本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，具體涉及NADPH在制備治療心肌肥厚與心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(triphosphopyridine nucleotide，NADPH)由葡萄糖經(jīng)過磷酸戊糖途徑(PPP)代謝產(chǎn)生，作為細胞內(nèi)最為重要的電子供體和生物合成的還原劑，可為還原性生物合成提供氫離子。NADPH是谷胱甘肽(GSH)還原酶的輔酶，可使氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成還原型GSH，維持還原型GSH的正常含量。GSH是細胞內(nèi)重要的抗氧化劑，可保護一些含巰基的蛋白質(zhì)、脂肪和蛋白酶類免受氧化劑的破壞，特別在維持紅細胞膜的完整性方面起著重要作用。NADPH除了參與膽固醇、脂肪酸、單加氧酶系、類固醇激素等的生物合成，還參與體內(nèi)羥化反應(yīng)和藥物、毒物及某些激素的生物轉(zhuǎn)化；例如，NADPH可利用解毒細胞的電子供體，通過體內(nèi)代謝減少生物體氧化型化合物，維持其氧化還原的平衡，在氧化防御系統(tǒng)發(fā)揮重要作用。NADPH也可以借助于異檸檬酸穿梭作用進入呼吸鏈產(chǎn)生ATP：由于線粒體內(nèi)膜對物質(zhì)的通透性很低，線粒體外產(chǎn)生的NADPH不能直接進入呼吸鏈被氧化。NADPH上的H可以在異檸檬酸脫氫酶的作用下被交給NAD+，然后由NAD+進入呼吸鏈產(chǎn)生能量。細胞能量代謝的維持和減少ROS(活性氧簇)對細胞生存，特別對缺血缺氧的組織至關(guān)重要，普遍認為能量代謝障礙和氧化應(yīng)激是心腦缺血疾病的重要機制。

心肌肥厚(cardiac hypertrophy)尤其是左室肥厚(Left ventricular hypertrophy,LVH)是心臟對慢性壓力或容量超負荷產(chǎn)生的靶器官反應(yīng)。我國現(xiàn)有高血壓病患者約2.66億，其中三分之一的高血壓患者可伴發(fā)LVH。心肌肥厚是一種極其重要的心血管危險因素，能增加冠心病、充血性心衰、中風或暫時缺血性心臟病發(fā)作等發(fā)生猝死的機率；更為重要的是，心肌肥厚也是慢性心力衰竭發(fā)生和發(fā)展的重要機制之一。

心力衰竭(heart failure)是指在正常的靜脈回流情況下，由于心輸出量絕對或相對減少，不能滿足機體代謝需要而引起以循環(huán)障礙為主的綜合征。臨床上，以肺循環(huán)和(或)體循環(huán)瘀血以及組織血液灌注不足為主要特征，按心力衰竭的發(fā)展過程，可分為急性心力衰竭和慢性心力衰竭；急性心力衰竭是指心輸出量短期內(nèi)急劇下降甚至喪失泵血功能，其發(fā)展迅速，根據(jù)嚴重程度可表現(xiàn)為昏厥、心源性休克、急性肺水腫、心臟驟停；慢性心力衰竭亦稱充血性心力衰竭或慢性心功能不全，是指由于致病因素使心臟長期處于壓力和(或)容量負荷過重狀態(tài)，造成心臟貯備力耗竭，逐漸喪失代償功能，心輸出量絕對或相對不足，不能維持身體代謝需要。心力衰竭的病因是多重而復雜的，主要包括心肌收縮和/或舒張功能障礙和心臟負荷長期過重及心室充盈受限，心力衰竭實際是心臟功能由代償向失代償轉(zhuǎn)化的結(jié)果；心力衰竭尤其是慢性心力衰竭時，機體防止心輸出量減少產(chǎn)生的代償反應(yīng)包括神經(jīng)內(nèi)分泌反射和心肌構(gòu)型重建，心肌肥厚就是心臟構(gòu)型重建的主要表現(xiàn)。心肌肥厚早期對心功能具有一定的代償意義；然而，在心肌肥厚晚期，病理性心肌肥厚伴隨著心肌細胞凋亡、心肌成纖維細胞增殖和心肌纖維化間質(zhì)增生，促使心臟功能逐漸由代償轉(zhuǎn)化為失代償，參與了心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展。

