本發(fā)明涉及藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：隨著組織工程材料的發(fā)展，越來(lái)越多的組織工程材料代替天然生物材料應(yīng)用于體內(nèi)移植，同樣的，軟骨細(xì)胞組織工程材料的獲取為軟骨組織修復(fù)開辟了新的道路。目前，以軟骨細(xì)胞作為移植材料被廣泛應(yīng)用于面部整形美容外科手術(shù)領(lǐng)域，例如矯正顱頜面缺損、隆鼻等。整形美容外科是醫(yī)學(xué)科學(xué)的重要組成部分。隨著物資生活的改善，人們對(duì)美的要求越來(lái)越高，無(wú)論是中國(guó)人還是外國(guó)人，鼻形不符合美學(xué)標(biāo)準(zhǔn)者為數(shù)不少。因此，以矯正鼻部不良外觀形態(tài)的隆鼻術(shù)，便成為僅次于重臉術(shù)的熱門手術(shù)，居整形美容手術(shù)的第二位。目前臨床上所選用的隆鼻填充材料不論是自體或異體、活性或非活性、天然或化學(xué)合成，都有一定的優(yōu)缺點(diǎn)。但對(duì)于隆鼻美容術(shù)，因排出率較高，遠(yuǎn)期效果尚難定論，故許多醫(yī)生主張用自體軟骨組織做隆鼻材料，但是受到軟骨組織的吸收及取軟骨增加受術(shù)者痛苦和疤痕等因素的影響，應(yīng)用同樣受到了限制?，F(xiàn)有專利公開號(hào)CN104922730A公開了一種軟骨細(xì)胞組織工程材料及其制備方法和用途，該專利中公開使用由軟骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成的工程材料作為構(gòu)建軟骨組織的應(yīng)用，該技術(shù)方案中有效證明軟骨細(xì)胞能夠用來(lái)作為面部整容的材料，但是這種材料不僅市場(chǎng)價(jià)格昂貴，而且軟骨細(xì)胞存活率和增值率較低，移植效果差，培養(yǎng)時(shí)間漫長(zhǎng)，不易被消費(fèi)群體接收，為此，急需開發(fā)一種排出率低，存活率和增值率較高，能夠有效用于面部整容整形手術(shù)的間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑及其制備方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有的應(yīng)用于面部整容材料存在的價(jià)格昂貴，排出率較高，使用的軟骨組織的吸收及取軟骨增加受術(shù)者痛苦和疤痕，應(yīng)用軟骨細(xì)胞存活率和增值率較低，移植效果差等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑及其制備方法。本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：本發(fā)明提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.25-1.25mg、所述輔料I0.5-1.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×105-108個(gè)，所述原料主要由以下重量份數(shù)的成分制成：祖師麻提取物10-60份、丹參提取物10-50份、狗脊提取物10-40份。本發(fā)明提供的第一注射劑能夠作為填充材料用于美容整形治療，第一注射劑的原料中含有由脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞能夠快速建立軟骨組織，與人體原位的軟骨在組織學(xué)和生物學(xué)均又很大的相似，排出率較低，能夠降低受術(shù)者的痛苦，此外，在原料中加入祖師麻提取物、丹參提取物、狗脊提取物，能夠有效提高軟骨細(xì)胞增殖，從而能夠使人體軟骨組織快速建立，有效降低患者痛苦，該針劑可以應(yīng)用在諸如顱面損傷、軟骨支架再造、修補(bǔ)模樣缺損、耳鼻喉科喉成形、鼻整形等手術(shù)中。祖師麻提取物由以下方法制備而成：將祖師麻粉碎后用2-3倍重量的乙醇提取2-4次，每次1.5-2h，合并提取液，濃縮至完全干燥得粗提物；將粗提物加5-8倍重量的蒸餾水溶解，離心，取上清液，上大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，棄去洗脫液；再用濃度為30-50％乙醇水溶液洗脫，回收洗脫液，濃縮，噴霧干燥，獲得祖師麻提取物。丹參提取物和狗脊提取物的制備方法均與祖師麻提取物的制備方法相同。需要說(shuō)明的是，祖師麻為瑞香科瑞香屬植物黃瑞香的根皮及莖皮；丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖；狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根莖。進(jìn)一步的，制備所述原料還包括以下重量份數(shù)的成分：布渣葉提取物3-8份、白茅根提取物10-15份、醉魚草提取物8-12份。第一注射劑的原料中加入布渣葉提取物、白茅根提取物、醉魚草提取物不僅能夠提高細(xì)胞增殖效率，而且能夠起到消炎止痛的效果，顯著降低隆鼻患者的痛苦，從而防止鼻整形患者出現(xiàn)空鼻癥，此外，這三種成分的加入有效防止整容手術(shù)后傷口細(xì)菌滋生，起到消炎的作用。布渣葉提取物、白茅根提取物和醉魚草提取物的制備方法均與祖師麻提取物的制備方法相同。需要說(shuō)明的是，布渣葉是椴樹科植物破布樹的干燥葉；白茅根為禾本科植物白茅的根莖；醉魚草為馬錢科醉魚草屬植物，以帶根的全草及葉、花入藥。進(jìn)一步的，所述輔料I主要由以下重量份數(shù)的成分制備而成：羥丙基甲基纖維素1-3份、蔗糖脂肪酸酯4-8份、乳酸2-4份。輔料中加入的羥丙基甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯、乳酸能夠起到防腐殺菌的目的，能夠保證第一注射劑的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)注射劑的保質(zhì)期限，防止注射劑在保存期間細(xì)菌滋生，有效提高穩(wěn)定性。