本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及改善鹽酸小檗堿口服生物利用度。

背景技術(shù)：

口服給藥是藥物治療中最常采用的給藥方式，其因給藥方式簡單，不直接損傷皮膚或粘膜，順應(yīng)性好，容易被患者接受，藥品生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛關(guān)注。但是該給藥方式容易受到藥物溶解度、滲透性、腸道P-糖蛋白外排以及胃腸道環(huán)境等眾多因素影響，導(dǎo)致藥物生物利用度低，藥效發(fā)揮受到影響。

鹽酸小檗堿(berberine,BBR)作為廣譜抗菌藥在治療腸道細(xì)菌感染性疾病方面已有悠久的歷史。近年來研究者研究發(fā)現(xiàn)BBR具有廣泛的藥理活性，除了傳統(tǒng)研究的抑菌、抗炎、抗病毒等藥理作用外，在治療糖尿病、心血管疾病、腫瘤方面也有很好的治療作用：寧光等人研究發(fā)現(xiàn)，BBR能夠顯著改善Ⅱ型糖尿病合并血脂水平異?；颊叩难?、血脂和胰島素抵抗水平，對代謝綜合征也有一定的治療作用；趙海英等人研究發(fā)現(xiàn)BBR能夠降低血壓，可能的機(jī)理為通過阻斷血管平滑肌α受體，舒張小動脈及靜脈血管平滑肌從而降低血壓；丁世豪等人研究表明BBR能有效降低室顫發(fā)生率、縮短室顫持續(xù)時間、延長存活時間，從而起到對抗快速型室性心律失常的作用；李健等人在BBR對CT26皮下移植瘤組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的影響研究中得出結(jié)論，BBR能夠抑制腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的形成而發(fā)揮抗腫瘤作用，從而抑制皮下移植瘤生長。BBR在傳統(tǒng)藥理研究中不可取代的主導(dǎo)地位以及在治療腫瘤、糖尿病、心腦血管系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病中表現(xiàn)出的顯著的治療效果受到廣泛的關(guān)注而成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。另外，BBR具有療效確切、價格低廉、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，因而新用途的開發(fā)具有巨大的市場潛力。但是由于較低的腸道吸收，使得BBR生物利用度低，臨床應(yīng)用受到限制。

近年來，為提高難吸收口服藥物，如BBR的生物利用度，研究者提出了很多解決措施，例如開發(fā)新劑型或應(yīng)用吸收促進(jìn)劑等。而P-糖蛋白作為重要的口服藥物吸收屏障，其抑制劑的研究和開發(fā)得到了國內(nèi)外研究者的大量關(guān)注并取得了一定的成果：開發(fā)出三代抑制劑。第一代抑制劑多為P-糖蛋白底物，如環(huán)孢霉素、維拉帕米等，其缺點(diǎn)為專屬性差，具有明顯的藥理活性，會產(chǎn)生較多的不良反應(yīng)；第二代抑制劑為第一代抑制劑的同系物或其結(jié)構(gòu)類似物，如右維拉帕米，其特點(diǎn)為毒性較低，但是具有抑制P450的作用，會影響其他藥物的體內(nèi)過程；第三代抑制劑如tariquidar(XR9576)，其特點(diǎn)為對P-糖蛋白選擇性高，抑制作用較前兩者強(qiáng)且不良反應(yīng)少，但是其仍然可能與任何含有P-糖蛋白的組織或器官發(fā)生作用。為了克服上述缺點(diǎn)，越來越多的研究者致力于研究和開發(fā)具有抑制P-糖蛋白作用的藥用輔料。篩選出藥理活性極低、抑制作用強(qiáng)且毒副作用小的抑制劑，提高口服難吸收藥物，如BBR的生物利用度仍然是當(dāng)前亟待解決的問題。

Gelucire44/14，也稱聚乙二醇-32甘油月桂酸酯，是一種飽和多糖分解的C8-C18甘油酯，含20％的單、雙、三甘油酯，72％的聚乙二醇單、雙脂肪酸酯和8％的游離聚乙二醇；目前已經(jīng)報道的關(guān)于Gelucire44/14的用途包括：控釋制劑的骨架材料或固體分散體的材料。未見到其可作為P-糖蛋白抑制劑用以提高難吸收藥物BBR的生物利用度的報道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個目的在于提供Gelucire44/14作為口服吸收促進(jìn)劑用于改善難吸收藥物口服生物利用度的應(yīng)用，一方面提高了口服難吸收藥物BBR的生物利用度，另一方面對吸收部位的粘膜毒性小，無藥理活性，甚至不被吸收，安全性能高。