目前，臨床上治療心肌肥厚或心力衰竭的藥物相近，主要是抑制心衰或心肌肥厚過程中神經(jīng)內(nèi)分泌的過度激活，糾正血流動力學紊亂，常用的治療藥物包括：(1)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEIs))和血管緊張素Ⅱ受體I阻斷劑(ARBs)，作用機制為：減少血管緊張素(ACEIs)的生成和作用，舒張動靜脈，降低心臟前后負荷，并可逆轉(zhuǎn)心血管重塑和左心室肥厚；(2)利尿劑，作用機制為：通過排除機體多余的水分，減少有效循環(huán)血量，減輕心臟前負荷，消除組織間隙水腫或肺水腫，螺內(nèi)酯等醛固酮受體拮抗劑還可對抗醛固酮的心臟重塑作用；(3)鈣拮抗劑，作用機制為：抑制胞外Ca²⁺內(nèi)流，使胞內(nèi)游離Ca²⁺濃度下降，舒張血管，降低血壓，減輕前和/或后負荷來改善心臟功能；(4)β受體阻滯劑，作用機制為：阻斷β受體，抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)活性及腎素釋放，降低血壓，消退或部分逆轉(zhuǎn)心臟構(gòu)型重建，上調(diào)β受體，恢復心臟對交感神經(jīng)遞質(zhì)的敏感性；(5)正性肌力藥物，作用機制為：如洋地黃類及非苷性正性肌力藥(包括磷酸二酯酶抑制劑和β受體激動劑)，直接加強心肌收縮力，增加心輸出量，減少心臟收縮末期殘余血量，降低前負荷，恢復心功能。上述第(1)-(4)類藥物緩解或逆轉(zhuǎn)心肌肥厚，逐漸改善心功能，適用于心肌肥厚或慢性心力衰竭的長期治療，但由于它們不具有強心作用，在心肌肥厚向心衰發(fā)展的失代償期療效一般，且不能用于急性心力衰竭的治療；而第(5)類藥物，臨床應(yīng)用時其不良反應(yīng)較多而嚴重，如：增加心律失常的風險，甚至增加心衰的死亡率。

目前，尚無NADPH用于治療心肌肥厚與心力衰竭的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明提出NADPH在制備治療心肌肥厚與心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供NADPH在制備治療心肌肥厚的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供NADPH在制備治療心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述藥物包括藥學上有效量的NADPH和藥學上可接受的載體。

進一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述載體選自常用的藥用輔料、或者生理鹽水、或者蒸餾水。

進一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述藥物為NADPH按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、合劑、丸劑、顆粒劑、糖漿劑、貼膏劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑或注射劑。

進一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述藥物的給藥方式選自口服給藥、注射給藥、舌下給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥、噴霧吸入中的至少一種。

本發(fā)明的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點：

(1)本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，NADPH不僅具有顯著的強心作用，而且能夠?qū)π募》屎裼芯徑庾饔?，因此可以作為治療心肌肥厚與心力衰竭的藥物；

(2)本發(fā)明通過研究進一步發(fā)現(xiàn)，NADPH能夠提高小鼠的心肌組織中的Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶和總ATP酶的活性，推測NADPH可能通過上述機制發(fā)揮對心肌肥厚的緩解作用；

(3)此外，NADPH對正常大鼠的血壓無明顯影響，治療心肌肥厚與心力衰竭時不良反應(yīng)較小。

附圖說明

為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，其中：

圖1(a)表示的為實驗例1中NADPH對離體原位蛙心的心收縮力的影響，數(shù)值表示的為收縮力相比正常的百分比；圖1(b)表示的為實驗例1中NADPH對離體原位蛙心的心輸出量的影響；圖1(c)表示的為實驗例1中NADPH對離體原位蛙心的心率的影響；圖1(d)表示的為實驗例1中NADPH對離體原位蛙心的心收縮力影響的曲線圖，平均值±標準差，N＝8-10；與正常組相比，^*P<0.05，^**P<0.01；與低鈣相比，^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001；

