本申請是申請日為2012年2月27日、申請?zhí)枮?01280010874.4(國際申請?zhí)枮閜ct/jp2012/054841)、發(fā)明名稱為“惡性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制用藥物”的發(fā)明專利申請的分案申請。本發(fā)明涉及將以利尿鈉肽受體gc-a及gc-b激動劑為代表的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑(vascularendothelialintracellularcgmpenhancer)作為有效成分的、包括癌在內(nèi)的惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制用藥物組合物。
背景技術(shù)：
：：以癌為代表的惡性腫瘤是基于細(xì)胞的異常增殖的疾病，作為惡性腫瘤的最大的特征是向周邊組織的浸潤和向其它臟器的轉(zhuǎn)移。自古以來已知惡性腫瘤患者的死因很多并不是原發(fā)病灶的增大，而是伴隨腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)轉(zhuǎn)移的多臟器衰竭，惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的控制近年來也未實現(xiàn)，是癌治療全體中的最重要課題之一。上皮系惡性腫瘤(癌)的轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是通過基于上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelialtomesenchymaltransition、以下稱為“emt”)癌細(xì)胞獲得運(yùn)動能力及浸潤能力、向周邊組織的浸潤、向血管或淋巴管的移動和侵入、向遠(yuǎn)組織的定植和轉(zhuǎn)移病灶的形成等多種生理現(xiàn)象而引起的，近年來特別是emt受到注目。在正常的上皮組織中，細(xì)胞彼此介由粘接分子緊密地接合而形成組織，但是emt是隨著惡變的進(jìn)行，細(xì)胞彼此的粘接能力喪失而向獲得游走能力·運(yùn)動能力的細(xì)胞轉(zhuǎn)換的現(xiàn)象。在emt的過程中，由于e鈣粘附蛋白的表達(dá)減少，n鈣粘附蛋白的表達(dá)亢進(jìn)，所以可以認(rèn)為n鈣粘附蛋白/e鈣粘附蛋白的基因表達(dá)比為emt的指標(biāo)。通過該emt獲得游走能力·運(yùn)動能力的癌細(xì)胞由于能夠進(jìn)行從原發(fā)病灶向周邊組織的浸潤、向血管或淋巴管的侵入，所以成為癌轉(zhuǎn)移的觸發(fā)(非專利文獻(xiàn)1：thomasr.geigeretal.,biochim.biophys.acta.、2009年、293-308頁)。此外，在上皮系以外的惡性腫瘤(肉瘤等)中，也是惡變而獲得運(yùn)動能力·浸潤能力的腫瘤細(xì)胞向血管等侵入，經(jīng)由向遠(yuǎn)組織的血管內(nèi)皮的定植、向組織內(nèi)的浸潤，從而形成轉(zhuǎn)移病灶。這樣，惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移是以與腫瘤細(xì)胞的增殖完全不同的機(jī)制進(jìn)行的，通過現(xiàn)有的具有細(xì)胞毒效果或細(xì)胞增殖抑制活性的藥劑無法充分抑制。此外，這些藥劑一般存在對正常組織的不良影響，在長期給予的情況下存在副作用嚴(yán)重的問題。為了控制惡性腫瘤轉(zhuǎn)移，通常需要長期的給予，所以期望發(fā)現(xiàn)·開發(fā)用于抑制轉(zhuǎn)移的安全性高的藥劑。細(xì)胞內(nèi)的cgmp作為介導(dǎo)生物體的信號傳導(dǎo)的第二信使被廣泛所知，特別是在血管平滑肌的控制中被經(jīng)常研究。一般已知血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)cgmp的上升會使平滑肌松弛，血壓下降，作為具有這種作用的藥劑的代表性例子，可列舉出利尿鈉肽。已知被稱為利尿鈉肽的肽有心鈉肽(anp)、腦鈉肽(bnp)及c型利尿鈉肽(cnp)，這些肽通過在細(xì)胞內(nèi)與具有鳥苷酸環(huán)化酶結(jié)構(gòu)域的膜跨受體特異性地結(jié)合，使細(xì)胞內(nèi)的cgmp上升，從而表現(xiàn)出各種生理活性。已知作為這種受體有利尿鈉肽受體gc-a(別名：npr-a)和利尿鈉肽受體gc-b(別名：npr-b)這2種，anp和bnp與gc-a特異性結(jié)合，cnp與gc-b特異性結(jié)合(非專利文獻(xiàn)2：silverma,curr.opin.nephrol.hypertens.,2006年,15卷,14-21頁)。anp是在心房細(xì)胞中產(chǎn)生并分泌的具有由28個氨基酸構(gòu)成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的肽，在腎臟中顯示利尿作用，在血管中松弛·擴(kuò)張血管平滑肌。anp進(jìn)一步對腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)及血管加壓素產(chǎn)生拮抗作用。這些作用綜合地通過血壓的下降、體液量的降低等向減輕心臟負(fù)擔(dān)的方向起作用。bnp是從腦中發(fā)現(xiàn)的具有由32個氨基酸構(gòu)成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的肽，但在之后的研究中判明與腦相比主要在心肌細(xì)胞中產(chǎn)生并分泌，具有與anp同樣的作用。anp和bnp與gc-a特異性地結(jié)合，促進(jìn)cgmp的產(chǎn)生而表現(xiàn)出上述的作用(非專利文獻(xiàn)3：yoshibayashim.etal,eur.j.endocrinol.,1996年、135卷，265-268頁)。實際上，在充血性心力衰竭等中伴隨著心房充盈壓的上升anp的分泌得到促進(jìn)，通過上述的作用而起到減輕充血性心力衰竭等癥狀的作用，人型anp(hanp)在日本作為急性心力衰竭治療藥在臨床上使用。此外，在心力衰竭患者中bnp分泌也亢進(jìn)，通過上述的作用而起到緩解伴隨心力衰竭的諸癥狀的作用，人型bnp(hbnp)在美國等中作為急性心力衰竭治療藥被認(rèn)可。已知anp或bnp除了利尿作用、血管擴(kuò)張作用等血壓調(diào)整作用以外還具有各種生理活性，例如報道了anp對由細(xì)菌感染引起的炎癥或伴隨其的內(nèi)皮保護(hù)功能不全具有作用(例如非專利文獻(xiàn)4：xungj.,etal,j.appl.physiol.(2011年)、110卷、1號、213-224頁、等)。關(guān)于惡性腫瘤，對anp在實驗中抑制癌細(xì)胞的增殖的效果有vesely等作的許多報道(例如，非專利文獻(xiàn)5(veselybaetal,eurjclininvest.(2005)、35卷、60-69頁)等)。在這些報道中，指出除了anp以外，長效利尿鈉肽(longactingnatriureticpeptide)、血管舒張因子(vesseldilator)及利鉀尿肽(kalliureticpeptide)等認(rèn)為由其氨基酸序列來看難以與利尿鈉肽受體gc-a結(jié)合的肽具有與anp同樣、或比其更強(qiáng)的癌細(xì)胞增殖抑制活性，此外指出，bnp不顯示這樣的增殖抑制作用。由此認(rèn)為，他們報道的anp的癌細(xì)胞增殖抑制作用并非基于對gc-a的激動劑活性。此外，包括vesely等的報道在內(nèi)，關(guān)于anp或bnp的與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有關(guān)的作用也是未知的。已知cnp是從豬的腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)的生理活性肽，在哺乳類的體內(nèi)，存在由22個氨基酸構(gòu)成的cnp-22、和其n末端側(cè)延長而由53個氨基酸構(gòu)成的cnp-53。cnp起初被認(rèn)為作為腦神經(jīng)肽發(fā)揮功能，但通過之后的研究判明在末梢也存在，確認(rèn)在骨的生長過程中發(fā)揮重要的作用。迄今為止，確認(rèn)了cnp主要在骺板的軟骨組織中控制軟骨細(xì)胞的分化或增殖，期待作為以軟骨發(fā)育不全癥為首的侏儒癥的治療藥的可能性。cnp在除了骨·軟骨以外中也已知有各種生理活性，對于血管，已知有抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖、或促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖等作用。然而，關(guān)于cnp對惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的作用是未知的。此外，作為其它的使細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升的藥劑，已知有檸檬酸西地那非那樣的cgmp的分解酶即磷酸二酯酶(pde)5的抑制劑、硝酸甘油那樣的no供給劑、精氨酸那樣的enos底物、分解anp或bnp的中性肽鏈內(nèi)切酶(nep)的抑制劑等。此外，已知在消化器官中有作用的鳥苷酸環(huán)化酶c(gc-c)的激動劑即鳥苷素(guanylin)、尿鳥苷素(uroguanylin)等也會使細(xì)胞內(nèi)的cgmp濃度上升。關(guān)于這些藥劑，也已知與包括炎癥反應(yīng)、過敏反應(yīng)的各種生理現(xiàn)象有關(guān)，近年來，也存在一些與腫瘤細(xì)胞的控制有關(guān)的報道，但是對于作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞并在實際的生理條件下抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是未知的。例如，關(guān)于西地那非，也有對惡性腫瘤具有抑制效果的報道((例如，非專利文獻(xiàn)6：dasetal.,proc.natl.acad.sci.(2010年)、107卷、42號、18202-18207頁等)，但另一方面，也有對腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移沒有影響的報道(例如，非專利文獻(xiàn)7：dianc.n.,etal,journalof.urology(2003年)、170卷(3)、994-997頁)。關(guān)于gc-c，已知與結(jié)腸直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)亢進(jìn)或因癌細(xì)胞而產(chǎn)生mmp9有關(guān)(例如，非專利文獻(xiàn)8：lubbew.j.,etal、cancerres.(2009年)、69卷、8號、3529-3536頁)等。關(guān)于no，有阻礙腫瘤細(xì)胞向經(jīng)lps處理的分離的大鼠毛細(xì)血管后微靜脈粘接的報道(非專利文獻(xiàn)9：kongl.,etal、clinexp.metastasis(1996年)、14卷、3號、335-343頁)，但其是使用了lps這樣的強(qiáng)炎癥誘導(dǎo)劑的實驗，認(rèn)為與實際的腫瘤轉(zhuǎn)移中的生理現(xiàn)象相差懸殊。此外，在之后十幾年間沒有追隨其的報道，關(guān)于對生理性腫瘤轉(zhuǎn)移的作用并不清楚。然而，關(guān)于作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移是未知的?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1：thomasr.geigeretal.,biochim.biophys.acta.、2009年、293-308頁非專利文獻(xiàn)2：silverma,curr.opin.nephrol.hypertens.,2006年，15卷，14-21頁非專利文獻(xiàn)3：yoshibayashim.etal,eur.j.endocrinol.,1996年、135卷，265-268頁非專利文獻(xiàn)4：xungj.,etal,j.appl.physiol.(2011年)、110卷、1號、213-224頁非專利文獻(xiàn)5：veselybaetal,eurjclininvest.(2005)、35卷、60-69頁非專利文獻(xiàn)6：dasetal.,proc.natl.acad.sci.(2010年)、107卷、42號、18202-18207頁非專利文獻(xiàn)7：dianc.n.,etal,journalof.urology(2003年)、170卷(3)、994-997頁非專利文獻(xiàn)8：lubbew.j.,etal、cancerres.(2009年)、69卷、8號、3529-3536頁非專利文獻(xiàn)9：kongl.,etal、clinexp.metastasis(1996年)、14卷、3號、335-343頁技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的課題是提供用于抑制以癌為首的惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的安全性高的藥物。用于解決問題的方案本發(fā)明人等對能夠抑制癌的轉(zhuǎn)移的藥劑進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利尿鈉肽受體gc-a激動劑通過具有抑制癌細(xì)胞的emt、以及抑制癌細(xì)胞的游走能力、運(yùn)動能力、浸潤能力等與轉(zhuǎn)移有關(guān)的細(xì)胞活性的獲得的作用，特異性誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步對宿主側(cè)的因子即血管內(nèi)皮細(xì)胞起作用，從而抑制癌的植入(implantation)轉(zhuǎn)移等。進(jìn)而，通過實際的癌患者中的臨床研究發(fā)現(xiàn)，在癌患者的癌切除術(shù)中，在術(shù)后3天給予血壓不發(fā)生變動的低用量的hanp的患者組中癌的復(fù)發(fā)被顯著地抑制。此外，在腫瘤細(xì)胞的小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中，不僅對于表達(dá)gc-a的腫瘤細(xì)胞，對于b6黑色素瘤那樣的不表達(dá)gc-a的腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，也通過gc-a激動劑的給予確認(rèn)到顯著的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制效果。進(jìn)而，在使用了內(nèi)皮組織特異性敲除gc-a基因的小鼠的該轉(zhuǎn)移試驗中，確認(rèn)到與野生型小鼠相比顯著的腫瘤轉(zhuǎn)移的增大，相反在使用了使gc-a基因在內(nèi)皮細(xì)胞中過量表達(dá)的小鼠的該轉(zhuǎn)移試驗中，確認(rèn)到與野生型小鼠相比顯著的腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制，暗示了內(nèi)皮組織中表達(dá)的gc-a介導(dǎo)的信號在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮核心作用，進(jìn)而，對于該轉(zhuǎn)移試驗，即使給予cnp那樣的gc-b激動劑、檸檬酸西地那非那樣的pde5抑制劑等通過gc-a以外的機(jī)制使細(xì)胞內(nèi)cgmp上升的藥劑，也觀察到顯著的轉(zhuǎn)移抑制效果?；谶@些見解進(jìn)一步反復(fù)研究，從而完成本發(fā)明。即，利尿鈉肽受體gc-a激動劑對于表達(dá)gc-a的腫瘤細(xì)胞，通過直接作用于腫瘤細(xì)胞并抑制以emt為首的游走能力及浸潤能力而顯示抑制轉(zhuǎn)移的效果(直接效果)。除此以外，像gc-a激動劑、gc-b激動劑或pde5抑制劑那樣利用細(xì)胞內(nèi)cgmp的上升而引起信號傳導(dǎo)的物質(zhì)還具有以下效果(間接效果)：通過作用于血管或淋巴管的內(nèi)皮細(xì)胞，從而與腫瘤細(xì)胞中的gc-a表達(dá)的有無無關(guān)地阻礙腫瘤細(xì)胞向血管內(nèi)皮的粘接·浸潤，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。由于在內(nèi)皮細(xì)胞中通常表達(dá)gc-a、gc-b，所以該間接效果不論腫瘤的種類均能夠抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。本發(fā)明提供以下的發(fā)明。本發(fā)明涉及一種用于抑制或預(yù)防癌等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的藥物，其含有至少一種使血管內(nèi)皮的細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升的藥劑(稱為“血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑”)(例如，利尿鈉肽受體gc-a激動劑)作為有效成分。此外，本發(fā)明涉及一種預(yù)防或抑制癌等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的方法，其中，包括對需要控制癌等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的患者給予有效量的至少一種血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑(例如，利尿鈉肽受體gc-a激動劑)。