎn)換酶抑制劑治療。治療組：顯效17例(35.4％)，有效26例(54.18％)，無效5例(10.42)，對(duì)照組：顯效6例(15％)，有效23例(57.5％)，無效11例(27.5)，治療組總有效率89.58％，對(duì)照組72.5％，治療組總有效率明顯高于對(duì)照組。
結(jié)果顯示治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組，環(huán)磷腺苷注射制劑，能顯著改善沖血性心力衰竭患者的心肌舒縮功能，提高運(yùn)動(dòng)耐力，改善生活質(zhì)量。
運(yùn)用環(huán)磷腺苷注射制劑治療84例充血性心力衰竭，兩組均用強(qiáng)心，利尿，擴(kuò)血管治療，治療組加用環(huán)磷腺苷注射制劑60毫克至180毫克，加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，15天為一療程。治療組顯效31例(73.8％)，有效10例，(23.8)，無效1例(2.4％)有效19例(45.2％)，無效6例(14.3％)，總有效率36例(85.7％)。與對(duì)照組比較(p<0.01)。
結(jié)果顯示環(huán)磷腺苷注射制劑治療組癥狀緩解，心力衰竭改善程度顯著好于對(duì)照組。認(rèn)為環(huán)磷腺苷注射制劑能通過擴(kuò)張外周血管、減少心臟前后負(fù)荷，能明顯改善心力衰竭患者的癥狀體征，具有顯著療效。
運(yùn)用環(huán)磷腺苷注射制劑治療冠心病心力衰竭39例，治療組與對(duì)照組均使用強(qiáng)心、利尿擴(kuò)血管。治療組加用環(huán)磷腺苷注射制劑90毫克加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克，在90分鐘左右滴完，每天一次，14天為一個(gè)療程。治療組總有效率92.3％，對(duì)照組69.2％(p<0.05)。治療組用藥后癥狀明顯改善，左室功能明顯增強(qiáng)，每搏量，每分輸出量，左室射血分?jǐn)?shù)用藥后顯著性差異(p<0.05)，未見不良反應(yīng)。
對(duì)冠心病的治療作用方面。將冠心病58例分成兩組，治療組30例，使用環(huán)磷腺苷90毫克加入5％葡萄糖或生理鹽水中25毫克，靜脈滴入，每日一次，15天為一個(gè)療程。對(duì)照組28例用復(fù)方丹參注射制劑15毫克加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，15天為一個(gè)療程。兩組臨床治療比較，環(huán)磷腺苷注射制劑在改善心電圖、胸悶、心絞痛、心悸、氣促等癥狀顯效率明顯，用于復(fù)方丹參注射制劑組，改善心功能的總有效率也明顯用于對(duì)照組。
結(jié)果證實(shí)環(huán)磷腺苷注射制劑具有正性肌力作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌泵血功能，擴(kuò)張血管、降低心肌耗氧，改善心肌細(xì)胞代謝，保護(hù)缺血、缺氧的心肌，緩解冠心病的臨休癥狀優(yōu)于復(fù)方丹參注射制劑。
對(duì)肺心病的治療作用方面。使用環(huán)磷腺苷注射制劑治療肺心病45例，男性39例，女性6例，年齡65—70歲，病史5—25年。環(huán)磷腺苷注射制劑90毫克加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，10—15日為一個(gè)療程，用藥期間同時(shí)用其他擴(kuò)血管藥及強(qiáng)心劑利尿藥。臨床觀察顯示，肺心病給用環(huán)磷腺苷注射制劑治療后胸悶、心悸、氣促肝功能、腎功能、肺功能，心電圖顯效率在83％以上，總有效率95％以上。認(rèn)為該藥是治療肺心病，特別是伴心力衰竭的一線藥物，可擴(kuò)張血管，降低肺動(dòng)脈壓，增強(qiáng)心肌收縮力改善心、肝、肺、腎功能，提高生存質(zhì)量，延長生存期。是安全、有效、具有良好應(yīng)用前景的正性肌力藥物。
對(duì)擴(kuò)張型心肌病的治療作用方面。使用環(huán)磷腺苷注射制劑治療擴(kuò)張型心肌病44例，治療組使用環(huán)磷腺苷注射制劑靜脈滴入，加用強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管治療，對(duì)照組是用強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管等一般治療。治療前使用彩色心動(dòng)儀測(cè)左室舒縮功能，結(jié)果顯示，治療組左室舒張?jiān)缙谘鞣逯邓俣壬仙笫沂鎻埻砥谘鞣逯邓俣认陆?，心臟舒張功能明顯改變，每搏輸出量，射血分?jǐn)?shù)，心臟指數(shù)均有改善，心律失常發(fā)生率降低。