圖2(a)表示的為實驗例2中NADPH對ISO致心肌肥厚的影響；圖2(b)表示的為實驗例2中各組小鼠的心臟HE染色圖；圖2(c)表示的為實驗例2中NADPH對ISO誘導小鼠心肌肥厚中心重指數(shù)的影響；測定心臟和左心室的濕重，計算心重指數(shù)(HWI＝HW/BW)和左心指數(shù)(LVWI＝LVW/BW)，平均值±標準差；與對照組相比，^###P<0.001；與ISO組相比，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001；N(L)表示的為NADPH 1mg/kg，N(M)表示的為NADPH 2mg/kg，N(H)表示的為NADPH 4mg/kg；

圖3(a)表示的為實驗例2中各組小鼠的心電圖；圖3(b)表示的為實驗例2中NADPH對ISO所致小鼠的心電圖的R波波幅的影響；平均值±標準差；與對照組相比，^###P<0.001；N(L)表示的為NADPH 1mg/kg，N(M)表示的為NADPH 2mg/kg，N(H)表示的為NADPH 4mg/kg；

圖4是實驗例2中NADPH對小鼠心功能的影響；N(L)表示的為NADPH 1mg/kg，N(M)表示的為NADPH 2mg/kg，N(H)表示的為NADPH 4mg/kg；

圖5是實驗例2中NADPH對小鼠的心肌組織中ATP酶含量的影響；N(L)表示的為NADPH 1mg/kg，N(M)表示的為NADPH 2mg/kg，N(H)表示的為NADPH 4mg/kg；

圖6是實驗例3中NADPH對正常大鼠的血壓的影響；NS表示的為生理鹽水，SBP表示的為收縮壓，DBP表示的為舒張壓，MBP表示的為平均動脈壓，平均值±標準差。

實驗例

下述各實驗例證明本發(fā)明所述的技術(shù)效果。

實驗例1 NADPH對離體原位蛙心的強心作用的實驗

(1)實驗材料

蟾蜍(60～80g)由蘇州大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXK(蘇)2002-0037；

動物飼養(yǎng)環(huán)境：室溫22℃，濕度50-60％，通風良好，人工晝夜(12h/12h)，自由攝取食物和水；

外源性NADPH藥物的來源可以通過人工合成、半合成、生物提取獲得；

(2)實驗方法

將蟾蜍毀髓后固定于蛙板，分離左右主動脈和下腔靜脈，下腔靜脈插入靜脈套管，左主動脈插入動脈套管，右主動脈結(jié)扎，用任氏液(1000mL：NaCl 6.5g、KCl 0.14g、CaCl₂0.12g、NaHCO₃ 0.2g、NaH₂PO₄ 0.01g、葡萄糖1g、雙蒸水)沖洗心臟，蛙心夾夾住心尖，通過張力換能器連接Medlab操作系統(tǒng)，記錄正常蛙心搏動曲線、心率及心輸出量，換入等量低鈣任氏液(CaCl₂含量為任氏液的1/2)灌流心臟，當心臟收縮顯著減弱時，向靜脈套管內(nèi)加入NADPH(純度>97％，Roche，10621706001)，記錄心臟搏動曲線、心率及心輸出量變化。

(3)實驗結(jié)果

NADPH對離體原位蛙心的影響如圖1(a)、1(b)、1(c)、1(d)所示。

由圖1(a)、1(b)、1(c)、1(d)可知，離體蛙心經(jīng)低鈣任氏液灌流后，心收縮力輻度顯著降低，心輸出量減少；在低鈣任氏液中加入5μg/mL NADPH或10μg/mLNADPH后，離體蛙心的收縮輻度可以顯著提高，心輸出量增加，但對心率無顯著影響；給藥20min后，開始出現(xiàn)強心作用，維持時間長達2h。

(4)實驗結(jié)論

NADPH可以顯著提高離體蛙心的收縮輻度，增加心輸出量，但對心率無顯著影響；即：NADPH具有顯著的強心作用。

實驗例2小鼠心肌肥厚模型實驗

(1)實驗材料

SPF級ICR小鼠(雄性，體重18～22g)由蘇州大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：XCYK(蘇)2002-2009；

