本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別涉及一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體和制備方法及其在治療惡性腫瘤中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：天然產(chǎn)物及其衍生物在人類健康與醫(yī)藥發(fā)展方面扮演著越來越重要的作用，藤黃（gamboge）：為藤黃科植物藤黃樹garciniahanbaryihook.f.分泌的干燥樹脂。其主產(chǎn)于柬埔寨、印度、泰國(guó)和越南，我國(guó)廣東省和海南省均有栽培。祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)其早有記載，藤黃性寒，味酸、辛、澀，有毒，具破血散結(jié)、解毒、止血、殺蟲之功效，自古以來就被用于治療瘰疬、癰疸、癤腫等頑疾。藤黃在國(guó)外常被用作利尿劑，治療水腫和腦出血時(shí)的血壓升高，現(xiàn)已收載于《美國(guó)藥典》第10版。藤黃酸（gambogicacid,ga）：是中藥藤黃中提取的有效成分，為廣譜抗腫瘤藥物，對(duì)于多數(shù)腫瘤細(xì)胞都具有抑制作用，有研究表明藤黃酸對(duì)人肝癌細(xì)胞株smmc-7721和qgy-7701的增殖有明顯的劑量依賴性抑制作用，而對(duì)正常人肝組織細(xì)胞株l-02作用相對(duì)較弱。藤黃酸還可明顯抑制人胃腺癌細(xì)胞株sgc-7901的增殖。藤黃酸抗腫瘤作用機(jī)制是多方面的，包括誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞周期、影響癌基因和抑癌基因及其相關(guān)蛋白的表達(dá)等，此外藤黃酸還具有抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能，這些是目前化療藥物所不能同時(shí)具備的。藤黃酸溶解度差，生物利用度低，半衰期短（犬體內(nèi)t1/2＜1h，大鼠體內(nèi)t1/2＜20min），同時(shí)游離的藤黃酸具有一定的血管刺激、消化道副作用等毒性，在臨床試用時(shí)容易引發(fā)給藥部位的靜脈炎，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也表現(xiàn)了一定的致死毒性或使動(dòng)物出現(xiàn)豎毛、體重減輕等，大大限制了藤黃酸的應(yīng)用，在一定程度上也限制了藤黃酸更出色的治療效果。故有必要對(duì)藤黃酸開展結(jié)構(gòu)修飾或新劑型的研究。目前臨床使用的藤黃酸常以注射劑為主，由于藤黃酸水溶性很差，現(xiàn)有報(bào)道的藤黃酸原料主要是使用硼砂溶液溶解配制的，該方法穩(wěn)定性差，臨床使用不安全。為增強(qiáng)藤黃酸的片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑以及注射劑等多種劑型開發(fā)的可行性，需要解決藤黃酸溶解度差這一問題。已有研究表明在藤黃酸原料藥中加入l-精氨酸、葡甲胺、賴氨酸等助溶劑或者聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯等增溶劑制備藤黃酸溶液可顯著改善其溶解度和穩(wěn)定性，適用于各種劑型的開發(fā)；而通過直接添加l-精氨酸或者聯(lián)合使用l-精氨酸、葡甲胺、賴氨酸等作為助溶劑均可制備藤黃酸的凍干制劑，這對(duì)于藤黃酸的注射劑研究極為重要。但是長(zhǎng)期使用這些助溶劑或增溶劑，可能引起一系列不良反應(yīng)，如過敏、心血管毒性、腎毒性、神經(jīng)毒性等。前藥在藥物的開發(fā)過程中起著重要的角色，其主要目的在于解決母體藥物的水溶性問題、延長(zhǎng)半衰期、降低藥物毒性以及提高藥物效果。制備前藥的重要手段之一為將化合物與水溶性聚乙二醇（peg）連接，可大大增加化合物的水溶性，從而引起藥物在理化性質(zhì)、藥代動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)方面的變化。目前采用peg化成功開發(fā)出前藥的產(chǎn)品有peg-紫杉醇、peg-喜樹堿等，peg化后的前藥水溶性大大增加、半衰期延長(zhǎng)、毒性降低，活性也有所增加。近年來各種納米載體包括脂質(zhì)體，納米粒及膠束等可以改善化療藥物的溶解性，延長(zhǎng)其在體內(nèi)的半衰期，減少正常細(xì)胞對(duì)藥物的吸收，增加藥物在腫瘤細(xì)胞中的蓄積,從而達(dá)到最大的抗腫瘤療效和最小的毒副作用。脂質(zhì)體由于主要成分為磷脂，因而具有高度的生物相容性和較低的生物毒性，能夠裝載親水性和疏水性的藥物。此外，脂質(zhì)體強(qiáng)大的優(yōu)點(diǎn)之一是它的特定用途，如可以通過改變脂質(zhì)成分或增加功能性的成分來實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)循環(huán)或者靶向功能。