本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

人類基因組草圖的繪制完成及生物與化學(xué)分子生物學(xué)理論的不斷發(fā)展為基因治療打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，基因治療已成為醫(yī)學(xué)界最活躍的研究領(lǐng)域之一，基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將其插入病人的適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞中，使外源基因制造的產(chǎn)物能治療某種疾病。從廣義說，基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術(shù)，理想的基因治療方案須具備有效性和安全性，這就需要有效目的基因在表達(dá)時(shí)具有明確靶向性，因此靶向性基因載體的開發(fā)對(duì)基因治療的發(fā)展尤為重要，它的有效開發(fā)必將推動(dòng)基因治療向常規(guī)治療方法的轉(zhuǎn)變，普通制備用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的基因載體的基因傳遞效率較低，不利于進(jìn)行用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的配制，為此，我們提出一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物及其制備方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物及其制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的普通制備用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的基因載體的基因傳遞效率較低，不利于進(jìn)行用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的配制的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的組成成分如下：

人體肺癌細(xì)胞株5-10份、CD147納米基因載體納米顆粒混懸液4-8份、碳化二亞胺鹽酸鹽2-8份、脂質(zhì)體載體5-10份、兔抗人CD147單克隆體4-8份、實(shí)驗(yàn)用水0.5-1.5份、血清液5-10份、基因轉(zhuǎn)染試劑4-8份、DNA聚合酶4-8份、限制性內(nèi)切酶4-8份。

優(yōu)選的，所述脂質(zhì)體載體為N-三甲基溴化銨膽固醇微粒。

優(yōu)選的，所述CD147納米基因載體納米顆粒混懸液為15g/L的CD147納米基因載體納米顆?；鞈乙?。

優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)染試劑為聚合物轉(zhuǎn)染試劑。

優(yōu)選的，所述實(shí)驗(yàn)用水為三蒸水。

優(yōu)化的，該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法包括如下步驟：

S1：靶向基因載體識(shí)別功能的添加：將兔抗人CD147單克隆體配置成1g/L,的溶液，再將其與濃度為15g/L的CD147納米基因載體納米顆?；鞈乙旱润w積混懸于含有碳化二亞胺鹽酸鹽的實(shí)驗(yàn)用水中，在4攝氏度條件下振蕩8小時(shí)，再在磁性分離器中收集含有磁性成份的納米顆粒，制成識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體；

S2：基因載體與質(zhì)粒的復(fù)合：將增加識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體與脂質(zhì)體載體進(jìn)行混合，再加入DNA聚合酶，由于在靜電荷力和分子間作用力的作用，使得DNA分子折疊，形成粒狀的復(fù)合物；

S3：復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合：先將配制的粒狀復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在基因轉(zhuǎn)染試劑的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理，再將復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在血清液中進(jìn)行融合，通過人體肺癌細(xì)胞株的內(nèi)吞或者吞噬作用，使得復(fù)合物進(jìn)入到人體肺癌細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)緊密的復(fù)合物對(duì)DNA起到保護(hù)作用，使得DNA避免被核酸酶降解；

S4：基因載體和目的基因的脫離：在復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合物中加入限制性內(nèi)切酶，目的基因通過核膜孔或者是在分細(xì)胞分裂過程中進(jìn)入細(xì)胞核，修補(bǔ)缺失基因或者相關(guān)異?；?，而靶向性載體則分解成小分子化合物通過細(xì)胞新陳代謝排出細(xì)胞；

S5：靶向基因載體的檢測(cè)：對(duì)復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。

優(yōu)選的，所述步驟S5中對(duì)復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)的檢測(cè)內(nèi)容包括肺癌細(xì)胞CD147表達(dá)量的檢測(cè)、細(xì)胞吞噬效果的檢測(cè)、細(xì)胞功能蛋白表達(dá)量的檢測(cè)、復(fù)合物安全性檢測(cè)、完成基因載體和目的基因的脫離過程后的肺癌細(xì)胞的增殖能力的檢測(cè)、細(xì)胞遷移能力的檢測(cè)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：與現(xiàn)有的用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物及其制備方法相比，本發(fā)明在制備用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物時(shí)使用的基因載體為CD147納米基因載體，納米基因載體在遞送治療基因的過程中，可以避免基因損耗，增加病灶位置基因濃度，并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)吞，提高治療基因的生物利用率，進(jìn)而提高了基因傳遞的效率。

附圖說明

圖1為本發(fā)明制備方法流程圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

請(qǐng)參閱圖1，本發(fā)明提供一種技術(shù)方案：一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的組成成分如下：

人體肺癌細(xì)胞株5-10份、CD147納米基因載體納米顆?；鞈乙?-8份、碳化二亞胺鹽酸鹽2-8份、脂質(zhì)體載體5-10份、兔抗人CD147單克隆體4-8份、實(shí)驗(yàn)用水0.5-1.5份、血清液5-10份、基因轉(zhuǎn)染試劑4-8份、DNA聚合酶4-8份、限制性內(nèi)切酶4-8份。

