本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種動(dòng)物源宮腔內(nèi)置物、制備方法和用途。該宮腔內(nèi)置物為動(dòng)物源性材料，用于治療和預(yù)防宮腔粘連。

背景技術(shù)：

子宮內(nèi)膜(endometrium)是指構(gòu)成哺乳類子宮內(nèi)壁的一層。子宮內(nèi)膜分為致密層、海綿層和基底層三層。內(nèi)膜表面2/3為致密層和海綿層統(tǒng)稱功能層，受卵巢性激素影響發(fā)生周期變化而脫落?；讓訛榭拷訉m肌層的1/3內(nèi)膜，富有血管，不受卵巢性激素影響，不發(fā)生周期性的變化。

臨床上，當(dāng)子宮內(nèi)壁出現(xiàn)創(chuàng)傷時(shí)，如吸宮或刮宮、子宮肌瘤剔除術(shù)、子宮內(nèi)膜結(jié)核等，造成內(nèi)膜過(guò)度損傷，進(jìn)而損傷子宮內(nèi)膜基底層，結(jié)果會(huì)導(dǎo)致上皮、間質(zhì)細(xì)胞再生障礙，新生血管形成受損，內(nèi)膜難以實(shí)現(xiàn)自我修復(fù)。此時(shí)，宮腔缺乏內(nèi)膜覆蓋，前后壁可發(fā)生纖維化、瘢痕化及形成宮腔粘連，引起子宮內(nèi)膜或結(jié)締組織、肌肉粘著，導(dǎo)致出現(xiàn)月經(jīng)過(guò)少、痛經(jīng)、經(jīng)血反流、閉經(jīng)和習(xí)慣性流產(chǎn)甚至導(dǎo)致不孕等臨床綜合征。

20世紀(jì)70年代以來(lái)，隨著宮腔鏡等技術(shù)的發(fā)展，宮腔鏡下行宮腔粘連分離術(shù)(tcra)目前已成為治療宮腔粘連以及由此治療不孕的標(biāo)準(zhǔn)方法。但是行tcra術(shù)后宮腔再次粘連仍有可能發(fā)生，且一旦再發(fā)宮腔粘連，子宮內(nèi)膜修復(fù)將無(wú)法順利完成，臨床表現(xiàn)為月經(jīng)量無(wú)明顯增加或仍然閉經(jīng)，故tcra術(shù)后仍需要采取一定防粘連措施。

子宮粘連預(yù)防和治療的關(guān)鍵在于以下三個(gè)方面：隔離創(chuàng)面、宮腔組織修復(fù)和減少瘢痕的形成。目前臨床使用及研究中的宮腔操作后防止粘連和減少瘢痕的方法有：術(shù)后全身給予雌激素治療；機(jī)械屏障法如宮內(nèi)節(jié)育器和foley帶氣囊導(dǎo)尿管、透明質(zhì)酸膜，新鮮羊膜。目前研究的促進(jìn)組織再生的研究主要包括支架材料的應(yīng)用、生長(zhǎng)因子、基因療法、細(xì)胞療法(如干細(xì)胞的應(yīng)用)、機(jī)械療法、電療等。天然生物材料如膠原、脫細(xì)胞基質(zhì)因其良好的生物相容性而越來(lái)越受到科研人員的重視，尤其是脫細(xì)胞基質(zhì)已有研究證明可作為組織修復(fù)的良好基礎(chǔ)。

理想的子宮粘連和是提供屏障隔離創(chuàng)面以防止粘連的發(fā)生；提供引導(dǎo)細(xì)胞分化、生長(zhǎng)的“模板”，誘導(dǎo)組織再生，促進(jìn)宮腔組織自我修復(fù)。本發(fā)明提供具有上述功能的植入性材料。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種能夠治療和預(yù)防宮腔粘連的植入性醫(yī)療器械，該醫(yī)療器械包括生物組織基質(zhì)材料，對(duì)現(xiàn)有生物修補(bǔ)材料的脫細(xì)胞工藝技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，使本發(fā)明生物組織基質(zhì)材料與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，dna殘留量更低，免疫原性更低、抗感染能力更高、修復(fù)能力更強(qiáng)；此外本發(fā)明提供的植入性材料保留了細(xì)胞外基質(zhì)的生長(zhǎng)因子促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，有利于宮腔基底層、粘膜下層、粘膜層等組織的恢復(fù)。此外本發(fā)明更將生物修補(bǔ)材料制作為宮腔內(nèi)置結(jié)構(gòu)，用于隔離創(chuàng)面、宮腔組織修復(fù)和減少瘢痕的形成，從而處理宮腔粘連問(wèn)題，并解決由此產(chǎn)生的不孕問(wèn)題。

具體為，一種宮腔內(nèi)置物，其特征在于，所述宮腔內(nèi)置物具有袋狀結(jié)構(gòu)，所述宮腔內(nèi)置物包括經(jīng)脫細(xì)胞處理的動(dòng)物小腸粘膜下層基質(zhì)材料。

小腸粘膜下層基質(zhì)材料包含堿性纖維生長(zhǎng)因子(fgf-2)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf-β1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)。

宮腔內(nèi)置物包括纖維粘連蛋白(fibronectin，fn)，其質(zhì)量百分比含量大于2％。纖維粘連蛋白用于新生細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì)上的固定，有助于各組織的再生和修復(fù)。

袋狀結(jié)構(gòu)具有內(nèi)腔和開口，所述內(nèi)腔由所述小腸粘膜下層基質(zhì)材料圍成。

所述宮腔內(nèi)置物還包括支撐構(gòu)件，所述宮腔內(nèi)置物的內(nèi)腔能夠容納所述支撐構(gòu)件，所述支撐構(gòu)件能夠在所述開口處進(jìn)出所述袋狀結(jié)構(gòu)的所述內(nèi)腔；支撐構(gòu)件用于支撐宮腔內(nèi)置物，使其在宮腔內(nèi)擴(kuò)張，有效隔離創(chuàng)面，防止發(fā)生宮腔粘連。