在過去的幾十年中，化療藥物的脂質(zhì)體劑型在體外實(shí)驗(yàn)中取得了顯著的成功。本專利的目標(biāo)主要是將ga先制備成peg-ga達(dá)到增溶的目的，延長(zhǎng)藥物的半衰期和增強(qiáng)抗腫瘤效果，再將peg-ga與磷脂分子等組合，利用納米技術(shù)制備載藥脂質(zhì)體，達(dá)到增強(qiáng)藥物溶解性、增強(qiáng)藥物療效和降低藥物毒副作用的目的。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有藤黃酸劑型中所存在的抗腫瘤活性差、血液循環(huán)時(shí)間短、制劑穩(wěn)定性差和毒副作用大等上述不足，提供一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體具有優(yōu)異的水溶性，能夠增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性和抗腫瘤作用，大幅降低藥物的毒副作用，延長(zhǎng)荷瘤小鼠的生存期。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體由聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和磷脂組成，所述聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和磷脂的重量比為1-10:0.5-2:0.05-0.2:1-4:10-30。申請(qǐng)人經(jīng)大量研究和實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將聚乙二醇（peg）與抗腫瘤藥物藤黃酸結(jié)合成兩親性共軛物即peg-ga，通過將peg-ga插入脂質(zhì)體雙分子層,構(gòu)建納米靶向藥物遞送系統(tǒng)，不僅能改善藥物的水溶性，同時(shí)能增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性和抗腫瘤作用。黑色素瘤和結(jié)腸癌移植瘤模型小鼠體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)結(jié)果顯示，聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體有明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用，其抑瘤率高于藤黃酸注射液組；毒性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)過程中，模型小鼠均能耐受預(yù)定劑量的聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，未表現(xiàn)出明顯的毛發(fā)、行為、進(jìn)食異常等，治療期間小鼠體重正常增長(zhǎng)，證實(shí)聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體降低了藥物的毒性。在b16抑制瘤模型和c26模型的治療過程中，生存期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，采用聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體進(jìn)行治療后，模型小鼠與其他組相比100%存活的生存期明顯延長(zhǎng)。且聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體組跟生理鹽水組情況一樣，注射部位的尾靜脈和尾部組織一直都未見異常。因此進(jìn)一步說明了聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體提高了藥物的抗癌活性，同時(shí)降低了藥物的毒副作用。藤黃酸的英文名：gambogicacid；化學(xué)名稱：1,5-亞甲基-1h，3h，11h-呋喃并（3,4-g）吡喃并（3,2-b）呫噸-1-巴豆酸，3a，4,5,7-四氫-8-羥基-α，3,3,11-四甲基-13-（3-甲基-2-丁烯基）-11-（4-甲基-3-戊烯基）-7,15-二氧代，分子量：628.7512，分子式：c38h44o8其中聚乙二醇-藤黃酸共軛物（peg-ga）的結(jié)構(gòu)如下式所示：優(yōu)選地，聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和磷脂的重量比為2:1:0.2:4:15。通過進(jìn)一步優(yōu)選脂質(zhì)體原料的配伍比例，本發(fā)明的聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體水溶性、穩(wěn)定性和抗腫瘤活性得到進(jìn)一步優(yōu)化。