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一種用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng)的制作方法

文檔序號(hào):994571閱讀:515來源:國知局
專利名稱:一種用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域,涉及一種用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng),具體涉及由含有LyP-I (氨基酸序列為CGNKRTRGC)序列的多肽修飾的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng)、制備方法及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)
隨著人類生存環(huán)境的惡化,誘發(fā)癌癥的因素越來越多,癌癥的發(fā)病率呈明顯的上升趨勢(shì)。癌癥已成為威脅人類健康和生命的主要疾病。淋巴轉(zhuǎn)移是實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑, 也是腫瘤導(dǎo)致患者死亡的重要原因。淋巴轉(zhuǎn)移一般發(fā)生在腫瘤早期或中期,如不及時(shí)控制, 可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞經(jīng)淋巴回流至血流擴(kuò)散,引發(fā)更廣泛的腫瘤轉(zhuǎn)移。據(jù)臨床研究統(tǒng)計(jì),60% 惡性腫瘤患者初診時(shí)即已發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。目前臨床上對(duì)腫瘤的常規(guī)治療方法是切除原發(fā)瘤和淋巴清掃之后,進(jìn)行全身化療或放療。但是,外科手術(shù)不能徹底清除腫瘤轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié), 從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā);化療藥物靜注后,藥物到達(dá)腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的幾率很小,目前尚無有效的手段加以控制和治療。因此,對(duì)淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤進(jìn)行靶向治療具有重要的臨床現(xiàn)實(shí)意義。鑒于機(jī)體組織間隙生理學(xué)特點(diǎn)(含眾多有親水性孔道(約IOOnm),毛細(xì)淋巴管壁孔隙(30-120nm)大于毛細(xì)血管壁孔隙(< lOnm)),通過組織間隙注射一定納米尺度(如 SOnm左右)的載藥系統(tǒng),可以將其靶向至淋巴系統(tǒng)。目前用于靶向淋巴系統(tǒng)遞藥的納米載體包括活性炭、硅粒、高分子聚合物、脂質(zhì)體、納米粒、納米乳和聚合物膠束等。在各種納米載體中,脂質(zhì)體以其天然結(jié)構(gòu)特性、便于修飾、易于粒徑控制和親水親脂性藥物兼可包載等的優(yōu)越性,被認(rèn)為是最適合的淋巴系統(tǒng)靶向載體。但在脂質(zhì)體具體實(shí)施淋巴系統(tǒng)靶向過程中普遍存在如下問題①脂質(zhì)體經(jīng)組織間隙注射后,淋巴吸收不完全,部分滯留于注射部位組織間隙,滯留量約為總給藥劑量的10-40%,反復(fù)注射含抗腫瘤藥物脂質(zhì)體,會(huì)導(dǎo)致局部組織損傷甚至壞死;②進(jìn)入淋巴系統(tǒng)的脂質(zhì)體因機(jī)械截留或巨噬細(xì)胞吞噬而在正常淋巴結(jié)中蓄積,易造成正常淋巴組織損傷;③脂質(zhì)體在淋巴結(jié)中蓄積是一個(gè)被動(dòng)過程,對(duì)正常淋巴結(jié)和腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)沒有選擇性,甚至?xí)蚰[瘤轉(zhuǎn)移所致淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)破壞而無法截留或吞噬脂質(zhì)體時(shí),被腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)攝取脂質(zhì)體量反而低于正常淋巴結(jié),影響其靶向治療效果。 其中,前兩個(gè)問題有研究已采用"壓力補(bǔ)償"和"飽和巨噬細(xì)胞"策略對(duì)其給予了較好的解決并獲得中國發(fā)明專利(ZL2005100M046. 8)。但第三個(gè)問題-脂質(zhì)體對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的靶向遞藥問題仍未得到有效解決。近期研究發(fā)現(xiàn),腫瘤誘導(dǎo)的淋巴管新生現(xiàn)象是促進(jìn)腫瘤發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的重要因素,并發(fā)現(xiàn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的兩種蛋白VEGFR-3和VEGFR-2是淋巴管新生過程中所需受體,故有研究者利用VEGFR-3和VEGFR-2的抑制劑來抑制腫瘤組織和淋巴結(jié)內(nèi)的淋巴管新生,從而達(dá)到抑制腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的目的。結(jié)果表明,這種治療方法對(duì)前期腫瘤治療效果良好,能有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移,但對(duì)已發(fā)生淋巴管增生或者發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤則基本無效。LyP-I是一種通過噬菌體展示技術(shù)篩選得到的環(huán)狀九肽,其不僅對(duì)原位腫瘤具有靶向性,而且對(duì)淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤也具有靶向能力。LyP-I能靶向的腫瘤包括黑色素瘤(MDA-MB-435)、乳腺癌(MMTV-PyMT)、前列腺癌(TRAMP)、皮膚癌(K14-HPV16)、骨肉瘤 (KRIB)等;LyP-I對(duì)淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的靶向性是基于其與腫瘤細(xì)胞和腫瘤內(nèi)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的特異親和性識(shí)別?,F(xiàn)有研究者利用LyP-I修飾白蛋白納米粒和疊氮納米粒,還有研究者制備了能夠表達(dá)LyP-I的病毒性載體,所有這些載藥系統(tǒng)都表現(xiàn)出良好的主動(dòng)靶向至原位腫瘤的效果。目前還未見將LyP-I用于修飾脂質(zhì)體的報(bào)道,也未見將其用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng)。本發(fā)明構(gòu)建了一種由含LyP_l(氨基酸序列為CGNKRTRGC)序列的多肽與脂質(zhì)體組成載體系統(tǒng),其中LyP-I序列多肽由兩個(gè)半胱氨酸通過二硫鍵連接成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。該脂質(zhì)體載體系統(tǒng)可用于實(shí)現(xiàn)向原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的靶向遞藥。本發(fā)明提供的脂質(zhì)體載體系統(tǒng)可通過皮下組織間隙注射或肌肉注射將脂質(zhì)體被動(dòng)引流至淋巴系統(tǒng)內(nèi),通過LyP-I的介導(dǎo)作用靶向至腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。所述的系統(tǒng)也可直接通過靜脈注射給藥,通過腫瘤EI5R效應(yīng)和LyP-I介導(dǎo)作用將其靶向至原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤。所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng)可用作原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤診斷或治療的藥物靶向遞送。