此外，本發(fā)明進(jìn)一步涉及至少一種血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑(例如，利尿鈉肽受體gc-a激動劑)，其用于預(yù)防或抑制癌等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的用途。在本發(fā)明所提供的藥物、治療方法等(以下，稱為“藥物等”。)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑優(yōu)選為利尿鈉肽受體gc-a激動劑、利尿鈉肽受體gc-b激動劑、gc-c激動劑、nep抑制劑、pde5抑制劑、no供給劑、enos活化劑、cgmp類似物等具有作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞而使其細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升的活性的物質(zhì)。更優(yōu)選為利尿鈉肽受體gc-a激動劑、利尿鈉肽受體gc-b激動劑、nep抑制劑或pde5抑制劑，進(jìn)一步優(yōu)選為利尿鈉肽受體gc-a激動劑。本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑至少具有作用于血管或淋巴管的內(nèi)皮細(xì)胞而使其細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升的活性，但優(yōu)選在給生物體給予的情況下使末梢血管的內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升。在本發(fā)明所提供的藥物等中，利尿鈉肽受體gc-a激動劑優(yōu)選為選自以下的(a1)到(a6)中的任一種或其藥理上可接受的鹽、且對利尿鈉肽受體gc-a具有激動劑活性的物質(zhì)；(a1)心鈉肽、(a2)腦鈉肽、(a3)包含(a1)或(a2)的活性片段的物質(zhì)、(a4)在(a1)到(a3)中的任一氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或附加1～數(shù)個氨基酸而得到的突變體、(a5)(a1)到(a4)中任一種的衍生物、以及(a6)(a1)到(a5)中任一種的修飾體。其中，作為利尿鈉肽受體gc-a激動劑的更優(yōu)選的方式，可分別列舉出以下的物質(zhì)等。作為(a1)心鈉肽，優(yōu)選由序列表的序列號1或2中記載的氨基酸序列構(gòu)成的肽。此外，作為(a2)腦鈉肽，優(yōu)選由序列表的序列號3、4或5中記載的氨基酸序列構(gòu)成的肽。(a3)活性片段優(yōu)選為具有序列表的序列號6的氨基酸序列的肽，更優(yōu)選為由序列表的序列號1或2的7位到27位的氨基酸序列、序列號3或4的10位到30位的氨基酸序列、或序列表的序列號5的23位到43位的氨基酸序列構(gòu)成的肽。(a4)突變體優(yōu)選為在序列表的序列號1到5中任一項中記載的氨基酸序列中，在除了序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸的1處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加1個～數(shù)個氨基酸而得到的肽，更優(yōu)選為(i)在序列號1或2的氨基酸序列的1位到6位及28位中的任一處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽、(ii)在序列號3或4的氨基酸序列的1到9位、31位及32位中的任一處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽、或(iii)在序列號5的氨基酸序列的1位到22位、44位及45位中的任一處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽。(a5)衍生物優(yōu)選為包含序列表的序列號1到5中的任一氨基酸序列、或上述的(a3)活性片段的物質(zhì)，更優(yōu)選為進(jìn)一步包含免疫球蛋白fc部分、血清白蛋白、及來自生長素釋放肽的c末端的部分序列中的至少一種的物質(zhì)。(a6)修飾體優(yōu)選為包含序列表的序列號1到5中的任一氨基酸序列、且在其氨基酸序列中的相當(dāng)于序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸的至少一個中接受化學(xué)修飾的物質(zhì)，更優(yōu)選為通過結(jié)合peg、pva等制藥上使用的高分子聚合物進(jìn)行化學(xué)修飾而得到的物質(zhì)。此外，在本發(fā)明所提供的藥物等中，利尿鈉肽受體gc-a激動劑也可以是抗gc-a抗體。這樣的抗gc-a抗體也可以使用與gc-a特異性結(jié)合、且對gc-a具有激動劑活性的抗體。作為這樣的抗體，可以是多克隆抗體，也可以是單克隆抗體，但優(yōu)選為人源化單克隆抗gc-a抗體、或人型(humantype)單克隆抗gc-a抗體。在本發(fā)明所提供的藥物等中，利尿鈉肽受體gc-b激動劑優(yōu)選為選自以下的(b1)到(b5)中的任一種或其藥理上可接受的鹽、且對利尿鈉肽受體gc-b具有激動劑活性的物質(zhì)；(b1)c型利尿鈉肽、(b2)包含(b1)的活性片段的物質(zhì)、(b3)在(b1)或(b2)的氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或附加1～數(shù)個氨基酸而得到的突變體、(b4)(b1)到(b3)中任一種的衍生物、以及(b5)(b1)到(b4)中任一種的修飾體。其中，作為利尿鈉肽受體gc-b激動劑的進(jìn)一步優(yōu)選的方式，可分別列舉出以下的物質(zhì)等。(b1)c型利尿鈉肽優(yōu)選為由序列表的序列號7(hcnp-22)、序列號8(hcnp-53)、序列號9(來自雞的cnp)或序列號10(來自青蛙的cnp)中記載的氨基酸序列構(gòu)成的肽。(b2)活性片段優(yōu)選為具有序列表的序列號11的氨基酸序列的物質(zhì)，更優(yōu)選活性片段為由序列表的序列號7的6位到22位的氨基酸序列(hcnp6-22)構(gòu)成的物質(zhì)。(b3)突變體為在序列表的序列號7到10中任一項記載的氨基酸序列中，在除了序列號11所表示的氨基酸以外的氨基酸的1～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加1～數(shù)個氨基酸而得到的物質(zhì)，更優(yōu)選突變體為(i)在序列號7、9或10的氨基酸序列的1位到5位中的任一處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽、或(ii)在序列號8的氨基酸序列的1位到36位中的任一處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽。(b4)衍生物優(yōu)選為包含序列表的序列號7到11中的任一氨基酸序列的物質(zhì)、或進(jìn)一步包含免疫球蛋白fc部分、血清白蛋白、及來自生長素釋放肽的c末端的部分序列中的至少一種的物質(zhì)。(b5)修飾體優(yōu)選為包含序列表的序列號7到10中的任一氨基酸序列、且在其的相當(dāng)于序列號11所表示的氨基酸以外的氨基酸的至少一個中接受化學(xué)修飾的物質(zhì)，更優(yōu)選修飾體為通過附加制藥上使用的高分子聚合物進(jìn)行化學(xué)修飾而得到的物質(zhì)。此外，在本發(fā)明所提供的藥物等中，利尿鈉肽受體gc-b激動劑也可以是抗gc-b抗體。這樣的抗gc-b抗體也可以采用與gc-b特異性結(jié)合、并對gc-b具有激動劑活性的物質(zhì)。作為這樣的抗體，可以是多克隆抗體，也可以是單克隆抗體，但優(yōu)選為人源化單克隆抗gc-b抗體、或人型單克隆抗gc-b抗體。作為本發(fā)明的藥物等中使用的pde5抑制劑，可以使用西地那非、伐地那非、他達(dá)拉非、烏地那非、米羅那非等許多的化合物、或它們的藥理上可接受的鹽，但優(yōu)選為檸檬酸西地那非、鹽酸伐地那非、或他達(dá)拉非。此外，在本發(fā)明所提供的藥物等中，利尿鈉肽受體gc-a激動劑等血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑可以調(diào)節(jié)為不使患者的血壓、心律或尿量中的至少一項目發(fā)生較大變動的程度的用量進(jìn)行給予，作為其用量，例如對于利尿鈉肽受體gc-a激動劑或gc-b激動劑而言，可以為0.1μg/kg/分鐘以下的連續(xù)給予，優(yōu)選為0.05μg/kg/分鐘以下的連續(xù)給予，更優(yōu)選采用0.025μg/kg/分鐘以下的連續(xù)給予。連續(xù)給予時的給予期間通常為1天以上，優(yōu)選為1到數(shù)天。此外，本發(fā)明所提供的藥物等，可以對接受惡性腫瘤的切除手術(shù)的患者，在與該手術(shù)對應(yīng)的期間(例如，從該切除手術(shù)前一天到術(shù)后數(shù)天)給予的形態(tài)中利用。作為此時的給予方法，例如為將利尿鈉肽受體gc-a激動劑或利尿鈉肽受體gc-b激動劑以0.1μg/kg/分鐘以下從手術(shù)前到術(shù)后一定期間連續(xù)給予的方法，優(yōu)選為將由序列號1到5、7到10中任一項中記載的氨基酸序列構(gòu)成的肽以0.05μg/kg/分鐘以下的用量從腫瘤切除手術(shù)前到術(shù)后一定期間(優(yōu)選為5天以下)的期間連續(xù)地給予的方法，更優(yōu)選為將由序列號1的氨基酸序列構(gòu)成的肽以0.025μg/kg/分鐘的用量從腫瘤切除手術(shù)前到術(shù)后3天連續(xù)地給予的方法。此外，在本發(fā)明所提供的藥物等中，也包括組合2種以上的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑作為有效成分進(jìn)行給予(可以配合到單一的制劑中，也可以同時或在不同的時期給予分別制劑化而得到的制劑)那樣的方式。在這樣的組合中，優(yōu)選為利尿鈉肽受體gc-a激動劑或利尿鈉肽受體gc-b激動劑與pde5抑制劑或no供給劑的組合，更優(yōu)選為由序列號1、序列號3、序列號7或序列號7的氨基酸號6到22所組成的氨基酸序列構(gòu)成的肽與西地那非的組合。此外，本發(fā)明提供通過血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑(例如，利尿鈉肽受體gc-a激動劑)的給予而作用于患者的體內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，并呈現(xiàn)出抑制腫瘤細(xì)胞的向血管內(nèi)皮組織的粘接及浸潤的藥理作用那樣的藥物或治療方法等。進(jìn)而，本發(fā)明所提供的藥物還提供一種藥物，其特征在于，含有利尿鈉肽gc-a激動劑作為血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑，對可能患有上皮系惡性腫瘤的對象(優(yōu)選為在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)gc-a的對象)進(jìn)行給予。此時，除了對血管內(nèi)皮的作用以外，對表達(dá)gc-a的腫瘤細(xì)胞也顯示出抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力獲得的藥理作用，從而可以期待協(xié)同效果。作為這樣的對腫瘤細(xì)胞的藥理作用，為選自抑制癌細(xì)胞的emt、阻礙癌細(xì)胞獲得游走能力、阻礙癌細(xì)胞獲得運(yùn)動能力、抑制癌細(xì)胞的浸潤及特異性誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡中的至少一種，更優(yōu)選顯示多種作用。發(fā)明的效果本發(fā)明所述的以利尿鈉肽受體gc-a激動劑等血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑作為有效成分的用于抑制或預(yù)防惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的藥物具有通過作用于淋巴管或血管的內(nèi)皮細(xì)胞而抑制腫瘤細(xì)胞的向血管內(nèi)皮的粘接、浸潤，從而不論腫瘤的種類都能夠抑制或預(yù)防轉(zhuǎn)移那樣的優(yōu)異的效果。特別是關(guān)于作為血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑含有利尿鈉肽受體gc-a激動劑的藥物，對表達(dá)gc-a的腫瘤細(xì)胞顯示抑制emt、游走活性、浸潤活性等與轉(zhuǎn)移相關(guān)的各過程的效果，發(fā)揮能夠在多個階段抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移那樣的特別的效果。通過這樣的本發(fā)明的優(yōu)異效果，不僅能夠預(yù)防惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移或利用腫瘤切除術(shù)治療后的復(fù)發(fā)，也能夠有效地抑制、預(yù)防難以切除的惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移。進(jìn)而，由于hanp、hbnp、西地那非等已經(jīng)在臨床上給多數(shù)患者給予，確認(rèn)了安全性，所以本發(fā)明所提供的藥物成為副作用風(fēng)險少、且具有優(yōu)異的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制作用的藥物。附圖說明圖1是表示對a549細(xì)胞的由利尿鈉肽(hanp(●)、hbnp(▼)、hcnp(○))刺激引起的細(xì)胞內(nèi)cgmp水平的變動的圖表。圖表的各點中的例數(shù)為n＝5～7。圖2是通過培養(yǎng)48小時為止的活細(xì)胞數(shù)表示在各濃度的hanp(圖2的a)、hbnp(圖2的b)、hcnp(圖2的c)存在下及非存在下的a549細(xì)胞的增殖狀況的圖表。各利尿鈉肽的濃度為對照(0m)(○)、1×10-9m(●)、1×10-8m(δ)、1×10-7m(□)及1×10-6m(▼)。圖表的各點中的例數(shù)為n＝10～12。圖3是表示在1μmhanp存在下(圖3的c)及非存在下(圖3的b)的由tgf-β1刺激引起的a549細(xì)胞的形態(tài)變化的顯微鏡照片(圖3的a：無刺激的a549細(xì)胞(對照)、圖3的b：tgf-β1(1ng/ml)、圖3的c：hanp(1μm)+tgf-β1(1ng/ml))。圖4是以mrna水平進(jìn)行表示的、在1μmhanp存在下及非存在下分別以0.25、0.5及1.0ng/mltgf-β1刺激a549細(xì)胞時的作為emt的指標(biāo)的各因子(分別為圖4的a：vegf-a、圖4的b：e-鈣粘附蛋白、圖4的c：n-鈣粘附蛋白、圖4的d：pdgf-b、圖4的e：tnf-α及圖4的f：il-6)的基因表達(dá)的圖表。圖表中，橫軸表示tgf-β1的濃度，縱軸表示mrna水平。此外，圖表中，在1μmhanp非存在下的各基因的表達(dá)以灰色的棒表示，在hanp存在下的各基因的表達(dá)以黑色的棒表示。圖5是表示在1μmhanp存在下及非存在下分別以0.25、0.5及1.0ng/mltgf-β1刺激a549細(xì)胞時的e-鈣粘附蛋白與n-鈣粘附蛋白的表達(dá)比率(n-cad/e-cad)的圖表。圖表的橫軸表示tgf-β1的濃度，縱軸表示e-鈣粘附蛋白與n-鈣粘附蛋白的表達(dá)比率(n-cad/e-cad)。在1μmhanp非存在下的e-鈣粘附蛋白與n-鈣粘附蛋白的表達(dá)比率(n-cad/e-cad)以灰色的棒表示，在hanp存在下的e-鈣粘附蛋白與n-鈣粘附蛋白的表達(dá)比率(n-cad/e-cad)以黑色的棒表示。圖6的a及圖6的b是表示在使用tgf-β1作為游走激發(fā)物質(zhì)的博伊登室試驗(boydenchamberassay)中在hanp的存在下及非存在下的a549細(xì)胞的游走能力的圖。圖6的a是各組中的試驗20小時后的細(xì)胞培養(yǎng)池(cellcultureinsert)下表面的細(xì)胞的顯微鏡照片(圖6的a之a(chǎn)：對照組、圖6的a之b：tgf-β1組、圖6的a之c：tgf-β1+hanp組)。圖6的b是表示各組中的附著在試驗20小時后的細(xì)胞培養(yǎng)池下表面的細(xì)胞數(shù)的圖表。圖7是傷口愈合分析(woundhealingassay)中的剛負(fù)傷后的培養(yǎng)皿的傷口部分的顯微鏡照片(圖7的a)、以及對照組(圖7的b)、tgf-β1組(圖7的c)及tgf-β1+hanp組(圖7的d)各組的負(fù)傷24小時后的培養(yǎng)皿的傷口部分的顯微鏡照片。圖8是表示傷口愈合分析中的對照組、tgf-β1組及tgf-β1+hanp組各組的負(fù)傷24小時后的移動率的圖表。圖9的a及圖9的b表示在使用tgf-β1作為游走激發(fā)物質(zhì)并在上層形成有基質(zhì)膠(matrigel)層的博伊登室試驗中在hanp的存在下及非存在下的a549細(xì)胞的浸潤能力。圖9的a是各組中的試驗40小時后的細(xì)胞培養(yǎng)池下表面的細(xì)胞的顯微鏡照片(圖9的a之a(chǎn)：對照組、圖9的a之b：tgf-β1組、圖9的a之c：tgf-β1+hanp組)。圖9的b是表示各組中的附著在試驗40小時后的細(xì)胞培養(yǎng)池下表面的細(xì)胞數(shù)的圖表。