優(yōu)選地，聚乙二醇-藤黃酸共軛物由甲氧基聚乙二醇一端的羥基和藤黃酸c-30位羧基通過酯鍵連接形成。優(yōu)選地，甲氧基聚乙二醇包括甲氧基聚乙二醇1000、甲氧基聚乙二醇2000、甲氧基聚乙二醇4000、甲氧基聚乙二醇6000和甲氧基聚乙二醇8000中的一種或幾種。優(yōu)選地，磷脂包括大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕櫚酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化豆磷脂、二油酰基卵磷脂、二月桂酰磷脂酰甘油、二棕櫚脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油和二肉豆蔻酰磷脂酸中的一種或幾種。本發(fā)明的另一目的在于提供上述聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體的制備方法，一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：s1將聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和磷脂溶解于乙醇中形成有機(jī)相，加熱至40-60℃；s2將上述有機(jī)相通過針管泵注入水相中形成含醇脂質(zhì)體溶液，將該含醇脂質(zhì)體溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40-60℃下減壓除去乙醇，得到脂質(zhì)體初溶液；s3將上述脂質(zhì)體初溶液用高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行整粒；隨后用擠出器和0.1-0.45μm孔徑的濾膜對(duì)脂質(zhì)體初溶液進(jìn)行擠出過濾，得到脂質(zhì)體溶液；s4向上述脂質(zhì)體溶液中加入凍干保護(hù)劑，然后進(jìn)行真空冷凍干燥，即得聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體。優(yōu)選地，步驟s2中有機(jī)相與水相的體積比為1:1-1:5。優(yōu)選地，步驟s3中整粒過程包括將脂質(zhì)體初溶液分兩次進(jìn)高壓均質(zhì)機(jī)處理，第一次壓力為100-300bar，第二次壓力為700-900bar。優(yōu)選地，步驟s4中凍干保護(hù)劑為海藻糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、脯氨酸和甘氨酸中的一種或幾種。優(yōu)選地，步驟s4中真空冷凍干燥過程的預(yù)凍溫度和升華干燥溫度低于-30℃，解析干燥終點(diǎn)溫度為20-30℃。優(yōu)選地，步驟s3中將脂質(zhì)體溶液進(jìn)行擠出過濾時(shí)，第一次使用0.45μm孔徑的濾膜，第二次使用0.22μm孔徑的濾膜。本發(fā)明的再一目的在于提供上述聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體的應(yīng)用，所述脂質(zhì)體可應(yīng)用于治療肺癌、卵巢癌、乳腺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤或腦瘤。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：1、本發(fā)明將親水性的聚乙二醇peg與疏水的抗腫瘤藥物藤黃酸結(jié)合成兩親性聚合物，再與磷脂等組合成脂質(zhì)體藥物遞送系統(tǒng)，提高了藤黃酸的水溶性，使藥物更適合于靜脈注射，提高了藥物的生物利用度。2、本發(fā)明將親水性的聚乙二醇peg與疏水的抗腫瘤藥物藤黃酸結(jié)合成兩親性聚合物，再與磷脂等組合成脂質(zhì)體藥物遞送系統(tǒng)，延緩了藥物的釋放，增強(qiáng)了藥物的穩(wěn)定性并有望降低藥物的急性毒性。3、本發(fā)明將親水性的聚乙二醇peg與疏水的抗腫瘤藥物藤黃酸結(jié)合成兩親性聚合物，搭載脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，在于脂質(zhì)體高度的生物形容性和對(duì)腫瘤的被動(dòng)靶向性，有望提高在腫瘤部位的藥物濃度，降低在正常組織的藥物蓄積，從而延長(zhǎng)腫瘤患者的生存期，改善治療功效和減少毒副作用。附圖說明圖1為本發(fā)明實(shí)施例制備的peg-ga脂質(zhì)體制劑外觀圖、粒徑分布圖及透射電鏡圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例制備的peg-ga脂質(zhì)體制劑、peg-ga組、ga組和空白脂質(zhì)體組對(duì)小鼠體重的影響以及對(duì)小鼠生存期的影響。圖3為本發(fā)明實(shí)施例制備的peg-ga脂質(zhì)體組、peg-ga組、ga組和空白脂質(zhì)體組對(duì)荷瘤小鼠體內(nèi)的b16-f10和c26腫瘤生長(zhǎng)抑制曲線和抑瘤率。圖4為本發(fā)明實(shí)施例制備的peg-ga脂質(zhì)體制劑、peg-ga組、ga組和空白脂質(zhì)體組對(duì)小鼠尾部靜脈注射的刺激情況。圖5為本發(fā)明實(shí)施例制備的peg-ga脂質(zhì)體制劑組，peg-ga組和ga組的體外釋放率曲線。具體實(shí)施方式下面結(jié)合試驗(yàn)例及具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本