實(shí)施例1

該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法包括如下步驟：

S1：靶向基因載體識(shí)別功能的添加：將5份的兔抗人CD147單克隆體配置成1g/L,的溶液，再將其與濃度為5份的15g/L的CD147納米基因載體納米顆粒混懸液等體積混懸于含有4.5份的碳化二亞胺鹽酸鹽的0.75份的實(shí)驗(yàn)用水中，在4攝氏度條件下振蕩8小時(shí)，再在磁性分離器中收集含有磁性成份的納米顆粒，制成識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體；

S2：基因載體與質(zhì)粒的復(fù)合：將增加識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體與7.5份的脂質(zhì)體載體進(jìn)行混合，再加入4.5份的DNA聚合酶，由于在靜電荷力和分子間作用力的作用，使得DNA分子折疊，形成粒狀的復(fù)合物；

S3：復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合：先將配制的粒狀復(fù)合物的1/20與7份的人體肺癌細(xì)胞株在5.5份的基因轉(zhuǎn)染試劑的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理，再將復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在7.5份的血清液中進(jìn)行融合，通過人體肺癌細(xì)胞株的內(nèi)吞或者吞噬作用，使得復(fù)合物進(jìn)入到人體肺癌細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)緊密的復(fù)合物對(duì)DNA起到保護(hù)作用，使得DNA避免被核酸酶降解；

S4：基因載體和目的基因的脫離：在1份的復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合物中加入4.3份的限制性內(nèi)切酶，目的基因通過核膜孔或者是在分細(xì)胞分裂過程中進(jìn)入細(xì)胞核，修補(bǔ)缺失基因或者相關(guān)異常基因，而靶向性載體則分解成小分子化合物通過細(xì)胞新陳代謝排出細(xì)胞；

S5：靶向基因載體的檢測(cè)：對(duì)復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。

實(shí)施例2

該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法包括如下步驟：

S1：靶向基因載體識(shí)別功能的添加：將8份的兔抗人CD147單克隆體配置成1g/L,的溶液，再將其與濃度為8份的15g/L的CD147納米基因載體納米顆?；鞈乙旱润w積混懸于含有7.8份的碳化二亞胺鹽酸鹽的1.2份的實(shí)驗(yàn)用水中，在4攝氏度條件下振蕩8小時(shí)，再在磁性分離器中收集含有磁性成份的納米顆粒，制成識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體；

S2：基因載體與質(zhì)粒的復(fù)合：將增加識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體與8份的脂質(zhì)體載體進(jìn)行混合，再加入7份的DNA聚合酶，由于在靜電荷力和分子間作用力的作用，使得DNA分子折疊，形成粒狀的復(fù)合物；

S3：復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合：先將配制的粒狀復(fù)合物的1/60與7.5份的人體肺癌細(xì)胞株在6.5份的基因轉(zhuǎn)染試劑的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理，再將復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在8份的血清液中進(jìn)行融合，通過人體肺癌細(xì)胞株的內(nèi)吞或者吞噬作用，使得復(fù)合物進(jìn)入到人體肺癌細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)緊密的復(fù)合物對(duì)DNA起到保護(hù)作用，使得DNA避免被核酸酶降解；

S4：基因載體和目的基因的脫離：在復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合物中加入6.7份的限制性內(nèi)切酶，目的基因通過核膜孔或者是在分細(xì)胞分裂過程中進(jìn)入細(xì)胞核，修補(bǔ)缺失基因或者相關(guān)異?；颍邢蛐暂d體則分解成小分子化合物通過細(xì)胞新陳代謝排出細(xì)胞；

S5：靶向基因載體的檢測(cè)：對(duì)復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。

實(shí)施例3

該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法包括如下步驟：

S1：靶向基因載體識(shí)別功能的添加：將6份的兔抗人CD147單克隆體配置成1g/L,的溶液，再將其與濃度為6份15g/L的CD147納米基因載體納米顆粒混懸液等體積混懸于含有5份的碳化二亞胺鹽酸鹽的1份的實(shí)驗(yàn)用水中，在4攝氏度條件下振蕩8小時(shí)，再在磁性分離器中收集含有磁性成份的納米顆粒，制成識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體；

S2：基因載體與質(zhì)粒的復(fù)合：將增加識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體與7.5份的脂質(zhì)體載體進(jìn)行混合，再加入6份的DNA聚合酶，由于在靜電荷力和分子間作用力的作用，使得DNA分子折疊，形成粒狀的復(fù)合物；

S3：復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合：先將配制的粒狀復(fù)合物的1/30與7.5份的人體肺癌細(xì)胞株在6份的基因轉(zhuǎn)染試劑的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理，再將復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在血清液中進(jìn)行融合，通過人體肺癌細(xì)胞株的內(nèi)吞或者吞噬作用，使得復(fù)合物進(jìn)入到人體肺癌細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)緊密的復(fù)合物對(duì)DNA起到保護(hù)作用，使得DNA避免被核酸酶降解；

S4：基因載體和目的基因的脫離：在復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合物中加入6份的限制性內(nèi)切酶，目的基因通過核膜孔或者是在分細(xì)胞分裂過程中進(jìn)入細(xì)胞核，修補(bǔ)缺失基因或者相關(guān)異?；?，而靶向性載體則分解成小分子化合物通過細(xì)胞新陳代謝排出細(xì)胞；

S5：靶向基因載體的檢測(cè)：對(duì)復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。