本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及來自藥用植物的未確定結(jié)構(gòu)的藥物制劑，特別是涉及抗高血脂藥。
背景技術(shù)：
：高脂血癥是機體脂代謝異常導(dǎo)致的血清脂質(zhì)和脂蛋白升高，主要是以血清膽固醇和甘油三酯等水平過高為主要表現(xiàn)的一類病癥。隨著飲食結(jié)構(gòu)的變化，高脂血癥的發(fā)生率日益升高。尤其是在代謝紊亂過程中，高脂血癥愈來愈呈常見和多發(fā)之勢?，F(xiàn)代大量研究結(jié)果表明，高脂血癥是動脈粥樣硬化的高危因素，與缺血性心臟病、心肌梗塞、腦梗塞甚至中風(fēng)等疾病密切相關(guān)，嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命?，F(xiàn)有治療高脂血癥的有效藥物主要是以他汀類藥物為代表，因其確切的療效，已成為大多數(shù)臨床醫(yī)生的首選。但大劑量或長期服用他汀類藥物會產(chǎn)生肌毒和肝轉(zhuǎn)氨酶升高。另外貝特類和煙酸類降脂藥物會產(chǎn)生胃腸道不適和肝腎損傷。因此尋找療效顯著、安全可靠的降血脂藥一直是臨床亟待解決的重要課題。中醫(yī)藥治療高脂血癥取得了顯著成就，鑒于中藥毒副作用較小，甚至無毒副作用，能夠適合病人長期服用的優(yōu)點，從中醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)ふ依硐氲闹委煾咧Y的藥物已成為全世界醫(yī)學(xué)專家學(xué)者關(guān)注的焦點。本發(fā)明正是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，經(jīng)過發(fā)明人多年的臨床探索研制而成的高脂血癥有效藥物。該藥物治療高脂血癥不僅療效顯著，而且適合長期服用，無明顯的胃腸不適癥狀，以及肝腎損傷。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種治療高脂血癥的中藥組合物，該中藥組合物的治療效果顯著，且無明顯的毒副作用。本發(fā)明所要解決上述問題的技術(shù)方案如下：一種治療高脂血癥的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物的有效成份由以下重量份的原料藥制成：辣木根20—40份，粟米20—40份，黑豆15—25份，板栗15—25份，地龍10—20份，胡桃仁10—20份，黑芝麻10—20份，甘草5-15份。上述中藥組合物，其中制備所述有效成份的原料藥的最佳配比為：辣木根30份，粟米30份，黑豆20份，板栗20份，地龍15份，胡桃仁15份，黑芝麻15份，甘草10份。本發(fā)明所述的中藥組合物為常見的口服制劑，該口服制劑為由上述有效成份和醫(yī)學(xué)可接受的輔料按常規(guī)方法制成的顆粒劑、膠囊、片劑或丸劑。本發(fā)明所述的口服制劑可以采用各種常見的制備方法獲得，其中一種簡便易行的方法由以下步驟組成：①按配比稱取其他原料藥，每一次加8～10倍的水煎煮2次，合并煎液，靜置約12小時后，取上清液并濃縮至稠膏狀；②將步驟①獲得的稠膏狀提取物濃縮成浸流膏并噴霧干燥，得浸膏粉；③加入適量醫(yī)學(xué)可接受的輔料，按常規(guī)方法制成常用的口服制劑。依據(jù)中醫(yī)方劑學(xué)理論，采用君臣佐使配伍結(jié)構(gòu)，令諸藥協(xié)同配伍，從而產(chǎn)生整體功效，并非單獨藥物功效的簡單疊加。本發(fā)明人基于長期的臨床實踐認(rèn)為，高脂血癥的主要病機為脾虛夾濕，治療高脂血癥的基本方法為健脾祛濕。方中辣木根健脾祛濕為君藥，粟米、黑豆、板栗皆入脾經(jīng)而具健脾功效，可輔助辣木根加強健脾祛濕功效，為臣藥。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，“水寒則土濕”，腎臟屬水臟，腎水犯脾可加引起脾虛濕重。胡桃仁、黑芝麻性味甘溫，皆入腎經(jīng)，能夠溫腎臟，可以制約水濕犯脾，地龍入膀胱經(jīng)，擅動而利尿，可以達(dá)到“利小便而祛濕”的功效，三藥相伍共為佐藥。甘草功擅調(diào)和諸藥而為使藥。