進(jìn)一步的，所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水溶解而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.5-1mL、所述海藻多糖0.8-1.25mg、所述磷脂酰膽堿0.2-0.5mg、所述D-丙氨酸0.2-0.4mg、所述輔料II0.5-1mg。第二注射劑用于手術(shù)后恢復(fù)期注射，透明質(zhì)酸可以改善皮膚營(yíng)養(yǎng)代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、增加彈性、防止衰老，在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑，海藻多糖、磷脂酰膽堿和D-丙氨酸的加入，能夠促進(jìn)第一注射劑中軟骨細(xì)胞的分化和分裂，有效調(diào)節(jié)細(xì)胞增長(zhǎng)，輔助透明質(zhì)酸的吸收，有效提高術(shù)后皮膚彈性，防止衰老。進(jìn)一步的，制備所述第二注射劑還包括免疫球蛋白、泡桐提取物、香青蘭提取物、人參提取物，每mL所述注射用水中含有所述免疫球蛋白50-70U、泡桐提取物0.1-0.2mg、香青蘭提取物0.1-0.3mg、人參提取物0.1-0.3mg。第二注射劑中加入免疫球蛋白、泡桐提取物、香青蘭提取物、人參提取物，能夠提高軟骨細(xì)胞的免疫力，降低細(xì)胞病死率，同時(shí)降低手術(shù)后病人的痛苦，起到消炎止痛的作用。進(jìn)一步的，所述輔料II主要由以下重量份數(shù)的成分制成：十二烷基氨基丙酸鈉3-8份、甲酸鈣2-4份、脫氫醋酸鈉1-4份。輔料II中加入十二烷基氨基丙酸鈉、甲酸鈣和脫氫醋酸鈉能夠起到滅菌效果，有效保證了第二注射劑的有效性，防止注射液細(xì)菌滋生，影響藥效。本發(fā)明還提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：S1、使用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到的軟骨細(xì)胞；S2、制備原料：按照重量份數(shù)分別稱取10-60份的祖師麻提取物、10-50份的丹參提取物、10-40份的狗脊提取物，并將上述成分均勻混合，制備形成原料；S3、同時(shí)稱取輔料I和步驟S2中制備的所述原料，并取步驟S1中所述的軟骨細(xì)胞，將所述輔料I、所述原料和所述軟骨細(xì)胞加入至注射用水中，在60-70℃的環(huán)境下充分?jǐn)嚢枞芙?；S4、加入步驟S3中溶液總質(zhì)量2％的活性炭，在60-70℃的環(huán)境下保溫20-30min，過(guò)濾，過(guò)濾后調(diào)節(jié)pH至5.5-7.5，即得到注射液；S5、將步驟S4中制得的所述注射液進(jìn)行灌裝、壓塞、軋蓋即得到間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑。進(jìn)一步的，步驟S1中，所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞的方法包括以下步驟：將7×104/ml-1×107/ml的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種至盛放有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液的培養(yǎng)板中，將所述培養(yǎng)板置于飽和濕度為60-80％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即得到軟骨細(xì)胞。進(jìn)一步的，所述誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液主要由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、胰島素、妥布霉素、膽鈣化醇、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維素通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)液溶解而成，每mL所述細(xì)胞培養(yǎng)液含有所述轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β10-15ng、所述胰島素50-70U、所述妥布霉素45-65U、所述膽鈣化醇10-25μg、所述轉(zhuǎn)鐵蛋白5-8mg、所述纖維素30-45ng。進(jìn)一步的，所述細(xì)胞培養(yǎng)液主要由葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯、纖粘連蛋白、羧甲基纖維素鈉、維生素C通過(guò)MEM培養(yǎng)基水溶液配置而成，每mL所述MEM培養(yǎng)基水溶液含有所述葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯1-3mg、所述纖粘連蛋白5-8mg、所述羧甲基纖維素鈉0.75-1.5mg、所述維生素C45-65μg，所述MEM培養(yǎng)基水溶液的濃度為8-12mg/mL。通過(guò)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液能夠有效誘導(dǎo)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化成為軟骨細(xì)胞，分化效率較高，且分化后的軟骨細(xì)胞表型穩(wěn)定，體外培養(yǎng)的成活率較高。本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明提供的第一注射劑能夠直接用于面部整容手術(shù)中的填充材料，軟骨細(xì)胞的注射能夠重建軟骨組織，有效降低排出率，適宜的生長(zhǎng)環(huán)境為軟骨細(xì)胞的分化和增殖提供了基礎(chǔ)，提高了軟骨細(xì)胞的植活率，進(jìn)而提高了手術(shù)的成功幾率，手術(shù)過(guò)程更加安全，降低患者在隆鼻或顱面修復(fù)過(guò)程中的痛苦，與現(xiàn)有技術(shù)相比，縮短了手術(shù)周期，可以廣泛應(yīng)用在諸如顱面損傷、軟骨支架再造、修補(bǔ)模樣缺損、耳鼻喉科喉成形、鼻整形等手術(shù)中。