圖10是表示對于各種癌細(xì)胞(圖10的a：a549細(xì)胞、圖10的b：h460細(xì)胞、圖10的c：h520細(xì)胞、圖10的d：h358細(xì)胞)的依賴于hanp的濃度(1、5、10μm)的凋亡誘導(dǎo)的圖表。圖11是表示順鉑的各濃度下的由1μmhanp引起的對各種癌細(xì)胞(圖11的a：a549細(xì)胞、圖11的b：h460細(xì)胞、圖11的c：h520細(xì)胞、圖11的d：h358細(xì)胞)的凋亡誘導(dǎo)的圖表。圖表的橫軸表示順鉑的濃度。各圖表中，灰色是順鉑(cddp)單獨組，黑色是1μmhanp組。圖12是表示順鉑的各濃度下的由10μmhanp引起的對各種癌細(xì)胞(圖12的a：a549細(xì)胞、圖12的b：h460細(xì)胞、圖12的c：h520細(xì)胞、圖12的d：h358細(xì)胞)的凋亡誘導(dǎo)的圖表。圖表的橫軸表示順鉑的濃度。各圖表中，灰色是順鉑(cddp)單獨組，黑色是10μmhanp組。圖13是表示vegf、及hanp對鋪滿培養(yǎng)的huvec細(xì)胞的細(xì)胞間粘接的作用的顯微鏡照片(圖13的左上：對照、右上：添加vegf的huvec細(xì)胞、左下：添加hanp的huvec細(xì)胞、右下：添加vegf及hanp的huvec細(xì)胞)。圖13中，以圓或橢圓狀染色(灰色(實際的彩色照片中為藍(lán)色))的地方是被topro3染色的細(xì)胞核。在細(xì)胞外緣附近以帶狀染色的地方(細(xì)胞核以外的帶狀的染色部分：灰色(實際的彩色照片中(綠色))是被免疫染色的ve-鈣粘附蛋白，表示細(xì)胞間粘接的狀況。圖14是以癌的進(jìn)展程度(圖14的a：1a期(stage1a)、圖14的b：1b期(stage1b)、圖14的c：2期(stage2)、圖14的d：3期(stage3))表示通過kaplan-meier法(采用癌的復(fù)發(fā)作為監(jiān)測變量(censorvariable))解析肺癌切除術(shù)患者的對照組及hanp組中的術(shù)后早期(2年以內(nèi))無復(fù)發(fā)生存率(累計生存率)的結(jié)果的圖表。平均觀察期間為：hanp組：21.8個月、對照組：22.0個月。圖14的a、圖14的b、圖14的c及圖14的d中，●、■、▲及◆分別表示對照組。圖表上沒有表示標(biāo)繪意味著沒有發(fā)生死亡、復(fù)發(fā)等事件。圖15是分別表示hanp給予組(○)(n＝23)及對照組(●)(n＝21)的從癌切除術(shù)前到術(shù)后4天為止的舒張期血壓(圖15的a)、收縮期血壓(圖15的b)、心律(圖15的c)及尿量(圖15的d)的圖表。圖16是熒光標(biāo)記的a549細(xì)胞的小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的腫瘤細(xì)胞注入8周后的肺的熒光顯微鏡照片。圖16的a是對照組(給予28天生理鹽水)的照片，圖16的b是anp給予組(hanp：0.5μg/kg/分鐘、給予28天)的照片。圖17是表示gfp標(biāo)記的a549細(xì)胞的小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的腫瘤細(xì)胞注入8周后的通過向肺的轉(zhuǎn)移而形成的結(jié)節(jié)數(shù)的圖表?？v軸表示肺中形成的結(jié)節(jié)數(shù)。左邊的棒為對照組(給予28天生理鹽水)，右邊的棒為anp給予組(hanp：0.5μg/kg/分鐘、給予28天)。圖18是小鼠黑色素瘤b16-f10細(xì)胞的小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的腫瘤細(xì)胞注入2周后的肺的顯微鏡照片。黑色部分為通過轉(zhuǎn)移的黑色素瘤形成的結(jié)節(jié)(轉(zhuǎn)移病灶)。圖18的a為對照組(生理鹽水)的照片，圖18的b為anp給予組(hanp：0.5μg/kg/分鐘)的照片。圖19是表示小鼠黑色素瘤b16-f10細(xì)胞的小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的腫瘤細(xì)胞注入2周后的通過向肺的轉(zhuǎn)移而形成的結(jié)節(jié)數(shù)的圖表?？v軸表示每一個體的肺中形成的結(jié)節(jié)數(shù)。各棒自左向右為對照組(給予生理鹽水)、anp給予組(hanp：0.5μg/kg/分鐘、連續(xù)給予)、bnp給予組(小鼠bnp：0.5μg/kg/分鐘、連續(xù)給予)、cnp給予組(hcnp-22：2.5μg/kg/分鐘、連續(xù)給予)及西地那非給予組(檸檬酸西地那非：20mg/kg、腹腔內(nèi)給予)。圖20是表示小鼠黑色素瘤b16-f10細(xì)胞的向gc-a敲除小鼠的尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的腫瘤細(xì)胞注入2周后的通過向肺的轉(zhuǎn)移而形成的結(jié)節(jié)數(shù)的圖表?？v軸表示每一個體的肺中形成的結(jié)節(jié)數(shù)。左邊的棒表示野生型小鼠的結(jié)果，中央的棒表示全身性gc-a敲除小鼠的結(jié)果，右邊的棒表示內(nèi)皮特異性gc-a敲除小鼠的結(jié)果。圖21是表示小鼠黑色素瘤b16-f10細(xì)胞的向血管內(nèi)皮特異性gc-a過量表達(dá)小鼠的尾靜脈注入試驗中的腫瘤細(xì)胞注入2周后的通過向肺的轉(zhuǎn)移而形成的結(jié)節(jié)數(shù)的圖表?？v軸表示每一個體的肺中形成的結(jié)節(jié)數(shù)。右邊的棒表示血管內(nèi)皮特異性gc-a過量表達(dá)小鼠的結(jié)果，左邊的棒表示野生型的結(jié)果。具體實施方式<血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑>在本發(fā)明中，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑是指至少具有如下活性(稱為細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)活性)的藥劑，所述活性為：作用于生物體內(nèi)的淋巴管或血管的內(nèi)皮細(xì)胞使其細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升而引起的信號傳導(dǎo)亢進(jìn)的活性。由于血管內(nèi)皮細(xì)胞的cgmp也向血中釋放，所以在生物體內(nèi)，該增強(qiáng)活性不僅可以作為血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的cgmp濃度的上升也可以作為血中的cgmp濃度的上升進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞內(nèi)的cgmp通過鳥苷酸環(huán)化酶(gc，作為gc，有g(shù)c-a、gc-b那樣的跨膜受體型和可溶型(sgc))產(chǎn)生，所以通過引起gc的活化而上升。此外，由于細(xì)胞內(nèi)的cgmp通過磷酸二酯酶5(phosphodiesterase5，(pde5))進(jìn)行分解，所以通過使例如西地那非那樣的pde5抑制劑發(fā)揮作用也可引起細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度的上升。進(jìn)而，通過追加外來性的cgmp或其類似物，也可以介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升而使信號亢進(jìn)。本發(fā)明中的細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)活性只要是直接、或間接地介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升而使信號傳導(dǎo)亢進(jìn)的活性，則不論其機(jī)制如何均可，但優(yōu)選為gc-a的活化、gc-b的活化及pde5的阻礙，更優(yōu)選為gc-a的活化作用。作為跨膜受體型gc的利尿鈉肽受體gc-a、利尿鈉肽受體gc-b，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中確認(rèn)到表達(dá)。因此，針對它們的激動劑即anp或cnp等利尿鈉肽可以作為本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑使用。特別是gc-a激動劑不僅具有對血管內(nèi)皮的作用，而且對于在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)gc-a的上皮系的惡性腫瘤也具有抑制腫瘤細(xì)胞的emt、游走活性等的活性，對于上皮系惡性腫瘤，發(fā)揮良好的轉(zhuǎn)移抑制作用。此外，各種利尿鈉肽被中性肽鏈內(nèi)切酶(neutralendopeptidase)(nep)切斷，活性消失。因此，nep抑制劑也可以作為本發(fā)明的細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑使用。此外已知，已知主要在消化器官中作用的針對gc-c的激動劑即鳥苷素、尿鳥苷素等也具有細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)活性。作為可溶型gc，已知有sgcα、sgcβ等，它們通過no(一氧化氮，nitricoxide)而活化。因此，關(guān)于硝酸甘油等no供給劑、在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的no產(chǎn)生酶即enos的底物(精氨酸等)或活化劑，也可以作為本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑使用。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移大多通過向末梢的血管或淋巴管的內(nèi)皮組織粘接而達(dá)成。因此，本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑優(yōu)選為在給生物體給予時能夠使末梢血管的內(nèi)皮細(xì)胞中的cgmp濃度上升、或使末梢血的cgmp濃度上升的藥劑。本發(fā)明中使用的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑的對于血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)活性，可以基于本發(fā)明的見解采用通常的方法來確認(rèn)。例如，在huvec那樣的來自血管內(nèi)皮的細(xì)胞或從動物采集的血管內(nèi)皮組織的培養(yǎng)液中添加待檢物質(zhì)，培養(yǎng)一定期間后，使用市售的cgmp測定試劑盒(例如，cyclicgmpassaykit(yamasacorp.制))，測定細(xì)胞內(nèi)或培養(yǎng)液中的cgmp濃度。通過將其結(jié)果與未添加待檢物質(zhì)時進(jìn)行比較，可以檢測cgmp濃度的上升。此外，通過對小鼠等實驗動物給予待檢物質(zhì)，測定血液中的cgmp濃度，與該動物中的給予前的血中cgmp濃度或非給予組的血中cgmp濃度進(jìn)行比較，也可以測定對血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)活性。作為本發(fā)明中使用的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑，只要是利尿鈉肽受體gc-a激動劑、利尿鈉肽受體gc-b激動劑、gc-c激動劑、nep抑制劑、pde5抑制劑、no供給劑、enos活化劑、cgmp類似物等具有作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞而使其細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升的活性的物質(zhì)，則沒有特別限定，但優(yōu)選為利尿鈉肽受體gc-a激動劑、利尿鈉肽受體gc-b激動劑、nep抑制劑或pde5抑制劑，進(jìn)一步優(yōu)選為利尿鈉肽受體gc-a激動劑。<利尿鈉肽受體gc-a激動劑>在本發(fā)明中，“利尿鈉肽受體gc-a激動劑”是指具有與利尿鈉肽受體gc-a(以下，有時也簡記為“gc-a”。(chinkersm,etal.,nature338；78-83,1989))結(jié)合而將其鳥苷酸環(huán)化酶活化的作用(以下，“gc-a激動劑活性”)的物質(zhì)，本說明書中有時也簡記為“gc-a激動劑”。作為代表性的gc-a激動劑，可列舉出例如心鈉肽(atrialnatriureticpeptide：anp)或腦鈉肽(brainnatriureticpeptide：bnp)。本發(fā)明的gc-a激動劑只要是具有g(shù)c-a激動劑活性的物質(zhì)則沒有特別限定，可以使用anp、bnp、它們的活性片段及它們的突變體、它們的衍生物以及它們的修飾體等。此外，即使是與anp或bnp不具有結(jié)構(gòu)上的共同性的肽或低分子化合物，只要是具有g(shù)c-a激動劑活性的物質(zhì)，也包含在本發(fā)明的gc-a激動劑中。作為本發(fā)明中的anp，可列舉出由28個氨基酸構(gòu)成的來自人的anp(slrrsscfggrmdrigaqsglgcnsfry：序列號1)、來自大鼠的anp(slrrsscfggridrigaqsglgcnsfry：序列號2)等。關(guān)于來自人的anp，biochem.biophys.res.commun.，118卷，131頁，1984年中記載的α-hanp以一般名carperitide在日本取得制造銷售認(rèn)可，并被銷售(商品名：hanp)。α-anp一般也作為humanpro-anp[99-126]被知曉。作為本發(fā)明中的bnp，可例示出由32個氨基酸構(gòu)成的來自人的bnp(spkmvqgsgcfgrkmdrissssglgckvlrrh：序列號3)、來自豬的bnp(spktmrdsgcfgrrldrigslsglgcnvlrry：序列號4)、來自大鼠的bnp(sqdsafriqerlrnskmahssscfgqkidrigavsrlgcdglrlf：序列號5)等。人bnp以一般名nesiritide在美國等受到藥事認(rèn)可，并以商品名：natrecor被銷售。此外，在各種anp及bnp中，在通過序列中包含的2個cys殘基間的二硫鍵而形成的環(huán)結(jié)構(gòu)(例如，在hanp中，在序列號1的7位cys與23位cys之間產(chǎn)生二硫鍵而形成環(huán)結(jié)構(gòu)，在hbnp中，在序列號3的10位cys與26位cys之間產(chǎn)生二硫鍵而形成環(huán)結(jié)構(gòu))中包含的由17個氨基酸構(gòu)成的序列及緊接著其c末端的氨基酸序列中，cys-phe-gly-xaa1-xaa2-xaa3-asp-arg-ieu-xaa5-xaa6-xaa7-xaa8-xaa9-leu-gly-cys-xaa10-xaa11-xaa12-arg(其中，xaa3為met、leu或ile)(序列號6，以下稱為“環(huán)結(jié)構(gòu)序列a”)在各種肽間保守性良好，認(rèn)為對于受體的結(jié)合和表現(xiàn)活性是重要的。(silver,ma,,curr.opin.nephrol.hypertens.(2006),15,p14-21、a.calderone,minervaendocrinol.(2004),29,p.113-127)。<利尿鈉肽受體gc-b激動劑>在本發(fā)明中，“利尿鈉肽受體gc-b激動劑”是指具有與利尿鈉肽受體gc-b(有時也簡記為“gc-b”(sugas.,etal.,endocrinology(1992),130(1),p.229-239))結(jié)合而將其鳥苷酸環(huán)化酶活化的作用(以下、“gc-b激動劑活性”)的物質(zhì)，在本說明書中有時也簡記為“gc-b激動劑”。作為代表性的gc-b激動劑，可列舉出例如c型利尿鈉肽(c-typenatriureticpeptide：cnp)。本發(fā)明的gc-b激動劑只要是具有g(shù)c-b激動劑活性的物質(zhì)則沒有特別限定，可以使用cnp、其活性片段、它們的突變體、它們的衍生物以及它們的修飾體等。此外，即使是與cnp不具有結(jié)構(gòu)上的共同性的肽或低分子化合物，只要是具有g(shù)c-b激動劑活性的物質(zhì)，也包含在本發(fā)明的激動劑中。作為本發(fā)明中的cnp，可列舉出由22個氨基酸構(gòu)成的來自人的cnp-22(glskgcfglkldrigsmsglgc：序列號7、本說明書中也稱為hcnp-22、在豬及大鼠等哺乳類中具有共同的氨基酸序列)、由53個氨基酸構(gòu)成的來自人的cnp-53(dlrvdtksraawarllqehpnarkykgankkglskgcfglkldrigsmsglgc：序列號8、本說明書中也稱為hcnp-53)、來自雞的cnp(glsrscfgvkldrigsmsglgc：序列號9)、來自青蛙的cnp(gysrgcfgvkldrigafsglgc：序列號10)等。在各種cnp中，通過序列中包含的2個cys殘基間的二硫鍵而形成的環(huán)結(jié)構(gòu)(例如，在hcnp-22中，在序列號7的6位cys與22位cys之間產(chǎn)生二硫鍵而形成環(huán)結(jié)構(gòu))被認(rèn)為對于與gc-b受體的結(jié)合和表現(xiàn)活性是重要的(furuya,m.etal,biochem.biophys.res.commun.,(1992),183,no3,p.964-969,silver,ma,,curr.opin.nephrol.hypertens.