發(fā)明內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，由重量比為2:1:0.2:4:15的聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和蛋黃卵磷脂組成首先制備聚乙二醇-藤黃酸共軛物，包括先將甲氧基聚乙二醇2000（mpeg2000）的端基氧化，合成mpeg2000-cooh；第二步使mpeg2000-cooh一端的羥基與藤黃酸c-30位羧基在eda和dmap的作用下發(fā)生酯化反應(yīng)，生成聚乙二醇-藤黃酸共軛物peg2000-ga備用。其次制備聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，包括以下步驟：s1將配方量的peg-ga，聚乙二醇、維生素e、膽固醇和蛋黃卵磷脂溶解于乙醇中形成有機(jī)相，加熱至45℃；s2將上述有機(jī)相通過針管泵注入水相中形成含醇脂質(zhì)體溶液，其中有機(jī)相與水相的重量比為1：3，將該含醇脂質(zhì)體溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45℃下減壓除去乙醇，得到脂質(zhì)體初溶液；s3將上述脂質(zhì)體初溶液分兩次進(jìn)高壓均質(zhì)機(jī)整粒處理，第一次壓力為200bar，第二次壓力為800bar；然后再對(duì)脂質(zhì)體初溶液進(jìn)行擠出過濾，第一次使用0.45μm孔徑的濾膜，第二次使用0.22μm孔徑的濾膜，得到脂質(zhì)體溶液；s4最后，在上述脂質(zhì)體溶液中加入10%甘露醇，然后進(jìn)行真空冷凍干燥，其中預(yù)凍溫度為-40℃，升華干燥干燥溫度為-35℃，解析干燥終點(diǎn)溫度為25℃，即得聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體。取0.4ml上述實(shí)施例1制備的聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體于西林瓶中，加入1.6ml去離子水稀釋五倍，得到有藍(lán)色乳光的澄清溶液，用malvern激光散射粒度分析儀測(cè)定粒徑,激光粒度分析結(jié)果顯示其平均粒徑為70±10nm，脂質(zhì)體粒徑分布較窄。粒徑分布如圖1所示。將脂質(zhì)體溶液滴加到大小適中的硅片上，室溫干燥。在硅片樣品表面鍍金增強(qiáng)導(dǎo)電性,貼上導(dǎo)電膠后置于樣品室，選擇加速電壓為3.0kv，采用掃描電鏡觀察脂質(zhì)體的表面形態(tài)。sem觀察結(jié)果如圖1所示，聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體近似于球形，大小均一，表面光滑。實(shí)施例2一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，由重量比為1:2:0.2:4:10的聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和大豆磷脂組成首先制備聚乙二醇-藤黃酸共軛物，包括先將甲氧基聚乙二醇1000（mpeg1000）的端基氧化，合成mpeg1000-cooh；第二步使mpeg1000-cooh一端的羥基與藤黃酸c-30位羧基在eda和dmap的作用下發(fā)生酯化反應(yīng)，生成聚乙二醇-藤黃酸共軛物peg1000-ga備用。聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：s1將配方量的ga-mpeg1000、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和磷脂溶解于乙醇中形成有機(jī)相，加熱至40℃；s2將上述有機(jī)相通過針管泵注入水相中形成含醇脂質(zhì)體溶液，其中有機(jī)相與水相的重量比1:1，將該含醇脂質(zhì)體溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50℃下減壓除去乙醇，得到脂質(zhì)體初溶液；s3將上述脂質(zhì)體初溶液分兩次進(jìn)高壓均質(zhì)機(jī)整粒處理，第一次壓力為100bar，第二次壓力為900bar；然后再對(duì)脂質(zhì)體初溶液進(jìn)行擠出過濾，第一次使用0.45μm孔徑的濾膜，第二次使用0.22μm孔徑的濾膜，得到脂質(zhì)體溶液；s4最后，在上述脂質(zhì)體溶液中加入5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的海藻糖，然后進(jìn)行真空冷凍干燥，其中預(yù)凍溫度為-38℃，升華干燥干燥溫度為-32℃，解析干燥終點(diǎn)溫度為24℃，即得聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體。