對(duì)高血壓病的治療作用方面。使用環(huán)磷腺苷注射制劑治療高血壓病48例，治療組用環(huán)磷腺苷注射制劑90毫克加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，連續(xù)用15日。對(duì)照組42例，僅口服拜新同(拜耳公可生產(chǎn))30毫克，每日一次，共用15日。治療組合對(duì)照組均使用其他降壓藥物及降脂藥，結(jié)果對(duì)照組降壓有效率91.67％。收縮壓舒張壓均有顯著下降，頭昏、眼花、頭痛等癥狀顯著，明顯優(yōu)于對(duì)照組，認(rèn)為環(huán)磷腺苷注射制劑是一種治療顯著，安全性好的降壓藥物。
環(huán)磷腺苷制劑可用于治療腦梗死。使用環(huán)磷腺苷注射制劑治療腦梗死32例。治療組32例，使用環(huán)磷腺苷注射制劑90毫克加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，連續(xù)用20日為一個(gè)療程。對(duì)照組32例，使用胞二磷膽鹽0.5加入5％葡萄糖或生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，連續(xù)用20日為一個(gè)療程。結(jié)果治療組總有效率93.8％，對(duì)照組81.3％，兩組治療有明顯差異。認(rèn)為環(huán)磷腺苷注射制劑可促進(jìn)腦內(nèi)細(xì)胞內(nèi)線粒體內(nèi)能量代謝，增加腦血流量，提高腦氧分壓，減輕腦水腫，縮小腦梗死范圍，促進(jìn)腦功能恢復(fù)。治療腦梗死療程短，神經(jīng)損害輕，取得了良好療效。
環(huán)磷腺苷制劑可用于治療慢性腎功能衰竭。使用環(huán)磷腺苷注射制劑治療慢性腎功能衰竭，治療組20例，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用環(huán)磷腺苷注射制劑90毫克生理鹽水250毫克中，靜脈滴入，每日一次，連續(xù)用15日為一個(gè)療程，一般1—2療程。對(duì)照組20例，僅給予常規(guī)治療。結(jié)果治療組顯效4例，(20％)，有效8例(40％)，穩(wěn)定3例，(15％)，無效3例(25％)。對(duì)照組顯效3例(15％)，有效5例(25％)，穩(wěn)定6例，(30％)，無效6例(30％)。通過觀察對(duì)腎功能不全失代償?shù)闹委熡休^好療效，對(duì)肌酐大于707umol/l的腎功能衰竭患者治療差。慢性腎功能衰竭失代期患者在采用傳統(tǒng)的透析治療同時(shí)配合環(huán)磷腺苷注射制劑治療，能取得延緩慢性腎功能衰竭發(fā)展的作用。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“賦形劑”亦可稱為輔料、填充劑等。本文所用的“藥學(xué)可接受的賦形劑”指的是可用于配制藥物的賦形劑，其對(duì)生物體基本上沒有不良影響，并且通常是生物體可耐受的。
冷凍干燥粉針劑的制備過程是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的制藥工藝，例如如下凍干曲線a和凍干曲線b所示的兩種示意性的凍干曲線：
在下文制備冷凍干燥粉針劑中的具體實(shí)例中，如未另外特別說明，所用的凍干曲線是凍干曲線a。
冷凍干燥粉針劑中的水分含量是一般在8％以下，優(yōu)選低于5％，更優(yōu)選低于3％。水分控制可通過適當(dāng)調(diào)整冷凍干燥程序來控制。該冷凍干燥粉針劑中的水分含量可根據(jù)許多已知方法來測(cè)定，例如干燥失重法。
在本發(fā)明中，為了在必要時(shí)調(diào)節(jié)藥液的ph值，可以向組合物中加入適當(dāng)?shù)膒h調(diào)節(jié)劑。盡管本發(fā)明人可用不具緩沖能力的強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液例如氫氧化鈉水溶液和鹽酸水溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，如果用這種不具緩沖能力的ph調(diào)節(jié)劑處理能滿足體系的ph要求，則具有緩沖能力的ph調(diào)節(jié)劑將更加能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明目的，因此這些緩沖劑不但能夠調(diào)節(jié)ph值，而且能穩(wěn)定ph值。因此本發(fā)明所列任一ph調(diào)節(jié)劑或其組合均包括在本發(fā)明精神和范圍內(nèi)。
在制備本發(fā)明凍干粉針劑時(shí)，所配制的藥液中，固形物含量是為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。由于凍干粉針劑通常是在管狀西林瓶中進(jìn)行冷凍干燥得到，本領(lǐng)域技術(shù)人員理解這種產(chǎn)品在獲得成品甚至在供醫(yī)生使用之前，通常均呈現(xiàn)一個(gè)圓餅狀，盡管該圓餅的體積理論上講會(huì)比原有水溶液的體積少(稍有縮小)，然而通常這種縮小通常不會(huì)縮小到原水溶液體積50％，通常會(huì)在原水溶液體積的80-120％之間，更通常在原水溶液體積的90-100％之間，而從終產(chǎn)品西林瓶內(nèi)可觀察到原水溶液液面痕跡(主體餅狀物因凍干縮小后殘留在瓶壁上的液面痕跡，即便西林瓶中的凍干品因各種原因例如碰撞等原因而呈粉末狀，通常仍然可以保留原有的液面痕跡)，據(jù)此痕跡亦可估計(jì)出該冷凍干燥組合物在冷凍干燥之前的水溶液體積。