全方君臣佐使，共奏健脾祛濕，以降血脂之主要功效。本發(fā)明所述的中藥組合物治療高脂血癥的效果，通過下述動物實驗予以證實。一、藥效實驗1.實驗材料1.1受試藥物與陽性藥物：實驗組1：下述實施例1的顆粒劑；實驗組2：下述實施例2的顆粒劑；對照組1：辛伐他汀片，杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)；1.2實驗動物sd大鼠，spf級，180-200g，雌性，63只，購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號為scxk(粵)2013-0020.1.3主要試劑表1實驗用化學(xué)藥品和分析試劑其余化學(xué)試劑均為分析純。1.4主要儀器電子天平、精密電子天平、臺式離心機、酶標(biāo)儀、組織切片機、生物顯微鏡。2.實驗方法2.1高脂飲食大鼠脂質(zhì)代謝紊亂模型高脂高膽固醇飼料(由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供)配方：蔗糖20％、豬油15％，膽固醇1.2％，膽酸鈉0.2％、酪蛋白10％、磷酸氫鈣0.6％、石粉0.4％、預(yù)混料0.4％，基礎(chǔ)飼料52.2％。質(zhì)量比：蛋白質(zhì)19％，脂肪18.5％，碳水化合物50.5％，熱量比：蛋白質(zhì)17.5％，脂肪37％，碳水化合物45.5％。喂養(yǎng)開始第1、2天按體重口服維生素d230萬u/kg，后每隔2周補給維生素d21次。高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲食。2.2動物分組與給藥63只sd大鼠購入后，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，排除體重變化異常者。動物分籠飼養(yǎng)，按照體重隨機分為7組，每組9只：a、空白對照組：普通飲食；b、模型組：高脂飲食；c、陽性對照組：高脂飲食+辛伐他汀(10mg/kg)；d、實驗組1高劑量組:高脂飲食+下述實施例1的顆粒劑(5.4g/kg)；e、實驗組1低劑量組:高脂飲食+下述實施例1的顆粒劑(0.9g/kg)；f、實驗組2高劑量組:高脂飲食+下述實施例2的顆粒劑(5.4g/kg)；g、實驗組2低劑量組:高脂飲食+下述實施例2的顆粒劑(0.9g/kg)。實驗藥物制備：稱量降脂藥粉末適量，將實驗組顆粒劑盛進(jìn)已洗滌干凈的自動電子煎藥鍋，加入5倍量的水浸泡30分鐘，打開開關(guān)用武火快煎，待藥液沸騰后開始計時，5min后改用文火繼續(xù)加熱20分鐘后，用3層紗布趁熱過濾，所得濾液置于燒杯中，藥渣繼續(xù)加3倍量的水加熱30分鐘后，過濾，合并兩次所得濾液，再次倒入洗凈的煎藥鍋，煎煮至所需藥量后關(guān)火。靜置至常溫，分裝備用。所制備的藥物濃度：低劑量組0.09g/ml，高劑量組0.54g/ml。給藥方式:高脂飼料喂飼7天造成高脂模型后,供試藥物和對照組藥物強制經(jīng)口灌胃給藥，按大鼠體重給藥量為10ml/kg，每天上午給藥1次，每周給藥7天，連續(xù)給藥6周。3.檢測指標(biāo)與方法3.1生化測定高脂喂食7天、給藥2周、4周及給藥6周后最后一天給藥后24小時后，禁食不禁飲過夜，毛細(xì)玻璃管于眼眶靜脈叢取血，取血適量，常規(guī)制備血清，測定血清脂質(zhì)指標(biāo)：血清tc、tg、hdl、ldl含量。3.2組織病理學(xué)檢查動物心臟采血處死后，進(jìn)行詳細(xì)的系統(tǒng)尸檢，解剖中注意觀察實質(zhì)性臟器的色澤、質(zhì)地、腫塊等。肝臟器官去血液后稱重，計算其臟器系數(shù)，見式1-1：臟器系數(shù)(％)＝器官(濕)重量/體重×100％(1-1)取肝臟生理鹽水洗凈，吸干水分后,常規(guī)固定于10％多聚甲醛固定液，經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片(厚4-5um)，蘇木素-伊紅染色。于研究用光學(xué)顯微鏡下觀察。肝細(xì)胞變性評分標(biāo)準(zhǔn)：5％肝細(xì)胞變性為“-”，5％-30％肝細(xì)胞變性為“+”，30％-60％肝細(xì)胞變性為“++”，>60％肝細(xì)胞變性為“+++”。