所述內(nèi)置物的形狀基本上呈以下形狀：梯形，所述梯形底邊長(zhǎng)為0.5-6cm，高度為0.5-7.5cm，所述開口位于梯形的較短底邊處；優(yōu)選地，所述梯形的至少一個(gè)角部為弧線形；三角形，所述三角形底邊長(zhǎng)為0.5-6cm，高度為0.5-7.5cm，所述開口位于三角形的一個(gè)側(cè)邊上；優(yōu)選地，所述三角形的至少一個(gè)角部為弧線形；圓形，所述圓形直徑為0.5-7.5cm，所述開口位于圓形的圓邊處或圓形的圓面上；或者橢圓形，所述橢圓形短軸為0.5-6cm，長(zhǎng)軸為0.5-7.5cm，所述開口位于橢圓形的圓邊處或圓面上。這些形狀與宮腔內(nèi)腔形狀基本上適配，并與支撐構(gòu)件形狀適配，即能被支撐構(gòu)件較好地?cái)U(kuò)張，也有利于有效隔離創(chuàng)面，防止發(fā)生宮腔粘連。

其中支撐構(gòu)件可以為節(jié)育器或氣囊。

其中支撐構(gòu)件為foley帶氣囊。宮腔內(nèi)置物的內(nèi)腔可以容納氣囊結(jié)構(gòu)，氣囊充氣后擴(kuò)張，也是宮腔內(nèi)置物擴(kuò)張，有效隔離創(chuàng)面，防止發(fā)生宮腔粘連。

其中的支撐構(gòu)件為可收縮節(jié)育器，該可收縮節(jié)育器可選用花式、母體樂(lè)、t形、元宮形、γ型、宮腔形等各種樣式。

其中用動(dòng)物的小腸粘膜下層為原料，經(jīng)過(guò)清洗、病毒滅活、脫細(xì)胞、干燥和成型處理制備小腸粘膜下層基質(zhì)材料，然后將得到的小腸粘膜下層基質(zhì)材料成型為所需要的袋狀結(jié)構(gòu)。所述袋狀結(jié)構(gòu)，包括開口端和封閉端。

開口端用于在使用時(shí)將節(jié)育器放入袋狀結(jié)構(gòu)中，將其撐開，使小腸粘膜下層基質(zhì)材料與子宮內(nèi)壁緊密的接觸，輔助并促進(jìn)子宮內(nèi)膜損傷的修復(fù)。

根據(jù)需要在宮腔內(nèi)置物的袋狀結(jié)構(gòu)表面可包括通孔，免于組織液在袋裝結(jié)構(gòu)內(nèi)積累，利于組織修復(fù)。優(yōu)選地，所述孔間距0.2-1厘米，孔直徑0.5-3毫米。

本發(fā)明提供一種治療宮腔粘連的植入性醫(yī)療器械。該產(chǎn)品的細(xì)胞外基質(zhì)材料可以來(lái)自于動(dòng)物的小腸粘膜下層組織材料，例如哺乳動(dòng)物的小腸粘膜下層組織材料，更優(yōu)選豬或牛的的小腸粘膜下層組織材料。本產(chǎn)品以小腸粘膜下層組織材料為原料，去除細(xì)胞、dna及其它引發(fā)免疫原反應(yīng)的成分。本發(fā)明所述的細(xì)胞外基質(zhì)中動(dòng)物源dna殘留量(動(dòng)物源性生物材料dna殘留量)小于10ng/mg，優(yōu)選小于3ng/mg，α-gal抗原清除率不低于99％。dna和α-gal是抗原，如果生物材料中這些物質(zhì)含量過(guò)高，放入人體后會(huì)使人體發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，而上述含量的有效控制克服了上述免疫排斥反應(yīng)的缺陷，上述這些物質(zhì)的去除是通過(guò)脫細(xì)胞步驟實(shí)現(xiàn)的。

本發(fā)明還提供一種宮腔內(nèi)置物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)組織前置處理；(2)病毒滅活：采用過(guò)氧乙酸-乙醇溶液浸泡小腸粘膜下層組織材料進(jìn)行病毒滅活；(3)清洗；(4)脫細(xì)胞：脫細(xì)胞液液為溶有胰蛋白酶和edta的pbs溶液，脫細(xì)胞過(guò)程在多頻超聲波裝置中進(jìn)行；(5)清洗；(6)真空冷凍干燥：在真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行；(7)成型：將由步驟(6)得到的經(jīng)真空冷凍干燥的小腸粘膜下層基質(zhì)材料制成袋狀結(jié)構(gòu)。

所述步驟(1)中，取小腸粘膜下層組織材料，清洗，濾干。

所述步驟(2)的過(guò)氧乙酸-乙醇溶液，其中過(guò)氧乙酸的體積百分比濃度為0.1％-5％、乙醇的體積百分比濃度為5％-40％，用水配置成溶液，過(guò)氧乙酸-乙醇溶液與豬小腸粘膜下層組織材料的體積比為(3-20)︰1，滅活時(shí)間2-4小時(shí)，滅活的溫度范圍為10-40℃。

本發(fā)明步驟(3)的清洗過(guò)程中，采用清洗液清洗豬小腸粘膜下層組織材料，清洗液為ph值為7.2-7.4的pbs溶液，pbs溶液溫度為20℃，pbs溶液與豬小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為(20-40)︰1；然后采用純化水清洗，純化水與豬小腸粘膜下層組織材料比例(體積比)為(20-40)︰1，至檢測(cè)電導(dǎo)率為10μs/cm以下終止；清洗過(guò)程在超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行，頻率優(yōu)選40khz，功率優(yōu)選3000w以上。

本發(fā)明步驟(4)的脫細(xì)胞液為含有胰蛋白酶和edta的pbs溶液；脫細(xì)胞液中胰蛋白酶的質(zhì)量百分比濃度為0.01-0.2％，優(yōu)選0.02-0.05％；edta的濃度為0.1-1mmol/l，優(yōu)選0.4-0.8mmol/l；脫細(xì)胞液的ph值為7.0-8.0，優(yōu)選為7.2-7.5；所述脫細(xì)胞液與豬小腸粘膜下層組織材料體積比為(20-40)︰1，脫細(xì)胞過(guò)程在雙頻超聲波裝置中進(jìn)行，其中低頻頻率范圍為20-40khz，高頻頻率為60-90khz，其中低頻處理5-40min，高頻處理5-40min，脫細(xì)胞液的溫度范圍為20-35℃，超聲功率5000w以上。采用胰蛋白酶和edta，使細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的連接被破壞；采用低頻超聲對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎，同時(shí)使用高頻超聲作用于破碎的細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)，進(jìn)一步使細(xì)胞脫離細(xì)胞外基質(zhì)，達(dá)到脫細(xì)胞目的。采用上述方式，對(duì)整個(gè)細(xì)胞脫離基質(zhì)過(guò)程中的各個(gè)步驟進(jìn)行強(qiáng)化，使細(xì)胞被從基質(zhì)上完全脫離。到達(dá)最佳的免疫原去除效果。