(2006),15,p14-21、a.calderone,minervaendocrinol.(2004),29,p.113-127)。根據(jù)furuya等的報道，報道了即使在僅由環(huán)結(jié)構(gòu)構(gòu)成的肽即hcnp6-22(由序列號7的氨基酸號6到22構(gòu)成的肽)或環(huán)結(jié)構(gòu)的n末端和c末端上分別附加anp的n末端側(cè)、c末端側(cè)的序列，也顯示與hcnp-22基本相同程度的gc-b激動劑活性，在hcnp-22的9位leu和10位lys上具有突變的肽活性減弱，但在其以外的部位(例如，17位ser、18位met)上具有突變的肽、或?qū)anp的10到12位的氨基酸序列取代成相應(yīng)的hcnp-22序列即leu-lys-leu(序列號7的9位到11位)的肽顯示與hcnp-22基本相同程度的gc-b激動劑活性等。根據(jù)這些見解，對于gc-b激動劑活性重要的環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列為cys-phe-gly-leu-lys-leu-asp-arg-ile-gly-xaa1-xaa2-ser-gly-leu-gly-cys(其中，xaa1表示ser或ala，xaa2表示met、phe或glu，序列號11)，以下，將該序列稱為“環(huán)結(jié)構(gòu)序列b”。在本發(fā)明中，具有生物活性的肽或蛋白質(zhì)的“活性片段”是指由與該肽或蛋白質(zhì)的生物活性相關(guān)的部位構(gòu)成、且保持該肽或蛋白質(zhì)所具有的生物活性的至少一部分的物質(zhì)。作為本發(fā)明中的anp或bnp的活性片段，可以使用具有上述的與gc-a結(jié)合而將其鳥苷酸環(huán)化酶活化的作用的肽。作為這樣的活性片段，可列舉出具有上述的環(huán)結(jié)構(gòu)序列a(序列號6的氨基酸序列)的肽，優(yōu)選由環(huán)結(jié)構(gòu)序列a(序列號6的氨基酸序列)構(gòu)成的肽。作為其具體例子，可列舉出由序列號1或2的7到27位中記載的氨基酸序列、序列號3或4的10到30位中記載的氨基酸序列、或序列號5的23到43位中記載的氨基酸序列構(gòu)成的肽等，但并不限定于此，具有環(huán)結(jié)構(gòu)序列a、且具有g(shù)c-a激動劑活性的物質(zhì)可以作為本發(fā)明的anp或bnp的活性片段采用。作為本發(fā)明中的cnp的活性片段，可以使用例如由序列號7到10中的任一氨基酸序列的至少一部分氨基酸序列構(gòu)成、且具有g(shù)c-b激動劑活性的肽。作為這樣的活性片段，可列舉出具有上述的環(huán)結(jié)構(gòu)序列b(序列號11的氨基酸序列)的肽，優(yōu)選由環(huán)結(jié)構(gòu)序列b(序列號11的氨基酸序列)構(gòu)成的肽，作為其具體例子，可列舉出：hcnp6-22、序列號7、9或10的氨基酸序列的1位到5位中的、包含1位的連續(xù)的氨基酸部分或全部缺失的肽，序列號8的氨基酸序列的1位到36位中的、包含1位的連續(xù)的氨基酸部分或全部缺失的肽等，但并不限定于此，具有環(huán)結(jié)構(gòu)序列b、且具有g(shù)c-b激動劑活性的物質(zhì)可以作為本發(fā)明的cnp的活性片段采用。作為本發(fā)明的gc-a激動劑及gc-b激動劑，可以采用上述的活性片段本身，此外，即使是在活性片段的n末端、c末端或其兩者上附加1到多個氨基酸的肽(活性片段的衍生物)，只要保持所期望的激動劑活性，就可以采用。作為這樣的肽，可列舉出在hcnp6-22的n末端、c末端及其兩者上附加來自anp的c末端、及n末端的序列的肽(furuya,m.etal,biochem.biophys.res.commun.,(1992),183,no3,p.964-969)等。在本發(fā)明中，具有生物活性的肽或蛋白質(zhì)的“突變體”是指在該肽或蛋白質(zhì)的氨基酸序列的一處～數(shù)處取代、缺失、插入和/或附加(以下、稱為“取代等”)一個～數(shù)個氨基酸而得到的、且保持該肽或蛋白質(zhì)所具有的生物活性的至少一部分的物質(zhì)?！皵?shù)處”通常為3處左右，優(yōu)選為2處左右?！皵?shù)個”通常為10個左右，優(yōu)選為5個左右，更優(yōu)選為3個左右，進(jìn)一步優(yōu)選為2個左右。在多處被取代等的情況下，可以是取代、缺失、插入及附加中的任一個，也可以組合二個以上。此外，被取代等的氨基酸可以是天然存在的氨基酸，也可以是其?；w等修飾物，還可以是人工合成的氨基酸類似體。此外，被取代等的部位只要是保持原本的肽或蛋白質(zhì)的活性的一部分，則可以選擇任意部位，但優(yōu)選在該原本的肽或蛋白質(zhì)的活性部位或受體結(jié)合部位以外的部位進(jìn)行取代等。作為anp或bnp的突變體，只要保持gc-a激動劑活性，則可以采用在所期望的部位被取代等的肽，但優(yōu)選列舉出保持上述的環(huán)結(jié)構(gòu)序列a、且在其以外的部位被取代等的肽。例如，anp的突變體只要具有g(shù)c-a激動劑活性，例如也可以在序列號1或2中記載的氨基酸序列中的所期望的1處～多處取代等1～數(shù)個氨基酸，但優(yōu)選為在序列號1或2中記載的氨基酸序列中的除序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸中在1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽，更優(yōu)選為在序列號1或2中記載的氨基酸序列的1到6位及28位中的任1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽。此外，bnp的突變體只要具有g(shù)c-a激動劑活性，則可以在序列號3、4或5中記載的氨基酸序列的所期望的1處～多處取代等一個～數(shù)個氨基酸，但優(yōu)選為在序列號3、4或5中記載的氨基酸序列中的除序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸中在1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽，更優(yōu)選為在序列號3或4中記載的氨基酸序列的1到9位、31位及32位中的任1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽、或在序列號5中記載的氨基酸序列的1位到22位、44位及45位中的任一處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽等。作為anp的突變體的具體例子，可列舉出例如hanp的12位的met取代成ile的大鼠α-ranp(biochem.biophys.res.commun.，121卷，585頁，1984年)、n末端的ser-leu-arg-arg-ser-ser缺失的hanp等。關(guān)于這樣的anp或bnp突變體，可列舉出例如medicinalresearchreview，10卷，115頁，1990年中記載的一系列的肽等。此外，作為氨基酸序列的1到多個氨基酸缺失并且氨基酸序列的1到多個氨基酸被取代成其它氨基酸的例子，可列舉出例如由15個氨基酸殘基構(gòu)成的mini-anp(science，270卷，1657頁，1995年)等。此外，作為cnp的突變體，只要保持gc-b激動劑活性，則可以采用在所期望的部位被取代等的肽，但優(yōu)選可列舉出保持上述的環(huán)結(jié)構(gòu)序列b、且在其以外的部位被取代等的肽。作為具體的cnp的突變體，只要具有g(shù)c-b激動劑活性，則可以在序列號7到10中記載的氨基酸序列中的所期望的1處～多處取代等1～數(shù)個氨基酸，但優(yōu)選為在序列號7到10中任一項中記載的氨基酸序列中的除序列號11所表示的氨基酸以外的氨基酸中在1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽，更優(yōu)選為在序列號7、9或10中記載的氨基酸序列的1到5位中的任1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽、或在序列號8中記載的氨基酸序列的1到36位中的任1處～數(shù)處取代等一個～數(shù)個氨基酸而得到的肽。作為cnp的突變體的具體例子，報道了在hcnp-22的17位和18位上具有突變的肽具有與hcnp-22同等的gc-b激動劑活性，將這樣的突變體的環(huán)結(jié)構(gòu)部分的n末端和c末端取代成來自hanp的序列的突變體的衍生物也顯示hcnp-22的活性的90％左右的gc-b激動劑活性，在hcnp-22的9位到11位中的任一處具有突變的肽顯示hcnp-22的50％以上的gc-b激動劑活性，在hcnp-22的10位和11位的兩者上具有突變的肽具有hcnp-22的40％以上的gc-b激動劑活性等(furuya,m.etal,biochem.biophys.res.commun.,(1992),183,no3,p.964-969)。此外，在其它文獻(xiàn)中，記載了hcnp-22的各種突變體保持gc-b激動劑活性，且其進(jìn)一步具有對cnp的分解酶即中性肽鏈內(nèi)切酶(nep)的切斷的耐性等(wo2009/067639號小冊子)。此外，作為其它的hcnp-22的衍生物，已知有cd-np。其是在hcnp-22的c末端上連接了來自蛇毒的利尿鈉肽即dnp(dendroapsisnatriureticpeptide)的c末端序列的肽，作為保持gc-a激動劑活性和gc-b激動劑活性這兩者的肽被知曉(deborahetal.,j.biol.chem.,(2008),vol.289,no.50,pp.35003-35009)。在本發(fā)明中，具有生物活性的肽或蛋白質(zhì)的“衍生物”是指包含該肽或蛋白質(zhì)的氨基酸序列、且進(jìn)一步附加其它的肽或蛋白質(zhì)的融合肽、且保持該生理活性肽或蛋白質(zhì)所具有的生物活性的至少一部分的融合肽。將具有這樣的生物活性(在本發(fā)明中，與gc-a或gc-b結(jié)合而將其鳥苷酸環(huán)化酶活化的作用)的至少一部分的融合肽也稱為生理活性肽的衍生物。本發(fā)明的衍生物中，可以是在原本的生理活性肽或蛋白質(zhì)的c末端或n末端的一者上融合附加肽，也可以是在c末端及n末端的兩者上融合附加肽的衍生物。作為附加的肽，沒有特別限定。但優(yōu)選該肽自身不具有生理活性。此外，附加肽可以直接結(jié)合，也可以介由由1～數(shù)個氨基酸構(gòu)成的接頭序列而結(jié)合。作為接頭序列，已知有各種序列，但優(yōu)選使用包含較多gly、ser等的序列。作為這樣的附加肽，可列舉出免疫球蛋白(優(yōu)選igg)的fc部位、血清白蛋白、生長素釋放肽的c末端側(cè)序列等(例如使anp與免疫球蛋白的fc部位結(jié)合而成的融合蛋白質(zhì)(參照美國專利公開us2010-0310561等)、使glp-1與血清白蛋白結(jié)合而成的融合蛋白質(zhì)(參照國際專利公開wo2002/046227等))。作為用作本發(fā)明的gc-a激動劑的衍生物，可例示出anp或bnp的衍生物、anp或bnp的活性片段的衍生物、anp或bnp的突變體的衍生物等，優(yōu)選為hanp的衍生物及hbnp的衍生物。作為用作本發(fā)明的gc-b激動劑的衍生物，可例示出cnp的衍生物、cnp的活性片段的衍生物、cnp的突變體的衍生物等，優(yōu)選為hcnp-22的衍生物、hcnp-53的衍生物或hcnp6-22的衍生物。例如已知：作為gc-a激動劑采用的衍生物的例子的、使anp與免疫球蛋白的fc部位結(jié)合而成的融合蛋白質(zhì)(參照美國專利公開us2010-0310561等)在保持anp的生物活性的狀態(tài)下可改善血中滯留性。此外，關(guān)于anp及bnp的各種衍生物，可列舉出例如medicinalresearchreview，10卷，115頁，1990年中記載的一系列的肽。此外，作為anp或cnp的衍生物的具體例子，可列舉出國際專利公開wo2009/142307號公報(對應(yīng)美國專利公開us2010-305031號公報)中公開的各種anp衍生物、cnp衍生物等。其中，報道了：在anp、cnp、胃動素等生理活性肽上附加來自生長素釋放肽的c末端的部分序列的衍生物，在保持原肽的生理活性的狀態(tài)下可改善血中滯留性。該報道中，在hanp的n末端或c末端中的任一者及它們兩者上附加來自生長素釋放肽的c末端的部分肽的多種衍生物中的任一種，均保持了gc-a激動劑活性，其血中半衰期延長。此外，在hcnp6-22的n末端或c末端中的任一者及它們兩者上附加來自生長素釋放肽的c末端的部分肽的多種衍生物中的任一種，均保持了gc-b激動劑活性，其血中半衰期延長。進(jìn)而，作為cnp或其活性片段的衍生物的其它例子的、在hcnp-22的c末端附加了anp的c末端部分的肽、或在hcnp6-22的n末端及c末端附加了anp的n末端部分及c末端部分的肽(cnp活性片段的衍生物)，也保持了與cnp-22相同程度的gc-b激動劑活性(furuya,m.etal,biochem.biophys.res.commun.,(1992),183,no3,p.964-969)。進(jìn)而，在其它文獻(xiàn)中，記載了hcnp-22及hcnp-53的各種衍生物保持gc-b激動劑活性，其中的多個衍生物進(jìn)一步具有nep分解耐性等(wo2009/067639號小冊子)。這些現(xiàn)有的利尿鈉肽的衍生物可以作為本發(fā)明的gc-a激動劑和/或gc-b激動劑采用。在本發(fā)明中，具有生物活性的肽或蛋白質(zhì)的“修飾體”是指該肽或蛋白質(zhì)中包含的氨基酸的1處到數(shù)處通過與其它化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)而被修飾、且保持該肽或蛋白質(zhì)所具有的生物活性的至少一部分的物質(zhì)。接受修飾的部位只要保持原本的肽或蛋白質(zhì)的活性，則可以選擇任意部位。例如當(dāng)附加達(dá)到一定程度大小的化學(xué)物質(zhì)如聚合物的修飾中，優(yōu)選在肽或蛋白質(zhì)的活性部位、或受體結(jié)合部位以外的部位被修飾。此外，在用于防止分解酶的切斷而進(jìn)行修飾的情況下，也可以采用在接受該切斷的部位進(jìn)行了修飾的物質(zhì)。作為化學(xué)修飾的方法，已知有各種方法，已知有例如附加聚乙二醇(peg)、聚乙烯醇(pva)等在制藥技術(shù)中利用的(藥理上使用的)高分子聚合物的方法、在lys殘基等的側(cè)鏈的氨基上附加作為接頭的化合物并介由其與其它蛋白質(zhì)等(例如血清白蛋白)結(jié)合的方法等，但并不限定于這些，可以采用各種方法。此外，關(guān)于各種生理活性肽的修飾體的制造方法，例如可以參考美國專利公開us2009-0175821號等適當(dāng)制作。修飾體優(yōu)選為通過附加制藥上使用的高分子聚合物進(jìn)行化學(xué)修飾而得到的物質(zhì)。例如，anp的修飾體只要具有g(shù)c-a激動劑活性，則可以在序列號1或2的氨基酸序列中的所期望的1處～多處被修飾，但優(yōu)選為包含序列表的序列號1或2的氨基酸序列、且在其中的相當(dāng)于序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸的至少一個中接受化學(xué)修飾的肽。更優(yōu)選為在序列號1或2的氨基酸序列中的除了序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸中在1處～數(shù)處被修飾的肽，進(jìn)一步優(yōu)選為在序列號1或2的氨基酸序列的1到6位及28位中的任1處～數(shù)處被修飾的肽。此外，bnp的突變體只要具有g(shù)c-a激動劑活性，則可以在序列號3、4或5的氨基酸序列的所期望的1處～多處被修飾，但優(yōu)選為包含序列表的序列號3、4或5的氨基酸序列、且在其中的相當(dāng)于序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸的至少一個中接受化學(xué)修飾的肽。更優(yōu)選為在序列號3、4或5的氨基酸序列中的除了序列號6所表示的氨基酸以外的氨基酸中在1處～數(shù)處被修飾的肽，更優(yōu)選為在序列號3或4的氨基酸序列的1到9位、31位及32位中的任1處～數(shù)處被修飾的肽、或在序列號5中記載的氨基酸序列的1位到22位、44位及45位中的任1處～數(shù)處被修飾的肽。進(jìn)而，上述的anp或bnp的活性片段、突變體及它們的衍生物的修飾體也包含在本發(fā)明中。這樣的各種修飾體也只要保持gc-a激動劑活性，就可以用于本發(fā)明中。例如已知：作為這樣的可作為gc-a激動劑采用的修飾體的具體例子的在hbnp、其突變體及其活性片段上結(jié)合了peg、pva等親水性聚合物或以烷基、芳基等烴基為代表的疏水性基的各種修飾體，均保持gc-a激動劑活性(參照美國專利usp7,662,773號等)。關(guān)于anp或bnp與gc-a受體的結(jié)合，由于anp及bnp的環(huán)結(jié)構(gòu)和其c末端尾部部分很重要，所以特別是在其n末端部上結(jié)合了其它序列或物質(zhì)的衍生物或修飾體，其附加肽或修飾物對環(huán)結(jié)構(gòu)造成的影響少，在不會阻礙與gc-a受體的結(jié)合的情況下保持gc-a激動劑活性。這通過上述的許多文獻(xiàn)得到證實。此外，cnp的修飾體只要具有g(shù)c-b激動劑活性，則可以在序列號7到10中的任一氨基酸序列中的所期望的1處～多處被修飾，但優(yōu)選為在序列號7到10中的任一氨基酸序列中的除了序列號11所表示的氨基酸以外的氨基酸中在1處～數(shù)處被修飾的肽，更優(yōu)選為在序列號7、9或10的氨基酸序列的1到5位中的任1處～數(shù)處被修飾的肽。