3.3數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法各數(shù)據(jù)均以mean±sd表示，組間比較采用t檢驗考察顯著性，以p<0.05或p<0.01作為顯著性指標(biāo)。組織形態(tài)學(xué)結(jié)果比較用參比差值法進(jìn)行顯著性檢驗。4.實驗結(jié)果4.1對血清生化指標(biāo)的測定4.1.1藥物治療2周后對血脂四項水平的影響：由表2和圖1可以看出，與空白對照組比較，模型組動物血清tc、tg、ldl水平均有升高，有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)，說明模型穩(wěn)定可信；血清hdl水平降低，沒有統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組相比較，陽性對照組動物血清tc、tg、ldl降低，但均沒有統(tǒng)計學(xué)差異，提示陽性對照藥物辛伐他汀還未顯效。實驗組1高劑量組與模型組相比較，tg降低有顯著性差異(p<0.05),ldl降低有特別顯著性差異(p<0.01)，提示實驗組1高劑量組在2周即可表現(xiàn)出一定的降血脂作用。實驗組1低劑量組與模型組相比較，tg水平降低有特別顯著性差異(p<0.01),tc水平降低無統(tǒng)計學(xué)差異，ldl水平降低有特別顯著性差異(p<0.01)，提示實驗組1低劑量對tg和ldl有較強的調(diào)節(jié)作用。表2給藥2周后血脂情況(mean±sd,n＝8)注：與空白對照組對比，*p<0.05，**p<0.01；與模型組對比，▲p<0.05，▲▲p<0.01；與陽性對照組對比，◆p<0.05，◆◆p<0.01。實驗組2高劑量組與模型組相比較，tg水平降低有顯著性差異(p<0.05)，ldl水平降低有特別顯著性差異(p<0.01),提示實驗組2高劑量對tg和ldl有較強的調(diào)節(jié)作用，其作用可能還優(yōu)于實驗組1。實驗組2低劑量組與模型組相比較，tc、tg、ldl、hdl均沒有統(tǒng)計學(xué)差異。表3給藥4周后血脂情況(mean±sd,n＝7)注：與空白對照組對比，*p<0.05，**p<0.01；與模型組對比▲p<0.05，▲▲p<0.01。4.1.2藥物治療4周后對血脂四項水平的影響：由表3和圖2可以看出，與空白對照組相比，模型組動物血清tc(p<0.01)、tg(p<0.05)均有升高，有統(tǒng)計學(xué)差異。各組與模型組相比較，雖然tc、tg、ldl、hdl水平有變化，但均沒有統(tǒng)計學(xué)差異。給藥4周模型組血脂升高比較穩(wěn)定，但是降脂藥效果不顯著。表4給藥6周后血脂情況(mean±sd,n＝7)注：與空白組對比，*p<0.05，**p<0.01；與高脂組對比▲p<0.05，▲▲p<0.01。4.1.3藥物治療6周后對血脂四項水平的影響：由表4和圖3可以看出，與空白對照組比較，模型組動物血清tc(p<0.01)、tg(p<0.01)、ldl(p<0.05)水平均有升高，血清hdl(p<0.05)水平降低均有統(tǒng)計學(xué)差異，說明高血脂模型穩(wěn)定。與模型組相比較，陽性對照組動物血清tc、tg、ldl降低，hdl水平升高，但均沒有統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組1高劑量組tg水平降低有顯著性差異(p<0.05)，hdl水平升高有顯著性差異(p<0.05)，提示有一定的降血脂作用；實驗組1低劑量組各指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組2高劑量組tc、tg水平降低有特別顯著性差異(p<0.01)，提示對tc、tg有較強的調(diào)節(jié)作用；實驗組2低劑量組tc(p<0.05)和tg也降低(p<0.01)，同時hdl水平升高有顯著性差異(p<0.05)，提示與實驗組2高劑量類似的較弱調(diào)節(jié)作用，顯示出一定的劑量依賴關(guān)系。上述研究結(jié)果表明：本發(fā)明中藥組合物具有顯著的降低血脂功效，與陽性對照組辛伐他丁比較，療效相當(dāng)。