本發(fā)明的另一個目的在于提供Gelucire44/14作為P-糖蛋白抑制劑用于促進(jìn)P-糖蛋白底物藥物BBR的吸收的應(yīng)用。

本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：

Gelucire44/14作為經(jīng)口服的鹽酸小檗堿的吸收促進(jìn)劑的應(yīng)用。

所述Gelucire44/14作為P-糖蛋白抑制劑促進(jìn)經(jīng)口服的鹽酸小檗堿的吸收的應(yīng)用。

所述Gelucire44/14的濃度≥臨界膠束濃度。

所述Gelucire44/14作為吸收促進(jìn)劑改善鹽酸小檗堿的口服生物利用度的應(yīng)用。

Gelucire44/14在制備經(jīng)口服的鹽酸小檗堿的吸收促進(jìn)劑中的應(yīng)用。

Gelucire44/14在制備鹽酸小檗堿口服給藥制劑中的應(yīng)用。

Gelucire44/14作為促進(jìn)P-糖蛋白底物鹽酸小檗堿口服吸收的P-糖蛋白抑制劑的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：

本發(fā)明基于Gelucire44/14促進(jìn)藥物體外腸道轉(zhuǎn)運(yùn)以及在體腸道吸收作用，提出了Gelucire44/14作為口服吸收促進(jìn)劑用于改善諸如BBR等難吸收藥物口服生物利用度的應(yīng)用。所述的Gelucire44/14具有良好的吸收促進(jìn)作用，也是較為理想的P-糖蛋白抑制劑。在體外擴(kuò)散池實(shí)驗(yàn)中，除了促進(jìn)吸收方向的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量，還可很大程度的抑制分泌方向的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量，從而實(shí)現(xiàn)藥物吸收增加；同時，毒性考察結(jié)果顯示，Gelucire44/14對藥物口服吸收部位的粘膜無損傷；另外，Gelucire44/14作為P-糖蛋白抑制劑，在一定濃度范圍內(nèi)能夠有效的抑制P-糖蛋白對藥物分子的外排作用，綜上所述，Gelucire44/14是安全且有效的P-糖蛋白抑制劑，可用于促進(jìn)難吸收藥物BBR的口服吸收，提高其生物利用度。

附圖說明

圖1為0.1％和1.0％的Gelucire44/14(G44)對BBR在大鼠小腸轉(zhuǎn)運(yùn)的Papp的影響；**p＜0.01(與BBR組相比)；m-s：從粘膜到漿膜方向(吸收方向)的BBR轉(zhuǎn)運(yùn)，s-m：從漿膜到粘膜方向(分泌方向)的BBR轉(zhuǎn)運(yùn)。

圖2為Gelucire44/14(G44,0.1％，v/v)對BBR在大鼠回腸(A)、結(jié)腸(B)吸收的影響。

圖3為Gelucire44/14(G44,0.1％，v/v)對大鼠腸吸收部位粘膜毒性評價結(jié)果；其中，(A)為蛋白釋放量，(B)為乳酸脫氫酶(LDH)釋放量；**p＜0.01，n.s.為無顯著差異(均與PBS組相比)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。所述實(shí)施例是對本發(fā)明的解釋而非限定。

理想的吸收促進(jìn)劑應(yīng)具備吸收促進(jìn)作用強(qiáng)，毒副作用小，不發(fā)揮藥理活性，聯(lián)合用藥時與其他藥物不存在相互作用，不與除給藥部位以外的其他組織或器官發(fā)生作用，不會影響藥物的正常分布等優(yōu)點(diǎn)。

Gelucire44/14的脂肪酸分布如表1所示，可發(fā)現(xiàn)其較為安全且不具有藥效；此外，Gelucire44/14作為藥用輔料于1998年在歐洲藥典中發(fā)布，近年來在藥物制劑中得到了廣泛的應(yīng)用，在藥用輔料的研究領(lǐng)域具有極大的發(fā)掘潛力；再者，Gelucire44/14的親水親油平衡值為14，是兩親性表面活性劑，遇水后可乳化形成乳劑(臨界膠束濃度為0.001～0.01％)，可增加藥物溶解度。