本發(fā)明步驟(5)的清洗過(guò)程中，采用清洗液清洗豬小腸粘膜下層組織材料，清洗液為ph值為7.2-7.4的pbs溶液，pbs溶液與豬小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為(20-40)︰1；然后采用降溫的注射用水清洗，注射用水與豬小腸粘膜下層組織材料比例為(20-40)︰1，注射用水溫度20-35℃，檢測(cè)清洗注射用水與未清洗注射用水電導(dǎo)率之差小于1μs/cm終止；清洗過(guò)程在超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行，頻率優(yōu)選40khz，功率優(yōu)選3000w以上。

所述步驟(6)中，將一層或多層由步驟(5)得到的小腸粘膜下層基質(zhì)材料放置在模具上，放入真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行豬小腸粘膜下層基質(zhì)材料的冷凍干燥。上述步驟(6)所述的模具包括帶針底板與壓框，將一或多層小腸粘膜下層基質(zhì)材料平鋪于所述帶針底板上，將所述壓框放置于豬小腸粘膜下層基質(zhì)材料上，將所述帶針底板和所述壓框相對(duì)固定。本發(fā)明提到的模具，具體的結(jié)構(gòu)可以參考發(fā)明專利zl201310203602.2。真空冷凍干燥為：將帶有小腸粘膜下層基質(zhì)材料的模具放置于真空冷凍干燥機(jī)中；先預(yù)凍至-45℃，保溫1-2小時(shí)；然后開啟真空泵，調(diào)節(jié)溫度至-15℃，保溫5-7小時(shí)，再調(diào)節(jié)溫度至0℃，保溫2小時(shí)，最后調(diào)節(jié)溫度至25℃，保溫4小時(shí)，完成真空冷凍干燥；冷凍干燥裝置的腔室內(nèi)的壓強(qiáng)為1-50pa。

所述步驟(7)中，以由步驟(6)得到的經(jīng)真空冷凍干燥的小腸粘膜下層基質(zhì)材料為原料，將其縫制或粘接成袋狀結(jié)構(gòu)；所述袋狀結(jié)構(gòu)包括內(nèi)腔、開口端和封閉端，所述開口端能夠允許支撐構(gòu)件(例如節(jié)育器)在所述開口端處進(jìn)出所述袋狀結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔，所述內(nèi)腔能夠容納所述支撐構(gòu)件。

其中袋狀結(jié)構(gòu)可以使用的可降解線縫制，也可以通過(guò)可降解膠粘接而成袋狀結(jié)構(gòu)，所用的可降解膠例如是蛋白膠。

子宮呈倒置扁梨形，前面扁平，后面稍突出，壁寬腔小，上端寬而游離，朝前上方；下端較窄，呈圓柱狀，插入陰道的上部。成年女性的子宮宮腔容量約5ml。所述袋狀結(jié)構(gòu)的封閉端的尺寸大于所述開口端的尺寸。袋狀結(jié)構(gòu)可以基本上呈梯形或三角形形狀，或者將梯形或三角形的鈍角或銳角部分裁切并縫制成弧線形。所述袋狀結(jié)構(gòu)能夠保證節(jié)育器套管放入，且保證已經(jīng)在其內(nèi)打開的節(jié)育器不會(huì)掉出來(lái)。袋狀結(jié)構(gòu)具有不同的大小規(guī)格，適合不同個(gè)體需要。-縫線使用可生物降解的外科手術(shù)線。縫制過(guò)程亦需控制無(wú)菌。袋狀結(jié)構(gòu)還可以呈圓形或橢圓，以安放于宮腔中。圓形或橢圓形的袋狀結(jié)構(gòu)也可以適用于相應(yīng)形狀的節(jié)育器。

本發(fā)明還提供宮腔內(nèi)置物在宮腔內(nèi)置醫(yī)療器械中的應(yīng)用，宮腔內(nèi)置醫(yī)療器械用于修復(fù)宮腔內(nèi)膜或基底層損傷，用于預(yù)防和治療宮腔粘連，用于防止宮腔前后壁發(fā)生纖維化或瘢痕化，或者用于預(yù)防和治療由宮腔粘連所導(dǎo)致的不孕、習(xí)慣性流產(chǎn)、月經(jīng)過(guò)少、痛經(jīng)、經(jīng)血反流或閉經(jīng)。

本發(fā)明提供一種宮腔內(nèi)置物及其制備方法，經(jīng)該制備方法成型的宮腔內(nèi)置物，適用于不同大小的子宮。通過(guò)與不同類型的節(jié)育器等配合使用，針對(duì)性的修復(fù)子宮內(nèi)膜不同部位的損傷。

本發(fā)明提供一種宮腔內(nèi)置物，該產(chǎn)品由細(xì)胞外基質(zhì)材料制成，所用細(xì)胞外基質(zhì)材料優(yōu)選具有較高的純度的類型。優(yōu)選材料的內(nèi)毒素水平低于12eu/g，更優(yōu)選低于5eu/g，最優(yōu)選的是低于1eu/g。作為額外的偏好，ecm材料可的生物負(fù)載低于1cfu/g，更優(yōu)選的是低于0.5cfu/g。真菌的水平低于1cfu/g，更優(yōu)選的是低于0.5cfu/g。核酸水平最好小于5ug/mg，更優(yōu)選的是小于2ug/mg，病毒含量?jī)?yōu)選小于50pfu/g，更優(yōu)選的是小于5pfu/g。