4.2組織病理學(xué)檢查肝臟檢查結(jié)果：在解剖動物過程中發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，模型組和其他給藥組動物肝臟外觀呈不同程度的彌漫性腫大，邊緣鈍而厚，表面光滑，質(zhì)如面團(tuán)，壓迫時可出現(xiàn)凹陷，表面色澤較蒼白，個別帶灰黃色，有油膩感。肝臟系數(shù)比較，由表4可以看出，與空白對照組相比，模型組肝臟系數(shù)顯著升高，有顯著性差異(p<0.05)；與模型組相比，各實驗組肝臟系數(shù)均有所降低，其中實驗組1高劑量組肝臟系數(shù)降低明顯，有統(tǒng)計學(xué)上的顯著性差異(p<0.05)。以上結(jié)果說明，實驗組1高劑量組可能對肝臟有較好的保護(hù)作用。表5給藥6周對大鼠臟器系數(shù)的影響(mean±sd,n＝4)注：與空白對照組對比，*p<0.05，**p<0.01；與模型組對比，▲p<0.05，▲▲p<0.01。肝臟病理切片結(jié)果表明(表5)：空白對照組(n＝3)各鼠肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝板排列整齊，部分區(qū)域排列稍紊亂，以中央靜脈為中心向周圍放射狀排列，肝細(xì)胞輪廓較清楚，呈多邊形，胞漿豐富，胞質(zhì)酸酸性明顯，胞質(zhì)內(nèi)很脂滴少見，其中1例可見少量肝細(xì)胞(5％-30％)脂肪變性；2例可見少量肝細(xì)胞(5％-30％)水腫變性，其余未見明顯變性。模型組(n＝3)各鼠肝組織結(jié)構(gòu)較紊亂，肝血竇腔狹窄，高倍鏡下可見肝細(xì)胞明顯腫脹，胞質(zhì)內(nèi)見大量脂滴，圍繞細(xì)胞核呈竄排列，部分細(xì)胞內(nèi)見融合后的較大脂滴將細(xì)胞核推向一側(cè)，形態(tài)與脂肪細(xì)胞相似。其中2例可見大量肝細(xì)胞(>60％)脂肪變性，1例可見中量肝細(xì)胞(30％-60％)脂肪變性；2例可見中量肝細(xì)胞(>60％)水腫變性，1例可見少量(5％-30％)水腫變性。陽性對照組肝索結(jié)構(gòu)較清楚，肝小葉邊緣部分細(xì)胞水腫，可見少量脂滴，數(shù)量較模型組明顯減少，但比空白對照組稍多。其中1例可見中量肝細(xì)胞脂肪變性，2例可見少量；2例可見少量肝細(xì)胞水腫變性，1例未見。實驗組1高劑量組肝索結(jié)構(gòu)清晰，除肝小葉邊緣部分細(xì)胞水腫，可見少量脂滴外，整體接近正常肝細(xì)胞。其中1例可見大量，2例可見少量肝細(xì)胞脂肪變性；1例可見少量，2例未見肝細(xì)胞水腫變性。實驗組1低劑量組肝索與肝血竇結(jié)構(gòu)較清楚。肝細(xì)胞內(nèi)可見明顯脂滴，以小葉周邊的細(xì)胞最典型，但較模型組有所減少。其中1例可見中量，2例可見少量肝細(xì)胞脂肪變性；均未見細(xì)胞水腫變性。實驗組2高劑量可見肝索及肝血竇輪廓較清晰，呈放射狀排列于中央靜脈周圍。肝細(xì)胞輪廓較模糊，水腫，胞內(nèi)可見少量脂滴。其中2例可見少量、1例未見肝細(xì)胞脂肪變性；2例可見中量、1例可見少量肝細(xì)胞水腫變性。實驗組2低劑量肝索及肝血竇輪廓清晰，呈放射狀排列于中央靜脈周圍。肝細(xì)胞輪廓較清楚，胞質(zhì)酸酸性明顯，胞質(zhì)內(nèi)幾乎無脂滴。形態(tài)結(jié)構(gòu)接近正常肝組織。其中1例可見少量、2例未見脂肪變性；3例未見肝細(xì)胞水腫變性。綜合以上結(jié)果分析，實驗組1低劑量組對肝臟影響較小，對高血脂癥動物的肝臟可能有一定的改善作用。實驗組2高劑量組存在肝細(xì)胞水腫變性，可能有一定的肝毒性作用，如需長期大劑量應(yīng)用，必須進(jìn)行下一步深入研究。上述結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物能夠較好地修復(fù)高脂血癥大鼠肝臟的組織學(xué)損傷，與陽性對照組辛伐他丁比較，效果相當(dāng)。表6給藥6周對大鼠肝臟治療作用病理實驗結(jié)果的影響(n＝3)二、降脂藥急性毒性試驗1.