動物飼養(yǎng)環(huán)境：室溫22℃，濕度50-60％，通風良好，人工晝夜(12h/12h)，自由攝取食物和水；

外源性NADPH藥物的來源可以通過人工合成、半合成、生物提取獲得；

ATP酶試劑盒(A070-6)，購自南京建成生物工程研究所；

異丙腎上腺素(ISO)和卡托普利(Cap)均購自上海麥克林生化科技有限公司；

水合氯醛購自國藥集團化學試劑有限公司；

心電圖儀(Kenz,ECG-103)。

(2)實驗方法

1)異丙腎上腺素致小鼠心肌肥厚模型

異丙腎上腺素(ISO)是一種非選擇性β-腎上腺素受體激動劑，小劑量長期給藥能夠增加心肌收縮力和耗氧量，并促進胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和糖原合成，增加心肌細胞總蛋白和非收縮蛋白合成，引起心肌肥厚，尤其是左心室肥厚。

ICR小鼠隨機分為6組，分別為正常對照組、模型對照組—ISO組、陽性對照組—ISO+卡托普利(Cap)100mg/kg、ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組。

各組的給藥方法為：正常對照組每日皮下注射(sc)等容積生理鹽水；其他各組每日皮下注射(sc)ISO 2次，每次1mg/kg，2次間隔8h，ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組每天上午sc ISO，4h后腹腔注射相應(yīng)劑量的NADPH，陽性對照組每天上午scISO，4h后腹腔注射相應(yīng)劑量的Cap，模型對照組腹腔注射等容積生理鹽水；連續(xù)給藥14d。

2)小鼠超聲心動圖測定

小鼠腹腔注射4％水合氯醛10mg/kg麻醉，脫凈小鼠胸部皮毛，采用高分辨率小動物超聲影像系統(tǒng)(VISUΛLSONICS，VEVO2100)，探頭頻率為8MHz，置于胸骨左側(cè)，選取標準左室乳頭肌短軸切面和長軸切面結(jié)合M型和多普勒超聲進行檢測，分別測量小鼠心臟收縮期和舒張期時射血分數(shù)(EF)、左室短軸縮短率(FS)、左室內(nèi)徑(LVID)、左室后壁厚度(LVPW)、左室前壁厚度(LVAW)、左室容積(LVvol)，均取連續(xù)3個心動周期的平均值。

3)小鼠心電圖測定

小鼠腹腔注射4％水合氯醛 10mL/kg麻醉，將針狀電極紅色連與(R)右上肢、黃色(L)左上肢、綠色(LF)左下肢、黑色(RF)右下肢，采用心電圖儀檢測Ⅱ?qū)?lián)心電圖，頻率50Hz，紙速25mm/s。

4)小鼠心臟重量指數(shù)的測定

給藥14d后，測量小鼠體重(body weight，BW)，麻醉處死，開胸取心臟，用生理鹽水洗凈殘血，濾紙吸干拍照，稱量全心重(heart weight，HW)和左心室重(left ventricle weight，LVW)，計算心重指數(shù)(HWI＝HW/BW)和左心指數(shù)(LVWI＝LVW/BW)。部分左心室置4％中性甲醛固定，部分左心室置-80℃保存。

5)小鼠心肌組織HE染色

取心尖部左心室組織固定于4％中性甲醛溶液，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋，切片，行HE染色，光學顯微鏡下觀察拍照。

6)小鼠生化指標測定

小鼠左心室組織勻漿取上清，應(yīng)用試劑盒測定心肌組織Na⁺-K⁺、Ca²⁺-Mg²⁺、T-ATP酶水平。

(3)實驗結(jié)果

NADPH對減輕ISO所致小鼠心肌肥厚的影響如圖2(a)、2(b)、2(c)所示。

由圖2(a)可知，模型對照組小鼠心臟比正常對照組明顯增大，陽性對照組、ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組心臟有所縮小。

由圖2(b)可知，病理學檢查顯示：模型對照組心肌組織經(jīng)HE染色后心肌細胞肥大，細胞核深染，細胞間距變大；ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組，隨著NADPH劑量的增大，心肌細胞肥大現(xiàn)象的減輕越明顯；這表明，NADPH能夠減輕ISO所致小鼠心肌細胞肥大的病理改變。