此外，在賦予對酶nep的切斷的耐性的修飾的情況下，由于已知在各種cnp肽中包含的環(huán)結(jié)構(gòu)序列b中在序列號11的1位cys與2位phe之間被切斷，所以也可以修飾其間的鍵。進(jìn)而，上述的cnp的活性片段、突變體及它們的衍生物的修飾體也包含在本發(fā)明中。這樣的各種修飾體只要保持gc-b激動劑活性，則可以用于本發(fā)明中。作為這樣的cnp、其活性片段、它們的突變體及它們的衍生物的修飾體的具體例子，例如在wo2009/067639號小冊子中，公開了在hcnp-22及hcnp-53上結(jié)合了peg等各種親水性聚合物的修飾體、在hcnp-22中將nep的切斷部位即cys6-phe7的肽鍵取代成(-ch2-nh-)或(-c(＝o)-n(r)-：r表示甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基等低級烷基)等偽肽鍵的修飾體大多保持了gc-b激動劑活性，此外，其多數(shù)具有與hcnp-22相比得到改善的血中滯留性。此外，關(guān)于各種生理活性肽的修飾體的制造方法，例如，可以參考美國專利公開us2009-0175821號等適當(dāng)制作。關(guān)于cnp與gc-b受體的結(jié)合，由于cnp的環(huán)結(jié)構(gòu)很重要，所以特別是在其c末端和/或n末端部上結(jié)合了其它序列或物質(zhì)的衍生物或修飾體，其附加肽或修飾物對環(huán)結(jié)構(gòu)造成的影響少，在不會阻礙與gc-b受體的結(jié)合的情況下保持gc-b激動劑活性。這通過上述的許多文獻(xiàn)得到證實。上述的anp、bnp及cnp、它們的活性片段、它們的突變體、它們的衍生物以及它們的修飾體可以從天然的細(xì)胞或組織中采集，也可以采用基因工程學(xué)的方法、細(xì)胞工程學(xué)的方法進(jìn)行生產(chǎn)，也可以化學(xué)合成，還可以進(jìn)一步將它們進(jìn)行酶處理或化學(xué)處理而將氨基酸殘基進(jìn)行修飾或除去氨基酸序列的一部分。這樣的制造適宜參考本說明書中記載的文獻(xiàn)按照常規(guī)方法來進(jìn)行。此外，作為本發(fā)明的gc-a激動劑或gc-b激動劑，也可以使用在單一的物質(zhì)中兼具作為gc-a激動劑和gc-b激動劑的性質(zhì)這兩者的物質(zhì)(本發(fā)明中，也稱為“兩活性物質(zhì)”)。作為這樣的兩活性物質(zhì)，只要是保持gc-a激動劑活性和gc-b激動劑活性兩者的物質(zhì)則沒有特別限定。作為這樣的物質(zhì)，可列舉出例如在同一分子中包含環(huán)結(jié)構(gòu)序列a(序列號6)和環(huán)結(jié)構(gòu)序列b(序列號11)這兩者的物質(zhì)(例如，包含兩者的序列的融合肽、或由兩者的序列構(gòu)成的肽介由接頭化合物連接而成的修飾體等)、包含將環(huán)結(jié)構(gòu)序列a和環(huán)結(jié)構(gòu)序列b的特征融合從而兼具的氨基酸序列的物質(zhì)等。作為這樣的兩活性物質(zhì)的具體例子，已知有cd-np。其是在hcnp-22的c末端上連接了來自蛇毒的利尿鈉肽即dnp(dendroapsisnatriureticpeptide)的c末端序列的肽，作為保持gc-a激動劑活性和gc-b激動劑活性這兩者的肽被知曉(deborahetal.,j.biol.chem.,(2008),vol.289,no.50,pp.35003-35009)。此外，作為其它例子，將hanp(序列號1)的9位到11位取代成leu-lys-lue的肽保持了gc-a激動劑活性和gc-b-激動劑活性這兩者(furuya,m.etal,biochem.biophys.res.commun.,(1992),183,no3,p.964-969)。此外，本發(fā)明的gc-a激動劑及gc-b激動劑可以采用作為抗利尿鈉肽受體gc-a或gc-b的抗體、且具有相對于各自的受體的激動劑活性的物質(zhì)。在本發(fā)明中，“抗體”是與作為對象的抗原(gc-a或gc-b)特異性結(jié)合的抗體或保持其結(jié)合活性的片段(結(jié)合片段、例如fab片段等)。此外，作為本發(fā)明的抗體，可列舉出抗血清、多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、人型抗體、人抗體、它們中的任一者的活性片段等。這些抗體可以使用成為免疫源的受體的全體或其胞外結(jié)構(gòu)域作為免疫源，通過通常的方法來制造。例如，關(guān)于人源化抗體，可以參照例如wo91/009968號等的記載，關(guān)于人型抗體，可以參照例如wo92/03918號、wo94/25585號等的記載，進(jìn)而采用各種周知技術(shù)。此外，關(guān)于所制造的抗體，可以通過利用后述的方法測定gc-a激動劑活性或gc-b激動劑活性，挑選具有所期望的活性的抗體。作為本發(fā)明的gc-a激動劑使用的抗gc-a抗體是與利尿鈉肽受體gc-a特異性結(jié)合、且具有g(shù)c-a激動劑活性的抗體或其結(jié)合片段，優(yōu)選為作為單克隆抗體的抗gc-a單克隆抗體，更優(yōu)選為人源化的抗gc-a抗體或作為人型抗體的抗gc-a抗體。此外，作為本發(fā)明的gc-b激動劑使用的抗gc-b抗體是與利尿鈉肽受體gc-b特異性結(jié)合、且具有g(shù)c-b激動劑活性的抗體或其結(jié)合片段，優(yōu)選為作為單克隆抗體的抗gc-b抗體，更優(yōu)選為作為人源化抗體的抗gc-b抗體或作為人型抗體的抗gc-b抗體。關(guān)于某種物質(zhì)是否具有g(shù)c-a激動劑活性，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過以往已知的方法容易地實施測定。具體而言，可以在強(qiáng)制表達(dá)gc-a(chinkersm,etal.,nature338；78-83,1989)的培養(yǎng)細(xì)胞中添加物質(zhì)，測定細(xì)胞內(nèi)cgmp水平。保持gc-a激動劑活性的一部分通常是指，在使用同一試驗體系，將gc-a激動劑物質(zhì)和anp或bnp(該激動劑物質(zhì)為參考anp或bnp的序列而制作的物質(zhì)時，該作為參考的肽)平行地測定gc-a激動劑活性的情況下，cgmp上升活性的峰至少保持anp或bnp所顯示的cgmp上升活性峰的約10％以上，但優(yōu)選是指保持約30％以上，進(jìn)一步優(yōu)選為保持約50％以上，進(jìn)一步更優(yōu)選為保持約70％以上。關(guān)于某種物質(zhì)是否具有g(shù)c-b激動劑活性，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過以往已知的方法容易地實施測定。具體而言，可以在強(qiáng)制表達(dá)gc-b(chinkersm,etal.,nature338；78-83,1989)的培養(yǎng)細(xì)胞中添加物質(zhì)，測定細(xì)胞內(nèi)cgmp水平。保持gc-b激動劑活性的一部分通常是指，在使用同一試驗體系，將gc-b激動劑物質(zhì)和cnp平行地測定gc-b激動劑活性的情況下，cgmp上升活性的峰至少保持cnp所顯示的cgmp上升活性峰的約10％，但優(yōu)選是指保持約30％以上，進(jìn)一步優(yōu)選為保持約50％以上，進(jìn)一步更優(yōu)選為保持約70％以上。此外，就本發(fā)明的gc-a激動劑活性或gc-b激動劑活性而言，即使在上述的方法中在峰上活性的上升沒有變大，給生物體給予時的活性持續(xù)時間長的物質(zhì)也可以用于本發(fā)明。為了進(jìn)行這樣的評價，對動物給予待檢物質(zhì)，經(jīng)時地測定血中的cgmp濃度。對所得到的數(shù)據(jù)，可以制成x軸標(biāo)繪時間、y軸標(biāo)繪cgmp濃度的圖表，將其線之下的面積(auc)與anp或cnp等對照物質(zhì)進(jìn)行比較來評價。在該評價方法中保持活性通常是指與對照物質(zhì)相比較通常保持約10％以上，但優(yōu)選是指保持約30％以上，進(jìn)一步優(yōu)選為保持約50％以上，進(jìn)一步更優(yōu)選為保持約70％以上。此外，對于這樣的評價體系，添加低分子的化合物，若是cgmp產(chǎn)生能力提高那樣的化合物，則即使是不具有與利尿鈉肽共同的結(jié)構(gòu)的物質(zhì)(例如，低分子化合物)，也可以作為gc-a激動劑或gc-b激動劑用于本發(fā)明中。作為本發(fā)明的gc-a激動劑優(yōu)選的物質(zhì)為anp、bnp、具有其環(huán)結(jié)構(gòu)序列a的活性片段、或在其環(huán)結(jié)構(gòu)序列a以外被取代等的突變體、它們的衍生物或修飾體，更優(yōu)選為hanp、hbnp、它們的衍生物或它們的修飾體，進(jìn)一步更優(yōu)選為hanp或hbnp。作為本發(fā)明的gc-b激動劑優(yōu)選的物質(zhì)為cnp、具有其環(huán)結(jié)構(gòu)序列b的活性片段、或在其環(huán)結(jié)構(gòu)序列b以外被取代等的突變體、它們的衍生物或修飾體，更優(yōu)選為hcnp-22、hcnp-53、作為其活性片段的hcnp6-22、它們的衍生物或它們的修飾體，進(jìn)一步更優(yōu)選為hcnp-22、hcnp-53或hcnp6-22。<nep抑制劑>作為本發(fā)明中使用的nep抑制劑，只要是具有抑制nep的上述那樣的切斷利尿鈉肽的天然型的活性的物質(zhì)，則可以沒有特別限定地使用，通過許多文獻(xiàn)被介紹(例如，cuculi,eetal.(expertopinninvestigdrugs)(2011),20(4),pp.457-463)、matthewi.etal.(br.j.clin.pharmacol.(2004),57(1),pp.27-36)。本發(fā)明的目的中，作為nep抑制劑，也可以是nep選擇性抑制劑。作為本發(fā)明的nep抑制劑，優(yōu)選為山帕曲拉(sampatrilat)、西諾番(sinorphan)、奧馬曲拉(omapatrilat)、格莫曲拉(gemopatrilat)、法西多曲(fasidotril)、米克山普(mixanpril)、z-13752a、mdi-100240等。對于這些藥劑，可以通過上述的參考文獻(xiàn)(包含其引用文獻(xiàn))的記載及周知的技術(shù)進(jìn)行制造及制劑化。<pde5抑制劑>作為本發(fā)明中使用的pde5抑制劑，只要是具有作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞而且阻礙pde5酶分解cgmp的活性的物質(zhì)，則沒有特別限定，可以采用公知的各種藥劑(例如，參照m.p.govannoni,etal.(curr.med.chem.(2010)17,pp.2564-2587)等)。優(yōu)選為西地那非(sildenafil)、伐地那非(vardenafil)、他達(dá)拉非(tadalafil)、烏地那非(udenafil)、米羅那非(mirodenafil)、slx-2101、羅地那非(lodenafil)、羅地那非碳酸酯(lodenafilcarbonate)、依昔舒林(exisulind)等、及它們的衍生物、以及它們的藥理上可接受的鹽，更優(yōu)選為西地那非、伐地那非、他達(dá)拉非、烏地那非、米羅那非或它們的藥理上可接受的鹽，進(jìn)一步優(yōu)選為檸檬酸西地那非、鹽酸伐地那非、他達(dá)拉非、烏地那非或米羅那非，最優(yōu)選為檸檬酸西地那非。關(guān)于這些藥劑，可以通過上述的參考文獻(xiàn)(包含其引用文獻(xiàn))的記載及周知的技術(shù)進(jìn)行制造及制劑化。<gc-c激動劑>作為本發(fā)明中使用的gc-c激動劑，只要是具有與gc-c結(jié)合而使細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升的活性的物質(zhì)就沒有特別限定，可以使用公知的各種物質(zhì)(例如，potterl.r.(pharmacology&therapeutics(2011),130(1),pp.71-82)等)。例如，作為本發(fā)明中使用的gc-c激動劑，可列舉出st(heatstableenterotoxin)或其類似物質(zhì)、鳥苷素(guanylin)、尿鳥苷素(uroguanylin)等的肽、其活性片段、它們的突變體、它們的衍生物或修飾體等，優(yōu)選為利那洛肽(linaclotide)、鳥苷素或尿鳥苷素。關(guān)于這些藥劑，可以通過上述的參考文獻(xiàn)(包含其引用文獻(xiàn))的記載及周知的技術(shù)進(jìn)行制造及制劑化。<no供給劑>本發(fā)明中使用的no供給劑是指其自身或其分解物、代謝物具有no結(jié)構(gòu)、且釋放no的物質(zhì)，本
技術(shù)領(lǐng)域：
：中已知有各種no供給劑(例如，參照(j.clin.hypertens.(2006),no.12,vol.8,suppl.4,pp.40-52)等)，例如，可列舉出no氣體、硝酸鹽、sydnomine等。作為sydnomine，可列舉出例如嗎多明或作為其活性代謝物的林西多明等。對于它們，例如在r.p.mason,etal(j.clinhypertens.(2006),8(sppl.s12),pp.40-52)等中有記載，可以通過這些文獻(xiàn)(包含其引用文獻(xiàn))的記載及周知的技術(shù)進(jìn)行制造、制劑化等。<enos活化劑>本發(fā)明的enos活化劑只要是nos(nitricoxidesynthase)的底物或提高該酶的活性的藥劑，則沒有特別限定，可以使用各種物質(zhì)，但優(yōu)選為l-精氨酸。nos是由l-精氨酸產(chǎn)生no的酶，在血管內(nèi)皮中，恒定表達(dá)內(nèi)皮型nos(enos)。因此，通過提高enos的底物即l-精氨酸的血中濃度，增進(jìn)no產(chǎn)生，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中引起細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度的上升。<cgmp或其類似物>作為本發(fā)明中使用的cgmp類似物，是對cgmp的化學(xué)結(jié)構(gòu)(guanosine3’，5’-cyclicmonophosphate)實施化學(xué)修飾而得到的物質(zhì)，是具有活化cgmp依賴性蛋白激酶的作用的物質(zhì)，可以采用公知的文獻(xiàn)(例如，corbinj.d.,etal.(j.biol.chem.(1986),261(3),pp.1208-1214)等)中記載的各種物質(zhì)，但優(yōu)選為8-溴cgmp(8-bromoguanosine3’,5’-cyclicmonophosphate)。在本發(fā)明中，“藥物”是指含有規(guī)定的有效成分且為了體現(xiàn)規(guī)定的藥理作用而利用的藥物品，對于其形態(tài)、組成、給予方法等沒有限定。作為本發(fā)明的藥物的實施方式，其有效成分可以作為單一的制品被制品化，也包含通過將多個制品組合而使用從而達(dá)成本發(fā)明的方式。在本發(fā)明中，“有效成分”是指為藥物品中包含的組成之一、且該藥物品具有目標(biāo)藥理作用的至少一部分作用的組成。相對于藥物品的含量/含有比例沒有特別限定，可以依賴于該成分所具有藥理作用的程度，以各種比例配合。本發(fā)明所述的藥物中可作為有效成分使用的物質(zhì)也可以是上述的gc-a激動劑等具有血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)活性的物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選為hanp、hbnp、hcnp-22、hcnp-53、hcnp6-22或西地那非的藥學(xué)上可接受的鹽。即，在本發(fā)明中，也可以使用上述的物質(zhì)的無機(jī)酸如鹽酸、硫酸、磷酸、或有機(jī)酸如甲酸、醋酸、丁酸、琥珀酸、檸檬酸等的酸加成鹽(acidadditionsalts)作為有效成分?；蛘?，在本發(fā)明中，也可以使用上述的物質(zhì)的鈉、鉀、鋰、鈣等的金屬鹽、由有機(jī)堿形成的鹽的形態(tài)作為有效成分。此外，本發(fā)明所述的藥物組合物也可以作為其有效成分所述的物質(zhì)的游離形、或其藥學(xué)上可接受的鹽。作為西地那非的鹽，最優(yōu)選為檸檬酸鹽?？勺鳛楸景l(fā)明所述的藥物等的有效成分使用的物質(zhì)或其藥學(xué)上可接受的鹽優(yōu)選與公知的藥學(xué)上可接受的載體、賦型劑、稀釋劑等混合而制成藥物組合物，通過藥物中一般使用的給予方法、即經(jīng)口給予方法或經(jīng)粘膜給予、靜脈內(nèi)給予、肌肉內(nèi)給予或皮下給予等非經(jīng)口給予方法對個體進(jìn)行給予。有效成分為肽性物質(zhì)時，也可以制成在消化道內(nèi)不易受到分解的制劑、例如將作為活性成分的肽容納在脂質(zhì)體中的微膠囊劑進(jìn)行經(jīng)口給予。此外，也可以是從直腸、鼻內(nèi)、舌下等消化道以外的粘膜吸收的給予方法。此時可以以坐劑、點鼻噴霧劑、吸入藥、舌下片之類的形態(tài)對個體進(jìn)行給予。此外，對于通過采用以葡聚糖等多糖類、多胺、peg等為代表的生物降解性高分子作為載體的各種控釋制劑、持續(xù)化制劑等來改善肽的血中滯留性的制劑，也可以在本發(fā)明中使用?？勺鳛楸景l(fā)明所述的藥物的有效成分使用的物質(zhì)的給予量根據(jù)疾病的種類、個體(患者)的年齡、體重、癥狀的程度及給予途徑等也不同，但通常，對于一種有效成分作為每1天的合計的給予量的上限，例如為約100mg/kg以下，優(yōu)選為約50mg/kg以下，進(jìn)一步優(yōu)選為1mg/kg以下。