表1 Gelucire44/14的脂肪酸組成

盡管Gelucire44/14顯示出了作為口服吸收促進(jìn)劑的一定優(yōu)勢，但是，口服吸收促進(jìn)劑發(fā)揮作用的原因較為復(fù)雜，同一種口服吸收促進(jìn)劑僅能夠?qū)τ邢薹N類的難吸收藥物發(fā)揮作用，提高其口服生物利用度。

本發(fā)明結(jié)合Gelucire44/14促進(jìn)藥物腸道吸收的實(shí)驗(yàn)，證實(shí)Gelucire44/14可作為口服吸收促進(jìn)劑用于改善BBR口服生物利用度，實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果如下。

1、Gelucire44/14促大鼠體外腸道轉(zhuǎn)運(yùn)

選取8～10周齡雄性SD大鼠(體重230～250克)，實(shí)驗(yàn)前16小時禁食，可自由飲水。將大鼠戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40mg/kg)后，仰臥置于固定板，沿腹中線剪開，從回腸(或結(jié)腸)上端插管，用PBS溶液(pH7.4)沖洗腸段，腹主動脈脫血后分離回腸(或結(jié)腸)并置于Hepes-tris緩沖溶液(pH7.4)中，剪取3～4厘米長的腸段，迅速分離筋膜層并安于擴(kuò)散池。分別精密量取一定體積的BBR母液、BBR母液和相應(yīng)量的Gelucire44/14及一定量的Gelucire44/14，用Hepes-tris緩沖溶液稀釋得到相應(yīng)的藥液、藥物與Gelucire44/14混合溶液及Gelucire44/14溶液。對照組(即BBR組)及實(shí)驗(yàn)組吸收方向上，粘膜側(cè)分別為藥液及藥物與Gelucire44/14混合溶液，漿膜側(cè)均為Hepes-tris緩沖溶液；對照組及實(shí)驗(yàn)組分泌方向上，漿膜側(cè)均為藥液，粘膜側(cè)分別為Hepes-tris緩沖溶液及Gelucire44/14溶液。在混合氣體(95％O₂和5％CO₂)循環(huán)及37℃水浴保溫中，分別于不同的時間間隔于底物接收側(cè)取樣0.1mL，同時及時補(bǔ)充0.1mL緩沖溶液。取樣完畢后立即測定。采用上述體外腸道轉(zhuǎn)運(yùn)模型，以難吸收藥物BBR為模型藥物，考察不同濃度(0.001％、0.02％、0.1％、1.0％及5.0％，v/v)的Gelucire44/14對上述模型藥物BBR在大鼠腸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，結(jié)果如表2、表3和圖1所示。

表2.不同濃度Gelucire44/14(G44)對BBR在大鼠回腸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響

注：與BBR組相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，n.s.為無顯著差異

如表2所示，濃度為0.001％的Gelucire44/14只對BBR吸收方向有促進(jìn)作用，而對分泌方向無作用；當(dāng)濃度為0.1％和1.0％時，Gelucire44/14一方面對BBR吸收方向有促進(jìn)作用，另一方面對分泌方向有抑制作用。由此可得，當(dāng)Gelucire44/14濃度低于臨界膠束濃度時，其促進(jìn)作用可能的機(jī)制與P-糖蛋白無關(guān)，而濃度高于臨界膠束濃度時，其促進(jìn)藥物吸收的作用可能主要為P-糖蛋白抑制作用。

表3.不同濃度Gelucire44/14(G44)對BBR在大鼠結(jié)腸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響

注：與BBR組相比，**p＜0.01，***p＜0.001，n.s.為無顯著差異

如表3所示，除0.02％以外所有濃度的Gelucire44/14均對BBR吸收方向的轉(zhuǎn)運(yùn)有促進(jìn)作用，該結(jié)果與對BBR在小腸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響一致。而不同濃度的Gelucire44/14對回腸、結(jié)腸分泌方向的抑制作用存在差異，其原因可能與腸道不同部位P-糖蛋白的含量有關(guān)。

從圖1可以得出，0.1％和1.0％的Gelucire44/14可以增加BBR吸收方向上的透過性，但是促進(jìn)作用較經(jīng)典的P-糖蛋白抑制劑維拉帕米(verapamil)弱；另一方面，0.1％和1.0％的Gelucire44/14能夠降低BBR分泌方向上的透過性，且0.1％的抑制作用較verapamil強(qiáng)。由此推斷，0.1％和1.0％的Gelucire44/14均可發(fā)揮P-糖蛋白抑制作用，兩者比較發(fā)現(xiàn)0.1％的Gelucire44/14對P-糖蛋白的抑制作用更強(qiáng)。