因此，雖然本發(fā)明提供的是一種基本無水的冷凍干燥粉針劑，然而根據(jù)該粉針劑仍然可以大致估計(jì)出其在配制時(shí)，至少在冷凍干燥開始之前的藥液體積，根據(jù)該估計(jì)出的體積以及西林瓶中的干燥終產(chǎn)物的重量，亦可計(jì)算到在制備本發(fā)明凍干粉針劑時(shí)，所配制的藥液中的固形物的含量。因此，根據(jù)本發(fā)明第一方面的凍干粉針劑，其在配制時(shí)的藥液的固形物含量為1～20％(w/v)，優(yōu)選2～15％(w/v)，再更優(yōu)選2～10％。
術(shù)語“固形物含量”是指固體物質(zhì)(例如本發(fā)明活性化合物及所用的全部賦形劑，重量/克)加入到溶劑(例如注射用水)中，溶解后得到一個(gè)溶液，所述固體物質(zhì)的重量除以終溶液體積的百分?jǐn)?shù)(重量/體積百分?jǐn)?shù)，例如g/100ml)。例如在本發(fā)明中，以100mg活性化合物和總計(jì)約20mg的其它固形物加適量注射用水溶液，配制成終體積為2ml的溶液，其固形物含量即為6％。
在本發(fā)明中，符號(hào)％，根據(jù)其所使用的語境，可以具有本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解的含義。例如在提及固形物含量時(shí)，該符號(hào)表示重量/體積的百分?jǐn)?shù)(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷凍干燥粉針劑中的“水含量”時(shí)，例如水含量在8％以下，此時(shí)該符號(hào)％表示重量/重量的百分?jǐn)?shù)(w/w，g/100g)。一般而言，在固體分散在液體中時(shí)，％表示重量/體積百分?jǐn)?shù)；在固體分散在固體中或者液體分散在固體中(例如粉針的含水量)時(shí)，％表示重量/重量百分?jǐn)?shù)。在其它情況下，如無另外說明，符號(hào)％表示重量/重量百分?jǐn)?shù)。
在配制本發(fā)明的藥液時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，可使用例如約0.45um的微孔濾膜進(jìn)行粗濾過濾，在將藥液灌裝到西林瓶中之前，可以使用例如約0.22um的微孔濾膜進(jìn)行精濾過濾以除菌，必要時(shí)可以過濾多次。
本發(fā)明提供的環(huán)磷腺苷制劑可以在25℃以下干燥處保存至少24個(gè)月，可以滿足一般的注射制劑的貯藏要求。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其為冷凍干燥粉針劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該冷凍干燥粉針劑為單劑量制劑(例如西林瓶裝的粉針劑)，每一單位劑量中活性化合物的量(其在本發(fā)明中如未另外說明，均以環(huán)磷腺苷計(jì))可以例如但不限于約10mg、約20mg、約30mg、約50mg。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其用注射用水復(fù)溶，通常而言復(fù)溶時(shí)間在30秒內(nèi)，優(yōu)選在20秒內(nèi)，更優(yōu)選在15秒內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明的凍干粉針劑，其用水制成每1ml中含環(huán)磷腺苷10mg的溶液并根據(jù)中國藥典2010年版二部附錄vih項(xiàng)下的方法測(cè)定，該溶液的ph值為5.5～7.0，例如ph值為6.0～6.5。
本發(fā)明所得凍干粉針劑特別是冷凍干燥粉針劑通常為白色或類白色的凍干塊狀物或其碎塊或其粉末，無臭、味苦，易溶于水。
具體實(shí)施方式
通過下面的實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。在下面的例子中，使用的ph調(diào)節(jié)劑(在本發(fā)明中亦即酸堿調(diào)節(jié)劑)，如無另外說明，是1mo1/l磷酸氫二鈉溶液或0.1mol/l磷酸調(diào)節(jié)溶液，其用量是使制備的制劑調(diào)節(jié)到規(guī)定值或范圍。
下文制備步驟為了舉例的目的，并基于各舉例的可比較性而作了某些具體描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)已有知識(shí)完全可以從中概括得到本發(fā)明制備制劑的方法。在下面配液制備各種組合物中，如未另外說明，每批的總配液量為10000ml，但是列明配方時(shí)，均以相對(duì)于每1ml配液量(其中環(huán)磷腺苷濃度約10mg/ml)的量闡明，并且以每瓶含環(huán)磷腺苷20mg的量分裝到玻璃瓶中；得到的制劑每瓶中含環(huán)磷腺苷20mg。