此外，對于一種有效成分，作為每一天的合計的給予量的下限，例如為約0.1μg/kg以上，優(yōu)選為0.5μg/kg以上，更優(yōu)選為1μg/kg以上。本發(fā)明所述的藥劑(藥物組合物)的給予頻率也可根據(jù)所使用的有效成分、給予途徑、及處理的特定的疾病而改變。例如經(jīng)口給予利尿鈉肽時，優(yōu)選每一天以4次以下的給予次數(shù)進(jìn)行處置，此外，在非經(jīng)口給予、例如靜脈內(nèi)給予的情況下優(yōu)選利用輸液泵、導(dǎo)管等持續(xù)地進(jìn)行給予。在給予anp或bnp等肽或它們的鹽的情況下，例如只要將冷凍干燥制劑溶解到注射用水中使用微量輸液泵(在沒有微量輸液泵的情況下，小兒用微量輸液器)等進(jìn)行連續(xù)給予(也稱為持續(xù)給予)即可。作為連續(xù)給予時的給予期間，為數(shù)小時～數(shù)天(例如3～14天(優(yōu)選3～7天)左右)。作為此時的給予量的有效成分的上限，對各有效成分可以適當(dāng)采用例如約50μg/kg/分鐘(每一天、約72mg/kg)以下的濃度，也可以為約5μg/kg/分鐘(每一天、約7.2mg/kg)以下，優(yōu)選為約0.5μg/kg/分鐘(每一天、720μg/kg)以下，更優(yōu)選為約0.2μg/kg/分鐘以下，進(jìn)一步優(yōu)選為約0.1μg/kg/分鐘以下，進(jìn)一步更優(yōu)選為約0.05μg/kg/分鐘以下。此外，作為下限，為約0.0001μg/kg/分鐘(每一天約0.144μg/kg)以上，優(yōu)選為約0.001μg/kg/分鐘(每一天1.44μg/kg)以上。作為具體的給予方法，可以采用例如3天以上(優(yōu)選3到4天)、約0.025μg/kg/分鐘，此時的每一天的給予量以有效成分計達(dá)到約36μg/kg。利尿鈉肽由于如上所述具有松弛·擴(kuò)張血管而使血壓降低的作用，所以在預(yù)防和/或治療惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移時，優(yōu)選以不會使血壓降低至必要以上的速度進(jìn)行給予，優(yōu)選在給予時及剛給予后監(jiān)測血壓。此外，此時的hanp等的給予期間通常為1天以上。優(yōu)選在該期間連續(xù)給予，作為此時的給予期間通常為1天以上，優(yōu)選為數(shù)天，更優(yōu)選為1天以上且5天以下。當(dāng)長期地控制惡性腫瘤時，可以適當(dāng)重復(fù)上述的給予方法、或根據(jù)患者的狀態(tài)適當(dāng)變更給予量或給予期間。此外，作為本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑的給予量，優(yōu)選選擇對接受給予的對象的末梢血管的內(nèi)皮細(xì)胞使細(xì)胞內(nèi)cgmp濃度上升、或使末梢血液中的cgmp濃度上升的程度的用量、用法。這樣的用量·用法可以通過采集患者的末梢血并監(jiān)測cgmp濃度適當(dāng)選擇。具體而言，在將anp給予到靜脈中的情況下，例如優(yōu)選將anp的1000μg(例如，hanp注射用1000、第一三共(株)制)溶解到注射用水10ml中，以“體重×0.06ml/小時”的速度(0.1μg/kg/分鐘或其以下的給予速度)進(jìn)行給予。給予速度不限于上述的速度，優(yōu)選根據(jù)病情，以0.2μg/kg/分鐘以下的速度(優(yōu)選約0.01μg/kg/分鐘以上)邊監(jiān)測血壓或心律邊進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。特別是確認(rèn)到即使將hanp以0.025μg/kg/分鐘的用量連續(xù)給予3或4天，也不會使血壓、心博等體液狀態(tài)發(fā)生很大變動，優(yōu)選采用該用量用法。在將bnp給予到靜脈中的情況下，例如優(yōu)選將hbnp以約0.01μg/kg/分鐘進(jìn)行連續(xù)給予，也可以采用進(jìn)一步在其給予開始前組合約2μg/kg的hbnp的快速濃注給予的給予方法。此時也優(yōu)選以不會使血壓降低至必要以上的速度進(jìn)行給予，推薦在給予時及剛給予后監(jiān)測血壓。在anp或bnp以上述的給予速度不會給血壓或心律等造成較大影響的情況下，也可以進(jìn)一步提高給予速度。另外，關(guān)于其它的anp或bnp的活性片段、突變體、衍生物或突變體等，只要考慮其活性和持續(xù)性來決定給予速度即可。在并非天然型的肽(hanp、hbnp、hcnp-22等)，而使用anp、bnp、cnp等的活性片段、突變體、衍生物、修飾體等時，可以考慮其活性的強(qiáng)度、在體內(nèi)的持續(xù)性、分子量等該物質(zhì)的特征，適當(dāng)決定給予量、給予方法、給予速度、給予頻率等。此外，對于hanp、hbnp、cnp(hcnp-22、hcnp-53)等有效成分，通過采用控釋制劑技術(shù)或持續(xù)化制劑技術(shù)、不易受到肽的分解的各種突變體、衍生物或修飾體等，可以不限定于連續(xù)給予或快速濃注給予，選擇對患者的負(fù)擔(dān)更少的給予方法、給予頻率等。作為給予的時期，只要是在患者中發(fā)現(xiàn)癌后，則可以在任何時期給予，但從通常的抑制轉(zhuǎn)移的觀點出發(fā)，優(yōu)選持續(xù)地、或空出一定期間的間隔定期地給予。此外，進(jìn)行癌的切除手術(shù)時，通過從手術(shù)中到手術(shù)后數(shù)天進(jìn)行給予，可以顯著地抑制癌的復(fù)發(fā)。本發(fā)明的目的是抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移，其對象患者通常為惡性腫瘤的患者。對象患者可以是沒有其它基礎(chǔ)疾病的癌患者，此外，也可以是例如心力衰竭風(fēng)險高的惡性腫瘤患者。作為惡性腫瘤的種類，沒有特別限定，可以對所有種類的惡性腫瘤的患者進(jìn)行給予。作為這樣的惡性腫瘤，可列舉出例如癌那樣的上皮系的惡性腫瘤、肉瘤那樣的非上皮系的惡性腫瘤、黑色素瘤等各種種類的惡性腫瘤。本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑由于作用于血管內(nèi)皮而抑制所有腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移共同的進(jìn)程、即腫瘤細(xì)胞向淋巴管或血管內(nèi)皮的粘接、浸潤，所以認(rèn)為不論腫瘤的種類，均發(fā)揮抑制所有惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的效果(間接效果)。因此，即使不表達(dá)gc-a的腫瘤細(xì)胞發(fā)生惡變并向血管或淋巴管侵入，通過該間接效果，也無法向血管內(nèi)皮細(xì)胞粘接、向組織浸潤，轉(zhuǎn)移被阻礙。這樣的作用通過以下事實得到證明：不僅對于在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)gc-a的來自肺癌的細(xì)胞株a549或h460，對于不表達(dá)gc-a且具有強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力的黑色素瘤細(xì)胞，在小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移模型中，以gc-a激動劑為首，gc-b激動劑或pde5抑制劑的給予也可顯著地抑制腫瘤細(xì)胞向各臟器的轉(zhuǎn)移。進(jìn)而，在內(nèi)皮組織特異性敲除gc-a的小鼠中，在同樣的黑色素瘤尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中，與野生型小鼠相比確認(rèn)到顯著的轉(zhuǎn)移的增大，進(jìn)而，在內(nèi)皮組織特異性過量表達(dá)gc-a的小鼠中，與野生型小鼠相比確認(rèn)到顯著的轉(zhuǎn)移的抑制。在gc-a敲除小鼠中，由于在通常腫瘤不轉(zhuǎn)移的心臟中也見到黑色素瘤的轉(zhuǎn)移，所以認(rèn)為在增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)cgmp的信號中，特別是gc-a介導(dǎo)的信號阻礙腫瘤細(xì)胞向內(nèi)皮組織的粘接、浸潤。此外，可以是原發(fā)性腫瘤，也可以是轉(zhuǎn)移性腫瘤。在原發(fā)性腫瘤的情況下，優(yōu)選與癌切除手術(shù)配合進(jìn)行給予。在轉(zhuǎn)移性腫瘤的情況下，若能夠進(jìn)行切除手術(shù)，則同樣地優(yōu)選與手術(shù)配合從術(shù)中起給予數(shù)天。在切除困難、或懷疑向臟器轉(zhuǎn)移的情況下，優(yōu)選通過定期地給予來控制轉(zhuǎn)移。進(jìn)而，對于像上皮系的惡性腫瘤那樣在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)利尿鈉肽受體gc-a的惡性腫瘤患者，通過gc-a激動劑的給予，通過以emt的抑制為首的直接效果和基于阻礙向血管內(nèi)皮的粘接、浸潤的轉(zhuǎn)移抑制這樣的間接效果的兩者，能夠多方面地抑制轉(zhuǎn)移，所以可以期待更良好的轉(zhuǎn)移抑制效果。作為這樣的惡性腫瘤，可列舉出例如肺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、乳癌、子宮癌、卵巢癌、前列腺癌、骨腫瘤、腦腫瘤等。在篩選通過這樣的本發(fā)明的藥物的給予連腫瘤細(xì)胞自身的轉(zhuǎn)移能力的獲得也能夠抑制的給予對象時，也可以在給予前采集腫瘤組織，確認(rèn)細(xì)胞中的gc-a的表達(dá)，對確認(rèn)到受體的表達(dá)的患者進(jìn)行給予。此外，本發(fā)明的藥物等也包含將作為有效成分的2種以上的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑組合使用那樣的預(yù)防或抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的方法、為此的給予方法和/或這樣的方法中使用的藥物。將多個有效成分或藥劑“組合給予的藥物”是預(yù)想將該有效成分或藥劑組合給予的藥物。在本發(fā)明中，將多個有效成分或藥劑“組合給予”是指在某一定期間，被給予對象將組合的全部有效成分或藥劑攝入其體內(nèi)。可以作為全部有效成分包含于單一制劑中的制劑(所謂的配合劑)給予，此外，也可以將各有效成分分別制劑化，分別將它們的全部進(jìn)行給予(所謂的并用給予)。在分別制劑化的情況下，其給予的時期沒有特別限定，可以同時給予，也可以空出時間在不同的時間、或不同的日子給予。多個有效成分分別在不同的時間或日子給予時，有效成分的給予的順序沒有特別限定。通常，由于各制劑按照各自的給予方法給予，所以它們的給予有時為同一次數(shù)，有時為不同的次數(shù)。此外，在各有效成分分別被制劑化時，各制劑的給予方法(給予途徑)可以相同，也可以以不同的給予方法(給予途徑)進(jìn)行給予。此外，全部有效成分沒有必要同時存在于體內(nèi)，只要在某一定期間(例如一個月、優(yōu)選1周、進(jìn)一步優(yōu)選數(shù)天、進(jìn)一步更優(yōu)選1天)內(nèi)，全部有效成分被攝入體內(nèi)即可，當(dāng)給予一個有效成分時其它的有效成分已從體內(nèi)消失的情況也是可以的。在本發(fā)明的藥物等中，若例示出將作為有效成分的2種以上的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑組合給予時的組合，當(dāng)含有至少一種gc-a激動劑作為有效成分時，可以進(jìn)一步組合選自gc-b激動劑、nep抑制劑、pde5抑制劑、no供給劑、enos活化劑、gc-c激動劑及cgmp類似物中的至少一種，優(yōu)選組合選自gc-b激動劑、nep抑制劑、pde5抑制劑、及no供給劑中的至少一種，更優(yōu)選組合gc-b激動劑或pde5抑制劑。此外，當(dāng)采用至少一種gc-b激動劑作為有效成分時，可以進(jìn)一步組合選自nep抑制劑、pde5抑制劑、no供給劑、enos活化劑、gc-c激動劑及cgmp類似物中的至少一種，優(yōu)選組合選自nep抑制劑、pde5抑制劑、及no供給劑中的至少一種，更優(yōu)選組合nep抑制劑或pde5抑制劑。此外，當(dāng)采用至少一種pde5抑制劑作為有效成分時，可以進(jìn)一步組合選自nep抑制劑、no供給劑、enos活化劑、gc-c激動劑及cgmp類似物中的至少一種，優(yōu)選組合選自nep抑制劑、及no供給劑中的至少一種。此外，本發(fā)明的藥物通過與其它的通常使用的抗腫瘤劑的至少一種并用，可以有效地進(jìn)行惡性腫瘤的治療，本發(fā)明也提供這樣的與其它的抗腫瘤劑的并用療法。本發(fā)明的藥物由于可以控制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤，所以通過在利用其它的抗腫瘤劑的治療中一并適當(dāng)給予，可以期待能夠提高利用該抗腫瘤劑的治療的效率及改善治療預(yù)后。作為并用的抗腫瘤劑，可列舉出例如烷化劑、代謝拮抗劑、抗腫瘤抗生素、抗腫瘤性植物成分、brm(生物學(xué)響應(yīng)性控制物質(zhì))、激素、維生素、抗腫瘤性抗體、分子靶標(biāo)藥、其它的抗腫瘤劑等。更具體而言，作為烷化劑，可列舉出例如氮芥、氮芥n-氧化物或苯丁酸氮芥等烷化劑；卡波醌或塞替派等氮丙啶系烷化劑；二溴甘露醇或二溴衛(wèi)矛醇等環(huán)氧化物系烷化劑；卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、鹽酸尼莫司汀、鏈脲霉素、氯脲菌素或雷莫司汀等亞硝基脲系烷化劑；白消安、甲苯磺酸英丙舒凡或達(dá)卡巴嗪等。作為各種代謝拮抗劑，可列舉出例如6-疏嘌呤、6-硫鳥嘌呤或硫肌苷等嘌呤代謝拮抗劑；氟尿嘧啶、替加氟、替加氟·尿嘧啶、卡莫氟、去氧氟尿苷、溴尿苷、阿糖胞苷或依諾他賓等嘧啶代謝拮抗劑；甲氨喋呤或三甲曲沙等葉酸代謝拮抗劑等。作為抗腫瘤性抗生素，可列舉出例如絲裂霉素c、博來霉素、培洛霉素、柔紅霉素、阿柔比星、多柔比星、吡柔比星、thp-阿霉素、4’-表阿霉素或表柔比星等蒽環(huán)系抗生素抗腫瘤劑；色霉素a3或放線菌素d等。作為抗腫瘤性植物成分，可列舉出例如長春地辛、長春新堿或長春花堿等長春花生物堿類；紫杉醇、多西他賽等紫杉烷類；或依托泊苷或替尼泊苷等表鬼臼毒素類。作為brm，可列舉出例如腫瘤壞死因子或吲哚美辛等。作為激素，可列舉出例如氫化可的松、地塞米松、甲潑尼龍、潑尼松龍、普拉雄酮、倍他米松、曲安西龍、羥甲烯龍、諾龍、美替諾龍、磷雌酚、炔雌醇、氯地孕酮或甲羥孕酮等。作為維生素，可列舉出例如維生素c或維生素a等。作為抗腫瘤性抗體、分子靶標(biāo)藥，可列舉出曲妥珠單抗、利妥昔單抗、西妥昔單抗、尼妥珠單抗、地諾單抗、貝伐單抗、英夫利昔單抗、甲磺酸伊馬替尼、吉非替尼、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼、索拉非尼等。作為其它的抗腫瘤劑，可列舉出例如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、他莫昔芬、喜樹堿、異環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰胺、馬法蘭、l-天冬酰胺酶、醋葡醛內(nèi)酯、西佐喃、溶鏈菌、丙卡巴肼、哌泊溴烷、新抑癌素、羥基脲、烏苯美司或云芝胞內(nèi)多糖等。本發(fā)明中，在除了血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑以外還組合其它抗腫瘤劑給予的情況下，1種或2種以上的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑及其它抗腫瘤劑可以含有于單一制劑中，也可以分別作為不同的制劑的有效成分含有。給予一種或2種以上的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑及其它抗腫瘤劑的順序等也沒有特別限定。此外，本發(fā)明的藥物可以作為試劑盒提供。作為含有至少一種血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑的用于抑制或預(yù)防惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的試劑盒，可列舉出將anp、bnp或cnp等利尿鈉肽或它們的鹽作為冷凍干燥制劑封入的小藥瓶與用于溶解其的注射用水組合而制成的試劑盒等，此外，可以將用于溶解·給予的注射用注射器與它們組合，也可以進(jìn)一步組合微量輸液泵或小兒用微量輸液器。此外，在作為有效成分組合2種以上的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑使用的情況下，也可以將含有各有效成分的小藥瓶、片劑等組合而試劑盒化。此外，本發(fā)明的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑為利尿鈉肽等肽性的物質(zhì)時，也可以通過導(dǎo)入編碼其的基因而在患者的體內(nèi)表達(dá)該肽，基于此進(jìn)行基因治療。作為anp的基因，只要使用包含編碼序列號1或2的氨基酸序列的核苷酸序列的基因(例如，science，226卷，1206頁，1984年中記載的基因)即可。此外，作為bnp的基因，只要使用包含編碼序列號3、4或5的氨基酸序列的核苷酸序列的基因(例如，biochem.biophys.res.commun.，165卷，650頁，1989年中記載的基因)即可。此外，作為cnp的基因，只要使用包含編碼序列號7到10中的任一氨基酸序列的核苷酸序列的基因(例如，biochem.biophys.res.commun.，165卷，650頁，1989年中記載的基因)即可。