附圖說(shuō)明圖1為軟骨細(xì)胞制劑在加速試驗(yàn)中時(shí)間-細(xì)菌污染率的線條圖；圖2為軟骨細(xì)胞制劑在長(zhǎng)期試驗(yàn)中時(shí)間-細(xì)菌污染率的線條圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1本發(fā)明實(shí)施例1提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.25mg、所述輔料I0.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×105個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.075mg丹參提取物0.0875mg狗脊提取物0.0875mg。實(shí)施例2本發(fā)明實(shí)施例2提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料1.25mg、所述輔料I1.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×108個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.125mg丹參提取物0.625mg狗脊提取物0.500mg。一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：S1、使用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到的軟骨細(xì)胞；S2、制備原料：按照重量克數(shù)分別稱取0.125mg的祖師麻提取物、0.625mg的丹參提取物、0.500mg狗脊提取物，并將上述成分均勻混合，制備形成原料；S3、同時(shí)稱取輔料I和步驟S2中制備的所述原料，并取步驟S1中所述的軟骨細(xì)胞，將所述輔料I、所述原料和所述軟骨細(xì)胞加入至注射用水中，在60℃的環(huán)境下充分?jǐn)嚢枞芙猓籗4、加入步驟S3中溶液總質(zhì)量2％的活性炭，在60℃的環(huán)境下保溫20min，過(guò)濾，過(guò)濾后調(diào)節(jié)pH至5.5，即得到注射液；S5、將步驟S4中制得的所述注射液進(jìn)行灌裝、壓塞、軋蓋即得到間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑。所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞的方法包括以下步驟：將7×104/ml的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種至盛放有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液的培養(yǎng)板中，將所述培養(yǎng)板置于飽和濕度為60％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即得到軟骨細(xì)胞。所述誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液主要由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、胰島素、妥布霉素、膽鈣化醇、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維素通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)液配置而成，每mL所述細(xì)胞培養(yǎng)液含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β10ng、胰島素50U、妥布霉素45U、膽鈣化醇10μg、轉(zhuǎn)鐵蛋白5mg、纖維素30ng。所述細(xì)胞培養(yǎng)液主要由葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯、纖粘連蛋白、羧甲基纖維素鈉、維生素C通過(guò)MEM培養(yǎng)基水溶液配置而成，每mL所述MEM培養(yǎng)基水溶液含有葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯1mg、纖粘連蛋白5mg、羧甲基纖維素鈉0.75mg、維生素C45μg，所述MEM培養(yǎng)基水溶液的濃度為8mg/mL。實(shí)施例3本發(fā)明實(shí)施例3提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.85mg、所述輔料I1.0mg、所述軟骨細(xì)胞1×107個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：該制劑的制備方法與實(shí)施例2相同。實(shí)施例4本發(fā)明實(shí)施例4提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料1.0mg、所述輔料I0.8mg、所述軟骨細(xì)胞1×106個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：S1、使用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到的軟骨細(xì)胞；S2、制備原料：按照重量克數(shù)分別稱取0.15mg的祖師麻提取物、0.10mg的丹參提取物、0.40mg的狗脊提取物、0.08mg的布渣葉提取物、0.15mg的白茅根提取物、0.12mg的醉魚草提取物，并將上述成分均勻混合，制備形成原料；S3、同時(shí)稱取輔料I和步驟S2中制備的所述原料，并取步驟S1中所述的軟骨細(xì)胞，將所述輔料I、所述原料和所述軟骨細(xì)胞加入至注射用水中，在65℃的環(huán)境下充分?jǐn)嚢枞芙?