本發(fā)明提供一種宮腔內(nèi)置物，由小腸粘膜下層基質(zhì)材料制成。小腸粘膜下層基質(zhì)材料保留生長(zhǎng)因子或其他的有益的生物活性成分。小腸粘膜下層基質(zhì)材料包含堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fgf-2)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(tgf-β)、表皮生長(zhǎng)因子(egf)，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vegf)，和/或血小板衍生生長(zhǎng)因子(pdgf)。細(xì)胞外基質(zhì)材料還包含肝素、硫酸肝素、透明質(zhì)酸和/或纖維粘連蛋白。通常來(lái)說(shuō)，小腸粘膜下層基質(zhì)材料可能包含一個(gè)生物活性成分，能夠直接或間接的誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)，如細(xì)胞在形態(tài)、分裂、生長(zhǎng)、蛋白質(zhì)或基因表達(dá)上的變化。

本發(fā)明提供一種宮腔內(nèi)置物的制備方法中，可以在模具的帶針底板上鋪設(shè)一層或多層小腸粘膜下層基質(zhì)材料，優(yōu)選4-6層。

相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下顯著優(yōu)點(diǎn)：

小腸粘膜下層基質(zhì)材料用于宮腔操作后前后壁創(chuàng)面的隔離，不會(huì)造成如宮內(nèi)節(jié)育器等機(jī)械隔離對(duì)創(chuàng)面造成的二次傷害，也不會(huì)發(fā)生排異反應(yīng)。

小腸粘膜下層基質(zhì)材料用于宮腔操作后前后壁創(chuàng)面的隔離，不會(huì)產(chǎn)生如透明質(zhì)酸膜、聚乳酸膜用于創(chuàng)面隔離的炎癥反應(yīng)。

小腸粘膜下層基質(zhì)材料用于宮腔操作后前后壁創(chuàng)面的隔離，不會(huì)產(chǎn)生如新鮮羊膜用于創(chuàng)面隔離修復(fù)的排異反應(yīng)。

小腸粘膜下層基質(zhì)材料與節(jié)育器配合使用，有效解決了子宮內(nèi)膜不適合縫合的特殊問(wèn)題，使用與宮腔形狀契合的節(jié)育器將修復(fù)材料小腸粘膜下層基質(zhì)固定于宮腔內(nèi)，極大地提高了小腸粘膜下層基質(zhì)材料發(fā)揮修復(fù)功能的水平。

本發(fā)明選用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料，dna殘留少，能夠達(dá)到10ng/mg以下，半乳糖苷酶去除率較高，能夠達(dá)到99％以上；且完整保留了天然細(xì)胞外基質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，保留了本源性有益成分，生長(zhǎng)因子如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fgf2)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vegf)，透明質(zhì)酸(ha)和硫酸氨基聚糖(sgags)等，保證了產(chǎn)品具有低的免疫原性，高的抗感染能力，并具有誘導(dǎo)細(xì)胞分化、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的修復(fù)功能。

本發(fā)明選用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料，因其在制備過(guò)程中將基質(zhì)材料定型與脫水過(guò)程同步化，使多層結(jié)構(gòu)致密，不分層，極大地提高脫細(xì)胞基質(zhì)補(bǔ)片的力學(xué)性能與抗降解能力。并且通過(guò)控制滅菌工藝，能夠有效的控制降解時(shí)間，可以根據(jù)需要制備不同使用周期的產(chǎn)品。

本發(fā)明采用更溫和的胰蛋白酶和edta復(fù)合溶液以及雙頻超聲處理相配合進(jìn)行脫細(xì)胞處理，這一步驟是制造生物材料很重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，只有將作為免疫原的細(xì)胞含量降至極低或完全去除，植入體內(nèi)的材料才不會(huì)引發(fā)免疫反應(yīng)，從而保證了材料的安全性；采用胰蛋白酶和edta使細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的連接被破壞，然后采用低頻超聲對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎，同時(shí)使用高頻超聲作用于破碎的細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)，進(jìn)一步使細(xì)胞脫離細(xì)胞外基質(zhì)，從而達(dá)到脫細(xì)胞目的，針對(duì)脫細(xì)胞的各個(gè)環(huán)節(jié)采用對(duì)應(yīng)的方法進(jìn)行細(xì)節(jié)上的處理，使脫細(xì)胞效果更好，細(xì)胞殘留更低。

附圖說(shuō)明

圖1是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物所用的經(jīng)脫細(xì)胞及成型處理的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的正面掃描電鏡圖。

圖2是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物所用的經(jīng)脫細(xì)胞及成型處理的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的側(cè)面的掃描電鏡圖。

圖3為根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的x射線衍射譜(xrd)。

圖4是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的親水角測(cè)試圖。

圖5為宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的紅外圖譜。

圖6示出宮腔植入材料的脫細(xì)胞基質(zhì)材料與現(xiàn)有基質(zhì)材料的sds-page電泳結(jié)果圖。

圖7為經(jīng)脫細(xì)胞處理后的小腸粘膜下層基質(zhì)材料經(jīng)masson染色照片。

圖8為經(jīng)脫細(xì)胞處理后的小腸粘膜下層基質(zhì)材料經(jīng)masson染色照片(小倍率)。

圖9根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物的示意圖；

圖10是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物的示意圖；

圖11是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物的示意圖；

圖12是一種節(jié)育器的示意圖；

圖13為一種節(jié)育器安放裝置的示意圖。

上述附圖是為了幫助理解本發(fā)明的各個(gè)方面，用于解釋本發(fā)明，而非用于限制本發(fā)明。

具體實(shí)施方式

為了幫助理解本發(fā)明的各個(gè)方面，提供以下實(shí)施例。需要說(shuō)明的是，實(shí)施例是為了解釋本發(fā)明，本發(fā)明并不為這些實(shí)施方式所限制。

圖1和圖2是本發(fā)明中宮腔內(nèi)置物所用的經(jīng)脫細(xì)胞及成型處理的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的正面和側(cè)面的掃描電鏡圖。本發(fā)明的基質(zhì)材料采用非交聯(lián)工藝，將多層脫細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合后形成膠原蛋白微纖維網(wǎng)絡(luò)，優(yōu)秀的力學(xué)性能足以滿足使用需求，因此整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中無(wú)需使用化學(xué)交聯(lián)劑，避免了化學(xué)交聯(lián)產(chǎn)生的纖維包裹、糜爛、鈣化及炎癥等不良反應(yīng)。從圖1中可以看到小腸粘膜下層基質(zhì)材料呈多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，孔隙率可以達(dá)到90％以上，為引導(dǎo)細(xì)胞長(zhǎng)入提供適宜的微環(huán)境。從圖2中可以看到，小腸粘膜下層基質(zhì)材料經(jīng)過(guò)處理使膠原蛋白纖維形成層層疊加的多層結(jié)構(gòu)，可以調(diào)整材料的降解性能與力學(xué)性能，以適應(yīng)不同組織修復(fù)的需要。另外，小腸粘膜下層基質(zhì)材料的頂破強(qiáng)度與縫合強(qiáng)度較高，可以應(yīng)用于需要縫合、承力的手術(shù)條件。