一、組合物質(zhì)量控制方法
采用高效液相色譜法，對(duì)本發(fā)明所得環(huán)磷腺苷制劑進(jìn)行含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，步驟包括如下操作：
(1)中國藥典2015年版四部第59所第0512節(jié)所載的高效液相色譜法中的規(guī)范進(jìn)行測(cè)定；
(2)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(本實(shí)例中，色譜柱的規(guī)格為250mm×4.6mm，5μm)，以0.01磷酸溶液-乙腈以體積比95：5的混合液并且在該混合液中補(bǔ)充添加0.3w/v％的甲酸為流動(dòng)相，流速1ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長為259nm；取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液測(cè)定，理論板數(shù)按環(huán)磷腺苷峰計(jì)應(yīng)不低于5000，環(huán)磷腺苷與腺苷之間的分離度應(yīng)大于2；
(3)溶液制備：
取注射用環(huán)磷腺苷凍干粉針劑藥物組合物適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成每1ml溶液中含有環(huán)磷腺苷1mg的溶液，過濾，作為有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液(即，1000μg/ml)；
精密量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋刻度，搖勻，制成含環(huán)磷腺苷濃度為10μg/ml的溶液，作為有關(guān)物質(zhì)檢查用對(duì)照溶液(即，10μg/ml)；
精密量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液1ml置于20ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋刻度，搖勻，制成含環(huán)磷腺苷濃度為50μg/ml的溶液，作為含量測(cè)定用供試品溶液(即，50μg/ml)；
精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成濃度為50μg/ml的溶液，作為環(huán)磷腺苷含量測(cè)定用對(duì)照品溶液(即，50μg/ml)；
精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品、腺苷對(duì)照品各適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成每1ml溶液中含有環(huán)磷腺苷1000μg、腺苷10μg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液(即，1000μg/ml+10μg/ml)；
(4)測(cè)定：
精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算理論板數(shù)和環(huán)磷腺苷與腺苷之間的分離度峰之間的分離度，并確定環(huán)磷腺苷與腺苷二者的保留時(shí)間；
分別精密量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液和有關(guān)物質(zhì)檢查用對(duì)照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至環(huán)磷腺苷保留時(shí)間的3倍，讀取供試品溶液色譜圖中主成峰峰面積和各雜質(zhì)的峰面積，當(dāng)檢測(cè)到存在雜技時(shí)，以有關(guān)物質(zhì)檢查用對(duì)照溶液色譜圖中主成份峰面積為1.0％，計(jì)算供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)相對(duì)于環(huán)磷腺苷的百分含量，即得到供試品中的單一雜質(zhì)的含量(即，例如，如果對(duì)照溶液主峰面積為100，供試品溶液色譜圖中某雜質(zhì)的峰面積為115，則該雜質(zhì)相對(duì)于環(huán)磷腺苷的百分含量，簡稱該雜質(zhì)含量為1.15％；供試品溶液色譜圖中某雜質(zhì)的峰面積為87，則該雜質(zhì)含量為0.87％)；
分別精密量取含量測(cè)定用供試品溶液和含量測(cè)定用對(duì)照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至環(huán)磷腺苷保留時(shí)間的2倍，得到兩個(gè)色譜圖，分別讀取兩色譜圖中主成峰峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中環(huán)磷腺苷的含量。