；S4、加入步驟S3中溶液總質(zhì)量2％的活性炭，在65℃的環(huán)境下保溫25min，過(guò)濾，過(guò)濾后調(diào)節(jié)pH至6.0，即得到注射液；S5、將步驟S4中制得的所述注射液進(jìn)行灌裝、壓塞、軋蓋即得到間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑。所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞的方法包括以下步驟：將3×105/ml的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種至盛放有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液的培養(yǎng)板中，將所述培養(yǎng)板置于飽和濕度為70％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即得到軟骨細(xì)胞。所述誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液主要由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、胰島素、妥布霉素、膽鈣化醇、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維素通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)液配置而成，每mL所述細(xì)胞培養(yǎng)液含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β12ng、胰島素60U、妥布霉素55U、膽鈣化醇20μg、轉(zhuǎn)鐵蛋白6mg、纖維素40ng。所述細(xì)胞培養(yǎng)液主要由葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯、纖粘連蛋白、羧甲基纖維素鈉、維生素C通過(guò)MEM培養(yǎng)基水溶液配置而成，每mL所述MEM培養(yǎng)基水溶液含有葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯2mg、纖粘連蛋白6mg、羧甲基纖維素鈉1.0mg、維生素C55μg，所述MEM培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/mL。實(shí)施例5本發(fā)明實(shí)施例5提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料1.2mg、所述輔料I1.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×105個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：該制劑的制備方法與實(shí)施例4相同。實(shí)施例6本發(fā)明實(shí)施例6在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.25mg、所述輔料I0.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×105個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.125mg丹參提取物0.625mg狗脊提取物0.500mg；所述輔料I主要由以下重量克數(shù)的成分制備而成：羥丙基甲基纖維素0.05mg蔗糖脂肪酸酯0.3mg乳酸0.15mg。該制劑的制備方法與實(shí)施例2相同。實(shí)施例7本發(fā)明實(shí)施例7在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料1.25mg、所述輔料I1.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×108個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.125mg丹參提取物0.625mg狗脊提取物0.500mg；所述輔料I主要由以下重量克數(shù)的成分制備而成：羥丙基甲基纖維素0.3mg蔗糖脂肪酸酯0.6mg乳酸0.6mg。一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：S1、使用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到的軟骨細(xì)胞；S2、制備原料：按照重量克數(shù)分別稱取0.125mg的祖師麻提取物、0.625mg的丹參提取物、0.500mg的狗脊提取物，并將上述成分均勻混合，制備形成原料；S3、同時(shí)稱取輔料I和步驟S2中制備的所述原料，并取步驟S1中所述的軟骨細(xì)胞，將所述輔料I、所述原料和所述軟骨細(xì)胞加入至注射用水中，在70℃的環(huán)境下充分?jǐn)嚢枞芙?；S4、加入步驟S3中溶液總質(zhì)量2％的活性炭，在70℃的環(huán)境下保溫30min，過(guò)濾，過(guò)濾后調(diào)節(jié)pH至7.5，即得到注射液；S5、將步驟S4中制得的所述注射液進(jìn)行灌裝、壓塞、軋蓋即得到間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑。所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞的方法包括以下步驟：將1×107/ml的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種至盛放有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液的培養(yǎng)板中，將所述培養(yǎng)板置于飽和濕度為80％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即得到軟骨細(xì)胞。