圖3為宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的x射線衍射譜(xrd)結(jié)果，其中在2θ＝8°范圍存在一個(gè)較尖銳的峰，而2θ＝15-25°存在一個(gè)較為平緩的圓峰，表明基質(zhì)材料在經(jīng)過(guò)脫細(xì)胞工藝與成型工藝處理后，已改變了原來(lái)膠原蛋白的晶體結(jié)構(gòu)，形成無(wú)定形結(jié)構(gòu)，從而使x射線的衍射峰變寬變圓。這樣的微結(jié)構(gòu)，能夠極大消除材料在微結(jié)構(gòu)中的各向異性。而材料微結(jié)構(gòu)中的各向異性導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)分布的各向異性，形成某些方向上的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，從而形成瘢痕。而本發(fā)明的宮腔內(nèi)置物使細(xì)胞生長(zhǎng)分布無(wú)各向異性，從而避免瘢痕產(chǎn)生，防止宮腔粘連。

圖4為宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的親水角測(cè)試圖。生物材料表面的親疏水性對(duì)表面吸附蛋白質(zhì)的構(gòu)象具有重要的影響，宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的親水角為45°，非常有利于細(xì)胞的黏附和鋪展。

圖5為宮腔內(nèi)置物所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的紅外圖譜。材料的紅外圖譜中主要峰均體現(xiàn)為i型膠原蛋白的官能團(tuán)振動(dòng)峰，其中3308.26cm^-1峰值附近，是n-h伸縮振動(dòng)；1640.33cm^-1附近，是酰胺i帶的c＝o伸縮振動(dòng)，1548.46cm^-1附近是酰胺ⅱ帶的n-h彎曲振動(dòng)；1066.41-1548.46cm^-1附近的吸收峰表明了膠原蛋白三股螺旋結(jié)構(gòu)的完整性。另外，膠原的n-h伸縮振動(dòng)位于3308.26cm^-1說(shuō)明了肽鍵間氫鍵的存在。1240cm^-1與1450cm^-1峰強(qiáng)度的比值為0.99，基本上與i型膠原蛋白特征值1.0相同。因此，基質(zhì)材料中，i型膠原蛋白三股螺旋結(jié)構(gòu)保持較完整。為進(jìn)一步明確基質(zhì)材料中含有i型膠原，圖6示出宮腔植入材料的脫細(xì)胞基質(zhì)材料與現(xiàn)有基質(zhì)材料的sds-page電泳結(jié)果圖。圖6中，最左側(cè)條紋為對(duì)應(yīng)于不同分子量標(biāo)記物條紋，中間條紋為現(xiàn)有基質(zhì)材料的電泳條紋，最右側(cè)條紋為采用本發(fā)明方法制備的宮腔植入材料的細(xì)胞外基質(zhì)材料的電泳條紋，其中表示從上至下排列的條紋依次表示i型膠原纖維、γ鏈、β鏈、α1鏈和α2鏈。表面本發(fā)明中含有i型膠原蛋白。

此外，采用非交聯(lián)工藝的基質(zhì)材料成分除了i型膠原蛋白，還有少量的彈性蛋白與iii型、iv型和vi型膠原蛋白。非交聯(lián)工藝的基質(zhì)材料含有有微量的活性生物分子，如纖維粘連蛋白、層粘連蛋白有利于細(xì)胞的粘附、生長(zhǎng)；糖胺聚糖、蛋白多糖等分子作為生長(zhǎng)因子結(jié)合位點(diǎn)，有利于保存各種生長(zhǎng)因子，并阻礙膠原蛋白酶的降解，增加細(xì)胞遷移能力。此外，非交聯(lián)工藝還使基質(zhì)材料保留了原動(dòng)物組織中的堿性纖維生長(zhǎng)因子(fgf-2)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf-β1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)等，保留率高于45％，這些生長(zhǎng)因子在組織血管化、功能重建過(guò)程起到關(guān)鍵性作用。與其他脫細(xì)胞材料所不同的是，小腸粘膜下層基質(zhì)材料含有豐富的生物活性因子，這些活性因子使其能夠積極誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入材料，形成血管化組織，調(diào)控宿主組織的再生修復(fù)過(guò)程。

纖維粘連蛋白(fibronectin，fn)是一種大型的糖蛋白，存在于所有脊椎動(dòng)物，分子含糖4.5-9.5％，糖鏈結(jié)構(gòu)依組織細(xì)胞來(lái)源及分化狀態(tài)而異。fn可將細(xì)胞連接到細(xì)胞外基質(zhì)上。fn肽鏈中的一些短肽序列為細(xì)胞表面的各種fn受體識(shí)別與結(jié)合的最小結(jié)構(gòu)單位。經(jīng)質(zhì)譜法測(cè)試，fn在宮腔植入材料所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料的中的質(zhì)量百分比含量>5％；經(jīng)elisa法檢測(cè)，fn質(zhì)量百分比含量在2.6％以上。

現(xiàn)有的細(xì)胞外基質(zhì)材料采用皮膚、動(dòng)脈、心包等彈性較大的組織，除i型膠原蛋白外，還含有較大含量的彈性蛋白。i型膠原蛋白強(qiáng)度比彈性蛋白強(qiáng)100倍以上，為細(xì)胞外基質(zhì)提供力學(xué)強(qiáng)度，而彈性蛋白賦予基質(zhì)優(yōu)良的彈性，使細(xì)胞外基質(zhì)可以伸長(zhǎng)與收縮。由于彈性蛋白的存在，脫細(xì)胞基質(zhì)的膠原蛋白不斷降解，基質(zhì)會(huì)因受力而伸長(zhǎng)，不受力時(shí)則收縮變形，從而使組織無(wú)法重塑為正常形狀，并因材料變形而使手術(shù)修復(fù)失敗。另外，由于彈性蛋白在體內(nèi)很難降解，而使脫細(xì)胞基質(zhì)降解不完全，形成纖維包裹。而本發(fā)明所采用的粘膜下層材料中彈性蛋白含量極低，且經(jīng)處理后，基本上被去除。圖7、8為經(jīng)脫細(xì)胞處理后的小腸粘膜下層基質(zhì)材料經(jīng)masson染色照片，其中無(wú)彈性蛋白存留。