實(shí)施例3一種聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，由重量比為10:0.5:0.05:1:30的聚乙二醇-藤黃酸共軛物、聚乙二醇、維生素e、膽固醇和二硬脂酰磷脂酰甘油組成首先制備聚乙二醇-藤黃酸共軛物，包括先將甲氧基聚乙二醇8000（mpeg8000）的端基氧化，合成mpeg8000-cooh；第二步使mpeg8000-cooh一端的羥基與藤黃酸c-30位羧基在eda和dmap的作用下發(fā)生酯化反應(yīng)，生成聚乙二醇-藤黃酸共軛物peg8000-ga。其次制備聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，包括以下步驟：s1將配方量的peg-ga8000，聚乙二醇、維生素e、膽固醇和二硬脂酰磷脂酰甘油溶解于乙醇中形成有機(jī)相，加熱至50℃；s2將上述有機(jī)相通過針管泵注入水相中形成含醇脂質(zhì)體溶液，其中有機(jī)相與水相的重量比為1:5，將該含醇脂質(zhì)體溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40℃下減壓除去乙醇，得到脂質(zhì)體初溶液；s3將上述脂質(zhì)體初溶液分兩次進(jìn)高壓均質(zhì)機(jī)整粒處理，第一次壓力為300bar，第二次壓力為700bar；然后再對(duì)脂質(zhì)體初溶液進(jìn)行擠出過濾，第一次使用0.45μm孔徑的濾膜，第二次使用0.22μm孔徑的濾膜，得到脂質(zhì)體溶液。s4最后，在上述脂質(zhì)體溶液中加入15%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的麥芽糖，然后進(jìn)行真空冷凍干燥，其中預(yù)凍溫度為-37℃，升華干燥干燥溫度為-31℃，解析干燥終點(diǎn)溫度為22℃，即得聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體。試驗(yàn)例1聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體的體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)本試驗(yàn)例采用mtt法來檢測(cè)聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體的體外抗腫瘤活性，試驗(yàn)?zāi)[瘤細(xì)胞株包括小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞b16-f10、小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞c26和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec。以b16-f10細(xì)胞株為例介紹mtt法的流程和方法。將b16-f10細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板中,每孔100μl、4500個(gè)細(xì)胞，常規(guī)條件下培養(yǎng)過夜，此后，給予每孔細(xì)胞100μl配制好的不同濃度的peg-ga脂質(zhì)體制劑、peg-ga溶液或?qū)?yīng)不同濃度的ga針劑，對(duì)照組加入等量的培養(yǎng)基作為對(duì)照。培養(yǎng)48h，在結(jié)束培養(yǎng)前4h，加入mtt20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h。最后徹底棄去培養(yǎng)上清液，每孔加入150μldmso。37℃下?lián)u床低速晃動(dòng)10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶標(biāo)儀上，設(shè)定570nm波長(zhǎng)下檢測(cè)每孔細(xì)胞的吸光度a570值,按下列公式計(jì)算細(xì)胞存活率:細(xì)胞存活率(%)＝實(shí)驗(yàn)組a570值／對(duì)照組a570值×100%。