所述誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液主要由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、胰島素、妥布霉素、膽鈣化醇、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維素通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)液配置而成，每mL所述細(xì)胞培養(yǎng)液含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β15ng、胰島素70U、妥布霉素65U、膽鈣化醇25μg、轉(zhuǎn)鐵蛋白8mg、纖維素45ng。所述細(xì)胞培養(yǎng)液主要由葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯、纖粘連蛋白、羧甲基纖維素鈉、維生素C通過(guò)MEM培養(yǎng)基水溶液配置而成，每mL所述MEM培養(yǎng)基水溶液含有葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯3mg、纖粘連蛋白8mg、羧甲基纖維素鈉1.5mg、維生素C65μg，所述MEM培養(yǎng)基水溶液的濃度為12mg/mL。實(shí)施例8本發(fā)明實(shí)施例8提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料1.25mg、所述輔料I1.0mg、所述軟骨細(xì)胞1×108個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.125mg丹參提取物0.625mg狗脊提取物0.500mg；所述輔料I主要由以下重量克數(shù)的成分制備而成：羥丙基甲基纖維素0.3mg蔗糖脂肪酸酯0.5mg乳酸0.2mg。該制劑的制備方法與實(shí)施例7相同。實(shí)施例9本發(fā)明實(shí)施例9在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.5mL、所述海藻多糖0.8mg、所述磷脂酰膽堿0.2mg、所述D-丙氨酸0.2mg、所述輔料II0.5mg。實(shí)施例10本發(fā)明實(shí)施例10在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸1mL、所述海藻多糖1.25mg、所述磷脂酰膽堿0.5mg、所述D-丙氨酸0.4mg、所述輔料II1mg。實(shí)施例11本發(fā)明實(shí)施例11在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸、輔料II、泡桐提取物、香青蘭提取物和人參提取物通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.8mL、所述海藻多糖1.0mg、所述磷脂酰膽堿0.3mg、所述D-丙氨酸0.3mg、所述輔料II0.8mg、所述免疫球蛋白50U、泡桐提取物0.1mg、香青蘭提取物0.1mg、人參提取物0.1mg。實(shí)施例12本發(fā)明實(shí)施例12在實(shí)施例10的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸、輔料II、泡桐提取物、香青蘭提取物和人參提取物通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸1mL、所述海藻多糖1.25mg、所述磷脂酰膽堿0.5mg、所述D-丙氨酸0.4mg、所述輔料II1mg、所述免疫球蛋白70U、泡桐提取物0.2mg、香青蘭提取物0.3mg、人參提取物0.3mg。實(shí)施例13本發(fā)明實(shí)施例13在實(shí)施例9的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸、輔料II、泡桐提取物、香青蘭提取物和人參提取物通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.5mL、所述海藻多糖0.8mg、所述磷脂酰膽堿0.2mg、所述D-丙氨酸0.2mg、所述輔料II0.5mg、所述免疫球蛋白60U、泡桐提取物0.15mg、香青蘭提取物0.2mg、人參提取物0.2mg。實(shí)施例14本發(fā)明實(shí)施例14在實(shí)施例9的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.5mL、所述海藻多糖0.8mg、所述磷脂酰膽堿0.2mg、所述D-丙氨酸0.2mg、所述輔料II0.5mg；所述輔料II主要由以下重量克數(shù)的成分制成：十二烷基氨基丙酸鈉0.15mg甲酸鈣0.2mg脫氫醋酸鈉0.15mg。實(shí)施例15本發(fā)明實(shí)施例15在實(shí)施例10的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸1mL、所述海藻多糖1.25mg、所述磷脂酰膽堿0.5mg、所述D-丙氨酸0.4mg、所述輔料II1mg。所述輔料II主要由以下重量克數(shù)的成分制成：十二烷基氨基丙酸鈉0.7mg甲酸鈣0.2mg脫氫醋酸鈉0.1mg。實(shí)施例16本發(fā)明實(shí)施例16限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸1mL、所述海藻多糖1.25mg、所述磷脂酰膽堿0.5mg、所述D-丙氨酸0.4mg、所述輔料II0.8mg。所述輔料II主要由以下重量克數(shù)的成分制成：十二烷基氨基丙酸鈉0.24mg甲酸鈣0.24mg脫氫醋酸鈉0.32mg。對(duì)照例1本發(fā)明對(duì)照例1提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.25mg、所述輔料I0.