使用上述方法，測(cè)定下文制備例1-7所得全部制劑，結(jié)果：環(huán)磷腺苷理論板數(shù)約75000，環(huán)磷腺苷與腺苷的分離度約2.73，環(huán)磷腺苷拖尾因子約1.008，環(huán)磷腺苷保留時(shí)間約6.69，腺苷相對(duì)于環(huán)磷腺苷的相對(duì)保留時(shí)間約rrt＝0.88。另外，如果將上述hplc法流動(dòng)相中的甲酸去除或者改用同濃度的乙酸，上述這些測(cè)定參數(shù)基本不變。
使制備例1使所得制劑在35℃放置1月，使用上述hplc法測(cè)定，結(jié)果顯示，其理論板數(shù)、環(huán)磷腺苷與腺苷的分離度、環(huán)磷腺苷拖尾因子、環(huán)磷腺苷保留時(shí)間、腺苷rrt這些參數(shù)基本上未變化，但是在rrt1.17處出現(xiàn)一個(gè)明顯的雜質(zhì)峰(雜質(zhì)rrt1.17)，雜質(zhì)rrt1.17與環(huán)磷腺苷之間的分離度達(dá)到2.42，完全滿足測(cè)定主成分和該未知雜質(zhì)的要求。另外，當(dāng)將上述hplc法流動(dòng)相中的甲酸去除或者改用同濃度的乙酸時(shí)，測(cè)定制備例1經(jīng)35℃放置1月后的制劑時(shí)，雖然其理論板數(shù)、環(huán)磷腺苷與腺苷的分離度、環(huán)磷腺苷拖尾因子、環(huán)磷腺苷保留時(shí)間、腺苷rrt這些參數(shù)基本上未變化，但是rrt1.17雜質(zhì)未出現(xiàn)而在約rrt＝1.08處出現(xiàn)一個(gè)峰面積基本與rrt1.17雜質(zhì)相同的雜質(zhì)峰，二者可能為同一雜質(zhì)并且因流動(dòng)相變化而導(dǎo)致保留時(shí)間的變化，經(jīng)計(jì)算，此rrt1.08雜質(zhì)與環(huán)磷腺苷峰之間的分離度約為1.34，不能滿足測(cè)定要求。上述結(jié)果表明，要有效的測(cè)定雜質(zhì)rrt1.17，在流動(dòng)相中添加少量甲酸是必須的，完全出人意料的是，不加甲酸或者添加與甲酸類似的物質(zhì)乙酸時(shí)，卻不能使主成分與該雜質(zhì)rrt1.17有效的分離。
對(duì)于本文制備例1-7所得全部粉針劑，測(cè)定它們的含量，結(jié)果顯示它們的環(huán)磷腺苷含量均在理論投料量的99～101％范圍內(nèi)。
對(duì)于本文制備例1-7所得全部粉針劑，測(cè)定它們的有關(guān)物質(zhì)，特別是關(guān)注其中rrt1.17雜質(zhì)量，結(jié)果顯示這些制劑各單個(gè)雜質(zhì)均小于0.1％，各雜質(zhì)總和均小于0.25％，這些制劑的rrt1.17雜質(zhì)均小于0.02％，這些結(jié)果表明本文制備例1-7所得全部粉針劑在初始狀態(tài)下均具有良好的性質(zhì)。
對(duì)于本文制備例1-7所得全部注射劑，使它們經(jīng)35℃放置5月，測(cè)定它們的含量和有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果顯示：這些制劑在含量方面與其在0月時(shí)相比變化基本一致，殘余量(即5月含除以0月含量再乘以100％所得百分?jǐn)?shù))均在95～98％范圍內(nèi)；有關(guān)物質(zhì)測(cè)定中，除了rrt1.17雜質(zhì)外，各制劑之間在其它雜質(zhì)變化方面基本一致，并且5月時(shí)各制劑的各單個(gè)雜質(zhì)均小于0.1％，各雜質(zhì)總和均小于0.25％；有關(guān)物質(zhì)測(cè)定中，rrt1.17雜質(zhì)的變化在制劑之間存在明顯不同，具體是，制備例1-4各注射劑的rrt1.17雜質(zhì)與制劑0月時(shí)相比增加倍數(shù)(即5月雜質(zhì)含量減去0月雜質(zhì)含量再除以0月雜質(zhì)含量所得的數(shù)值)為0.18～0.23倍，而制備例5-7各注射劑的rrt1.17雜質(zhì)與制劑0月時(shí)相比增加倍數(shù)為3.24～4.46倍。這一結(jié)果表明，不同處方不同工藝所得制劑在穩(wěn)定性方面呈現(xiàn)差異，特別是以rrt1.17雜質(zhì)表征的穩(wěn)定性差異。
另外，對(duì)于下文制備例1-4制得的全部注射劑，照其《中國藥典》2015年版二部588頁收載的“注射用環(huán)磷腺苷”的標(biāo)準(zhǔn)，在0月時(shí)以及室溫放置2年后，照上述標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定，全部制劑在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)均符合上述藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
一、組合物制備例部分
制備例1、制備包含環(huán)磷腺苷的注射劑
處方：環(huán)磷腺苷10mg、甘露醇15mg、氯化鈉1.5mg、酸堿調(diào)節(jié)劑適量、注射用水適量加至1ml。