如圖2(c)可知，ISO處理2w后，模型對照組的心臟HWI和LVWI均顯著增加；與模型對照組相比，陽性對照組、ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組的心臟HWI和LVWI顯著降低；這表明，NADPH能夠有效緩解ISO所致小鼠心肌肥厚。

QRS波群反映左右心室去極過程中電位和時間的變化。在左心室肥大時，心電圖出現(xiàn)QRS波群電壓增高，波群時間延長。NADPH對ISO所致小鼠心電圖變化的影響如圖3(a)、3(b)所示。

由圖3(a)、3(b)可知，模型對照組QRS波幅明顯高于正常對照組，表明小鼠發(fā)生左室心肌肥厚；陽性對照組、ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組小鼠的QRS波電壓均有所降低；這表明NADPH對心肌肥厚有緩解作用。

NADPH對小鼠心功能的影響如表1和圖4所示。

表1 NADPH對小鼠心功能的影響

由表1和圖4可知，(1)與正常對照組相比，模型對照組小鼠的收縮期左室內(nèi)徑(LVIDs)、舒張期左室內(nèi)徑(LVIDd)、左室收縮末期容積(LVVols)、左室舒張末期容積(LV Vold)顯著升高，而射血分數(shù)(EF)、左室短軸縮短率(FS)明顯降低；這表明，模型對照組小鼠發(fā)生左室心肌肥厚、心功能降低；(2)陽性對照組、ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組小鼠的上述指標有一定程度改善，尤其ISO+NADPH 2mg/kg組小鼠的EF和FS有提高的趨勢；這表明NADPH對ISO所致的心肌肥厚及心功能缺損有緩解作用。

Na+-K+-ATP酶依賴ATP使Na⁺外流和K⁺內(nèi)流，以維持細胞內(nèi)外的Na⁺，K⁺水平；Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶依賴ATP將胞內(nèi)Ca²⁺泵至肌漿網(wǎng)或胞外，以維持胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)。NADPH對小鼠的心肌組織中ATP酶含量的影響如圖5所示。

由圖5可知，與模型對照組相比，ISO+NADPH 1mg/kg組、ISO+NADPH 2mg/kg組、ISO+NADPH 4mg/kg組小鼠的心肌組織中的Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶和總ATP酶活性均顯著升高。

(4)實驗結(jié)論

(1)NADPH能夠減輕小鼠心肌細胞肥大的病理改變，對心肌肥厚有緩解作用；(2)NADPH能夠提高小鼠的心肌組織中的Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶和總ATP酶活性，維持細胞內(nèi)離子穩(wěn)態(tài)。

實驗例3 NADPH對正常大鼠的血壓的影響

(1)實驗材料

SD大鼠(雄性，體重250～300g)由蘇州大學醫(yī)學院實驗動物中心提供；

動物飼養(yǎng)環(huán)境：室溫22℃，濕度50-60％，通風良好，人工晝夜(12h/12h)，自由攝取食物和水；

無創(chuàng)血壓檢測系統(tǒng)(Kent Scientific,CODA20496)。

(2)實驗方法

大鼠無創(chuàng)尾動脈血壓測定：采用容量壓力記錄傳感器無創(chuàng)測量清醒大鼠血壓，大鼠正常飼養(yǎng)2天，應(yīng)用無創(chuàng)血壓檢測系統(tǒng)測量大鼠血壓，實驗環(huán)境控制安靜、恒溫，適應(yīng)性訓練3天后開始正式實驗。分為兩組：生理鹽水組；NADPH 10mg/kg組。每次實驗進行2只大鼠，先測量記錄基礎(chǔ)血壓，基礎(chǔ)血壓平穩(wěn)后，一只靜脈注射生理鹽水2mL/kg，另一只靜脈注射0.5％NADPH 2mL/kg，記錄靜脈注射藥物30min、60min、90min、120min后的血壓。

(3)實驗結(jié)果

NADPH對正常大鼠的血壓的影響如圖6所示。

由圖6可知，NADPH在給藥30min、60min、90min、120min后，正常大鼠的收縮壓、舒張壓、平均血壓和脈壓差與給藥前相比無顯著差異，且在各時間點與生理鹽水組也無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

(4)實驗結(jié)論

NADPH對正常大鼠的血壓無明顯影響。

顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。