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×105個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.15mg狗脊提取物0.10mg。對(duì)照例2本發(fā)明對(duì)照例2提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.85mg、所述輔料I1.0mg、所述軟骨細(xì)胞1×107個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：該制劑的制備方法與實(shí)施例2相同。對(duì)照例3本發(fā)明對(duì)照例3在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料0.25mg、所述輔料I0.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×105個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.125mg丹參提取物0.625mg狗脊提取物0.500mg；所述輔料I主要由以下重量克數(shù)的成分制備而成：蔗糖脂肪酸酯0.3mg乳酸0.2mg。該制劑的制備方法與實(shí)施例2相同。對(duì)照例4本發(fā)明對(duì)照例4在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.5mL、所述海藻多糖0.8mg、所述輔料II0.5mg。對(duì)照例5本發(fā)明對(duì)照例5在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸、輔料II和人參提取物通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.8mL、所述海藻多糖1.0mg、所述磷脂酰膽堿0.3mg、所述D-丙氨酸0.3mg、所述輔料II0.8mg、所述免疫球蛋白50U、人參提取物0.1mg。對(duì)照例6本發(fā)明對(duì)照例6在實(shí)施例9的基礎(chǔ)上進(jìn)一步限定了所述軟骨細(xì)胞制劑還包括第二注射劑，所述第二注射劑主要由透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸和輔料II通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述透明質(zhì)酸0.5mL、所述海藻多糖0.8mg、所述磷脂酰膽堿0.2mg、所述D-丙氨酸0.2mg、所述輔料II0.5mg；所述輔料II主要由以下重量克數(shù)的成分制成：十二烷基氨基丙酸鈉0.35mg脫氫醋酸鈉0.15mg。對(duì)照例7本發(fā)明對(duì)照例7提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑，包括第一注射劑，所述第一注射劑主要由原料、輔料I、軟骨細(xì)胞通過(guò)注射用水配置而成，每mL所述注射用水中含有所述原料1.25mg、所述輔料I1.5mg、所述軟骨細(xì)胞1×108個(gè)，所述原料主要由以下重量克數(shù)的成分制成：祖師麻提取物0.125mg丹參提取物0.625mg狗脊提取物0.500mg。一種間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：S1、使用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到的軟骨細(xì)胞；S2、制備原料：按照重量克數(shù)分別稱取0.125mg的祖師麻提取物、0.625mg的丹參提取物、0.500mg狗脊提取物，并將上述成分均勻混合，制備形成原料；S3、同時(shí)稱取輔料I和步驟S2中制備的所述原料，并取步驟S1中所述的軟骨細(xì)胞，將所述輔料I、所述原料和所述軟骨細(xì)胞加入至注射用水中，在60℃的環(huán)境下充分?jǐn)嚢枞芙猓籗4、加入步驟S3中溶液總質(zhì)量2％的活性炭，在60℃的環(huán)境下保溫20min，過(guò)濾，過(guò)濾后調(diào)節(jié)pH至5.5，即得到注射液；S5、將步驟S4中制得的所述注射液進(jìn)行灌裝、壓塞、軋蓋即得到間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的軟骨細(xì)胞制劑。所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞的方法包括以下步驟：將7×104/ml的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種至盛放有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液的培養(yǎng)板中，將所述培養(yǎng)板置于飽和濕度為60％、溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即得到軟骨細(xì)胞。所述誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液主要由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、胰島素、妥布霉素、纖維素通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)液溶解而成，每mL所述細(xì)胞培養(yǎng)液含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β10ng、胰島素50U、妥布霉素45U、纖維素30ng。