在使用上述的基因進(jìn)行治療的情況下，只要使用反轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺伴隨病毒或人工載體作為載體，通過肌肉注射或局部注射導(dǎo)入基因即可。此外，也可以不使用上述那樣的載體，以質(zhì)粒的形式導(dǎo)入基因。關(guān)于具體的基因治療的方法，只要使用實驗醫(yī)學(xué)，12卷，303頁，1994年中記載的方法或其中引用的文獻(xiàn)的方法等即可。本發(fā)明也進(jìn)一步包含一種用于抑制或預(yù)防惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的藥物，其特征在于，含有至少一種血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑作為有效成分，對接受與其不同種類的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑的給予的對象進(jìn)行給予；及一種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移的抑制或預(yù)防方法，其特征在于，將有效量的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑對接受利用與其不同種類的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑的進(jìn)行治療的對象進(jìn)行給予。作為有效成分的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑、以及它們的給予方法等與上述的藥物組合物中的情況相同。作為這樣的用法中的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)cgmp增強(qiáng)劑的組合，優(yōu)選為gc-a激動劑或gc-b激動劑與pde5抑制劑的組合，更優(yōu)選為hanp、hcnp-22、hcnp6-22或它們的衍生物與西地那非或其藥理上可接受的鹽的組合，進(jìn)一步優(yōu)選為hanp與檸檬酸西地那非的組合。實施例以下，使用實施例對本發(fā)明具體地進(jìn)行說明。實施例所示的內(nèi)容為本發(fā)明的實施方式的一個例子，本發(fā)明并不限定于此。以下的實施例中使用的實驗材料的獲得方法及調(diào)制方法如下所述。hanp、及hcnp從asubiopharmaco.,ltd.獲得，hbnp從肽研究所(大阪)獲得，將分別獲得的冷凍干燥品用含有ibmx的生理鹽水溶解，對其適當(dāng)調(diào)節(jié)濃度使得ibmx的終濃度達(dá)到5×10-4m，用于以下的實驗。來自肺腺癌的細(xì)胞株a549細(xì)胞從atcc(manassas，va)獲得。細(xì)胞培養(yǎng)使用含有10％fcs的dmem(invitrogen公司、carlsbad、va)培養(yǎng)液，在37℃、5％co2的條件下進(jìn)行。關(guān)于培養(yǎng)液量，6孔板中設(shè)定為1.5ml，24孔板中設(shè)定為400μl，96孔板中設(shè)定為150μl。以下的實施例中，只要沒有特別指定則采用該培養(yǎng)液及培養(yǎng)條件。tgf-β1(transforminggrowthfactorβ1，轉(zhuǎn)化生長因子β1)使用從r&dsystems公司(minneapolis，mn)購入的產(chǎn)品，用生理鹽水適當(dāng)稀釋后用于以下的實驗。<實施例1>對癌細(xì)胞的由利尿鈉肽刺激引起的細(xì)胞內(nèi)cgmp水平的變動將a549細(xì)胞以4×104cell/孔添加到24孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天更換成無fcs的dmem培養(yǎng)液。在培養(yǎng)液中添加hanp、hbnp及hcnp溶液(最終濃度：從1×10-11m到1×10-6m的10倍稀釋系列，對照中為等量的生理鹽水)，其10分鐘后添加400μl的冷卻70％乙醇(含有0.1n鹽酸)，立即進(jìn)行超聲波處理。將處理后的溶液進(jìn)行冷凍干燥，使用cyclicgmpassaykit(yamasacorp.制)測定cgmp水平。將cgmp水平的測定結(jié)果示于圖1中。作為gc-a激動劑的hanp和hbnp濃度依賴性地增進(jìn)a549細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)cgmp。另一方面，作為cg-b受體激動劑的不與gc-a受體結(jié)合的hcnp中，未觀察到這樣的增進(jìn)。由此表示，在a549細(xì)胞中，特異性地響應(yīng)來自gc-a受體的刺激而引起信號傳導(dǎo)。<實施例2>利尿鈉肽對a549細(xì)胞的增殖抑制效果將a549細(xì)胞以4×104cell/孔添加到24孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天更換成無fcs的dmem培養(yǎng)液。在培養(yǎng)液中添加hanp、hbnp及hcnp溶液(最終濃度：從1×10-9m到1×10-6m的10倍稀釋系列，對照中為等量的生理鹽水)，在24、48小時后使用活細(xì)胞數(shù)測定試劑sf(nacalaitesque制)進(jìn)行細(xì)胞增殖分析。將結(jié)果示于圖2中。關(guān)于a549細(xì)胞的直到48小時后的細(xì)胞數(shù)，即使是最高1×10-6m的濃度，hanp、hbnp及hcnp與對照相比也基本沒有變化。根據(jù)vesely等的報道，anp具有抑制來自胰腺癌、乳癌等的各種癌細(xì)胞的增殖的效果，但在本發(fā)明的實施例的試驗體系中，在1×10-6m(1μm)下，全部利尿鈉肽對癌細(xì)胞的增殖均沒有影響。<實施例3>hanp對tgf-β1所致的emt誘導(dǎo)的效果將a549細(xì)胞以1×105cell/孔添加到6孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天更換成無fbs的dmem的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)24小時的培養(yǎng)液用于以下的實驗。制作anp組(添加anp溶液(終濃度：1μm))及對照組(添加等量的生理鹽水)，分別在添加的2小時后按照終濃度達(dá)到0.125、0.25、0.5、1.0及2.0ng/ml的方式添加tgf-β1，24小時后在顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，拍攝照片(圖3)。之后，使用總rna分離試劑(invitrogen公司)回收總rna，使用逆轉(zhuǎn)錄酶合成cdna，通過定量rt-pcr法測定e-鈣粘附蛋白、n-鈣粘附蛋白、vegf-a、pdgf-b、tnf-α及il-6的mrna水平。將mrna水平測定的結(jié)果示于圖4中。此外，已知在emt中，e-鈣粘附蛋白的表達(dá)減少，n-鈣粘附蛋白的表達(dá)亢進(jìn)，認(rèn)為n-鈣粘附蛋白/e-鈣粘附蛋白的表達(dá)比率作為表示emt的程度的指標(biāo)是有用的。將該比率示于圖5中。如圖3所示的那樣，1μm的hanp(圖3的c)顯著地抑制由tgf-β1刺激所誘導(dǎo)的emt引起的細(xì)胞的形態(tài)變化(如圖3的b那樣向與間葉系成分同樣的紡錘形變化)。此外，如圖4所示的那樣，顯著地抑制由于tgfβ1刺激所誘導(dǎo)的emt而表達(dá)亢進(jìn)的生長因子(vegf-a，pdgf-b)或炎癥性細(xì)胞因子(tnf-α、il-6)的基因表達(dá)。此外，顯著地抑制由tgf-β1刺激引起的n-鈣粘附蛋白的表達(dá)亢進(jìn)，阻礙由該刺激引起的e-鈣粘附蛋白的表達(dá)減少。其結(jié)果是，如圖5所示的那樣，在1μm的hanp存在下，emt的重要的指標(biāo)即n-鈣粘附蛋白/e-鈣粘附蛋白的表達(dá)比率顯著降低。此外，在使用來自肺大細(xì)胞癌的h460細(xì)胞的相同試驗中也得到同樣的結(jié)果。這樣，hanp在1μm的濃度下，顯示顯著地抑制成為癌的轉(zhuǎn)移的契機(jī)的重要現(xiàn)象即emt的效果。如實施例2中所示的那樣，由于hanp對該癌細(xì)胞在1μm下對增殖基本不造成影響，所以認(rèn)為hanp通過與對癌的增殖的效果完全不同的機(jī)制抑制癌細(xì)胞的emt。<實施例4>hanp對a549細(xì)胞的游走能力(boydenchamberassay)的作用將a549細(xì)胞以1×105cell/孔添加到6孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天更換成無fbs的dmem培養(yǎng)液，將培養(yǎng)24小時的培養(yǎng)液分成對照組、tgf-β1組及tgf-β1+hanp組的3組，用于以下的實驗。在培養(yǎng)液中，對于tgfβ+hanp組按照hanp的最終濃度達(dá)到1μm的方式添加hanp溶液，對于對照組及tgf-β1組添加等量的生理鹽水。從添加開始2小時后，如下所述進(jìn)行博伊登室試驗。在6孔板中，對于對照組添加1.5ml無fbs的dmem培養(yǎng)液，對于tgf-β組添加1.5ml含有tgf-β1(最終濃度：1ng/ml)的相同培養(yǎng)液，對于tgf-β1+hanp組添加1.5ml含有hanp(最終濃度：1μm)及tgf-β1(最終濃度：1ng/ml)的相同培養(yǎng)液。在其液面上放置細(xì)胞培養(yǎng)池(8.0μmporesize，bd公司制)，在其上添加將各組的a549細(xì)胞懸浮到無fbs的dmem(對于tgf-β1+anp組，添加最終濃度1μm的hanp)中而得到的細(xì)胞懸浮液1.5ml，進(jìn)行培養(yǎng)。20小時后，將各組的細(xì)胞培養(yǎng)池用10％福爾馬林固定，擦拭上表面，僅下表面進(jìn)行蘇木精-伊紅(h&e)染色。用顯微鏡觀察附著在insert的下表面的a549細(xì)胞的數(shù)目。將細(xì)胞的照片示于圖6的a中，將細(xì)胞數(shù)的圖表示于圖6的b中。a549細(xì)胞的游走能力在tgf-β1組中顯著地增加，但該現(xiàn)象通過1μm的hanp被顯著地抑制。此外，在使用了來自大細(xì)胞癌的h460細(xì)胞的相同試驗中也得到同樣的結(jié)果。<實施例5>hanp對癌細(xì)胞的運(yùn)動能力(woundhealingassay)的作用將a549細(xì)胞以4×105cell/孔添加到6孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天更換成無fbs的dmem培養(yǎng)液，培養(yǎng)24小時后，分成對照組、tgf-β1組及tgf-β1+hanp組的3組，用于以下的實驗。在培養(yǎng)液中，對于tgfβ1+hanp組按照hanp的最終濃度達(dá)到1μm的方式添加hanp溶液，對于對照組及tgf-β1組添加等量的生理鹽水。2小時后用200μl用移液吸頭弄傷孔的中央部。在剛弄傷后在顯微鏡下對各孔拍攝照片(圖7的a)。其中，在tgfβ+hanp組及tgf-β1組中，按照最終濃度達(dá)到1ng/ml的方式添加tgfβ1，培養(yǎng)24小時后，再次對各孔的相同部位拍攝照片，按照下式計算剛弄傷后與培養(yǎng)24小時后的傷幅之差的平均的比例(移動率：負(fù)傷面積填充百分率)。移動率(％)＝(最初的傷幅-24小時培養(yǎng)后的傷幅)/(最初的傷幅)×100將各孔的24小時后的傷口部分的照片示于圖7中，將各組的移動率示于圖8中。a549細(xì)胞的運(yùn)動能力通過tgf-β1刺激被增進(jìn)，但在1μm的hanp存在下，該運(yùn)動能力的增進(jìn)被顯著地抑制。此外，在使用了來自肺大細(xì)胞癌的h460細(xì)胞的相同試驗中也得到同樣的結(jié)果。<實施例6>hanp對癌細(xì)胞的浸潤能力的作用將a549細(xì)胞以1×105cell/孔添加到6孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天更換成無fbs的dmem的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)24小時的培養(yǎng)液分成對照組、tgf-β1組及tgf-β1+hanp組的3組，用于以下的實驗。在培養(yǎng)液中，對于tgfβ1+hanp組按照最終濃度達(dá)到1μm的方式添加hanp溶液，對于對照組及tgfβ1組添加等量的生理鹽水。從添加開始2小時后，如下所述進(jìn)行博伊登室試驗。事前如下準(zhǔn)備基質(zhì)膠包被的細(xì)胞培養(yǎng)池：細(xì)胞培養(yǎng)池(8.0μmporesize，bd公司)放置在6孔板上，在其上添加0.5μg/μl基質(zhì)膠液(通過pbs進(jìn)行調(diào)整)300μl，風(fēng)干12小時而制成。在6孔板的各孔中，對于對照組添加1.5ml無fbs的dmem培養(yǎng)液，對于tgf-β組添加1.5ml含有tgf-β1(最終濃度：1ng/ml)的相同培養(yǎng)液，對于tgfβ1+hanp組添加1.5ml含有hanp(最終濃度：1μm)及tgf-β1(最終濃度：1ng/ml)的相同培養(yǎng)液。在其液面上放置如上所述包被后的細(xì)胞培養(yǎng)池，在其上添加將各組的a549細(xì)胞懸浮到無fbs的dmem(對于tgfβ1+hanp組，添加最終濃度為1μm的hanp)中而得到的細(xì)胞懸浮液1.5ml，進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)40小時后，將各組的細(xì)胞培養(yǎng)池用10％福爾馬林固定，擦拭上表面，僅下表面進(jìn)行蘇木精-伊紅(h&e)染色。用顯微鏡觀察附著在insert的下表面上的a549細(xì)胞的數(shù)目。將該細(xì)胞的照片示于圖9的a中，將細(xì)胞數(shù)的圖表示于圖9的b中。基質(zhì)膠層介導(dǎo)的細(xì)胞浸潤在tgf-β1組中顯著地增加，但該細(xì)胞浸潤被1μm的hanp顯著地抑制。此外，在使用了來自肺大細(xì)胞癌的h460細(xì)胞的相同試驗中也得到同樣的結(jié)果。<實施例7>hanp對癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)活性將a549細(xì)胞以1×104cell/孔添加到96孔板中進(jìn)行培養(yǎng)。第二天更換成無fbs的dmem培養(yǎng)液，培養(yǎng)24小時后進(jìn)行以下的實驗。在培養(yǎng)液中，添加按照hanp的最終濃度分別達(dá)到1、5、10μm的方式調(diào)制稀釋系列的hanp溶液(對照中為等量的生理鹽水)，進(jìn)一步在2、4、6小時后，以該濃度追加添加(共添加4次)等量的hanp溶液(對照中為生理鹽水)。48小時后用自動細(xì)胞數(shù)計測器countess(注冊商標(biāo))(invitrogen公司)測定使用臺盼藍(lán)染色的細(xì)胞的viability(活細(xì)胞/全部細(xì)胞)。此外，使用來自肺大細(xì)胞癌的h460細(xì)胞、來自肺鱗癌細(xì)胞的h520細(xì)胞、來自支氣管肺泡上皮癌的h358細(xì)胞進(jìn)行同樣的試驗。將結(jié)果示于圖10中。各種癌細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)呈hanp的濃度依賴性地減少，表示hanp通過持續(xù)地存在于培養(yǎng)液中，對癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡。<實施例8>癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)中的hanp和順鉑的并用效果順鉑使用注射用順鉑“maruko”(商品名、nichi-ikopharmaceuticalco.,ltd.)。將a549細(xì)胞以1×104cell/孔添加到96孔板中進(jìn)行培養(yǎng)。第二天更換成無fbs的dmem培養(yǎng)液，培養(yǎng)24小時后，分成對照組、順鉑單獨組、1μmhanp組、順鉑+1μmhanp組、10μmhanp組、順鉑+10μmhanp組進(jìn)行以下的實驗。在培養(yǎng)液中，對于hanp添加組添加按照最終濃度分別達(dá)到1μm、10μm方式調(diào)制的hanp溶液，對于對照組、順鉑單獨組添加等量的生理鹽水。此外，對于順鉑添加組添加按照最終濃度分別達(dá)到1、5、10、20、30μm的方式調(diào)制了稀釋系列的順鉑溶液(對照組、hanp單獨組中為等量的生理鹽水)。進(jìn)一步在2、4、6小時后，以該濃度追加添加(共添加4次hanp)等量的hanp溶液(對照及順鉑單獨組中為生理鹽水)。48小時后用自動細(xì)胞數(shù)計測器countess(注冊商標(biāo))(invitrogen公司)測定使用臺盼藍(lán)染色的細(xì)胞的viability(活細(xì)胞/全部細(xì)胞)。此外，使用h460細(xì)胞、h520細(xì)胞、h358細(xì)胞進(jìn)行同樣的試驗。將hanp濃度1μm的結(jié)果示于圖11中，將10μm的結(jié)果示于圖12中。顯示hanp的對癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)活性通過與順鉑并用而得到增強(qiáng)。<實施例9>癌細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞系上的植入試驗正常人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(huvec)從takarabioinc.