以同一樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線如附圖3所示，從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度ic50，結(jié)果如下表1所示：table1theic50（μm）ofequivalentgaondifferentcellsafterincubationwithdifferentfumulationsfor48h黑色素瘤和結(jié)腸癌移植瘤模型小鼠體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)結(jié)果顯示，聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體有明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用，其抑瘤率高于藤黃酸注射液組。試驗(yàn)例2實(shí)施例peg-ga脂質(zhì)體制劑、peg-ga組、ga組和空白脂質(zhì)體組對(duì)小鼠體重的影響及對(duì)小鼠生存期的影響以6-8周齡的（體重約20g）的icr小白鼠為動(dòng)物模型，隨機(jī)取24只大鼠，設(shè)置3組，每組8只，雌雄各半：空白對(duì)照組尾部靜脈注射生理鹽水，試驗(yàn)組尾部注射peg-ga脂質(zhì)體制劑、peg-ga組、ga針劑以及空白脂質(zhì)體組，劑量為7.5mg/kg。觀察7天，主要觀察指標(biāo)包括：體重、飲食、行為活動(dòng)，是否有分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)，分泌物與排泄物是否正常，中毒反應(yīng)的癥狀、嚴(yán)重程度、起始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、是否可逆，是否出現(xiàn)小鼠死亡，對(duì)于瀕死或者死亡動(dòng)物的解剖觀察等。其中尾部靜脈注射后的刺激情況如圖4所示，小鼠體重變化及小鼠生存情況見圖2所示?？梢钥闯龆拘栽u(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)過程中，模型小鼠均能耐受預(yù)定劑量的聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體，未表現(xiàn)出明顯的毛發(fā)、行為、進(jìn)食異常等，治療期間小鼠體重正常增長(zhǎng)，證實(shí)聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體降低了藥物的毒性。在b16抑制瘤模型和c26模型的治療過程中，生存期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，采用聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體進(jìn)行治療后，模型小鼠與其他組相比100%存活的生存期明顯延長(zhǎng)。且聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體組跟生理鹽水組情況一樣，注射部位的尾靜脈和尾部組織一直都未見異常。因此進(jìn)一步說明了聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體提高了藥物的抗癌活性，同時(shí)降低了藥物的毒副作用。試驗(yàn)例3實(shí)施例制備的peg-ga脂質(zhì)體制劑組，peg-ga和ga組的體外釋放率試驗(yàn)采用透析法研究脂質(zhì)體體外釋放情況，用nahco3和edta溶液洗去透析袋（相對(duì)分子質(zhì)量截留量12000～14000）上殘留的甘油和雜質(zhì)，取2ml實(shí)施例1制備的peg-ga脂質(zhì)體懸浮液置于透析袋中，釋放介質(zhì)為5%牛血清的磷酸鹽緩沖液（pbs,ph7.4）500ml，37℃恒溫，攪拌速度300r/min。在固定的時(shí)間點(diǎn)吸取1ml透析溶液，同等數(shù)量的新鮮釋放介質(zhì)補(bǔ)充到緩沖溶液中。脂質(zhì)體溶液制備：在質(zhì)量濃度為1mg/ml的peg-ga脂質(zhì)體中加入超純水配制成樣品溶液，在上述條件下測(cè)定其釋放率。對(duì)照品溶液制備：對(duì)照樣品采用加有助溶劑l-精氨酸的超純水配制成1mg/ml藤黃酸溶液，并在與脂質(zhì)體相同條件下測(cè)定其釋放率。聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體與藤黃酸原料藥在pbs中釋放如圖5所示，聚乙二醇-藤黃酸脂質(zhì)體48h累積釋放率大于50%，4h累積釋放率約為30%，與原料藥相比釋放更平緩。當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12