所述細(xì)胞培養(yǎng)液主要由葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯、纖粘連蛋白、羧甲基纖維素鈉、維生素C通過(guò)MEM培養(yǎng)基水溶液配置而成，每mL所述MEM培養(yǎng)基水溶液含有葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯1mg、纖粘連蛋白5mg、羧甲基纖維素鈉0.75mg、維生素C45μg，所述MEM培養(yǎng)基水溶液的濃度為8mg/mL。本發(fā)明提供的軟骨細(xì)胞制劑的臨床驗(yàn)證1、檢測(cè)樣品：取本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例3、對(duì)照例1、對(duì)照例2提供的第一注射劑作為試驗(yàn)組，同時(shí)取實(shí)施例9、實(shí)施例11、、對(duì)照例4和對(duì)照例5提供的第二注射劑作為試驗(yàn)組，選用注射用水為陰性對(duì)照組。2、選取27只6周齡雄性胸腺裸鼠，并分為9個(gè)試驗(yàn)組，每組3只，試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2均將實(shí)施例1提供的第一注射劑注射到小鼠的背部皮下組織中；試驗(yàn)組3和試驗(yàn)組4均將實(shí)施例3提供的第一注射劑注射到小鼠的背部皮下組織中；試驗(yàn)組5和試驗(yàn)組6均將對(duì)照例1提供的第一注射劑注射到小鼠的背部皮下組織中；試驗(yàn)組7和試驗(yàn)組8均將對(duì)照例2提供的第一注射劑注射到小鼠的背部皮下組織中；另外一組作為陰性對(duì)照組，將注射用水注射到小鼠的背部皮下組織中，小鼠注射試驗(yàn)注射劑兩個(gè)小時(shí)后，計(jì)算30分鐘內(nèi)試驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)3組、實(shí)驗(yàn)5組、試驗(yàn)7組和陰性對(duì)照組中小鼠的平均扭動(dòng)次數(shù)，根據(jù)扭動(dòng)的次數(shù)，使用下列公式計(jì)算疼痛抑制率(％)，計(jì)算結(jié)果如表2所示。公式一：疼痛抑制率(％)＝【(陰性對(duì)照組的扭動(dòng)次數(shù)-試驗(yàn)組的扭動(dòng)次數(shù))/陰性對(duì)照組的扭動(dòng)次數(shù)】×100％。3、9個(gè)試驗(yàn)組分別注射第一注射劑和注射用水后，48小時(shí)注射后，將實(shí)施例9、實(shí)施例11、、對(duì)照例4和對(duì)照例5提供的第二注射劑分別注射到試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組4、試驗(yàn)組6、試驗(yàn)組8的小鼠的背部皮下組織中，將注射用水注射到陰性對(duì)照組的小鼠的背部皮下組織中。4、9個(gè)試驗(yàn)組的小鼠均在體外培養(yǎng)38周并不斷觀察，查看軟骨組織的生成情況估算新生軟骨組織生成體積，計(jì)算結(jié)果如表1所示；同時(shí)觀察小鼠皮膚情況，如表3所示。5、培養(yǎng)38周后，取出軟骨組織，切成1-2毫米大小，然后在0.05％的透明質(zhì)酸酶中消化30分鐘。去除上清液，然后使用磷酸鹽緩沖夜，內(nèi)含1％青霉素+鏈霉素生理鹽水溶液清洗。然后在使用0.5％的膠原酶和0.5％胰蛋白酶浸泡2-3小，用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞感染支原體或其他細(xì)菌的數(shù)量，并計(jì)算細(xì)胞受到支原體或細(xì)菌感染率；結(jié)果如下表4所示。表1新生軟骨組織生成體積(cm2)表2小鼠注射第一注射劑的疼痛抑制率(％)由上述表1可知，通過(guò)陰性對(duì)照例和對(duì)照例1相比，本發(fā)明實(shí)施例1提供的第一注射劑能夠促進(jìn)軟骨組織再生，而且能夠形成穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，由此可以說(shuō)明，本發(fā)明提供的祖師麻提取物、丹參提取物、狗脊提取物能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖，從而能夠使軟骨組織快速建立，三種成分缺少一種將不能達(dá)到上述效果；實(shí)施例3和對(duì)照例3提供的注射劑在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上能夠提高軟骨組織再生效率，但是注射實(shí)施例3的注射劑形成的軟骨組織面積大于對(duì)照例3，由此可以說(shuō)明，布渣葉提取物、白茅根提取物、醉魚草提取物的加入可以進(jìn)一步提高軟骨細(xì)胞增殖效率，三種缺少任意一種將達(dá)不到上述效果。有上述表2可知，本發(fā)明在第一注射劑的原料中加入布渣葉提取物、白茅根提取物、醉魚草提取物除了能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖外，還能夠有效抑制手術(shù)疼痛，且具有消炎的效果，三種成分任意缺少一種將達(dá)不到效果。表3小鼠注射第二注射劑后皮膚狀況由表3可以得出，本發(fā)明提供的第二注射劑中加入透明質(zhì)酸、海藻多糖、磷脂酰膽堿、D-丙氨酸能夠改善皮膚營(yíng)養(yǎng)代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、增加彈性、防止衰老，在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑，這幾種成分中任意缺少一種將達(dá)不到上述效果。表4小鼠注射第二注射劑后軟骨細(xì)胞免疫測(cè)試組別細(xì)胞總數(shù)量未感染的細(xì)胞數(shù)量感染率試驗(yàn)2組7.9×1052.4×10570％試驗(yàn)4組3.2×1053.0×1056％試驗(yàn)8組4.9×1053.7×10525％由表4可以得出，由試驗(yàn)2組和試驗(yàn)8組與試驗(yàn)4組對(duì)比可知，本發(fā)明實(shí)施例11中提供的第二注射劑中加入泡桐提取物、香青蘭提取物和人參提取物，能夠有效提高軟骨細(xì)胞的免疫力，三種成分任意缺少一種，將達(dá)不到上述效果，細(xì)胞感染較高，細(xì)胞致死率較高。