由于宮腔植入材料所用的小腸粘膜下層基質(zhì)材料為動(dòng)物源性脫細(xì)胞材料，來(lái)源于異種材料的相關(guān)免疫原應(yīng)盡量去除。通過(guò)脫細(xì)胞工藝處理制備的產(chǎn)品he染色切片照片如圖8所示，未發(fā)現(xiàn)殘留細(xì)胞核。且dna殘留達(dá)到3.8ng/mg以下，遠(yuǎn)低于同類脫細(xì)胞材料水平，而α-gal抗原清除率可達(dá)到99.4％。該項(xiàng)數(shù)據(jù)表明宮腔植入材料所用的基質(zhì)材料脫細(xì)胞過(guò)程徹底，免疫原性去除率高，最大程度上降低了引起免疫排斥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。

實(shí)施方式1：

圖9是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物的示意圖，該宮腔內(nèi)置物為袋狀結(jié)構(gòu)，外形大致為梯形，至少部分角部為弧形。開口2位于梯形較短的底邊一側(cè)?？梢允褂靡黄?jīng)真空冷凍干燥的小腸粘膜下層基質(zhì)材料對(duì)折后制作，或者使用兩片或多片基質(zhì)材料制作。該宮腔內(nèi)置物可以被放置于宮腔內(nèi)并展開，從而達(dá)到隔離和保護(hù)創(chuàng)面，促進(jìn)宮腔基底膜和粘膜等組織的恢復(fù)，防止粘連的發(fā)生。

進(jìn)一步地，以上實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物還可以包含支撐結(jié)構(gòu)，從而在袋狀結(jié)構(gòu)內(nèi)部撐開所述內(nèi)置物，以進(jìn)一步地防止發(fā)生宮腔粘連。支撐結(jié)構(gòu)可以是氣囊，優(yōu)選foley帶氣囊。通過(guò)預(yù)先將宮腔內(nèi)置物包覆于未充氣氣囊表面，并置于宮腔內(nèi)，后充氣使氣囊膨脹以支撐宮腔內(nèi)置物，以進(jìn)一步地防止發(fā)生宮腔粘連。

支撐結(jié)構(gòu)還可以是節(jié)育器。圖12是一種節(jié)育器的示意圖；圖13為一種節(jié)育器安放裝置的示意圖。在安放本實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物1的過(guò)程中，可以將宮腔內(nèi)置物1放置于宮腔內(nèi)，通過(guò)將帶有節(jié)育器3的節(jié)育器安放裝置4穿過(guò)子宮口和宮腔內(nèi)置物1的開口2，然后使節(jié)育器3脫離節(jié)育器安放裝置4，進(jìn)入宮腔內(nèi)置物1的內(nèi)腔，節(jié)育器3在構(gòu)件1的內(nèi)腔內(nèi)自動(dòng)擴(kuò)張，與宮腔內(nèi)置物1一起留置于宮腔內(nèi)。

也可以將節(jié)育器3預(yù)先組裝至宮腔內(nèi)置物1的內(nèi)腔中，并一起放置在節(jié)育器安放裝置4中。然后使節(jié)育器安放裝置4穿過(guò)子宮口，再使宮腔內(nèi)置物1脫離節(jié)育器安放裝置，進(jìn)入宮腔，節(jié)育器3在構(gòu)件的內(nèi)腔內(nèi)自動(dòng)擴(kuò)張并使宮腔內(nèi)置物1擴(kuò)張，從而使宮腔內(nèi)置物1和節(jié)育器3一起形成的宮腔內(nèi)置物留置于宮腔內(nèi)。

實(shí)施方式2：

圖10是根據(jù)本發(fā)明的另一種方式的宮腔內(nèi)置物的示意圖。該宮腔內(nèi)置物1為袋狀結(jié)構(gòu)，外形大致為三角形，至少部分角部為弧形。開口2位于三角形的一個(gè)側(cè)邊上，開口2長(zhǎng)度小于側(cè)邊長(zhǎng)度，使得節(jié)育器3的各個(gè)端部可以卡在大致呈三角形的袋狀結(jié)構(gòu)1的端部。在安放本實(shí)施方式的宮腔內(nèi)置物的過(guò)程中，可以將節(jié)育器3預(yù)先放置于宮腔內(nèi)置物1的內(nèi)腔中，并共同放置于節(jié)育器安放裝置4中。然后使節(jié)育器安放裝置4穿過(guò)子宮口，再使宮腔內(nèi)置物脫離節(jié)育器安放裝置，進(jìn)入宮腔，節(jié)育器3在構(gòu)件的內(nèi)腔內(nèi)自動(dòng)擴(kuò)張并使宮腔內(nèi)置物1擴(kuò)張，從而使宮腔內(nèi)置物1和節(jié)育器3一起形成的宮腔內(nèi)置物留置于宮腔內(nèi)。

實(shí)施方式3：

圖11是根據(jù)本發(fā)明的另一種方式的宮腔內(nèi)置物的示意圖。該宮腔內(nèi)置物1為袋狀結(jié)構(gòu)，外形大致呈圓形或橢圓形。開口2位于圓形或橢圓形的圓面上或圓邊處?？梢酝ㄟ^(guò)實(shí)施1或2的安放方式將節(jié)育器3和宮腔內(nèi)置物1放置于宮腔內(nèi)。

實(shí)施方式4：一種具有袋狀結(jié)構(gòu)的宮腔內(nèi)置物的制備方法

(1)原料選擇與初處理：取新鮮屠宰的豬小腸組織清洗潔凈，分裂出小腸粘膜下層，將小腸粘膜下層組織材料分割，剔除淋巴組織，用自來(lái)水沖洗1-3次，再用純化水沖洗至表面無(wú)污漬，然后將清洗后的豬小腸粘膜下層組織材料置于篩網(wǎng)等濾水裝置上，靜置五分鐘以上，以將水濾干。