試驗方法1.1試驗動物sd大鼠，spf級，180-200g，雌性，32只，購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號為scxk(粵)2013-0020.1.2實驗準(zhǔn)備樣品液的配置：實驗組顆粒(中藥粉末)采用濃縮煎的方法。樣品液的濃度和給藥及給藥容量：按容量一定不同給藥濃度，以能保持一定流動性的最大濃度作為灌胃樣品液，經(jīng)實踐發(fā)現(xiàn)最大濃度約為22.5g/ml。給藥方法：動物購入后實驗室觀察1周，排除體重異常動物，灌胃給藥前一晚禁食不禁飲，灌胃給藥后再禁食3h。按大鼠1ml/100g(體重)灌胃給藥。一日3次，每次間隔5h，持續(xù)觀察7天，記錄毒性反應(yīng)和體重變化。1.3操作步驟(1)預(yù)實驗：通過12只動物摸索，以降脂藥高劑量給藥組5.4g/kg為最低劑量，按1:5劑量比給藥，即5.4g/kg，4只；27g/kg，4只；135kg/kg，4只。找出大致死亡范圍找出0％和100％估計致死量。(2)最大給藥量試驗：由于受受試藥物的濃度和體積限制，無法測出半數(shù)致死量(ld50)，擬作最大給藥量試驗：20只sd大鼠，200g，雌雄各半，按135g/kg灌胃給藥，觀察7天記錄毒性反應(yīng)和體重變化。2.觀察指標(biāo)2.1預(yù)實驗結(jié)果：劑量(g/kg)5.427135死亡/總數(shù)0/40/40/42.2最大給藥試驗結(jié)果：給藥前后觀察：體重正常增加、進(jìn)食進(jìn)水狀況無異常。表7給藥后7天觀察情況表3.結(jié)果分析最大給藥量試驗發(fā)現(xiàn)動物未見毒性反應(yīng)，體重正常增加。可認(rèn)為降脂藥大鼠的最大給藥量未見毒性反應(yīng)，ld50大于最大給藥量(135g/kg)。表明本發(fā)明中藥組合物為一安全制劑。附圖說明圖1為給藥2周對大鼠血清tc、tg、hdl、ldl影響的柱狀圖。圖2為給藥4周對大鼠血清tc、tg、hdl、ldl影響的柱狀圖。圖3為給藥6周對大鼠血清tc、tg、hdl、ldl影響的柱狀圖。圖4為給藥6周肝臟病理切片的顯微照片，圖中，a為空白對照組200×，b為空白對照組400×，c為模型組200×，d為模型組400×，e為陽性對照組200×，f為陽性對照組400×，g為實驗組1高劑量組200×，h為實驗組1高劑量組400×，i為實驗組1低劑量組200×，j為實驗組1低劑量組400×，k為實驗組2高劑量組200×，l實驗組2高劑量組400×，m為實驗組2低劑量組200×，n為實驗組2低劑量組400×。具體實施方式實施例1(顆粒劑)：取辣木根840g，粟米840g，黑豆560g，板栗560g，地龍420g，胡桃仁420g，黑芝麻420g，甘草280g。每一次加9倍的水煎煮2次，合并煎液，靜置約12小時后，取上清液并濃縮至稠膏狀后，濃縮成浸流膏并噴霧干燥，得浸膏粉，按照1:1比例加入麥芽糊精，制軟材，擠壓制粒，干燥、整粒，成粒，分裝成10g/包。實施例2(顆粒劑)：取辣木根1100g，粟米980g，黑豆570g，板栗500g，地龍300g，胡桃仁340g，黑芝麻410g，甘草140g。每一次加10倍的水煎煮2次，合并煎液，靜置約12小時后，取上清液并濃縮至稠膏狀后，濃縮成浸流膏并噴霧干燥，得浸膏粉，按照1:1比例加入麥芽糊精，制軟材，擠壓制粒，干燥、整粒，成粒，分裝成10g/包。辣木根20—40份，粟米20—40份，黑豆15—25份，板栗15—25份，地龍10—20份，胡桃仁10—20份，黑芝麻10—20份，甘草5-15份。實施例3(顆粒劑)：取辣木根730g，粟米810g，黑豆600g，板栗670g，地龍440g，胡桃仁380g，黑芝麻310g，草400g。每一次加8倍的水煎煮2次，合并煎液，靜置約12小時后，取上清液并濃縮至稠膏狀后，濃縮成浸流膏并噴霧干燥，得浸膏粉，按照1:1比例加入麥芽糊精，制軟材，擠壓制粒，干燥、整粒，成粒，分裝成10g/包。實施例4(膠囊劑)：將按照實施例1的方法制備的藥物顆粒，裝入明膠膠囊，制成膠囊劑。實施例5(片劑)：將實施例1顆粒劑加水濕潤，壓片，制成片劑。實施例6(丸劑)：在實施例1中步驟(1)所得到的揮發(fā)油用適量淀粉吸收，起模制模心，以實施例1中步驟(3)得到的細(xì)粉以泛制法成型，以清水蓋面，干燥，選丸，制得水泛丸劑。當(dāng)前第1頁12