本發(fā)明提供的軟骨細(xì)胞制劑的穩(wěn)定性和安全性試驗(yàn)1.加速試驗(yàn)取實(shí)施例1、實(shí)施例6和對(duì)照例3提供的第一注射劑，同時(shí)取實(shí)施例9、實(shí)施例14、和對(duì)照例6提供第二注射劑，均在溫度20℃-30℃下，相對(duì)濕度為75％±5％的條件下放置30天，在試驗(yàn)期間多次取樣，檢測(cè)注射劑的性狀、色澤、細(xì)菌污染率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)施例1與實(shí)施例9提供的第一注射劑和第二注射劑均具有沉淀物，顏色明顯變深，對(duì)照例3和對(duì)照例6提供的第一注射劑和第二注射劑均出現(xiàn)渾濁，但沒(méi)有沉淀物，顏色略有加深，實(shí)施例6和實(shí)施例14提供的第一注射劑和第二注射劑均無(wú)變化，此外，6中注射劑的細(xì)菌污染率檢測(cè)如圖1所示，實(shí)施例1和實(shí)施例9提供的注射劑的細(xì)菌污染率在存儲(chǔ)15天時(shí)，細(xì)菌不斷滋生且細(xì)菌污染率達(dá)到了80％以上，對(duì)照例3和對(duì)照例6提供的注射劑在存儲(chǔ)30天時(shí)均達(dá)到了100％，而實(shí)施例6和實(shí)施例14提供的注射劑在存儲(chǔ)30天時(shí)，細(xì)菌污染率僅50％。2.長(zhǎng)期試驗(yàn)取實(shí)施例1、實(shí)施例6和對(duì)照例3提供的第一注射劑，同時(shí)取實(shí)施例9、實(shí)施例14、和對(duì)照例6提供第二注射劑，均在溫度2℃-8℃下，相對(duì)濕度為30％±10％的條件下放置700天，在試驗(yàn)期間多次取樣，檢測(cè)注射劑的性狀、色澤、細(xì)菌污染率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)施例1與實(shí)施例9提供的第一注射劑和第二注射劑隨時(shí)間的延長(zhǎng)均不斷出現(xiàn)沉淀物，且顏色隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸變深，對(duì)照例3和對(duì)照例6提供的第一注射劑和第二注射劑隨時(shí)間的延長(zhǎng)均出現(xiàn)渾濁，但沒(méi)有沉淀物，顏色略有加深，實(shí)施例6和實(shí)施例14提供的第一注射劑和第二注射劑在30天內(nèi)無(wú)任何變化，此外，6中注射劑的細(xì)菌污染率檢測(cè)如圖2所示，實(shí)施例1和實(shí)施例9提供的注射劑的細(xì)菌污染率在存儲(chǔ)600天時(shí)，細(xì)菌不斷滋生且細(xì)菌污染率已達(dá)到了100％，對(duì)照例3和對(duì)照例6提供的注射劑在存儲(chǔ)600天時(shí)均達(dá)到了80％，而實(shí)施例6和實(shí)施例14提供的注射劑在存儲(chǔ)700天時(shí)，細(xì)菌污染率僅60％。從加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)中可以看出，第一注射劑中含有的羥丙基甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯和乳酸，及第二注射劑中含有的十二烷基氨基丙酸鈉、甲酸鈣和脫氫醋酸鈉，均能夠有效提高注射劑的穩(wěn)定性，且能夠有效防止細(xì)菌滋生，降低細(xì)菌污染率，延長(zhǎng)注射劑的保質(zhì)期，三種成分缺少任意一種均不能達(dá)到上述效果。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化得到的軟骨細(xì)胞的分化效率分析1)分組試驗(yàn)組：本發(fā)明實(shí)施例2和對(duì)照例7中提供的誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液制成的培養(yǎng)基；對(duì)照組：常規(guī)添加劑制成的培養(yǎng)基；2)試驗(yàn)方法將等數(shù)量的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分別植入至上述培養(yǎng)基中，根據(jù)實(shí)施例2和對(duì)照例7提供的軟骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化方法進(jìn)行軟骨細(xì)胞的分化培養(yǎng)，培養(yǎng)5、10、15、20天后，采用臺(tái)盼藍(lán)經(jīng)典染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算分化效率如表5所示。表5軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)由表5可以看出，本發(fā)明實(shí)施例2提供的誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液中加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、胰島素、妥布霉素、膽鈣化醇、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維素，能夠有效提高軟骨細(xì)胞分化效率，上述幾種成分中任意缺少一種均不能達(dá)到較高的分化效率。本發(fā)明不局限于上述最佳實(shí)施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下都可得出其他各種形式的產(chǎn)品，但不論在其形狀或結(jié)構(gòu)上作任何變化，凡是具有與本申請(qǐng)相同或相近似的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3