本發(fā)明中,含LyP-I序列的多肽通過固相合成法合成,HPLC(高效液相色譜法)和 MS (質(zhì)譜法)表征其結(jié)構(gòu)。對(duì)其進(jìn)行熒光素FAM (羧基熒光素)標(biāo)記考查其體外腫瘤細(xì)胞攝取和體內(nèi)對(duì)原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的靶向性,結(jié)果證實(shí)LyP-I對(duì)體外腫瘤細(xì)胞和體內(nèi)原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤具有特異靶向性。本發(fā)明中,脂質(zhì)體載體系統(tǒng)的膜材料包括以下成分a:天然磷脂或合成磷脂, 和b 膽固醇,和c 甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物(甲氧基聚乙二醇的分子量為1000 5000),和d 含LyP-I序列的多肽-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物(聚乙二醇的分子量為1000 8000)。各成分之間的摩爾比為a :b = 5:l l:2,a: c = 1000 1 1000 100, aid= 1000 1 1000 100。所述的天然磷脂或合成磷脂可以是蛋磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、 二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂。所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物和含LyP-I序列多肽的多肽-聚乙二醇_磷脂復(fù)合物中的磷脂可以是二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰乙醇胺、氫化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺。所述的含LyP-I序列的多肽-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物,通過以下兩種方式合成1、含LyP-I序列的多肽提供一個(gè)游離巰基,聚乙二醇-磷脂提供一個(gè)馬來酰亞胺基,兩者發(fā)生特異性反應(yīng)而連接成共價(jià)復(fù)合物,其反應(yīng)式如下
權(quán)利要求
1.一種用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征在于,由含 LyP-I序列的多肽與脂質(zhì)體組成,其中LyP-I序列多肽由兩個(gè)半胱氨酸通過二硫鍵連接成環(huán)狀結(jié)構(gòu);所述的LyP-I氨基酸序列為CGNKRTRGC。
2.按權(quán)利要求1所述的用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征在于,所述的脂質(zhì)體其膜材料選自下述成分a 天然磷脂或合成磷脂,和b 膽固醇,和 c 甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物,和d 含LyP-I序列的多肽-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物;所述的脂質(zhì)體膜材料成分的摩爾比為a b = 5 1 1 2,a C=IOOO 1 1000 100,aid= 1000 1 1000 100。
3.按權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征在于,所述的天然磷脂或合成磷脂選自蛋磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、I"棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂或二硬脂酰鞘磷脂。
4.按權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征是,所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中甲氧基聚乙二醇分子量為1000 5000,所述的含LyP-I序列的多肽-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中聚乙二醇分子量為1000 8000。
5.按權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征是所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物或含LyP-I序列多肽的多肽-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中的磷脂選自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰乙醇胺、氫化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺。
6.按權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征是所述的含LyP-I序列的多肽-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中,LyP-I序列多肽通過共價(jià)鍵形式與聚乙二醇-磷脂連接而成復(fù)合物。
7.按權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征是所述的含LyP-I序列的多肽提供一個(gè)游離巰基,聚乙二醇-磷脂提供一個(gè)馬來酰亞胺基,兩者發(fā)生特異性反應(yīng)而連接成共價(jià)復(fù)合物;或者含LyP-I序列的多肽提供一個(gè)游離氨基,聚乙二醇-磷脂提供一個(gè)N-羥基琥珀酰亞胺基,兩者發(fā)生特異性反應(yīng)而連接成共價(jià)復(fù)合物。
8.按權(quán)利要求1所述脂質(zhì)體載體系統(tǒng),其特征是所述的脂質(zhì)體粒徑范圍為20 500nmo
9.權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體載體系統(tǒng)在制備用于原位腫瘤或淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤靶向診斷或治療藥物中的用途。
10.按權(quán)利要求9所述的用途,所述的藥物通過靜脈注射、皮下注射或肌肉注射給藥。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域,涉及一種用于原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤的主動(dòng)靶向脂質(zhì)體載體系統(tǒng),該載體系統(tǒng)由含LyP-1氨基酸序列為CGNKRTRGC序列的多肽與脂質(zhì)體組成,其中LyP-1序列多肽由兩個(gè)半胱氨酸通過二硫鍵連接成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。該脂質(zhì)體載體系統(tǒng)可通過皮下組織間隙注射或肌肉注射將脂質(zhì)體被動(dòng)引流至淋巴系統(tǒng)內(nèi),通過LyP-1的介導(dǎo)作用靶向至腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。該系統(tǒng)也可直接通過靜脈注射給藥,通過腫瘤EPR效應(yīng)和LyP-1介導(dǎo)作用將其靶向至原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤。本發(fā)明脂質(zhì)體載體系統(tǒng)可用作原位腫瘤和淋巴轉(zhuǎn)移腫瘤診斷或治療的藥物靶向遞送。
文檔編號(hào)A61K49/14GK102266565SQ201010192398
公開日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2010年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者占昌友, 孟慶剛, 王飛, 謝操, 閆志強(qiáng), 陸偉躍, 顧炳 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)
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