制法：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.1w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.05w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
制備例2、制備包含環(huán)磷腺苷的注射劑
處方：環(huán)磷腺苷9mg、甘露醇10mg、氯化鈉2mg、酸堿調(diào)節(jié)劑適量、注射用水適量加至1ml。
制法：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.05w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
制備例3、制備包含環(huán)磷腺苷的注射劑
處方：環(huán)磷腺苷11mg、甘露醇25mg、氯化鈉1mg、酸堿調(diào)節(jié)劑適量、注射用水適量加至1ml。
制法：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.05w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
制備例4、制備包含環(huán)磷腺苷的注射劑
處方：環(huán)磷腺苷10mg、甘露醇20mg、氯化鈉1.5mg、酸堿調(diào)節(jié)劑適量、注射用水適量加至1ml。
制法：
(1)使環(huán)磷腺苷和氯化鈉加至配制量60％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，按藥液體積0.15w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使甘露醇加至配制量20％的室溫注射用水中，攪拌溶解，按藥液體積0.1w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(3)使步驟(1)和步驟(2)所得藥液混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(4)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
本制備例4凍干時(shí)使用凍干曲線b進(jìn)行。
制備例5、制備環(huán)磷腺苷制劑
分別參照制備例1-4的配方和制法，不同的僅是不添加氯化鈉，制得四批制劑。
制備例6、制備環(huán)磷腺苷制劑
分別參照制備例1-4的配方，但是在制備時(shí)，不是氯化鈉與環(huán)磷腺苷預(yù)先單獨(dú)處理而是與甘露醇一起處理，制得四批制劑。具體制法如下：
(1)使環(huán)磷腺苷、甘露醇和氯化鈉加至配制量80％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至規(guī)定值(參照制備例1-2時(shí)調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，參照制備例3-4時(shí)調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5)，按藥液體積0.1w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使步驟(1)所得藥液用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(3)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
制備例7、制備環(huán)磷腺苷制劑
分別參照制備例1-4的配方，但是在制備時(shí)，不添加氯化鈉，并且環(huán)磷腺苷與甘露醇一起處理，制得四批制劑。具體制法如下：
(1)使環(huán)磷腺苷、甘露醇加至配制量80％的室溫注射用水中，攪拌溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至規(guī)定值(參照制備例1-2時(shí)調(diào)節(jié)藥液ph值至3.5～4.0，參照制備例3-4時(shí)調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5)，按藥液體積0.1w/v％加入針用活性炭，攪拌吸附20分鐘，過濾脫炭，備用；
(2)使步驟(1)所得藥液用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5，用孔徑為1um的鈦棒過濾器過濾后，補(bǔ)加室溫注射用水至配制量，測(cè)定溶液的ph值并用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液ph值至6.0～6.5；
(3)用孔徑為0.22um微孔濾膜濾芯對(duì)溶液循環(huán)除菌過濾至濾液經(jīng)可見異物檢查合格后，再將藥液無菌分裝到西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
以上各粉針劑，冷凍干燥除去水分后，凍干品中水分含量小于3％。