(2)病毒滅活：采用過(guò)氧乙酸-乙醇溶液浸泡豬小腸粘膜下層組織材料，該過(guò)程可在不銹鋼桶中進(jìn)行，過(guò)氧乙酸體積百分比濃度采用0.1％，乙醇體積百分比濃度采用5％，滅活時(shí)間2小時(shí)，溶液與豬小腸粘膜下層組織材料比例為5：1，溫度為20℃；完成后在超聲波清洗機(jī)中清洗數(shù)次至清洗液檢測(cè)電導(dǎo)率為10以下終止。

(3)清洗：采用清洗液清洗豬小腸粘膜下層組織材料，清洗液為ph值為7.2-7.4的pbs溶液，pbs溶液溫度為20℃，pbs溶液與豬小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為30︰1，優(yōu)選清洗3次，每次20分鐘；然后采用純化水清洗，純化水與豬小腸粘膜下層組織材料比例為30︰1，至檢測(cè)電導(dǎo)率為10μs/cm以下終止；清洗過(guò)程在超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行，頻率40khz，功率3000w。

(4)脫細(xì)胞：脫細(xì)胞液采用含有質(zhì)量百分比濃度0.1％的胰蛋白酶溶液和濃度為0.5mmol/l的edta的pbs溶液，脫細(xì)胞液ph＝7.2-7.5，超聲振蕩清洗30分鐘，溫度20℃，溶液與豬小腸粘膜下層組織材料比例為20：1，脫細(xì)胞過(guò)程在雙頻超聲波裝置中進(jìn)行，包含低頻和高頻兩個(gè)頻率，其中低頻頻率為20khz，高頻頻率為80khz，超聲功率為5kw，其中低頻處理10min，高頻處理10min，溫度為30℃；功率5000w。

(5)清洗：采用清洗液進(jìn)行清洗，清洗過(guò)程在超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行，超聲波的功率為3000w以上。清洗液為ph7.2-7.4的pbs溶液，pbs溶液溫度為20℃，pbs溶液與豬小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為30︰1，優(yōu)選清洗3次，每次20分鐘；然后采用20℃的降溫的注射用水清洗，注射用水與豬小腸粘膜下層組織材料比例(體積比)為30︰1，檢測(cè)清洗注射用水與未清洗注射用水電導(dǎo)率之差小于1μs/cm終止，頻率優(yōu)選40khz，功率優(yōu)選3000w以上。

(6)真空冷凍干燥：將一層或多層由步驟(5)得到的豬小腸粘膜下層基質(zhì)材料放置在模具上，放入真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行豬小腸粘膜下層基質(zhì)材料的冷凍干燥。上述步驟(6)所述的模具包括帶針底板與壓框，將一或多層豬小腸粘膜下層基質(zhì)材料平鋪于所述帶針底板上，將所述壓框放置于豬小腸粘膜下層基質(zhì)材料上，將所述帶針底板和所述壓框相對(duì)固定。本發(fā)明提到的模具，具體的結(jié)構(gòu)可以參考發(fā)明專利zl201310203602.2。真空冷凍干燥為：將帶有小腸粘膜下層基質(zhì)材料的模具放置于真空冷凍干燥機(jī)中；先預(yù)凍至-45℃，保溫1小時(shí)；然后開啟真空泵，調(diào)節(jié)溫度至-15℃，保溫6小時(shí)，再調(diào)節(jié)溫度至0℃，保溫2小時(shí)，最后調(diào)節(jié)溫度至25℃，保溫4小時(shí)，完成真空冷凍干燥；冷凍干燥裝置的腔室內(nèi)的壓強(qiáng)為25-30pa。得到冷凍干燥后的小腸粘膜下層基質(zhì)材料。

(7)成型：取由步驟(6)得到的冷凍干燥后的小腸粘膜下層基質(zhì)材料，以折疊處為長(zhǎng)底邊縫制梯形的袋子?？p制成的袋子，短底邊處開口，短底邊約為長(zhǎng)底邊的1/3左右，能夠保證節(jié)育器套管放入，且保證已經(jīng)在其內(nèi)打開的節(jié)育器不會(huì)掉出來(lái)。設(shè)計(jì)為不同的大小規(guī)格，適合不同個(gè)體需要?？p線使用可生物降解的外科手術(shù)線?？p制過(guò)程亦需控制無(wú)菌。

本實(shí)施方式還可以進(jìn)一步包括以下步驟：

打孔包裝步驟(8)，所述步驟(8)打孔包裝，具體為：干燥材料在模具上切割成固定的形狀(包括方形、圓形或其他形狀)，然后放入機(jī)械打孔機(jī)中，以間距0.9cm進(jìn)行打孔，孔直徑1.5毫米，然后采用特衛(wèi)強(qiáng)包裝袋包裝。

滅菌解析步驟(9)，所述步驟(9)滅菌解析步驟具體為：采用環(huán)氧乙烷進(jìn)行滅菌，滅菌條件為：先溫度20-40℃保溫時(shí)間2-4小時(shí)，濕度30-70％(優(yōu)選60％)，然后通入濃度300-1000mg/l(優(yōu)選800mg/l)環(huán)氧乙烷，滅菌4-8小時(shí)；解析過(guò)程在通風(fēng)的解析室中進(jìn)行，溫度控制在10-30℃之間，時(shí)間14-28天。

還可以根據(jù)實(shí)際需要，在真空冷凍干燥步驟(6)與成型步驟(7)之間完成打孔，相應(yīng)地，包裝步驟中，則無(wú)需再次打孔。

上述打孔的步驟可以避免袋狀內(nèi)置物中積存液體，而引發(fā)感染。打孔步驟利于組織修復(fù)。

對(duì)上述實(shí)施例所制備的生物材料進(jìn)行理化性質(zhì)、生物學(xué)檢測(cè)。

1.對(duì)制備的生物材料進(jìn)行物理性能檢測(cè)