2、Gelucire44/14促大鼠在體腸道吸收

選取8～10周齡雄性SD大鼠(體重230～250克)，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時以上，可自由飲水。將大鼠戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40mg/kg)后，仰臥置于固定板，沿腹中線剪開，從回腸(或結(jié)腸)上端插管，用PBS溶液(pH7.4)沖洗腸道后，從回腸(或結(jié)腸)末端插管并密封。分別精密量取一定體積的BBR母液及BBR母液和相應(yīng)量的Gelucire44/14，用PBS緩沖溶液稀釋得到相應(yīng)的藥液及藥物與Gelucire44/14混合溶液。從腸段上端用注射器將藥液或藥物與Gelucire44/14混合溶液緩緩注入后密封，并縫合腹中線。剝離大鼠頸靜脈，分別于不同的時間間隔取血0.25～0.3mL，置于肝素化的離心管中，12000rpm離心5分鐘，分離0.1mL血漿于離心管內(nèi)，置于冰盒內(nèi)待測。采用上述在體腸道吸收模型，以難吸收藥物BBR為模型藥物，根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇考察0.1％的Gelucire44/14對上述模型藥物BBR在大鼠腸道吸收的影響，結(jié)果如圖2和表4所示。

圖2(A)為0.1％的Gelucire44/14(G44)對BBR在大鼠回腸吸收的影響，如圖2(A)所示，與單獨(dú)使用BBR的對照組相比較，濃度為0.1％的Gelucire44/14顯著提高藥物吸收，但是其作用稍較經(jīng)典的P-糖蛋白抑制劑verapamil作用弱。

圖2(B)為0.1％的Gelucire44/14(G44)對BBR在大鼠結(jié)腸吸收的影響，從圖2(B)中可以得到與Gelucire44/14對BBR在大鼠回腸吸收促進(jìn)作用相似的結(jié)果，但是Gelucire44/14對結(jié)腸的作用較回腸弱。

表4.Gelucire44/14(G44)對BBR在大鼠腸道藥動學(xué)參數(shù)的影響

注：與BBR組相比，*p＜0.05，**p＜0.01，n.s.為無顯著差異

從表4中可見，0.3mM的verapamil和0.1％(v/v)的Gelucire44/14均能夠顯著提高BBR腸道吸收的C_max和AUC，而對T_max沒有顯著影響。

3、Gelucire44/14對大鼠腸道粘膜毒性評價

選取8～10周齡雄性SD大鼠(體重230～250克)，采用上述在體腸道吸收模型，以濃度為0.1％的Gelucire44/14溶液給予大鼠腸道部位，給藥12小時后，以PBS(pH7.4)沖洗給藥部位腸段，以灌流液中總蛋白和乳酸脫氫酶(LDH)為檢測指標(biāo)，評價Gelucire44/14對吸收部位粘膜毒性，結(jié)果見圖3。

從圖3可見，與對照組(PBS溶液，pH7.4)相比，給藥組Gelucire44/14(0.1％,v/v)各部位(結(jié)腸、回腸)的總蛋白含量和乳酸脫氫酶活性均無顯著性差異，且與陽性對照組(Triton X-100,3％,v/v)具顯著差異(P＜0.01)，表明給藥濃度0.1％(v/v)的Gelucire44/14對腸道吸收部位粘膜沒有顯著損傷，在上述給藥濃度可以安全應(yīng)用。

經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)表明，Gelucire44/14作為P-糖蛋白抑制劑，能夠抑制P-糖蛋白藥泵作用，從而增加難吸收藥物BBR的吸收，提高生物利用度；同時，毒性考察結(jié)果顯示Gelucire44/14對口服吸收部位粘膜無明顯損傷，由此可以推斷，Gelucire44/14是安全的口服吸收促進(jìn)劑及P-糖蛋白抑制劑，可用于制備難吸收藥物小檗科異喹啉類生物堿BBR口服給藥制劑，用于改善其口服生物利用度。

結(jié)論：Gelucire44/14能夠應(yīng)用于制備難吸收藥物小檗科異喹啉類生物堿BBR口服給藥制劑中。P-糖蛋白抑制劑Gelucire44/14可作為口服吸收促進(jìn)劑用于改善鹽酸小檗堿口服生物利用度。