購入。培養(yǎng)基、繼代按照制品的添附的文件的指示進(jìn)行。核染色使用topro3(從invitrogen公司購入)進(jìn)行，ve-鈣粘附蛋白的免疫染色使用抗ve-鈣粘附蛋白抗體(從bdbiosciences公司購入)進(jìn)行。將huvec細(xì)胞培養(yǎng)至鋪滿狀態(tài)，更換成無血清培養(yǎng)基后，在vegf及hanp的存在下及非存在下，進(jìn)行使用抗ve-鈣粘附蛋白抗體的免疫染色及核染色，觀察ve-鈣粘附蛋白的表達(dá)。將各條件下的染色的情況示于圖13的照片。在vegf單獨存在下，ve-鈣粘附蛋白的表達(dá)降低，觀察到形成細(xì)胞的間隙的現(xiàn)象，但在vegf+hanp中該現(xiàn)象被抑制，維持與對照組相同程度的緊密的細(xì)胞粘接。此外，在該huvec細(xì)胞層上，添加a549細(xì)胞，結(jié)果在vegf單獨存在下，觀察到a549細(xì)胞進(jìn)入huvec細(xì)胞層下的植入現(xiàn)象，與此相對，在vegf+hanp(1μm)中該植入現(xiàn)象被抑制。由此認(rèn)為，hanp具有抑制癌細(xì)胞在血管內(nèi)皮組織上植入、向轉(zhuǎn)移目標(biāo)組織浸潤的作用。因而，若綜合這些內(nèi)容，則認(rèn)為hanp具有通過抑制癌細(xì)胞的emt而使浸潤、轉(zhuǎn)移能力降低以及特異性誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡這樣的對癌細(xì)胞的直接效果、和發(fā)揮抑制向作為植入側(cè)的血管內(nèi)皮細(xì)胞植入的作用這樣的間接效果。<實施例10>肺癌患者的癌切除術(shù)后給予hanp的癌復(fù)發(fā)抑制效果報道了在血中bnp水平為30pg/ml以上的肺癌患者的癌切除術(shù)中，術(shù)后并發(fā)癥風(fēng)險高。在本試驗中，在肺癌患者的癌切除術(shù)前測定血中bnp水平，以30pg/ml為基準(zhǔn)，將其以上的患者的一部分或主治醫(yī)生判斷為術(shù)后并發(fā)癥風(fēng)險高的患者設(shè)為hanp組(全52例、癌的進(jìn)展程度明細(xì)(1a期：26例(50％)、1b期：16例(23％)、2期：7例(13％)、3期：3例(6％))。此外，不管血中bnp水平如何地設(shè)定對照組(287癥例、癌的進(jìn)展程度明細(xì)(1a期：155例(54％)、1b期：65例(23％)、2期：35例(12％)、3期：32例(11％))。hanp組從肺癌手術(shù)中到術(shù)后3天，按照0.025μg/kg/分鐘的用量調(diào)制hanp(商品名：hanp注射用1000、非快速濃注、第一三共(株))，進(jìn)行持續(xù)給予。在手術(shù)前及術(shù)后4天，測定各患者的血壓(收縮期及舒張期)、心律及尿量(將結(jié)果示于圖15中)。手術(shù)后約2年間，追蹤調(diào)查患者的癌的早期復(fù)發(fā)狀況?；颊呙?年施行胸部ct檢查、頭部mri檢查、骨閃爍顯像、或正電子斷層造影(pet)檢查，進(jìn)行關(guān)于復(fù)發(fā)的有無的全身檢查。將各組中的癌無復(fù)發(fā)生存率的結(jié)果示于圖14中。手術(shù)后2年間的癌的無復(fù)發(fā)生存率在對照組中隨著癌的進(jìn)展程度而降低，1a期中為91.6％，1b期中為73.4％，2期中為48％，3期中為29％。另一方面，在hanp組中，無論癌的進(jìn)展程度均未見到癌的早期復(fù)發(fā)。此外，如圖15所示的那樣，在hanp的0.025μg/kg/分鐘這樣的低用量療法中對于患者的血壓、心博、尿量等體液狀態(tài)未見到大的變動。這暗示了，若是該給予量，則即使在給循環(huán)系統(tǒng)沒有異常的患者給予的情況下，由hanp的主藥效引起的生物體變化也為不成問題的程度。由此表示，hanp的低用量療法不僅對于具有心力衰竭風(fēng)險的癌患者，而且對于沒有心力衰竭風(fēng)險的患者，作為安全、且副作用少的抗轉(zhuǎn)移療法也是非常有用的。<實施例11>各種gc-a激動劑對a549細(xì)胞的emt的作用在與實施例3同樣的試驗中，作為待檢物質(zhì)，代替hanp而使用hbnp(最終濃度：1μm)、cd-np(最終濃度：10μm(參照deborahetal.,j.biol.chem.,(2008),vol.289,no.50,pp.35003-35009))、lkl-anp(最終濃度：1μm(hanp的10～12位的氨基酸取代成lkl的突變體。參照(furuya,m.etal,biochem.biophys.res.commun.,(1992),183,no3,p.964-969)))進(jìn)行試驗，其結(jié)果是，在e-cad/ncad的值中，tgf-β誘導(dǎo)的emt的抑制率在bnp中為44.8％、cd-np中為37.7％、lkl-anp中為52.9％。這樣，各種gc-a激動劑顯示抑制腫瘤細(xì)胞的emt的作用。<實施例12>小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的hanp對a549細(xì)胞的轉(zhuǎn)移的效果小鼠使用6周齡的雄的balb/cnu/nu小鼠(從日本slc株式會社購入)。滲透泵使用alzet(cupertino，ca)的model2004(28天給予用)。將在小鼠的背部皮下埋入有裝有0.9％生理鹽水的滲透泵的小鼠設(shè)為對照組。同樣地，將在小鼠的皮下埋入有按照以0.5μg/kg/分鐘的給予量給予hanp的方式調(diào)制的滲透泵的組設(shè)為anp給予組。在滲透泵埋入后第二天進(jìn)行腫瘤細(xì)胞懸浮液的注入。作為腫瘤細(xì)胞，將gfp(greenfluorescentprotein，綠色熒光蛋白)標(biāo)記的a549細(xì)胞株(從和光純藥工業(yè)株式會社購入)用含有10％fcs的rpmi1640(lifetechnologiescorporation)在37℃、5％co2的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在即將締合(subconfluent)的狀態(tài)下進(jìn)行edta-胰蛋白酶處理后，離心，按照達(dá)到1×107cells/ml的方式懸浮于無血清dmem中。以100μl/個體的體積，將1×106個a549細(xì)胞懸浮液注入小鼠的尾靜脈。利用滲透泵的生理鹽水或anp的給予設(shè)為4周，通過熒光顯微鏡(olympusov100)觀察從腫瘤細(xì)胞注入開始8周后的肺轉(zhuǎn)移的情況(圖16)。此外，將在熒光顯微鏡下觀察的每1只小鼠的通過肺轉(zhuǎn)移形成的結(jié)節(jié)數(shù)示于圖17的圖表中。如圖16及圖17所示的那樣，通過hanp的最初的4周給予，癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移被顯著地抑制。此外，在作為腫瘤細(xì)胞使用h460細(xì)胞的試驗中，也得到同樣的結(jié)果。<實施例13>小鼠尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗中的各種cgmp增強(qiáng)劑對黑色素瘤的轉(zhuǎn)移的作用小鼠使用6周齡的雄的c56bl/6n小鼠(從日本slc株式會社購入)。小鼠黑色素瘤b16-f10從atcc購入，用含有10％fcs的dmem(lifetechnologiescorporation)在37℃、5％co2的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在即將締合的狀態(tài)下進(jìn)行edta-胰蛋白酶處理后，離心，按照達(dá)到5×106cells/ml的方式懸浮于無血清dmem中。以100μl/小鼠的體積，將5×105個黑色素瘤細(xì)胞懸浮液從小鼠的尾靜脈注入。滲透泵使用alzet(cupertino，ca)的model2002(14天給予用)。將在小鼠的背部皮下埋入有裝有0.9％生理鹽水的滲透泵的小鼠設(shè)為對照組。同樣地，對于anp組在小鼠的皮下埋入按照以0.5μg/kg/分鐘的給予量給予hanp的方式調(diào)制的滲透泵，對于bnp組在小鼠的皮下埋入按照以0.5μg/kg/分鐘的給予量給予小鼠bnp的方式調(diào)制的滲透泵，對于cnp組在小鼠的皮下埋入按照以2.5μg/kg/分鐘的給予量給予hcnp-22的方式調(diào)制的滲透泵。此外對于西地那非組以20mg/kg的用量，一天一次腹腔內(nèi)給予檸檬酸西地那非。在給予開始的第二天，按照上述的要領(lǐng)進(jìn)行腫瘤細(xì)胞懸浮液的注入，給予藥劑2周。觀察從腫瘤細(xì)胞注入開始2周后的腫瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移的情況(圖18)，將此時觀察的每一只小鼠的由肺轉(zhuǎn)移形成的結(jié)節(jié)數(shù)示于圖19的圖表中。如圖18及圖19所示的那樣，在anp組、bnp組、cnp組、及西地那非組的全部中，與對照組相比較，黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移被顯著地抑制。<實施例14>對gc-a敲除小鼠的黑色素瘤尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗作為小鼠，使用12周齡的雄的gc-a敲除(ko)小鼠(全身、內(nèi)皮組織特異性敲除、tokudomet.,kishimotoi.,kangawak.,etal(arteriosclerthrombvascbiol.2009；29:1516-21)、kishimotoi,tokudomet,nakaok,kangawak.(febsj.2011；278:1830-41))，與實施例13同樣地進(jìn)行(其中黑色素瘤b16-f10細(xì)胞懸浮液按照達(dá)到2.5×106cells/ml的方式調(diào)制，以100μl/小鼠的體積(2.5×105celsl/小鼠)注入)小鼠黑色素瘤細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移試驗，將2周后的野生型、全身gc-ako、及內(nèi)皮特異性gc-ako的各小鼠的由轉(zhuǎn)移到肺中的黑色素瘤細(xì)胞形成的結(jié)節(jié)數(shù)示于圖20的圖表中。如圖20所示的那樣，在全身gc-ako小鼠、內(nèi)皮組織特異性gc-ako小鼠這兩者中，與野生型小鼠相比較黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移均顯著地增加。<實施例15>對內(nèi)皮特異性gc-a過量表達(dá)小鼠的黑色素瘤尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗作為小鼠，使用12周齡的雄的內(nèi)皮組織特異性gc-a過量表達(dá)小鼠(參考zhunml,etal(cardiovascres.2009；84:292-9)等來制作)，與實施例13同樣地進(jìn)行(其中黑色素瘤b16-f10細(xì)胞懸浮液按照達(dá)到1.0×107cells/ml的方式調(diào)制，以100μl/小鼠的體積(1.0×106celsl/小鼠)注入)尾靜脈注入轉(zhuǎn)移試驗，將2周后的野生型及gc-a過量表達(dá)小鼠的肺中形成的結(jié)節(jié)數(shù)示于圖21的圖表中。如圖21所示的那樣，在內(nèi)皮組織特異性gc-a過量表達(dá)小鼠中，與ko小鼠的結(jié)果相反，與野生型小鼠相比較黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移被顯著地抑制。由實施例14、15的結(jié)果強(qiáng)烈暗示了，在生物體中特別是內(nèi)皮組織中的gc-a介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。序列表<110>獨立行政法人國立循環(huán)器病研究中心（nationalcerebralandcardiovascularcenter）國立大學(xué)法人大阪大學(xué)（osakauniversity）鹽野義制藥株式會社（shionogi&co.,ltd.）<120>惡性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制用藥物<130>d26f4083<150>jp2011-41263<151>2011-2-28<160>11<170>patentinversion3.4<210>1<211>28<212>prt<213>智人（homosapiens）<400>1serleuargargsersercyspheglyglyargmetaspargilegly151015alaglnserglyleuglycysasnserpheargtyr2025<210>2<211>28<212>prt<213>黑鼠（rattusrattus）<400>2serleuargargsersercyspheglyglyargileaspargilegly151015alaglnserglyleuglycysasnserpheargtyr2025<210>3<211>32<212>prt<213>智人（homosapiens）<400>3serprolysmetvalglnglyserglycyspheglyarglysmetasp151015argileserserserserglyleuglycyslysvalleuargarghis202530<210>4<211>32<212>prt<213>野豬（susscrofa）<400>4serprolysthrmetargaspserglycyspheglyargargleuasp151015argileglyserleuserglyleuglycysasnvalleuargargtyr202530<210>5<211>45<212>prt<213>黑鼠（rattusrattus）<400>5serglnaspseralapheargileglngluargleuargasnserlys151015metalahissersersercyspheglyglnlysileaspargilegly202530alavalserargleuglycysaspglyleuargleuphe354045<210>6<211>21<212>prt<213>人工序列<220><223>來自anp和bnp的環(huán)結(jié)構(gòu)序列<220><221>misc_feature<222>(4)..(5)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸或者人工的氨基酸類似物<220><221>misc_feature<222>(6)<223>xaa可以是met、leu或ile<220><221>misc_feature<222>(10)..(14)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸或者人工的氨基酸類似物<220><221>misc_feature<222>(18)..(20)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸或者人工的氨基酸類似物<400>6cyspheglyxaaxaaxaaaspargleuxaaxaaxaaxaaxaaleugly151015cysxaaxaaxaaarg20<210>7<211>22<212>prt<213>智人（homosapiens）<400>7glyleuserlysglycyspheglyleulysleuaspargileglyser151015metserglyleuglycys20<210>8<211>53<212>prt<213>智人（homosapiens）<400>8aspleuargvalaspthrlysserargalaalatrpalaargleuleu151015glngluhisproasnalaarglystyrlysglyalaasnlyslysgly202530leuserlysglycyspheglyleulysleuaspargileglysermet354045serglyleuglycys50<210>9<211>22<212>prt<213>原雞（gallusgallus）<400>9glyleuserargsercyspheglyvallysleuaspargileglyser151015metserglyleuglycys20<210>10<211>22<212>prt<213>蛙屬（ranasp.）<400>10glytyrserargglycyspheglyvallysleuaspargileglyala151015pheserglyleuglycys20<210>11<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>來自cnp的環(huán)結(jié)構(gòu)序列<220><221>misc_feature<222>(11)..(11)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸或者人工的氨基酸類似物,優(yōu)選為ser或ala<220><221>misc_feature<222>(12)..(12)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸或者人工的氨基酸類似物,優(yōu)選為met、phe或glu<400>11cyspheglyleulysleuaspargileglyxaaxaaserglyleugly151015cys當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12