1)孔隙率測(cè)定：采用孔隙率測(cè)定儀測(cè)定材料的孔隙率，實(shí)施方式4提供的樣品的孔隙率為90％。

2)縫合保持力檢測(cè)：方法：用2-0號(hào)外科縫線或相同直徑的不銹鋼絲縫合在生物材料一端邊緣2毫米處，將縫線或不銹鋼絲與生物材料的另一端固定在拉力儀上，以20mm/min的速度進(jìn)行拉伸，直到縫合點(diǎn)被撕裂，記錄下縫合點(diǎn)被撕裂時(shí)的拉力。按上述方法對(duì)3批樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：縫合抗拉強(qiáng)度大于或等于6n。

3)抗張強(qiáng)度檢測(cè)方法：方法：使用拉伸(壓縮)試驗(yàn)機(jī)，將補(bǔ)片裁剪成條狀試樣，裁剪后在相對(duì)濕度40％-60％，溫度為22℃±2℃的條件下放置2小時(shí)后立即進(jìn)行試驗(yàn)。將試樣兩端固定在拉伸試驗(yàn)機(jī)的夾頭上，以100mm/min的速度依次向外拉伸直到試樣斷裂，以n為單位記錄下試樣斷裂時(shí)的力。按照上述方法對(duì)3批樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果大于200n。

4)爆破強(qiáng)度檢測(cè)：方法，使用拉伸(壓縮)試驗(yàn)機(jī)，將材料裁剪成23×23mm的正方形式樣備用，在相對(duì)濕度為40％-60％，溫度為22℃±2℃的條件下放置2小時(shí)后立即進(jìn)行試驗(yàn)。用環(huán)形夾具將試樣固定在拉伸試驗(yàn)機(jī)的工作臺(tái)上，使球形探頭以750mm/min的速度穿過(guò)試樣，記錄下探頭穿破試樣的力。按上述方法對(duì)3批樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：爆破強(qiáng)度大于120n。

2.化學(xué)性能檢測(cè)

1)檢驗(yàn)液制備：取樣品的厚度均勻部分，切成1cm²的碎片，用水洗凈后晾干，然后加入玻璃容器中，按樣品總表面積(cm²)與水(ml)的比為5:1的比例加水，加蓋后置于壓力蒸汽滅菌器中，在121℃加熱30min，加熱結(jié)束后將樣品與液體分離，冷至室溫作為檢驗(yàn)液。取同體積水置于玻璃容器中，同法制備空白對(duì)照液。

2)病毒檢測(cè)：選擇偽狂犬病毒為指示病毒，采用實(shí)時(shí)定量pcr法檢測(cè)病毒的dna拷貝數(shù)，檢測(cè)3批樣品。結(jié)果：病毒dna拷貝數(shù)為0。

3)酸堿度：按gb/t14233.2-2005中5.4.1《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第1部分：化學(xué)分析法》中規(guī)定的方法試驗(yàn)，結(jié)果：檢驗(yàn)液與空白對(duì)照液的ph值之差不超過(guò)1.5。

4)dna殘留檢測(cè)：依據(jù)生物制劑殘留dna檢測(cè)方法《中國(guó)藥典》2015年版第四部，采用熒光染色法檢測(cè)實(shí)施例所提供的樣品dna殘留量。結(jié)果：實(shí)施例所提供的樣品的dna殘留量小于10ng/mg。

5)細(xì)菌內(nèi)毒素：按照gb/t14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法》進(jìn)行檢測(cè)，共3批樣品，結(jié)果：細(xì)菌內(nèi)毒為20eu/套。

6)環(huán)氧乙烷殘留：按gb/t14233.1-2008《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第1部分：化學(xué)分析法》中9的規(guī)定的方法試驗(yàn)，結(jié)果：產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量不超過(guò)10ug/套。

3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型選取12周齡成年雌性新西蘭大白兔，體重2500克左右，普通級(jí)。實(shí)驗(yàn)前24h每只兔耳緣靜脈注射絨毛膜促性腺激素50iu，使內(nèi)膜生長(zhǎng)同步。取下腹正中長(zhǎng)約2cm縱切口進(jìn)腹，查見(jiàn)雙側(cè)子宮，根據(jù)分組給予相應(yīng)處理后縫合腹部切口。實(shí)驗(yàn)分組：a組：對(duì)照組：右側(cè)子宮，于子宮中下1/3處作1.5cm縱切口，經(jīng)切口放置袋狀子宮修復(fù)材料大小3*0.5cm。縫合，作為補(bǔ)片對(duì)照。左側(cè)子宮僅做子宮切口后縫合作為空白對(duì)照。b組：建模組：機(jī)械損傷建模法：右側(cè)子宮，于子宮中下1/3處作1.5cm縱切口，切除半側(cè)宮腔內(nèi)膜及粘膜下層；左側(cè)子宮，切除半側(cè)宮腔內(nèi)膜及粘膜下層，生理鹽水沖洗宮腔。經(jīng)切口放置子宮修復(fù)材料大小3*0.5cm。c組：治療組：右側(cè)子宮，于子宮中下1/3處作1.5cm縱切口，切除全宮腔內(nèi)膜及粘膜下層；左側(cè)子宮宮腔切除全宮腔內(nèi)膜及粘膜下層。生理鹽水沖洗宮腔。經(jīng)切口放置子宮修復(fù)材料大小3*0.5cm。圍手術(shù)期應(yīng)用抗生素3天。分別于手術(shù)后7d，14d，28d處死動(dòng)物，留取子宮標(biāo)本，行he染色和masson染色，明確粘連情況及子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量、創(chuàng)面纖維化程度。結(jié)果表明，以a組：對(duì)照組中樣品空白對(duì)照組與空白對(duì)照組為基線，觀察b組：建模組、c組：治療組中，在造模后創(chuàng)面無(wú)子宮修復(fù)材料的宮腔修復(fù)時(shí)纖維化面積比例增加，腺體數(shù)量減少，發(fā)生明顯粘連，妊娠能力明顯下降，有顯著差異(p＜0.05)。而在造模后創(chuàng)面加子宮修復(fù)材料的宮腔修復(fù)時(shí)纖維化面積比例、腺體數(shù)量減少兩項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，未發(fā)現(xiàn)粘連發(fā)生，相比于無(wú)修復(fù)材料組明顯改善子宮內(nèi)膜修復(fù)過(guò)程，有顯著差異(p＜0.05)。